Абстрактный
<р> выражение высшего Lin28 связана с худшими патологических реакций опухоли в локально передовых больных раком желудка, подвергающиеся неоадъювантной химиотерапии. Тем не менее, характеристики Lin28 и механизм его действия сопротивления химиотерапии до сих пор неясно. В этом исследовании мы обнаружили, что трансфекцию Lin28 в клеток рака желудка (MKN45 и MKN28) увеличили их устойчивость к химио- препаратов Оксалиплатин (ОХА), паклитаксел (PTX), доксорубицин (ADM) и фторурацила (5-ФУ) по сравнению с клеток рака желудка, трансфицированных вектором управления. Когда нокдаун выражение Lin28 по Lin28 малых интерферирующих РНК (миРНК) была оценена в пробирке, мы обнаружили, что устойчивость к химио-препаратов была снижена. Кроме того, мы обнаружили, что Lin28 вверх регулирует C-Myc и P-зм и вниз регулирует Cylin D1. И, наконец, мы обнаружили, что микроРНК-107 является мишенью микроРНК из Lin28 и что он участвует в механизме сопротивления химиотерапии. Наши результаты свидетельствуют о том, что Lin28 /микроРНК-107 путь может быть одним из многих сигнальных путей, регулируемых Lin28 и связанных с раком желудка химио- сопротивления
<р> Образец цитирования:. Teng R, Ху Y, Чжоу J, Seifer B, Чэнь Y, Shen J, и др. (2015) Гиперэкспрессия Lin28 Уменьшает химиочувствительность клеток рака желудка к оксалиплатина, паклитаксел, доксорубицин, фторурацил и в части через микроРНК-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. DOI: 10.1371 /journal.pone.0143716
<р> Редактор: Наташа Киприану, Университет Кентукки медицинский колледж, США
<р> Поступило: 23 июня, 2015 года; Принято: 8 ноября 2015 года; Опубликовано: 4 декабря 2015
<р> Copyright: © 2015 Тэн и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> Финансирование:. Поддержка была оказана ZHEJIANG Провинциальный фонд естественных наук Китая: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка является частой клинической пищеварительной системы злокачественной опухоли с уровнем смертности, которая занимает третье место в мире [1]. Наша страна является областью, которая склонна к раку желудка. В последние годы, нео-адъювантной химиотерапии вводили у больных раком желудка, чтобы продлить выживание. Тем не менее, 5-летняя выживаемость пациентов с поздними стадиями рака желудка по-прежнему ниже, чем 30% [2]. Сопротивление Химиотерапия является основной причиной отказа рака желудка и других опухолей лечения. Таким образом, механизм химиотерапии резистентности рака желудка в настоящее время является серьезной проблемой в желудочном исследований рака.
<Р> Lin28 является высоко консервативен РНК-связывающий белок, который, как было показано участие в индукции плюрипотентных стволовых клеток и в поддержании стебле клеточно-подобные клетки при раке. Недавние исследования показали, что аномальным активации Lin28 хорошо коррелирует с прогнозом различных видов рака, включая рак груди, яичников, легких, толстой кишки и рака печени [3-6]. Наше предыдущее исследование показало, что экспрессия Lin28 также связана с плохой выживаемостью в больных раком желудка [7], а другое исследование показало, что экспрессия Lin28 коррелирует с устойчивостью к паклитаксела в клетках рака молочной железы человека [8]. Кроме того, выражение Lin28 связано с патологической реакции опухоли при местно-распространенном раке желудка, проходящих нео-адъювантной химиотерапии. Однако, молекулярный механизм, лежащий в основе этих выводов, остается неясным [9].
<Р> Lin28 способствует туморогенез подавляя супрессоров опухолей, таких как микроРНК выпускаемого-7 семьи, которая связана с лекарственной устойчивостью [8]. Тем не менее, в качестве мишени микроРНК из Lin28, микроРНК-107 редко упоминается как фактор устойчивости к лекарственному средству при раке желудка. Выражение MIR-107 уменьшается в различных злокачественных опухолей, таких как рак толстой кишки, рак головы и шеи, рака поджелудочной железы и рака желудка [10-13]. MIR-107 регулирует нижестоящие гены, которые участвуют в дифференциации и пролиферации клеток, обмена веществ, реакции на стресс и формирование кровеносных сосудов [10-14]. В данном исследовании мы исследовали Lin28 /микроРНК-107 путь и его роль в устойчивости клеток рака желудка к химиотерапии. Возможно, мы идентифицировали новую потенциальную мишень для химиотерапии устойчивых к раку желудка.
1. Культура клеток и трансфекция плазмида
<р> Линии клеток желудка человека MKN-28 и MKN-45 были получены в дар от профессора Sung Hoon Noh (Университета Йонсей колледж медицины, Сеул, Корея). Клетки культивировали в среде RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, штат Миссури, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (MP Biomedicals, Коста Меса, штат Калифорния, США) в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2 при 37 ° C. Оксалиплатина, паклитаксел, доксорубицин, фторурацил и были приобретены у Sigma (St. Louis, MO). Плазмиду pcDNA3.1-Lin28 трансфицировали Xtreme GENE HP трансфекции ДНК Реагент (Roche Applied Science, Мангейм, Германия) в соответствии с протоколом производителя. Стабильные Lin28 экспрессирующих клоны были дополнительно отобраны и культивируют с соответствующим неомицина, содержащей RPMI 1640 среде.
3. Сотовый лекарственной устойчивости Анализ 8. Ксенотрансплантата Анализ и лечение 1. В пробирке тестирования изменений чувствительности химиотерапии в желудочном раковых клетках, стабильно экспрессирующих Lin28 3. MIR-107 является целевой микроРНК из Lin28 5. Lin28 связано сопротивление химио-препарат в естественных условиях Обсуждение
<р> Жизнеспособность клеток измеряли с использованием МТТ [3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид] анализ (Amresco, Солон, Огайо, США) в соответствии с протоколом производителя. Клетки высевали в 96-луночные планшеты при плотности 5 * 10 3 клеток на лунку. После обработки клетки инкубировали с 5 мг /мл МТТ в течение 4 ч. Затем среду удаляли и 150 мл стерилизованного раствора ДМСО, с последующим инкубированием при 37 ° С в течение 4 ч. Значение ОП был получен при длинах волн 570 нм и 630 нм. Значение OD (570 нм до 630 нм) может косвенно отражает количество клеток и активность в соответствии со следующей формулой: приживаемость = дозированное группа OD570-630 /Доза, группа OD570-630. Кривая концентрации выживания клеток /лекарственное средство затем генерируется.
4. Вестерн-блот-анализ
<р> Клеточные лизаты разделяли с помощью электрофореза на 4-15% додецилсульфата натрия сульфат-полиакриламидном градиентном минигелей (SDSPAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA) и электрофоретически переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Вестерн-блоты зондировали антителами против Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), каспазы и скола каспазы, циклин D1, NF-кБ (Cell Signaling, Беверли, MA), CDK6, C-Myc (Abcam Trading ( Шанхай) Компания, Шанхай, Китай), P-зм и Bcl-2 (Хуань биотехнологии, Пекин, Китай). Белковые полосы были обнаружены с помощью усиленной хемилюминесценции (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).
5. Flow Cytometric Анализ
<р> Клетки (2 * 10 5 на лунку) высевали в шесть-луночного планшета и обрабатывали паклитакселом. Через 72 ч клетки фиксировали в 70% этаноле и окрашивали пропидийиодидом (PI). Содержание ДНК анализировали с потоком эпосов профиля II цитометр (Beckman Coulter, Fullerton, CA) с программным обеспечением многотактной (Flow Systems Феникс, Сан-Диего, Калифорния). Все эксперименты повторяли по крайней мере дважды. ПИ был также использован в сочетании с аннексина V (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния), чтобы определить, есть ли клетки были жизнеспособными, апоптическая или некротической.
6. Мирна Трансфекция и обнаружение
<р> Клетки высевают в шесть-луночные культуральные планшеты и трансфицировали 50 нМ предварительного микроРНК-107, приобретенного у Applied Biosystems (Карлсбад, Калифорния) или контролировать предварительно микроРНК в соответствии с протоколом производителя. Количественные в режиме реального времени полимеразной цепной реакции (ПЦР) проводили с использованием TaqMan микроРНК обратной транскрипции Kit и быстрый ПЦР-системы в режиме реального времени (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) в соответствии с протоколами производителя. Складка изменение уровней микроРНК-107 микроРНК рассчитывали и нормированы управления загрузкой HSA-Mir-423.
7. Животные
<р> BALB /с мышей в возрасте 3-4 недель, весом 18-22 г были приобретены у лабораторных животных SLAC компании (SCXK-2007-004, Шанхай, Китай) и пять размещались на клетку в конкретного патогена (SPF) окружающей среды. Животным давали возможность акклиматизироваться к объектам жилищного фонда в течение 7 дней до начала экспериментов. процедуры обработки животных были проведены в соответствии с законодательством П. Р. Китай по использованию и уходу за лабораторными животными и одобрено комитетом по этике экспериментального животного Чжэцзян университета (Чжэцзян, Китай) с помощью.
<р> Короче говоря, группы из шести мышей BALB /с подкожно вводили 1 * 10 6 MKN45 /Lin28, MKN45 /Вектор, или MKN45 клеток в правый бок. Объем опухоли рассчитывали по формуле: V = 1/2 * а
* б
2, где а
и б <бр> являются самыми длинными и самыми короткими диаметры опухолевой массы (в миллиметрах), соответственно. Когда опухоли достигали приблизительно 80 мм 3, мышей обрабатывали инъекцией ADM (50мг /кг) и ОХА (5УМ /кг) каждую неделю в течение 2-х недель. Количественные изменения веса тела и опухоли объема измеряли каждые три дня одним человеком с использованием баланса и штангенциркуль. Нет анестетики не использовались в экспериментах мыши.
9. Статистический анализ
<р> Все эксперименты проводились три раза с трех образцов. Анализ дисперсии и т-критерия Стьюдента были использованы для сравнения значений исследуемых и контрольных образцов. P-значение меньше 0,05 считается статистически значимым. Statistica 6.1 программное обеспечение было использовано для всех статистических анализов. Значение оценивали с помощью критерия Стьюдента.
Результаты
<р> отбирали и культивировали два штамма клеток рака желудка с отрицательным выражением Lin28 (MKN45 и MKN28). Мы определили клеток рака желудка со стабильной экспрессии Lin28 из устойчивых трансфицированных клонов (MKN45 /Lin28 /C2 и MKN28 /Lin28 /C3) с использованием Вестерн-блоттинга и Q-PCR (рис.1).
<Р> Выделенный MKN45 /Lin28C2, MKN45 /Vector, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vector и MKN28 клетки тестировали на чувствительность химиотерапии наркотиков. Мы выбрали следующие четыре часто используемых клинических препаратов химиотерапии для лечения рака желудка: Окса, PTX, ADM и 5-фу. Лечение с помощью окса, PTX и ADM продолжалось в течение 48 часов, в то время как введения 5-фторурацила продолжалась в течение 72 часов. После Lin28 трансфекции MKN45 и MKN28 клетки имели пониженную чувствительность к окса- PTX, ADM, и 5-FU, который был наиболее выражен для ОХА и PTX. Значения IC50 были более чем вдвое больше, чем в контрольной группе (рис 1).
<Р> На основе МТТ-анализе, мы использовали проточной цитометрии, чтобы обнаружить различия в апоптозе между Lin28-положительных, так и отрицательных Lin28-клеток после химиотерапии PTX воздействия. MKN45 /Lin28, MKN45 /Вектор и группы MKN45 Клеточные получили 0 мкМ и 0,1 мкМ лечение PTX в течение 24 часов, а затем дважды проводили окрашивание, чтобы обнаружить апоптоз клеток. Апоптическая скорость трансфекции клеток Lin28 была ниже, чем у не-трансфицированных клеток (р ≪ 0,05). Кроме того, Вестерн-блоттинг белков, собранных из клеток, обработанных 0,1 мкМ PTX показал, что апоптоз была снижена в клетках MKN45 /Lin28, как показано уменьшением в активации каспазы 9 и каспазы 3 (рис.2).
<Р> Переходные трансфекция киРНК-Lin28 должны ингибировать уровни экспрессии Lin28 в MKN45 /Lin28 и клеток MKN28 /Lin28 48 часов после передачи в соответствии с экспериментальными указаниями производителя реагента. экспрессия белка Lin28 был обнаружен, и связанный с ним чувствительности к лекарственным препаратам тестировали. экспрессия Lin28 РНК в клетках рака желудка был обнаружен д-ПЦР, в то время как экспрессия белка определяли с помощью Вестерн-блоттинга (рис 3).
<р> Q-ПЦР показал, что экспрессия мРНК Lin28 в MKN45 /Lin28 /Si-Lin28 ( 48 ч) и MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 (72 ч) клеток была значительно ниже, чем в клетках /Lin28 /SI-управления MKN45 (р ≪ 0,01). Этот трансфекция эффект был также проверен в клетках MKN28 /Lin28. Вестерн-блоттинг показал, что Lin28 Si-РНК значительно ингибирует экспрессию белка Lin28 в MKN45 /Lin28 и MKN28 /Lin28 клеток.
<Р> дл анализа МТТ проводили на четырех типах клеток (MKN45 /Lin28 /SI-контроль, MKN45 /Lin28 /SI-Lin28, MKN28 /Lin28 /SI-контроль, и MKN28 /Lin28 /SI-Lin28 клетки), которые были трансфицированы Lin28 миРНК в течение 48 часов с целью оценки чувствительности химиотерапии. Мы решили использовать химиотерапевтические препараты, которые имели наиболее выраженный эффект в предварительном тестировании: Окса, PTX и ADM. Мы выбрали градиент концентрации 5-6 по предварительным результатам предварительных экспериментов. Вмешательство миРНК снижала экспрессию Lin28 и Lin28-положительные клеточные линии имели повышенную чувствительность к химиотерапевтическим лекарственным средствам (рис 3).
<Р> Затем мы обнаружили чувствительность клеток к различным химиотерапевтических препаратов после понижающей регуляции Lin28 , Клетки были разделены на 4 группы, MKN45 /Lin28 /Si-контроль, MKN45 /Lin28 /си-Lin28, MKN28 /Lin28 /Si-управления и MKN28 /Lin28 /си-Lin28, и были протестированы с химиопрепараты ОХА и PTX соответственно , Были выбраны концентрации лекарственного средства химиотерапии (ОХА 3,2 мкг /мл и PTX 1 мкМ) в соответствии с результатами предварительных экспериментов. Количество апоптотических MKN45 /Lin28 и клеток MKN28 /Lin28 был меньше, чем у MKN45 /Lin28 /Si-Lin28 и клеток MKN28 /Lin28 /SI-Lin28 (р ≪ 0,05). Этот результат указывает на то, что понижающая регуляция экспрессии Lin28 может увеличить апоптоз клеток (рис 3).
2. Молекулярные механизмы, с помощью которых Lin28 изменения чувствительности химиотерапии
<р> Мы обнаружили сопротивления, связанные с наркотиками уровни экспрессии генов с помощью д-ПЦР в MKN45 /Lin28 и MKN45 /вектором cells.P-Г.П., и C-Myc уровни РНК заметно увеличились и уменьшились циклин D1 уровень РНК, в то время как другой Bcl-2, CDK6, NF-кБ, TOP II не показали существенной разницы между MKN45 /Lin28 и MKN45 /вектор cells.Also это лекарственное средство сопротивления связанных экспрессии генов были исследованы вестерн-блот в MKN45 /Lin28 и MKN45 /вектор клеток, которые показали устойчивую тенденцию, что P-зм и экспрессия C-Myc белок в то время как увеличение циклин D1 уменьшается. Однако экспрессия Bcl-2 снизился, экспрессия NF-кБ не изменилась, и экспрессия циклина D1 и протеинкиназа CDK6 была снижена (рис 4).
<Р> После того, как выражение Lin28 подавлялось трансфекцией Lin28 миРНК, уровни РНК P-Г.П., C-Myc и циклин D1 были пересмотрены. После снижения уровня РНК Lin28, Р-Г.П. и с-Мус были значительно понижающей регуляции, в то время как уровни циклина D1 значительно увеличился. Обнаружение P-Г.П., C-Myc и экспрессии циклина D1 с помощью Вестерн-блоттинга показал, что после ингибирования экспрессии Lin28, P-ЗТ и экспрессии C-Myc белка была значительно вниз регулируется, в то время как экспрессия циклин D1 существенно усиливает свою активность ( Рисунок 4).
<р> Во время тестирования РНК Lin28 и уровни микроРНК-107 в желудочном линиях раковых клеток, мы нашли взаимное торможение Lin28 и MIR-107 в клеточных линиях MKN45 и AGS. Кроме того, микроРНК-107 был вниз регулируется в MKN45 /Lin28 и MKN28 /Lin28 клеток. Нокдаун экспрессии Lin28 отменил это торможение. В последующем эксперименте, Lin28-позитивных клеток, MKN45 /Lin28 и MKN28 /Lin28, трансфицировали предварительно микроРНК-107 и впоследствии были причислены к MKN45 /Lin28 /пре-микроРНК-107 и MKN28 /Lin28 /pre- микроРНК-107 клеток. Трансфицированных клетки предварительно микроРНК-контроль назывались MKN45 /Lin28 /пре-Mir-Control и MKN28 /Lin28 /пре-Mir-Control. Анти-микроРНК-107 или управления трансфекцию в Lin28-негативных клеток, MKN45 /Вектор, дали MKN45 /вектор /анти-MIR-107 и MKN45 /вектор /анти-MIR-контрольными клетками, соответственно. Через сорок восемь часов после трансфекции РНК собирали и подвергали д-ПЦР для выявления различий в экспрессии микроРНК-107 в MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /вектор, MKN28 /вектор клеток. Эффект нокдауна экспрессии Lin28 по Lin28 миРНК была также оценена. После трансфекции с Lin28, микроРНК-107 экспрессия была значительно понижающей регуляции, а после нокдауна экспрессии Lin28, экспрессия микроРНК-107 увеличилась. Через сорок восемь часов после трансфекции предварительно микроРНК-107, уровни Lin28 РНК были значительно уменьшились, а через 96 часов после трансфекции, экспрессии белка Lin28 был еще ниже, чем у не-трансфицировали контрольной группы. Это открытие указывает на то, что микроРНК-107 может регулировать экспрессию Lin28 (рис.5).
4. MIR-107 участвует в Lin28-опосредованной сопротивления химио-лекарственное средство
<р> Химиотерапия чувствительность 4-х групп клеток, MKN45 /Lin28 /пре-микроРНК-регулирования, MKN45 /Lin28 /пре-микроРНК-107, MKN28 /Lin28 /предварительно микроРНК-контроль и MKN28 /Lin28 /пре-микроРНК-107, была протестирована с помощью метода МТТ через 48 часов после трансфекции с предварительным микроРНК-107. Мы выбрали химиотерапевтические препараты, которые имели наиболее выраженный эффект во время предварительного тестирования, окса-, PTX и ADM, и выбрал градиент концентрации 5-6 согласно предварительным результатам предварительных экспериментов. Эти результаты свидетельствуют о том, что введение предварительного MIR-107 в Lin28-положительных клеток, может увеличить чувствительность клеток к химиотерапии. Тестирование показало, что Апоптоз количество MKN45 /Lin28 апоптотических клеток увеличивалось после трансфекции с предварительной MIR-107 (р &л; 0,05). МТТ тестирование MKN45 /Lin28 /анти-MIR-контроль и MKN45 /Lin28 /анти-микроРНК-107 чувствительность химиотерапии показали, что ингибирование экспрессии микроРНК-107 в MKN45 снижается чувствительность к PTX (рис 5).
<Р> По вестерн-блоттинга и д-ПЦР, мы обнаружили уровни и экспрессии генов белка Лекарственная устойчивость связанных в MKN45 клеток /Lin28, которые были трансфицированы предварительно микроРНК-107, в том числе и с-Мус, P-Г.П., и циклин D1. Результаты показали, что через 48 часов после трансфекции MIR-107, экспрессии РНК и белка с-Мус и P-ЗТ снизились (р ≪ 0,01), в то время как экспрессия циклина D1 увеличена (р ≪ 0,05) (рис.5).
<р> После 2 циклов химиотерапии, мы обнаружили, что ксенотрансплантата опухоли клеток MKN45 /Lin28 не снижала в объеме и стали больше, чем у других групп (MKN45 /Vector и MKN45 ). В обоих MKN45 /Lin28 и MKN45 /векторные группы, одна из мышей умерли, так что химиотерапия была остановлена. Опухоли вырезали и анализировали их объемы. Мы обнаружили, что ксенотрансплантата опухоли MKN45 /Lin28 были больше, чем другие опухоли после ADM и окса химиотерапии (р &л; 0,01). (Рис.6)
<р> В настоящем исследовании, мы исследовали ассоциация экспрессии Lin28 с химио- чувствительности клеток рака желудка. Мы обнаружили, что трансфекция с Lin28 снижает чувствительность желудка линий раковых клеток MKN45 и MKN28 к четырем типам химиотерапевтических реагентов (окса- PTX, ADM, и 5-ФУ). Используя технологию помех миРНК в нокдаун экспрессию Lin28 может отменить химио- сопротивление. Мы также показали, что микроРНК-107 может вниз регулировать экспрессию Lin28, а также служил в качестве одного из потенциальных мишеней микроРНК, который регулируется Lin28. Сверхэкспрессия Lin28 до регулируемого C-Myc и P-Г.П., в то время как вниз регулируется циклин D1, это может обратить вспять феномены путем Lin28 миРНК или трансфекцию предварительного микроРНК-107. Это может быть критические механизмы, с помощью которых Lin28 в химиочувствительность уменьшились клеток рака желудка. Насколько нам известно, это первое исследование, которое демонстрирует Lin28 /микроРНК-107 сигнальный путь может быть вовлечен в сопротивление химио- препарата при раке желудка.
<Р> Химиотерапия является одним из основных для лечения больных раком желудка, но более чем у 50% пациентов будет прогрессировать к сопротивлению химиотерапии. Возможные механизмы химио-резистентности при раке желудка в настоящее время считаются включать трансмембранный перенос ABC транспортеров, глутатион S-трансферазы, активность топоизомеразы ДНК, мутации гена р53 рака и путей, связанных с апоптозом. Недавнее исследование показало, что микроРНК играет важную роль в химиотерапии рака желудка лекарственной устойчивости [15]. В качестве модели резистентности опухолевых клеток, было обнаружено, что раковые стволовые клетки также играют важную роль в устойчивости к химиотерапии. Ген с-Мус является одним из поверхностных маркеров раковых стволовых клеток, но также онкоген, связанный с неограниченной пролиферации, бесконечным иммортализации и продвижение клеточного деления [16]. В одном исследовании сообщалось, что 40% пациентов с раком желудка у С-Мус генов гиперэкспрессия и выше C-Myc выражение связано с худшим прогнозом [16-18]. Исследования также сообщили о корреляции между C-Myc гена и апоптоза. Выражение C-Myc может привести к снижению апоптоз опухолевых клеток. Апоптическая скорость клеток и чувствительность к индуцированных факторов зависят от уровней белка C-Myc [19]. Кроме того, С-Мус избыточная экспрессия связана с излучением и сопротивлением химиотерапии. Кроме того, С-Мус может повышающей регуляции Р-Г.П., которые могут индуцировать effluxing химиотерапевтических реагентов привело к сопротивлению химиотерапии [20]. Остановку клеточного цикла может повлиять на реакцию раковых клеток к химиотерапии некоторых лекарств (например, PTX), который играет роль в G2 /S фазы снижается чувствительность наркотиков. Белок клеточного цикла циклин D имеет три подтипа, D1, D2, D3, а также является фактором инициации клеточного цикла. Ее подавление трансформирующий фактор роста -β1 (TGF- 1) предотвращает клетки от входа в клеточный цикл, таким образом, что они остаются в состоянии покоя [21]. Циклин D специфически связывается с CDK4 /6 фосфорилировать и инактивировать белок ретинобластомы (PRB), тем самым способствуя переходу /S G1 и инициации синтеза ДНК [21]. В настоящем исследовании мы обнаружили Lin28 не имеют отношения с Bcl-2, NF-кВ и ТОРО II в желудочном раковых клеток. Партнерские отношения между Lin28 и микроРНК была хорошо установлена, например, как пусть-7, микроРНК-200c, микроРНК-143 [4,22]. Lin28 избыточная экспрессия вниз регулирует микроРНК, в то время как микроРНК может также негативно влиять на экспрессию Lin28. Lin28 вместе с TUT4 является негативным регулятором, который влияет на созревание и гомеостаза микроРНК [4,22]. Регулируя генов вниз по течению, микроРНК участвует в дифференциации и пролиферации клеток, клеточного метаболизма, реакции на стресс и формирование кровеносных сосудов. Чанга и др [23] обнаружили, что после того, как ингибирования микроРНК-107, рост HeLa клеток рака шейки матки и раковые клетки А549 легких был повышен. Marijn и др [24] обнаружили, что экспрессия микроРНК-107 в клетках рака яичников с лекарственной устойчивостью подавлялась. Наше исследование показало, что Lin28 может также сдерживать созревание микроРНК-107, а также введение микроРНК-107 увеличить клетку рака желудка химио-чувствительность к ОХА, PTX и ADM. После трансфекции анти-MIR-107, эта чувствительность уменьшается. Предварительно микроРНК-107 вызывает снижение экспрессии Lin28, иллюстрирующий, что Lin28 /микроРНК-107 путь может быть вовлечен в изменения химиочувствительность рака желудка.
<Р> Таким образом, мы показали, что Lin28 может ингибировать экспрессия микроРНК-107, в результате чего до регулирующего C-Myc, P-зм и вниз для регулирования циклин D1, впоследствии привести к химио-резистентности клеток рака желудка. Lin28 /микроРНК-107 путь может быть подан в качестве одного из многих сигнальных путей, который связан с раком желудка химио-резистентности. Наше исследование может обеспечить новое понимание механизма желудочного химиорезистентность рака. Lin28 /микроРНК-107 может представлять собой новые потенциальные терапевтические мишени для химиотерапии устойчивых к раку желудка.
Поддержка Информация
S1 Таблица. Минимальные данные для всех этих фигур
DOI: 10.1371. /Journal.pone.0143716.s001
(XLSX)
Метабаркодирование ДНК может улучшить анализ рациона человека
Клещи теперь переносят множество болезней,
Как укрепить свою иммунную систему для борьбы с коронавирусом
Микробиом легких предсказывает тяжесть заболевания COVID-19
Устойчивость к антибиотикам удвоится всего за два десятилетия
Влагалищные бактерии, способствующие преждевременным родам
Микробиом легких предсказывает тяжесть заболевания COVID-19
Новый препринт исследовательской работы размещен в medRxiv * сервер обнаружил, что изменения в микробиоме легких во время тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-C
Новая модель трансплантации микробиома влагалища
Бактериальный вагиноз - это заболевание, от которого страдают тысячи женщин во всем мире. и связан не только с вагинальными симптомами, но и с осложнениями, связанными с беременностью, включая преждев
Исследования показывают, что заражение кишечными паразитами снижает тяжесть COVID-19
Каждый день мы узнаем больше о болезни COVID-19. Взрослые любого возраста с определенными основными заболеваниями подвержены повышенному риску тяжелого заболевания, вызванного вирусом, вызывающим COVI