PLOS ONE: surexpression de Lin28 Diminue la chimiosensibilité des cellules de cancer gastrique à l'oxaliplatine, Paclitaxel, doxorubicine et fluorouracile dans la partie via microRNA-107

Résumé

expression supérieur Lin28 est associée à des réponses tumorales pathologiques pire en local patients gastriques avancés cancéreux soumis à une chimiothérapie néoadjuvante. Cependant, les caractéristiques de Lin28 et son mécanisme d'action de la résistance à la chimiothérapie est encore incertaine. Dans cette étude, nous avons constaté que la transfection de Lin28 dans les cellules de cancer gastrique (MKN45 et MKN28) ont augmenté leur résistance à la chimio-médicaments oxaliplatine (OXA), paclitaxel (PTX), la doxorubicine (ADM), et fluorouracile (5-FU) par rapport avec des cellules de cancer gastrique transfectées avec un vecteur témoin. Lorsque knockdown expression Lin28 par Lin28 petits ARN interférents (siRNA) a été évaluée in vitro, nous avons constaté que la résistance à la chimiothérapie-médicaments a été réduit. En outre, nous avons constaté que Lin28 régule à la hausse C-myc et P-gp et régule à la baisse Cylin D1. Enfin, nous avons découvert que miR-107 est une cible de microARN Lin28 et qu'elle participe au mécanisme de la résistance à la chimiothérapie. Nos résultats suggèrent que la voie Lin28 /miR-107 pourrait être l'une des nombreuses voies de signalisation régulées par Lin28 et associés au cancer gastrique chimio-résistance

Citation:. Teng R, Hu Y, Zhou J, Seifer B, Chen Y, Shen J et al. (2015) La surexpression de Lin28 Diminue la chimiosensibilité des cellules de cancer gastrique à l'oxaliplatine, Paclitaxel, doxorubicine et fluorouracile dans la partie via microARN-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. doi: 10.1371 /journal.pone.0143716

Editeur: Natasha Kyprianou, Université du Kentucky College of Medicine, ETATS-UNIS

Reçu le 23 Juin 2015; Accepté 8 Novembre 2015; Publié 4 Décembre, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Teng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le ses fichiers de renseignements à l'appui du papier et

financement:. Un appui a été fourni par ZHEJIANG provincial Natural science Foundation de la CHINE: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .

intérêts concurrents:. Les auteurs ont déclaré qu'il n'y a pas des intérêts divergents existent

Le cancer gastrique introduction est un système digestif tumeur maligne clinique commune avec un taux de mortalité qui se classe troisième dans le monde [1]. Notre pays est une région qui est sujette à un cancer gastrique. Au cours des dernières années, la chimiothérapie néo-adjuvante a été administré à des patients atteints de cancer gastrique pour prolonger la survie. Néanmoins, le taux de survie à 5 ans des personnes atteintes du cancer gastrique avancé est encore inférieure à 30% [2]. la résistance à la chimiothérapie est la principale cause de l'échec du cancer gastrique et d'autres traitements de tumeurs. Par conséquent, le mécanisme de la résistance à la chimiothérapie du cancer gastrique est actuellement une préoccupation majeure dans les études sur le cancer gastrique.

Lin28 est une protéine de liaison à l'ARN hautement conservée qui a été montré pour participer à l'induction de cellules souches pluripotentes et la tige maintien cellules analogues à des cellules dans le cancer. Des études récentes ont rapporté que l'activation aberrante de Lin28 est bien corrélée avec le pronostic de différents cancers, notamment du sein, de l'ovaire, du poumon, du côlon et le cancer du foie [3-6]. Notre étude antérieure a montré que l'expression Lin28 est également associée à une faible survie chez les patients atteints d'un cancer gastrique [7], et une autre étude a montré que l'expression de Lin28 est en corrélation avec la résistance au paclitaxel dans des cellules de cancer du sein humain [8]. En outre, l'expression Lin28 est associée à la réponse tumorale pathologique chez les patients atteints de cancer gastrique localement avancé subissant une chimiothérapie néo-adjuvante. Cependant, le mécanisme moléculaire qui sous-tend ces résultats reste incertaine [9].

Lin28 favorise la tumorigenèse en refoulant miARN suppresseurs de tumeur tels que la famille let-7, qui est associée à la résistance aux médicaments [8]. Cependant, comme une cible miARN de Lin28, miR-107 est rarement mentionné comme un facteur de résistance aux médicaments dans le cancer gastrique. expression miR-107 est diminuée dans une variété de tumeurs malignes, comme le cancer du côlon, le cancer tête et du cou, le cancer du pancréas et le cancer gastrique [10-13]. MiR-107 régule les gènes en aval et qui sont impliquées dans la différenciation et la prolifération cellulaire, le métabolisme, la réponse au stress et à la formation des vaisseaux sanguins [10-14]. Dans cette étude, nous avons étudié la voie Lin28 /miR-107 et de son rôle dans la résistance des cellules de cancer de l'estomac à la chimiothérapie. Nous pouvons avoir identifié une nouvelle cible potentielle pour le cancer gastrique chimiothérapie résistant.

Matériel et méthodes

1. La culture cellulaire et le plasmide transfection

Les lignées cellulaires de cancer gastrique humains MKN-28 et MKN-45 ont été obtenus comme un cadeau du professeur Sung Hoon Noh (Yonsei University College of Medicine, Seoul, Corée). Les cellules ont été cultivées dans du milieu RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) additionné de 10% de sérum de veau fœtal (MP Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA) dans une atmosphère humidifiée contenant 5% de CO2 à 37 ° C. L'oxaliplatine, le paclitaxel, la doxorubicine et le fluorouracile ont été achetés auprès de Sigma (St. Louis, MO). Le plasmide pcDNA3.1-Lin28 a été transfectée avec Xtreme GENE HP DNA Transfection Réactif (Roche Applied Science, Mannheim, Allemagne) selon le protocole du fabricant. clones LIN28 exprimant stables ont été en outre sélectionnées et cultivées avec du milieu RPMI 1640 contenant de la néomycine appropriée.

2. Quantitative en temps réel
PCR

en temps réel q-PCR analyses ont été réalisées avec le système de détection de séquence 7500 ABI Prism (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). En bref, un mélange de réaction de 20 ul contenant 2 pl de matrice d'ADNc et 1 pi de chacun des sens et antisens amorces (système Promega GoTaq q-PCR® Master Mix, Madison, WI, USA) a été amplifié comme suit: dénaturation à 95 ° C pendant 10 min et 40 cycles de 95 ° C pendant 30 s, 60 ° C pendant 30 s et 72 ° C pendant 40 s. réactions q-PCR en temps réel ont été réalisées en triple pour chaque échantillon, et la valeur moyenne a été utilisée pour calculer les taux d'ARNm. L'analyse quantitative a été effectuée en utilisant le procédé CT comparatif. Les Lin28 et miR-107 le nombre de copies dans les tissus tumoraux ont été normalisées à l'ARNm nombre de copies du gène de ménage glycéraldéhyde 3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) pour obtenir la valeur 2 ^{-Δ CT. Les séquences d'amorces sont les suivantes dans le tableau 1.}

3. Cellule de résistance aux médicaments Assay

La viabilité cellulaire a été mesurée en utilisant un MTT [3- (4,5-diméthylthiazol-2-yl) -2,5-diphényltétrazolium] essai (Amresco, Solon, OH, USA) selon le protocole du fabricant. Les cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits à une densité de 5 * 10 ^{3 cellules par puits. Après le traitement, les cellules ont été mises en incubation avec 5 mg /ml de MTT pendant 4 h. Ensuite, le milieu a été éliminé et on a ajouté 150 ml d'une solution dans du DMSO stérile, suivie d'une incubation à 37 ° C pendant 4 h. La valeur de DO a été obtenue à la longueur d'onde de 570 nm et 630 nm. La valeur de DO (570 nm à 630 nm) peut refléter indirectement le nombre de cellules et l'activité selon la formule suivante: taux de survie = groupe dosé OD570-630 /aucun groupe de dose OD570-630. Une courbe de concentration survie cellulaire /médicament a ensuite été généré.}

4. Analyse par Western Blot

lysats cellulaires ont été séparés par électrophorèse sur un gradient minigel de dodécylsulfate de sodium 4-15% de sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA) et transférées par électrophorèse sur une membrane de nitrocellulose (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Western blots ont été sondés avec des anticorps contre Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), caspases et caspases clivées, cycline D1, NF-kB (Cell Signaling, Beverly, MA), CDK6, C-myc (Abcam Trading ( Shanghai) Company, Shanghai, Chine), P-gp, et Bcl-2 (Huan biotechnologie, Beijing, Chine). Les bandes protéiques ont été détectées par chimioluminescence amplifiée (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

5. Cytométrie en flux Assay

Cellules (2 * 10 ^{5 par puits) ont été étalées dans une plaque à six puits et traitées avec le paclitaxel. Au bout de 72 h, les cellules ont été fixées dans 70% d'éthanol et colorées avec de l'iodure de propidium (PI). La teneur en ADN a été analysé avec un profil II flux Epics cytomètre (Beckman Coulter, Fullerton, CA) avec le logiciel Multicycle (Flow Systems Phoenix, San Diego, CA). Toutes les expériences ont été répétées au moins deux fois. PI a également été utilisé en conjonction avec l'annexine V (BD Biosciences, San Jose, CA) pour déterminer si les cellules étaient viables, apoptotiques ou nécrotiques.}

6. Les miARN Transfection et la détection

Des cellules ont été étalées dans des plaques de culture à six puits et transfectées avec 50 nM de pré-miR-107 acheté chez Applied Biosystems (Carlsbad, CA) ou le contrôle de pré-miARN selon le protocole du fabricant. Quantitative en temps réel Polymerase Chain Reaction (PCR) a été réalisée en utilisant le kit TaqMan microARN transcription inverse et le système de PCR en temps réel rapide (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) selon les protocoles du fabricant. Le facteur de changement de niveaux miR-107 microARN a été calculée et normalisée à un contrôle de chargement hsa-mir-423.

7. Animaux

souris BALB /c âgées de 3-4 semaines pesant 18-22 g ont été achetés auprès de SLAC compagnie des animaux de laboratoire (SCXK-2007-004, Shanghai, Chine) et logés cinq par cage dans un sans pathogène spécifique (SPF) environnement. Les animaux ont été autorisés à s'acclimater aux installations de logement pendant 7 jours avant les expériences ont commencé. procédures d'animaux de manutention ont été effectuées en conformité avec la législation P. R. Chine sur l'utilisation et le soin des animaux de laboratoire et approuvés par le Comité d'éthique animale expérimentale de l'Université de Zhejiang (Zhejiang, Chine).

8. Xénogreffe Assay et traitement

En bref, des groupes de six souris BALB /c ont été injectées par voie sous-cutanée avec 1 * 10 <sup>6 MKN45 /Lin28, MKN45 /Vector ou MKN45 cellules dans le flanc droit. Le volume tumoral a été calculé en utilisant la formule: V = 1/2 * un
* b
2, où un
et b
sont les plus courts diamètres de la masse tumorale (en millimètres) et la plus longue, respectivement. Lorsque les tumeurs ont atteint environ 80 mm 3, les souris ont été traitées avec une injection d'ADM (50mg /kg) et OXA (5um /kg) chaque semaine pendant 2 semaines. Les changements quantitatifs de poids et de volume tumoral du corps ont été mesurés tous les trois jours par un seul individu en utilisant une balance et pieds à coulisse. Aucun anesthésique ont été utilisés dans les expériences de souris.</sup>

9. L'analyse statistique

Toutes les expériences ont été réalisées trois fois avec des échantillons en triple. Analyse de la variance et le test t de Student ont été utilisés pour comparer les valeurs des échantillons d'essai et de contrôle. Un P-valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. le logiciel Statistica 6.1 a été utilisé pour toutes les analyses statistiques. La signification a été évaluée par le test t de l'étudiant.

Résultats

1. Les tests in vitro de changements de sensibilité à la chimiothérapie dans les cellules cancéreuses gastriques exprimant de manière stable Lin28

Deux souches de cellules de cancer gastrique à l'expression de Lin28 négative (MKN45 et MKN28) ont été sélectionnés et mis en culture. Nous avons identifié les cellules cancéreuses gastriques avec expression de Lin28 stable à partir de clones résistants transfectées (MKN45 /Lin28 /C2 et MKN28 /Lin28 /C3) en utilisant western blot et q-PCR (figure 1).

Le MKN45 /Lin28C2 sélectionné, MKN45 /Vector, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vector, et MKN28 cellules ont été testées pour la chimiothérapie de sensibilité aux médicaments. Nous avons sélectionné les quatre médicaments de chimiothérapie suivants cliniques couramment utilisés pour le traitement du cancer gastrique: OXA, PTX, ADM, et 5-Fu. Traitement avec OXA, PTX et ADM a duré pendant 48 heures, tandis que le traitement 5-FU a duré pendant 72 heures. Après Lin28 transfection, les cellules MKN45 et MKN28 avaient une sensibilité réduite à OXA, PTX, ADM, et 5-Fu qui a été le plus prononcé pour OXA et PTX. Les valeurs IC50 étaient plus de deux fois celle du groupe témoin (figure 1).

Sur la base du test MTT, nous avons utilisé la cytométrie en flux pour détecter des différences dans l'apoptose entre les cellules Lin28-positives et Lin28 négatifs après une chimiothérapie exposition PTX. Le MKN45 /Lin28, MKN45 /vecteur et les groupes de cellules MKN45 reçu 0 uM et 0,1 uM de traitement PTX pendant 24 heures, et la double coloration a été réalisée pour détecter l'apoptose cellulaire. Le taux LIN28 apoptotique des cellules transfectées a été inférieure à celle des cellules non transfectées (p < 0,05). En outre, les western blots de protéines recueillies à partir des cellules traitées avec 0,1 uM PTX a montré que l'apoptose a été réduite dans les cellules MKN45 /LIN28 comme indiqué par une diminution de l'activation de la caspase 9 et de la caspase 3 (figure 2).

Transient la transfection d'ARNsi-Lin28 devrait inhiber les niveaux d'expression dans Lin28 MKN45 /Lin28 cellules MKN28 et /LIN28 48 heures après le transfert conformément aux directives expérimentales du fabricant du réactif. LIN28 expression de la protéine a été détectée, ainsi que la sensibilité médicamenteuse associée a été testée. l'expression de l'ARN Lin28 dans les cellules de cancer de l'estomac a été détectée par Q-PCR, alors que l'expression de la protéine a été détectée par transfert de type western (figure 3).

Q-PCR a montré que l'expression Lin28 ARNm dans MKN45 /Lin28 /si-Lin28 ( 48 h) et MKN45 /Lin28 /si-Lin28 (72 h) des cellules était beaucoup plus faible que dans les cellules /Lin28 /si-contrôle MKN45 (p < 0,01). Cet effet de transfection a également été vérifiée dans les cellules MKN28 /LIN28. Western blot a révélé que Lin28 si-ARN inhibait significativement Lin28 expression de la protéine dans MKN45 /Lin28 et MKN28 /Lin28 cellules.

Un test MTT a été effectué sur les types de cellules quatre (MKN45 /Lin28 /si-commande, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-contrôle et MKN28 /Lin28 /si-Lin28 cellules) qui ont été transfectées avec Lin28 siRNA pendant 48 heures pour évaluer la sensibilité de la chimiothérapie. Nous avons choisi d'utiliser les médicaments de chimiothérapie qui ont les effets les plus prononcés dans le pré-test: OXA, PTX et ADM. Nous avons sélectionné un gradient de concentration de 5-6 selon les résultats préliminaires des expériences préliminaires. Ingérence siRNA réduit l'expression de Lin28, et des lignées cellulaires Lin28-positives ont une sensibilité accrue aux médicaments chimiothérapeutiques (figure 3).

Nous avons ensuite détecté la sensibilité des cellules à différents médicaments de chimiothérapie après la régulation de Lin28 . Les cellules ont été divisés en 4 groupes, MKN45 /Lin28 /si-contrôle, MKN45 /Lin28 /si-LIN28, MKN28 /Lin28 /si-contrôle et MKN28 /Lin28 /si-LIN28, et ont été testés avec les médicaments de chimiothérapie OXA et PTX respectivement . Les concentrations de médicament de chimiothérapie (OXA 3,2 pg /ml et la PTX 1 uM) ont été choisies en fonction des résultats des expériences préliminaires. Le nombre de apoptotique MKN45 /Lin28 et les cellules MKN28 /LIN28 était inférieure à celle de MKN45 /Lin28 /si-Lin28 et cellules MKN28 /Lin28 /si-LIN28 (p < 0,05). Ce résultat indique que la régulation de l'expression Lin28 peut augmenter l'apoptose des cellules (figure 3).

2. Les mécanismes moléculaires par lesquels les changements LIN28 de la sensibilité à la chimiothérapie

Nous avons détecté liés résistance aux médicaments niveaux d'expression des gènes par q-PCR dans MKN45 /Lin28 et MKN45 /vecteur cells.P-gp, et les niveaux d'ARN C-myc étaient nettement augmenté et le niveau de l'ARN cycline D1 ont diminué, tandis que d'autres Bcl-2, CDK6, NF-kB, TOP II n'a pas montré de différence significative entre MKN45 /Lin28 et MKN45 /vecteur cells.Also ces liées-résistance aux médicaments expressions de gènes ont été étudiés par western blot dans MKN45 /Lin28 et MKN45 cellules /Vector, qui a montré tendance constante que la P-gp et d'expression de la protéine C-myc augmenté, tandis que la cycline D1 a diminué. Cependant, l'expression de Bcl-2 a diminué, le NF-kB expression n'a pas changé, et l'expression de la cycline D1 et la protéine kinase CDK6 est réduite (figure 4).

Après l'expression Lin28 a été inhibée par la transfection avec le siRNA Lin28, les niveaux de P-gp, C-myc et cycline D1 ARN ont été réévalués. Après la réduction du niveau de Lin28 d'ARN, P-gp et C-myc étaient significativement régulés à la baisse, tandis que les niveaux de cycline D1 ont augmenté de manière significative. La détection de la P-gp, C-myc et cycline D1 expression par western blot a révélé que, après inhibition de l'expression Lin28, P-gp et d'expression de la protéine C-myc était significativement régulée à la baisse, tandis que l'expression de la cycline D1 a été significativement régulée positivement ( Fig 4).

3. MiR-107 est la cible microRNA Lin28

Lors du test de l'ARN Lin28 et miR-107 niveaux dans des lignées cellulaires de cancer gastrique, on a trouvé une inhibition mutuelle des Lin28 et miR-107 dans les lignées de cellules MKN45 et AGS. En outre, miR-107 a été régulée à la baisse dans les cellules MKN45 /LIN28 et MKN28 /LIN28. Knockdown de l'expression de Lin28 a infirmé cette inhibition. Dans une expérience de suivi, les cellules Lin28-positives, MKN45 /Lin28 et MKN28 /Lin28, ont été transfectées avec pré-mir-107 et ont ensuite été appelé MKN45 /Lin28 /pré-miR-107 et MKN28 /Lin28 /pré miR-107 cellules. les cellules pré-miR-contrôle transfectées ont été appelés MKN45 /Lin28 /pré-miR-Control et MKN28 /Lin28 /pré-miR-Control. Anti-miR-107 ou de contrôle transfections dans des cellules Lin28-négatives, MKN45 /Vector, ont donné MKN45 /Vector /cellules anti-miR-107 et MKN45 /Vector /anti-miR-Control, respectivement. Quarante-huit heures après la transfection, l'ARN a été recueilli et soumis à q-PCR pour détecter les différences de miR-107 dans l'expression MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /vecteur et les cellules /vecteur MKN28. L'effet de knockdown de Lin28 expression par Lin28 siRNA a également été évaluée. Après transfection avec Lin28, miR-107 expression était significativement régulée à la baisse, alors qu'après knockdown de l'expression Lin28, l'expression de miR-107 a augmenté. Quarante-huit heures après la transfection, de la pré-miR-107, les taux d'ARN Lin28 étaient significativement diminuées, et 96 heures après la transfection, Lin28 expression de la protéine était encore inférieure à celle du groupe témoin non transfectée. Cette constatation indique que miR-107 peut réguler l'expression de Lin28 (figure 5).

4. MiR-107 participe à la résistance chimio-drogue Lin28 médiée

La sensibilité de la chimiothérapie de 4 groupes de cellules, MKN45 /LIN28 /pré-miR-contrôle, MKN45 /LIN28 /pré-miR-107, MKN28 /Lin28 /pré-contrôle et miR-MKN28 /Lin28 /pre-miR-107, a été testé en utilisant la méthode du MTT 48 heures après la transfection avec pré-miR-107. Nous avons choisi les médicaments de chimiothérapie qui ont les effets les plus prononcés au cours de pré-test, OXA, PTX et ADM, et sélectionné un gradient de concentration de 5-6 selon les résultats préliminaires d'expériences préliminaires. Les résultats suggèrent que l'introduction de la pré-miR-107 dans des cellules positives LIN28 peut augmenter la sensibilité des cellules à la chimiothérapie. Apoptose test a montré que le nombre de cellules apoptotiques MKN45 /LIN28 a augmenté après la transfection avec pré-miR-107 (p < 0,05). test MTT de MKN45 /Lin28 /anti-miR-contrôle et MKN45 /Lin28 /anti-miR-107 chimiothérapie sensibilité a montré que l'inhibition de l'expression de miR-107 en MKN45 réduit la sensibilité à la PTX (figure 5).

par western blot et q-PCR, nous avons détecté les gènes et expression de protéines niveaux liés à la résistance aux médicaments dans MKN45 cellules /LIN28 qui avaient été transfectées avec pré-miR-107, y compris ceux de C-myc, P-gp, et cycline D1. Les résultats montrent que 48 heures après la transfection avec miR-107, l'expression de l'ARN et de protéine de c-myc et de la P-gp a diminué (p < 0,01), tandis que l'expression de la cycline D1 augmenté (p < 0,05) (figure 5).

5. Lin28 associé résistance chimio-médicament in vivo

Après 2 cycles de chimiothérapie, nous avons constaté que les tumeurs de xénogreffes de cellules MKN45 /LIN28 n'a pas réduit en volume et est devenu plus grand que ceux des autres groupes (MKN45 /Vector et MKN45 ). Dans les groupes à la fois le MKN45 /LIN28 et MKN45 /Vector, une des souris sont mortes, alors la chimiothérapie a été arrêté. Les tumeurs ont été excisées et leurs volumes analysés. Nous avons constaté que les tumeurs de xénogreffe MKN45 /LIN28 étaient plus grandes que les autres tumeurs après ADM et la chimiothérapie OXA (p < 0,01). (Figure 6)

Discussion

Dans la présente étude, nous avons étudié l'association d'expression Lin28 avec chimio-sensibilité dans les cellules de cancer gastrique. Nous avons constaté que la transfection avec Lin28 réduit la sensibilité des lignées cellulaires de cancer de l'estomac MKN45 et MKN28 à quatre types de réactifs chimiothérapeutiques (OXA, PTX, SMA, et 5-FU). En utilisant la technologie d'interférence siRNA à knockdown expression Lin28 pourrait inverser la chimio-résistance. Nous avons également montré que miR-107 pourrait réguler vers le bas l'expression Lin28, tout est également servi comme l'un des microARN cibles potentielles qui est régulé par Lin28. La surexpression de Lin28 régulés à la hausse C-myc et P-gp, tout régulé à la baisse de la cycline D1, ce phénomènes pourraient renverser par Lin28 siRNA ou transfection pré-miR-107. Cela pourrait avoir des mécanismes essentiels par lesquels Lin28 chimiosensibilité a diminué dans les cellules cancéreuses gastriques. À notre connaissance, cette étude est la première qui démontre Lin28 /miR-107 voie de signalisation pourrait être impliqué dans la résistance chimio-drogue dans le cancer gastrique.

La chimiothérapie est un traitement important pour les patients atteints de cancer de l'estomac, mais plus de 50% des patients développeront une résistance à la chimiothérapie. Les mécanismes possibles pour la chimio-résistance dans le cancer gastrique sont actuellement considérés comme incluant le transport trans-membranaire des transporteurs ABC, glutathione S transférase, l'activité de l'ADN topoisomérase, le gène du cancer mutation du gène p53 et l'apoptose liée voies. Une étude récente a révélé que microRNA joue un rôle important dans la résistance aux médicaments de chimiothérapie de cancer gastrique [15]. Dans un modèle de résistance des cellules tumorales, on a observé que les cellules souches cancéreuses jouent également un rôle important dans la résistance à la chimiothérapie. Le gène c-myc est l'un des marqueurs de surface des cellules souches cancéreuses, mais aussi un oncogene associé à la prolifération indéfinie immortalisation infini, et la promotion de la division cellulaire [16]. Une étude a indiqué que 40% des patients atteints de cancer gastrique ont C-myc surexpression du gène et que plus l'expression de C-myc est associée à plus mauvais pronostic [16-18]. Des études ont également rapporté une corrélation entre le gène C-myc et l'apoptose. expression de c-myc peut conduire à une diminution de l'apoptose des cellules tumorales. Le taux d'apoptose des cellules et de la sensibilité à des facteurs induits dépendent des niveaux de protéine C-myc [19]. En outre, la surexpression de c-myc est associée à la radiothérapie et la résistance à la chimiothérapie. P-gp En outre, C-myc peut régulés à la hausse, ce qui peut induire des efflux de réactifs chimiothérapeutiques conduit à la résistance à la chimiothérapie [20]. l'arrêt du cycle cellulaire peut affecter la réponse de cellules cancéreuses à certains médicaments de chimiothérapie (par exemple, PTX), qui joue un rôle dans la phase G2 /S diminue la sensibilité aux médicaments. La protéine du cycle cellulaire cycline D comprend trois sous-types, D1, D2 et D3, et est un facteur d'initiation du cycle cellulaire. Sa suppression par le facteur de croissance transformant -β1 (TGF-β1) empêche les cellules d'entrer dans le cycle cellulaire de telle sorte qu'ils restent dans un état de repos [21]. Cycline D combine spécifiquement à CDK4 /6 à phosphoryler et à inactiver la protéine de rétinoblastome (pRb), contribuant ainsi à la transition G1 /S et l'initiation de la synthèse de l'ADN [21]. Dans l'étude actuelle, nous avons trouvé Lin28 ne sont pas pertinentes avec Bcl-2, NF-kB et TOPO II dans les cellules de cancer gastrique. Le partenariat entre Lin28 et microARN a été bien établi, comme let-7, miR-200c, miR-143 [4,22]. Lin28 surexpression down-régule microRNA, tandis que microRNA peut aussi affecter négativement l'expression de Lin28. Lin28 conjointement avec TUT4 constitue un régulateur négatif, qui influe sur la maturation et l'homéostasie des microARN [4,22]. Par la régulation des gènes en aval, microARN est impliquée dans la différenciation et la prolifération cellulaire, le métabolisme cellulaire, la réponse au stress et à la formation de vaisseaux sanguins. Cheng et al [23] ont trouvé que, après l'inhibition de miR-107, la croissance des cellules HeLa de cancer du col de l'utérus et des cellules cancéreuses du poumon A549 a été promu. Marijn et al [24] ont trouvé que l'expression de miR-107 dans les cellules de cancer de l'ovaire résistant aux médicaments a été régulée à la baisse. Notre étude a révélé que Lin28 peut également empêcher la maturation de miR-107, et l'introduction de miR-107 augmentation gastrique cellule cancéreuse chimio-sensibilité à OXA, PTX et ADM. Après transfection des anti-miR-107, cette sensibilité diminuée. Pré-miR-107 a provoqué une diminution de l'expression de Lin28, illustrant que la voie Lin28 /miR-107 peut être impliqué dans les changements de chimiosensibilité du cancer de l'estomac.

En résumé, nous avons montré que Lin28 pourrait inhiber la l'expression de miR-107, ainsi régulant à la hausse C-myc, P-gp et la régulation négative de la cycline D1, ensuite, à la chimio-résistance des cellules cancéreuses gastriques. La voie Lin28 /miR-107 peut être servi comme l'une des nombreuses voies de signalisation qui est associée à un cancer gastrique chimio-résistance. Notre étude peut fournir de nouvelles connaissances sur le mécanisme de chimiorésistance du cancer gastrique. Lin28 /miR-107 peut être une nouvelle cibles thérapeutiques potentielles pour le cancer gastrique chimiothérapie résistant.

Informations complémentaires
Tableau S1. les données minimales pour tous ces chiffres
doi: 10.1371. /journal.pone.0143716.s001
(XLSX)

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