PLoS One: túltermelése Lin28 Csökkenti a kemoszenzitivitás gyomorrák Cells oxaliplatin, paclitaxel, doxorubicin, fluorouracil részében keresztül a mikro-RNS-107

absztrakt katalógusa

A nagyobb Lin28 kifejezés társul rosszabb patológiás tumor válaszok lokálisan előrehaladott gyomorrák betegek neoadjuváns kemoterápiát. Ugyanakkor a jellemzőit Lin28 és hatásmechanizmusa kemoterápia rezisztencia még nem tisztázott. Ebben a vizsgálatban azt találtuk, hogy transzfekciója Lin28 figyelembe gyomor rákos sejtek (MKN45 és MKN28) növelték ellenállás a kemo-drogok oxaliplatin (OXA), a paclitaxel (PTX), a doxorubicin (ADM), és fluor-uracil (5-FU), mint a gyomor rákos sejtek transzfektált kontroll vektorral. Amikor knockdown Lin28 expresszió Lin28 kis interferáló RNS-t (siRNS-t) értékeltük in vitro, azt találtuk, hogy az ellenállás a kemo-gyógyszerek csökkent. Továbbá azt találtuk, hogy Lin28 up-szabályozza c-myc és a P-gp és a lefelé szabályozza Cylin D1. Végül azt találtuk, hogy a miR-107 egy olyan cél microRNS a Lin28 és hogy részt vesz a mechanizmus a kemoterápia ellenállás. Eredményeink arra utalnak, hogy a Lin28 /miR-107 útvonal lehet az egyik a sok jelátviteli útvonalak által szabályozott Lin28 és kapcsolódó gyomorrák kemo-rezisztencia. Katalógusa

Citation: Teng R, Hu Y, Zhou J, Seifer B, Chen Y, Shen J, et al. (2015) túltermelése Lin28 Csökkenti a kemoszenzitivitás gyomorrák Cells oxaliplatin, paclitaxel, doxorubicin, fluorouracil részében keresztül a mikro-RNS-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. doi: 10,1371 /journal.pone.0143716 katalógusa

Szerkesztő: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: június 23, 2015; Elfogadva: november 8, 2015; Megjelent: december 4, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Teng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír és az azt támogató információs fájlokat. katalógusa

Forrás: Support adta Zhejiang tartományi Természettudományi Alapítvány Kína: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

A gyomorrák gyakori klinikai emésztőrendszer rosszindulatú daganat, a halálozási arány, amely a harmadik helyen a világ [1]. Hazánk egy olyan terület, amely hajlamos gyomorrák. Az elmúlt években, neo-adjuváns kemoterápiát beadásra került gyomor rákos betegek, hogy meghosszabbítja a túlélést. Ennek ellenére, az 5 éves túlélés aránya előrehaladott gyomorrákban szenvedő még mindig alacsonyabb, mint 30% [2]. Kemoterápia ellenállás a vezető oka a hiba a gyomorrák és más daganatos kezelések. Ezért, a mechanizmus a kemoterápia rezisztencia gyomorrák jelenleg komoly aggodalomra adnak okot a gyomorrák vizsgálatokban.

Lin28 egy erősen konzervált RNS-kötő fehérje, amelyről kimutatták, hogy részt vegyenek indukáló pluripotens őssejtek és fenntartásában szár sejt-szerű sejtek rák. A legújabb vizsgálatok szerint aberráns aktiválása Lin28 jól korrelál a prognózisa különböző rákos megbetegedések, beleértve a mell-, petefészek-, tüdő-, vastagbél-, és a májrák [3-6]. A mi korábbi tanulmány kimutatta, hogy Lin28 expresszió is kapcsolatos szegény túlélési gyomorrákos betegek [7], és egy másik vizsgálatban kimutatták, hogy a kifejezés a Lin28 korrelál a paclitaxel rezisztencia humán emlőrák sejtek [8]. Sőt, Lin28 kifejezés társul patológiai tumor választ lokálisan előrehaladott gyomorrák betegek neo-adjuváns kemoterápiát. A molekuláris mechanizmusa ezeket a megállapításokat nem tisztázott [9]. Katalógusa

Lin28 elősegíti tumorogenezisben által elnyomásával tumor szupresszor miRNS mint a let-7 család, amely kapcsolatban van a gyógyszer-rezisztencia [8]. Azonban, mint a cél miRNS az Lin28, miR-107 ritkán említik a gyógyszer-rezisztencia tényező a gyomorrák. MiR-107 expresszió csökkent a különböző rosszindulatú daganatok, mint például a vastagbél-rák, fej-nyak rák, hasnyálmirigyrák és a gyomorrák [10-13]. MiR-107 szabályozza downstream gének, amelyek részt vesznek a sejt-differenciálódás és proliferáció, metabolizmus, a stressz válaszok és a vérerek képződését [10-14]. Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk Lin28 /miR-107 útvonal és szerepe a gyomorrák sejt ellenállást kemoterápia. Lehet, hogy azonosítottak egy új potenciális célpontja a kemoterápiára rezisztens gyomorrák. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

1. Sejttenyészetek és plazmid transzfekciót katalógusa

Az emberi gyomor rákos sejtvonalak MKN-28 és MKN-45 kaptuk ajándékba professzor Sung Hoon Noh (Yonsei University College of Medicine, Szöul, Korea). A sejteket RPMI 1640 tápközegben (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (MP Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA), nedvesített atmoszférában, amely 5% CO 2, 37 ° C. Az oxaliplatin, paclitaxel, doxorubicin, és fluorouracil a Sigmától (St. Louis, MO). A plazmid pcDNA3.1-Lin28 transzfektáljuk Xtreme GENE HP-DNS transzfekciós reagens (Roche Applied Science, Mannheim, Németország) alkalmazásával a gyártó protokollja. Stabil Lin28 expresszáló klónokat tovább szelektáltuk és tenyésztjük a megfelelő neomicin-tartalmú RPMI 1640 tápközegben.

2. Valós idejű kvantitatív PCR-

Real-time Q-PCR-elemzéseket végeztünk az ABI Prism 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Röviden, egy 20 pl reakciókeverékben, amely 2 ul cDNS-templát és 1 nl minden szensz és anti-szensz primerek (Promega Gotaq Q-PCR® Master Mix rendszer, Madison, WI, USA) amplifikáltuk a következő: denaturálás 95 ° C-on 10 percig, majd 40 ciklus 95 ° C-on 30 s, 60 ° C-on 30 másodpercig és 72 ° C-on 40 másodpercig. Real-time Q-PCR-reakciókat végeztünk három párhuzamosban minden egyes minta, és az átlagos értéket kiszámításához használt mRNS-szintre. Mennyiségi analízis alapján, az összehasonlító CT módszer. A Lin28 és miR-107 kópiaszám a tumor szövetekben normalizáltuk a mRNS-kópiaszámot a háztartási gén glicerinaldehid-3-foszfát dehidrogenáz (GAPDH), hogy megkapjuk a 2-es értéket ^{-Δ CT. A primer szekvenciák a következők 1. táblázatban}

3. Cell Gyógyszer-rezisztencia teszt

A sejtek életképességét mértük MTT [3- (4,5-dimetil-tiazol-2-il) -2,5-] assay (Amresco, Solon, OH, USA) szerint a gyártó protokollja. Sejteket szélesztettünk 96 mérőhelyes lemezeken, amelynek sűrűsége 5 * 10 ^{3 sejt per lyuk. A kezelés után a sejteket 5 mg /ml MTT-t 4 órán át. Ezután a táptalajt eltávolítottuk, és 150 ml sterilizált DMSO-oldatot adtunk, majd az inkubálást 37 ° C hőmérsékleten 4 órán át. Az OD-értékeket kaptuk a hullámhosszon 570 nm-nél és 630 nm-nél. Az OD értéket (570 nm-630 nm) közvetve tükrözi a sejt száma és aktivitása alapján az alábbi képlet: a túlélési arány = adagot kapott csoport OD570-630 /nem dózisú csoportban OD570-630. A sejtek túlélését /hatóanyag-koncentráció görbe ezután keletkezett. Katalógusa}

4. Western-blot analízis

A sejtlizátumokat elektroforézissel választottuk el egy 4-15% -os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gradiens minigélen (SDSPAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA), és elektroforetikusan átvittük egy nitro-cellulóz-membránra (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Western blotokat elleni antitestekkel Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), a kaszpázok és a hasított kaszpáz, ciklin D1, NF-kB (Cell Signaling, Beverly, MA), CDK6, c-myc (ABCAM Trading ( Shanghai) Company, Shanghai, Kína), a P-gp, és Bcl-2 (Huan Biotechnology, Peking, Kína). A fehérje sávokat detektáltuk fokozott kemilumineszcencia (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

5. Áramlási citometriás vizsgálatot

A sejteket (2 * 10 ^{5 üregenként) szélesztettünk egy hat lyukú lemez és kezelhetők paklitaxellel. 72 óra elteltével a sejteket fixáltuk 70% -os etanolban, és megfestettük propidium-jodid (Pl). A DNS-tartalom analizáltuk egy Epics Profil II áramlási citométerrel (Beckman Coulter, Fullerton, CA) Multicycle szoftvert (Phoenix Flow Systems, San Diego, CA). Minden kísérletet legalább kétszer megismételjük. PI is együtt használják az annexin-V (BD Biosciences, San Jose, CA), annak meghatározására, hogy a sejtek életképesek voltak, apoptotikus vagy nekrotikus.}

6. MiRNS Transzfekció és Detection

A sejteket hat-lyukú tenyésztő lemezek és transzfektáltuk 50 nM pre-miR-107 Applied Biosystems (Carlsbad, CA) vagy kontroll pre-miRNS szerint a gyártó protokollja. Kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakció (PCR) alkalmazásával hajtottuk végre a TaqMan mikro-RNS reverz transzkripciós Kit és a gyors, valós idejű PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) alkalmazásával a gyártó protokollja szerint. A szoros változást a miR-107 miRNS szinten kiszámítottuk, és normalizálják hsa-miR-423 mennyiségének ellenőrzésére. Katalógusa

7. Állatok katalógusa

BALB /c egerek 3-4 évesek hétig 18-22 g súlyú vásároltuk SLAC laboratóriumi állatok társaság (SCXK-2007-004, Shanghai, Kína), valamint elhelyezett öt ketrecben egy meghatározott kórokozóktól mentes (SPF) környezetben. Az állatokat hagyjuk akklimatizálódni a ház létesítmények 7 nappal a kísérletek megkezdése. Állati kezelési eljárások szerint végeztük a P. R. Kína jogszabályok használata és gondozása a laboratóriumi állatok és jóváhagyta a kísérleti állat Etikai Bizottságának Zhejiang University (Zhejiang, Kína). Katalógusa

8. Xenograft esszé és kezelés

Röviden, hatos csoportokba BALB /c egereket injektálunk szubkután 1 * 10 ^{6 MKN45 /Lin28, MKN45 /Vektor, vagy MKN45 sejtek a jobb szárnyat. A tumor térfogatot az alábbi képlet segítségével: V = 1/2 * egy fiatal * b katalógusa 2, ahol a egy fiatal és b
a leghosszabb és a legrövidebb átmérőjét a tumor tömegének (milliméterben), ill. Amikor a tumorok elérték a körülbelül 80 mm 3, a egereket injekciót ADM (50 mg /kg) és OXA (5 iim /kg) hetente, 2 héten át. Mennyiségi változások a testsúly és a tumor térfogatát mértük minden harmadik nap egyetlen személy segítségével egyensúlyt és Vernier féknyereg. Nem érzéstelenítők használtunk az egér kísérletekben. Katalógusa}

9. Statisztikai analízis

Minden A kísérleteket háromszor három párhuzamos mintákon. Varianciaanalízissel és Student-féle t-tesztet használtunk összehasonlítására az értékeket a vizsgálati és kontroll minták. A P-érték 0,05-nál kisebb minősül szignifikánsnak. Statistica 6.1 szoftvert alkalmaztuk az összes statisztikai elemzések. A szignifikancia értékelték a Student t-teszttel. Katalógusa

Eredmények katalógusa

1. In vitro vizsgálatok a kemoterápia érzékenység változások gyomor rákos sejtekben stabilan expresszáló Lin28

Két törzsek gyomorrák sejtek negatív Lin28 expresszió (MKN45 és MKN28) választottunk ki és tenyésztjük. Azonosítottunk gyomorrák sejtek stabil Lin28 kifejezés a rezisztens transzfektált klónokat (MKN45 /Lin28 /C2 és MKN28 /Lin28 /C3) western blot és Q-PCR (1. ábra). Katalógusa

A kiválasztott MKN45 /Lin28C2, MKN45 /Vektor, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vektor, és MKN28 sejtekkel vizsgáljuk kemoterápiás hatóanyaggal szembeni érzékenység. Azért választottuk a következő négy leggyakrabban használt kemoterápiás gyógyszer klinikai kezelésére gyomorrák: OXA, PTX, ADM, és 5-Fu. Kezelés oxa-, PTX, és az ADM tartott 48 óra, míg az 5-FU kezelés tartott 72 órán át. Miután Lin28 transzfektálás MKN45 és MKN28 sejtek volt egy csökkent érzékenység oxa-, PTX, ADM, és az 5-FU, hogy volt a legkifejezettebb a OXA és PTX. Az IC50-értékeket több, mint kétszerese a kontroll csoportban (1. ábra).

alapján az MTT assay, szoktuk áramlási citometriával, hogy észleli a különbségeket apoptózis közötti Lin28-pozitív és Lin28-negatív sejtek kemoterápia után PTX expozíciót. A MKN45 /Lin28, MKN45 /vektor és MKN45 sejtcsoportok kapott 0 uM és 0,1 jiM PTX a 24 órás kezelés, és a kettős festést végeztünk kimutatására sejt apoptózis. Az apoptotikus aránya transzfektált Lin28 sejtek alacsonyabb volt, mint a nem-transzfektált sejtek (p < 0,05). Ezen túlmenően, Western blot fehérje gyűjtött kezelt sejtek 0,1 pM PTX azt mutatta, hogy az apoptózis csökkent az MKN45 /Lin28 sejtek által mutatott csökkenése a kaszpáz 9 és kaszpáz-3 (2. ábra).

Tranziens transzfekciója siRNS-Lin28 kell gátolni Lin28 expressziós szinteket MKN45 /Lin28 és MKN28 /Lin28 sejtek 48 óra után transzfer a kisérleti iránymutatások a reagens gyártó. Lin28 fehérje expresszió volt kimutatható, és a hozzá tartozó hatóanyag-érzékenység teszteltük. Lin28 RNS expresszió gyomor rákos sejtekben kimutatható volt a Q-PCR-rel, míg a fehérje expresszióját detektáltuk Western blottal (3. ábra).

Q-PCR azt mutatta, hogy Lin28 mRNS expressziójának MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 ( 48 h) és MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 (72 h) sejtek sokkal alacsonyabb volt, mint amit a MKN45 /Lin28 /SI-kontroll sejtek (p < 0,01). Ez transzfekciós hatás is igazolt MKN28 /Lin28 sejteket. Western blot során kiderült, hogy Lin28 Si-RNS szignifikánsan gátolta Lin28 protein expresszió MKN45 /Lin28 és MKN28 /Lin28 sejtekben.

MTT vizsgálatot végeztünk a négy sejttípusban (MKN45 /Lin28 /SI-vezérlés, MKN45 /Lin28 /SI-Lin28, MKN28 /Lin28 /SI-vezérlés, és MKN28 /Lin28 /SI-Lin28 sejtek), amelyek transzfektálva Lin28 siRNS 48 órán át, hogy értékelje a kemoterápia érzékenység. Úgy döntöttünk, hogy használja a kemoterápiás gyógyszerek volt a legkifejezettebb hatást a pre-vizsgálat: OXA, PTX és az ADM. Azért választottuk a koncentráció gradiens 5-6 szerint az előzetes eredmények előzetes kísérletek. Interferencia siRNS csökkentett expresszióját Lin28, és Lin28-pozitív sejtvonalak volt fokozott érzékenység a kemoterápiás szerek (3. ábra).

következő észlelte az érzékenységet a sejtek különböző kemoterápiás szerek után down-regulációja Lin28 . A sejteket 4 csoportba osztjuk, MKN45 /Lin28 /si-vezérlés, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-szabályozás és MKN28 /Lin28 /si-Lin28, és vizsgáltak a kemoterápiás gyógyszerek OXA és PTX illetőleg . A kemoterápiás gyógyszer koncentrációit (OXA 3,2 ng /ml és PTX 1 uM) adunk a kiválasztott eredményei szerint az előzetes kísérletek. Az apoptotikus MKN45 /Lin28 és MKN28 /Lin28 sejtek kisebb volt, mint a MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 és MKN28 /Lin28 /SI-Lin28 sejtek (p < 0,05). Ez az eredmény azt jelzi, hogy down-regulációja Lin28 kifejezés növelheti sejt apoptózis (3. ábra).

2. A molekuláris mechanizmusok, amelyek Lin28 változások kemoterápiás érzékenység katalógusa

Azt észleltük a gyógyszer-rezisztencia kapcsolatos génexpressziós szintek Q-PCR MKN45 /Lin28 és MKN45 /vektor cells.P-gp, és a C-myc RNS-szint jelentősen nőtt, és a ciklin D1 RNS-szintje csökkent, míg a többi a Bcl-2, CDK6 NF-kB, TOP II nem mutatott szignifikáns különbséget a MKN45 /Lin28 és MKN45 /vektor cells.Also ezeket a gyógyszer-rezisztencia kapcsolatos génexpresszió vizsgáltuk western blot MKN45 /Lin28 és MKN45 /Vector sejtek, amelyek azt mutatták, következetes tendencia, hogy a P-gp és a C-myc fehérje expresszió emelkedett, míg ciklin D1 csökkent. Azonban, a Bcl-2-expresszió csökkent, az NF-kB-expresszió nem változott, és kifejezése a cyclin D1 és a protein kináz CDK6 csökkent (4. ábra).

Miután Lin28 expresszió gátolta a transzfekciót Lin28 siRNS, az RNS-szint a P-gp, c-myc és a ciklin D1 voltak újraértékelni. Az aprítást követően az RNS-szint Lin28, P-gp és c-myc szignifikánsan down-szabályozott, míg a ciklin D1 szinteket jelentősen nőtt. Kimutatása A P-gp, c-myc, és a ciklin D1-expresszió Western blot feltárta, hogy miután gátlása Lin28 kifejezés, a P-gp és c-myc fehérje expresszió szignifikánsan down-szabályozott, míg a kifejezés a ciklin D1 szignifikánsan emelkedett ( 4. ábra). katalógusa

3. MiR-107 a cél a mikro-RNS a Lin28

tesztelés közben a Lin28 RNS és miR-107 szintek gyomor rákos sejtvonalak, azt találtuk, kölcsönös gátlása Lin28 és miR-107 a MKN45 és AGS sejtvonalakban. Továbbá, miR-107-t lefelé szabályozni MKN45 /Lin28 és MKN28 /Lin28 sejteket. Kiütése expressziójának Lin28 megfordította ezt a gátlást. Egy utókísérletet, Lin28-pozitív sejtek MKN45 /Lin28 és MKN28 /Lin28, transzfektáltunk pre-mir-107 és a későbbiekben nevezik MKN45 /Lin28 /pre-miR-107 és MKN28 /Lin28 /pre- miR-107 sejtekben. Transzfektált pre-miR-kontroll sejteket nevezik MKN45 /Lin28 /pre-miR-Control és MKN28 /Lin28 /pre-miR-Control. Anti-miR-107 vagy ellenőrző transzfekciókra be Lin28-negatív sejtek MKN45 /Vector engedett MKN45 /Vector /anti-miR-107 és MKN45 /Vector /anti-miR-Control sejtek, ill. Negyvennyolc órával a transzfekció után, az RNS-t összegyűjtjük, és vetjük alá a Q-PCR-rel, hogy észleli a különbségek miR-107 expresszió MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /Vektor, és MKN28 /Vektor sejtekben. A hatás a kiütése Lin28 expresszió Lin28 siRNS is értékelték. Való transzfekció után Lin28, miR-107 expresszió szignifikánsan down-szabályozott, után pedig kiütése Lin28 kifejezés, a kifejezés a miR-107 nőtt. Negyvennyolc órával a transzfekció után a pre-miR-107, Lin28 RNS szintek szignifikánsan csökkent, és 96 órával a transzfekció után, Lin28 fehérje expresszió még mindig alacsonyabb volt, mint a nem-transzfektált kontrollcsoport. Ez azt jelzi, hogy a miR-107 is expresszióját szabályozzák Lin28 (5. ábra). Katalógusa

4. MiR-107 közreműködik Lin28 közvetített kemo-gyógyszer-rezisztencia katalógusa

A kemoterápia érzékenysége 4 sejtcsoportok, MKN45 /Lin28 /pre-miR-vezérlés, MKN45 /Lin28 /pre-miR-107, MKN28 /Lin28 /pre-miR-szabályozás és MKN28 /Lin28 /pre-miR-107, teszteltük az MTT módszer 48 órával a transzfekció után a pre-miR-107. Azért választottuk kemoterápiás gyógyszerek volt a legkifejezettebb hatást során előzetes vizsgálatok, OXA, PTX és az ADM, és a kiválasztott koncentrációgradiensben 5-6 Az előzetes eredmények szerint az előzetes kísérletek. Az eredmények azt sugallják, hogy a bevezetése a pre-miR-107 be Lin28-pozitív sejtek növelhetik sejt érzékenység a kemoterápia. Apoptózis vizsgálatok azt mutatták, hogy a számos MKN45 /Lin28 apoptotikus sejtek fokozott transzfekció után a pre-miR-107 (p < 0,05). MTT vizsgálata MKN45 /Lin28 /anti-miR-szabályozás és MKN45 /Lin28 /anti-miR-107 kemoterápiás érzékenység azt mutatta, hogy expressziójának gátlásához miR-107 MKN45 csökkentette a érzékenységet PTX (ábra 5).

Western blot és Q-PCR-rel, akkor kimutatható a hatóanyag-rezisztencia kapcsolatos gén és fehérje expressziós szintek MKN45 /Lin28 sejteket, hogy már transzfektálva pre-miR-107, beleértve a c-myc, a P-gp, és a ciklin D1. Az eredmények azt mutatták, hogy 48 órával a transzfekció után a miR-107, az RNS és a fehérje expresszió a c-myc-cel és a P-gp csökkent (p < 0,01), míg a kifejezés a ciklin D1 növekedett (p < 0,05) (5. ábra).

5. Lin28 kapcsolódó kemo-gyógyszer-rezisztencia in vivo

2 ciklust követően a kemoterápia, azt találtuk, hogy a xenograft tumorok MKN45 /Lin28 sejtek nem csökkentette a mennyiség és nagyobb lett, mint a többi csoport (MKN45 /vektor és MKN45 ). Mindkét MKN45 /Lin28 és MKN45 /Vektor csoportok, az egyik az egerek meghalt, így a kemoterápia leállt. A tumorokat kimetszettük és azok mennyiségét analizáljuk. Azt találtuk, hogy a MKN45 /Lin28 xenograft tumorok nagyobb volt, mint a többi daganat után ADM és OXA kemoterápia (p < 0,01) (6. ábra). Katalógusa

Vita katalógusa

A jelen tanulmányban azt vizsgáltuk, a szövetség Lin28 kifejezés kemo-érzékenység a gyomor rákos sejteket. Azt találtuk, hogy transzfekciót Lin28 csökkenti az érzékenységet a gyomor rákos sejtvonalak MKN45 és MKN28 négy típusú kemoterápiás reagensek (oxa-, PTX, ADM, és az 5-FU). Használata siRNS interferencia technológia knockdown Lin28 kifejezés megfordulhat kemo-ellenállás. Azt is kimutatta, hogy a miR-107 képes lefelé szabályozni Lin28 expresszióját, míg az is szolgált, mint az egyik lehetséges célpont mikroRNS hogy szabályozza Lin28. Túlexpressziója Lin28 fel szabályozott C-myc és a P-gp, míg lefelé szabályozni ciklin D1, ez jelenségek megfordíthatja a Lin28 siRNS vagy transzfekciója pre-miR-107. Ez kritikus lehet mechanizmusok, amelyek révén Lin28 csökkent kemoszenzitivitás gyomorrákban sejtekben. Tudomásunk szerint ez az első tanulmány, amely bemutatja, Lin28 /miR-107 jelátviteli útvonal szerepet játszhat a kemo-drog rezisztencia gyomorrákban. Katalógusa

A kemoterápia egyik legfontosabb kezelés gyomorrákos betegek, de mint 50% -ánál fejlődik ki, kemoterápia ellenállás. A lehetséges mechanizmusok kemo-rezisztencia gyomorrák jelenleg úgy gondolták, hogy a transz-membrán transzport az ABC transzporterek, a glutation S-transzferáz, a tevékenység a DNS topoizomeráz rákos gén p53 mutáció és az apoptózis kapcsolódó utakat. Egy nemrégiben készült tanulmány megállapította, hogy a mikro-RNS fontos szerepet játszik a gyomorrák kemoterápiás gyógyszer-rezisztencia [15]. Egy tumorsejt ellenállás modell, azt figyeltük meg, hogy a rákos őssejtek szintén fontos szerepet játszanak a rezisztencia kemoterápiával. A c-myc gén az egyik felületi markerek a rákos őssejtek, hanem egy onkogént társított határozatlan proliferáció, végtelen halhatatlanná, és előmozdítása a sejtosztódás [16]. Egy tanulmány szerint, amely 40% -ánál a gyomorrák van a C-myc gén fokozott expressziója, és hogy a magasabb C-myc expresszió társul rosszabb prognózissal [16-18]. A kutatások azt is összefüggés a c-myc gén és az apoptózis. C-myc expresszió csökkenéséhez vezethet tumorsejt apoptózisát. A sejt apoptózis mértéke és az érzékenység indukált faktorok függnek c-myc fehérje szintje [19]. Sőt, a c-Myc overexpressziója társul sugárzás és a kemoterápia ellenállás. Ezen túlmenően a C-myc lehet felülszabályozott a P-gp, amely képes indukálni effluxing kemoterápiás reagenseket vezetett kemoterápia rezisztencia [20]. Sejtciklus hatással lehet a válasz a rákos sejtek bizonyos kemoterápiás szerek (mint például a PTX), amely szerepet játszik a G2 /S fázisban csökkent a hatóanyag-érzékenység. A sejtciklus fehérje ciklin D három altípust, D1, D2, és D3, és egy sejtciklus iniciációs faktor. A szuppresszió által transzformáló növekedési faktor -β1 (TGF-β1) megakadályozza a sejtek bejutását a sejt ciklus úgy, hogy továbbra is egy nyugalmi állapotban [21]. A ciklin D kifejezetten ötvözi CDK4 /6 foszforilálni és inaktiválja retinoblasztóma fehérje (pRb), ezáltal hozzájárulva a G1 /S átmenetet és megkezdődik a DNS-szintézis [21]. A jelenlegi vizsgálatban azt találtuk, Lin28 nem voltak relevánsak a Bcl-2, NF-kB és TOPO II gyomor rákos sejtekben. A partnerség között Lin28 és mikroRNS már jól megalapozott, mint a let-7, miR-200c, miR-143 [4,22]. Lin28 túltermelése leszabályozza mikroRNS, míg a mikro-RNS is negatívan befolyásolja a kifejezés Lin28. Lin28 együtt TUT4 jelent negatív szabályozója, amely befolyásolja az érést, valamint homeosztázisának mikroRNS [4,22]. Szabályozása által downstream gének, mikroRNS vesz részt a sejtek differenciálódását és proliferációját, a sejtek anyagcseréjét, a stressz válaszokat, és a vérerek képződését. Cheng és munkatársai [23] megállapította, hogy miután gátló miR-107, a növekedés a HeLa méhnyakrák sejtek és A549 tüdőrák sejtek támogatják. Marijn munkatársai [24] megállapította, hogy a kifejezés a miR-107 a gyógyszer-rezisztens petefészekrák-sejtek le-szabályozott. A tanulmány megállapította, hogy Lin28 is korlátozzák az érés miR-107 és miR-bevezetése 107 növelik a gyomor rákos sejtek kemoterápiás érzékenység OXA, PTX, és az ADM. Transzfekciója után anti-miR-107, ez az érzékenység csökken. Pre-miR-107 csökkenését okozta a kifejezés Lin28, amelyek alátámasztják, hogy a Lin28 /miR-107 útvonal is be lehet vonni a kemoszenzitivitás változások gyomorrák. Katalógusa

Összefoglalóan azt mutatta, hogy Lin28 gátolta a expressziójának miR-107, és ezáltal felfelé szabályozó c-myc, a P-gp és a lefelé szabályozó ciklin D1, ezt követően eredményezhet kemo-ellenállása gyomor rákos sejteket. A Lin28 /miR-107 útvonal lehet szolgált egy a sok jelátviteli utak társított gyomorrákos kemo-ellenállás. A tanulmány új betekintést a gyomorrák kemorezisztenciájának mechanizmus. Lin28 /miR-107 lehet egy új terápiás célpontok kemoterápiára rezisztens gyomorrák. Katalógusa

alátámasztó információk
S1 táblázat. Minimális adatokat minden ezeket a számokat. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0143716.s001 katalógusa (XLSX-) hotelben

• PLoS One: Az endoszkópos Rezekciós Összehasonlítva resectio Treat Korai gyomorrák: rendszeres felülvizsgálatát és meta-Analysis
• PLoS One: Jelentősége szérum Pepsinogens mint biomarker gyomorrák és sorvadásos gyomorhurut Bemutató: rendszeres felülvizsgálatát és meta-Analysis