Abstract
Ozadje
Obsežen iskanje DNK metilira geni identificirane kandidat zaviralnih genov, ki so bili dokazano, da sodelujejo pri apoptoze v p53 Metode metilacije profilov 3 genov. PGP9 Rezultati p53 Pri raku želodca, p53 Citation mehanizma:. Waraya M, Yamashita K, Ema a, Katada N, Kikuchi s, Watanabe M (2015) Edinstven združenje p53 Urednik: Qian Tao, kitajski University of Hong Kong, Hong Kong Prejeto: March 31, 2015; Sprejeto: 18. september 2015; Objavljeno: 8. oktober 2015 Copyright: © 2015 Waraya et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v papir in njene dodatne informacije datotek Financiranje:. To delo je bilo podprto v delu, ki ga je Grant-in pomoč za raziskave raka, ki ga je ministrstvo za zdravje, delo in blaginjo Japonske in japonske fundacije za multidisciplinarno zdravljenje raka. Agencije za financiranje imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje podatkov, ali analizo; pri razlagi rezultatov; pri pripravi rokopisa; ali v odločbi, da predloži rokopis za objavo nasprotujočimi si interesi. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi Uvod DNA metilacija igra osrednjo vlogo v. gen utišanje zaviralnih genov pri raku ljudi. Rak specifična metilacija gen je redka entiteta, in pogosto aberacija izmed metilacije v primarnih tumorskih tkiv še bolj redko [1, 2]. Identificirali smo raka specifične metiliranih genov v vsakem organu pomočjo farmakološkega razkrinkanje mikromrež (PUM) [1, 2] in spremenjeni PUM [3-5]. Identificirali smo veliko kandidat zaviralnih genov (ZTP), kot je PGP9 Najpomembneje je, da je bil ta kandidat zaviralnih genov poročali, da je v p53 v tej študiji smo raziskovali metilacijski status DNA genov v p53 Načini Cell želodca rakave celične linije, KatoIII, NUGC4, AZ521 in SH10 bili kupljeni od RIKEN Bioresource Center (Ibaraki, Japonska). In hepatocelularni karcinom linija HepG2 smo kupili pri American Type Culture Collection (Manassas, VA). Te celične linije razen AZ521 in HepG2 gojimo v RPMI 1640 mediju (GIBCO, Carlsbad, CA) z dodatkom 10% fetalnega govejega seruma. AZ521 in HepG2 gojimo v DMEM mediju (GIBCO), dopolnjen z 10% FBS. Pari (n = 163) iz formalinom določen,-parafinski vgrajeni (FFPE) tumorsko tkivo in ustreznih normalnih osebkov sluznice dobljenih pri najmanj 5 cm od roba tumorja so bili pridobljeni pri bolnikih, ki so bili operirani med 1. januarjem 2000 in 31. decembrom 2010. vsi bolniki s stopnjo II /III GC so prestali potencialno kurativno resekcijo za primarno GC, in doživela adjuvantno s -1 kemoterapijo po operaciji (S-1 standardno zdravljenje). Neo-adjuvans terapija ni bila izvedena v tej kohorti bolnikov. Tumorji so bile razvrščene v skladu s klasifikacijo TNM po 7 th izdaja Unije za mednarodni nadzor raka (UICC) in 14 th izdaji japonski klasifikacije želodca karcinomom (JCGC). Značilnosti bolnikov so prikazani v tabeli 1. Vse vzorce tkiva so bili zbrani v Univerzitetni bolnišnici Kitasato in pisno privolitev je bila pridobljena iz vseh bolnikih in zdravih darovalcev pred odvzemu vzorca. Sedanja študija je odobril Odbor za etiko Kitasato univerze. mutacije eksonov 5, 6, 7 in 8 p53 genomske DNK iz FFPE tkiv in celičnih linij je bila vzeta z QIAamp DNA FFPE tkivo komplet (QIAGEN Sciences, Maryland, MD) in QIAamp DNK Mini Kit (QIAGEN) po protokolih proizvajalca. Za denaturacijo DNA, 2 ug genomske DNA smo inkubirali s 5 ig DNA lososove sperme v 0,3 mol /l NaOH 20 minut pri 50 ° C. Vzorec DNK smo nato razredčili s 500 ul raztopine, ki vsebuje 2,5 mol /l natrijevega metabisulfita (Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO) /125 mmol /l hidrokinon (Sigma) /0,4 mol /l raztopino natrijevega hidroksida, in inkubiramo pri 70 ° C 1,5 ure. Vzorec je bil nato nanesemo na kolono (Čarovnik DNK čiščenje System, Promega Inc., Madison, WI), inkubiramo z 0,3 mol /l NaOH 10 minut, nato obdelamo s 3 mol /l amonijevega acetata 5 minut. Vzorec smo oborili v 100% etanolu in DNA resuspendiramo v 50 ul lote vsebuje 10 mikrometrov Tris-HCl, pH 8 in 2,5 uM etilen diamin tetra ocetno kislino (EDTA), pH 8, in je bil nato pomnožili z verigo polimerazne reakcijo (PCR). Bisulfit rezultati zdravljenja v kemijske spremembe nemetiliran, vendar ne metilni, cytosines do uracili, ki omogoča razlikovanje med metiliranega in nemetiliran genomske DNA. za kvantitativno analizo metilacije, TaqMan metilacija specifični PCR (Q-MSP) je bila izvedena s pomočjo iQ ™ Multiplex POWERMIX (Bio-Rad) v treh izvodih na iCycler iQ ™ Real-Time sistem za zaznavanje PCR (Bio-Rad). Pogoji PCR in zaporedja so navedeni v tabeli S1. Serijske razredčitve bisulfit spremenjen CpGenome univerzalno metiliran DNK (Chemicon International, Temecula, CA) so bile uporabljene za sestavo kalibracijske krivulje na vsak krožnik, saj je metilacije pozitivne kontrole in CpGenome univerzalna nemetiliran DNA (Chemicon International) kot negativno kontrolo. Metiliranje vrednost (TaqMeth vrednost) je bila opredeljena kot razmerje med metilira PGP9 imunohistokemijsko za PGP9.5, NMDAR2B in CCNA1 za imunskim barvanjem, antigen demaskiranje smo izvedli z avtoklav namakanja je endogene peroksidaze aktivnost blokirali z inkubacijo pri 3% H 2O 2 /metanola 5 minut in vezavo nespecifične protitelesa smo blokirali z inkubacijo z 1% razredčeno normalno konjski serum za 30 minut. Odseki smo nato inkubirali pri 4 ° C preko noči pri naslednjih protiteles: kunec PGP9.5 poliklonsko protitelo (razredčenje 1:. 200, Nonus BIOGENESIS), kunec NMDAR2B poliklonsko protitelo (razredčenje 1: 100, Millipore) ali miš ciklin monoklonsko protitelo (6E6, redčenje 1:50, Leica Biosystems Newcastle. Ltd). Imunski kompleksi so bile ugotovljene z Vectastain Elite ABC kit (Vector Laboratories, Inc, BURLINGAME, CA), v skladu z navodili proizvajalca. Ti imunski kompleksi so bile ugotovljene z 3,3'-diaminobenzidine substrat (Vector) kot kromogena (PGP9.5 1,5 minute, NMDAR2B 6 minut, CCNA1 10 minut). Oddelki so jih nasprotno s hematoksilinom. Celice smo razdelili in zasejejo na nizko gostoto (1x10 6 /T-75 bučka), 24 ur pred začetkom zdravljenja. Celice smo nato obdelali vsakih 24 ur 4 dni z 1 ali 5 uM 5-aza-2'-deoksicitidin (5-aza-DC, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) raztopimo v 50% ocetni kislini ali pa so bile modelno obdelan s PBS, vključno z enako količino ocetne kisline. Kot je navedeno, 100 nM trichostatinA (TSA, Sigma-Aldrich). In /ali dodamo 12,5 LM cis-diaminedichloroplatinum (CDDP) (Nichi-Iko Pharmaceutical Co., Ltd., Japonska), za končnih 24 ur Western blot analiza Skupaj protein pridobljen iz celične linije, ki so bile epigenetically zdravljenih z /brez kemoterapije, in je bil podvržen blot analizo zahodni uporabo naslednjih protiteles: miške anti-p53 monoklonsko protitelo (1C12, razredčitev 1: 1000, celična signalizacija Technology, Inc.) ali miško anti-β-aktina IgG 2a monoklonsko protitelo (razredčitev 1: 10000, Sigma-Aldrich) p53 novinar test Cells (2x 10 4 celic /96 in tablice), ki so bili epigenetically zdravijo z /brez kemoterapije transficiramo s p53 obdelane celice (1 x 10 5 celic /vzorcev) smo obarvali z aneksin v in 7-AAD (guava neksinom reagent, guava Technologies, Hayward, CA) za diskriminacijo zgodnjih in poznih apoptotskih celic oz. Poskus je bil izveden s pomočjo Guava PCA sistem, izvaja v treh izvodih in analizirali z CytoSoft 2.1.5 programske opreme (guava Technologies). Fisherjev natančni ali test Mann-Whitney U Test je bil uporabljen za kategorične spremenljivke, in študent je t p53 p53 imunohistokemijsko za PGP9.5 je NAMDR2B in izražanje CCNA1 protein nato izvajajo tako v primerih, z izjemno visoko metilacije, in tistimi, z nizko metiliranjem teh genov. Močno zmanjšanje izražanja PGP9.5, NMDAR2B in CCNA1 opazili v primarnih želodčnih tkivih rakavih ko je promotor DNA metilacija izredno visoka (slika 3). Po drugi strani pa ni bilo zmanjšanje izražanja proteinov PGP9.5, NMDAR2B ali CCNA1 dalo ko je promotor DNA metilacija nizka (slika 4). Clinicopathological lastnosti in prognozo (5-letno RFS in OS) smo nato analizirali v univariablinega način rakom želodca z bolezensko stopnjo raka II /III želodca s standardno zdravljenje (operacijo plus postoperativne S-1 administracija) (tabela 1). razdeljeni smo bolnike s Rak želodca v 3 kategorije glede na p53 Zanimivo je, razvrščeni glede em skupine bolnikov o so GECs značilno povezana s spolom (p = 0,0003), starosti (p = 0,08), Lauren histologijo (p = 0,005) in infiltracije vzorec (p = 0,001), vendar ne s prognostičnih dejavnikov, kot so počivališča dejavnikov. skupine bolnikov razvrščeni glede na GECs je tudi pokazala, da je p53 Čeprav napoved ni pomembno razlikovala med skupinami kategorizirane po GEC (slika 2B ), je bilo več ponovitve našli v p53 po drugi strani pa je difuzna vrsta raka želodca pokazali bistveno boljši prognozo kot črevesne vrsto raka želodca v p53 na koncu, kot referenčni podatki (tabela 1), univariablinega prognostični analiza za RFS in OS vseh bolnikov, opredeljene klinično pomembnih potencialnih napovedni dejavniki, ki predstavljajo slabo preživetje, kot so spol (P = 0,03, P = 0,1) starost ≥67 let (P = 0,009, P = 0,001), zgornja lega tumor (P = 0,06, P = 0,1) je 14 th JGCA /7 th UICC pT (P = 0,08, P = 0.4) je 14 th JGCA pn (P = 0,001, P = 0,06) in 14 th JGCA /7 th fazi UICC (P <. 0.0001, P = 0,03) Epigensko zdravljenje povzroča protein p53 izraz, skladnih s p53 transkripcijske aktivnosti Epigensko zdravljenje NUGC4 celičnih linij raka želodca (divji tip p53 Poleg tega, epigenetsko zdravljenje KATOIII celičnih linijah raka želodca ( p53 sedanja študija je prvo poročilo, ki se SHM od zaviralnih genov v p53 je potrebno Skoraj popolna metilacija promotorja DNA CpG otokov za popolno genov utišanje in celo majhne deleže nemetiliran alel lahko odločno inducira izražanje genov [ ,,,0],1-5]. V primarnih tumorskih tkiv, mora SHM predstavljajo skoraj celotna metilacije na rakavih celicah, in SHM v primarnih tumorskih tkiv je dejansko povezana z zmanjšano proteinsko ekspresijo teh genov (slika 4). Ta rezultat je predlagal, da p53 pri raku želodca, p53 Pozitivna napovedni pomen p53 ni bilo statistično značilne razlike v stopnji recidiva ali edinstveni ponovitve mesta med p53 končno ocenil epigenetski učinke zdravljenja v kombinaciji z kemoterapevtika za primerjavo pomen p53 Na koncu, p53
poti. V tej študiji smo raziskovali p53
mutacije v zvezi s temi epigenetske spremembe v osnovni raka želodca
. 5
, NMDAR2B
in CCNA1
, ki so vključene v p53 zaviralnih poti v kombinaciji z p53
mutacije so bile preučiti 163 primarnih želodca raka. Učinek epigenetske vračanje v kombinaciji z citostatikov, na apoptozo je bila ocenjena tudi po tumorja Stanje p53
mutacija
genov. mutacije so bile ugotovljene v 44 primarnih želodčnih tumorjev (27%), in zelo visoko metilacija po kateremkoli od 3 genov je bila prisotna le v primerih z divjim tipom p53
. Višja p53
pot aberacija je bilo v primerih, pri moškem spolu (p = 0,003), črevesne tipa (p = 0,005), in vrste, ki niso infiltracije (p = 0,001). p53
pot aberacija skupina razstavljena manj ponovitev v bezgavkah, oddaljene organe, in trebušno mreno, kot je P53
brez aberacij skupine. V NUGC4 želodčni rak celične linije ( p53
divji tip), epigenetsko zdravljenje razširjen apoptozo s citostatikov, delno pa s p53
dejavnosti prepisu. Po drugi strani pa pri rakavih celic linije Kato III ( p53
mutant), epigenetsko zdravljenje samega inducirano apoptozo robustno, brez trans-aktivacije p53
.
Zaključek
ustrezni in niso pomembne poti obstajajo, in tumorji pri obeh vrstah poti, v razstavljeni edinstvene klinične značilnosti. Epigenetski zdravljenje lahko povzroči apoptozo delno pa s p53
aktivacija pa njihovi apoptotske učinki se lahko v veliki meri pojasniti z drugimi kot s p53
poti
Mutacija s super-visoke metilacija zaviralnih genov v p53
Pathway v edinstven želodčne rak Fenotip. PLoS ONE 10 (10): e0139902. doi: 10,1371 /journal.pone.0139902
. 5
v glavi in vratu ploščatocelični karcinom (HNSCC) [2], požiralnika SCC (ESCC) [6] rak želodca [4], in druge vrste raka [7], NMDAR2B
in ESCC [3] in rak želodca [8], in CCNA1
in HNSCC [2]. Profile metilacije teh genov so bili potrjeni z drugimi skupinami in /ali tudi druge vrste raka [9-14]. Geni, ki so pokazali več kot 60% metilacije v tumorskih tkivih so označeni kot zelo pomembne metilni genov (HRMGs) [15]. Poleg tega smo še bolj primerjali pogostost tega odklonskega metilacije HRMGs kandidatk z drugimi poročili rakom želodca [16], in genskih kandidati so zožiti na specifičnih genov.
zaviralnih poti, v (slika 1). Na primer, PGP9
. 5
neposredno komunicira s p53
in stabilizira p53
z zaviranjem njegove degradacije prek ubikvitinacije poti v jetrnih celic [17] , prsi [18] in nazofaringealnega raka [19]. NMDAR2B
inducira apoptozo s svojo neposredno povezavo s DAPK
[20], ki pa je bilo dokazano, da se prepreči transformacijo-onkogensko povzročena z aktiviranjem a p19ARF
/ p53
-dependent apoptotske kontrolno točko [21]. CCNA1
je p53
inducirano gena, ki posreduje apoptoza, G2 /M aretaciji in mitotićno katastrofo v človeški ledvic, jajčnikov in pljuč rakavih celic [22]. Zato, p53
pot je ablacije v tumorskih tkivih primarnega raka na epigenetsko način, skupaj z divjim tipom p53
, pa ni bilo nobenega poročila o pridružitvi p53
mutacija in epigenetske spremembe v primarnih tumorskih tkivih.
pot, ki se nenormalno ureja epigenetsko način v primarnem želodca rak, in primerjali njihovo metilacijo vzorec s stanje p53
mutacija da bi ugotovili, da se klinični pomen p53
aberacija fenotipov.
linije in vzorce tkiva
Analiza mutiranih p53
genov, ki uporabljajo eno-sklop konformacije polimorfizem (SSCP)
gena bili pregledani neradioaktivno analizo single-sklop mesnatosti polimorfizma (SSCP), ki je bil izveden s pomočjo naših že uveljavljenih metod [23]. PCR vzorci 10 ul produkt, smo trikrat razredčili z gel-pufra (95% deionizirane formamidom, 20 mmol /L EDTA, 0,01% bromofenola modro in 0,01% ksilen cyanol) in segrejemo na 95 ° C za 10 minut, čemur sledi kaljenje na ledu. Alikvote 3 ul smo aplicirali na spremenjene poliakrilamidnih gelih (PAFG: 18% poliakrilamid-bis (49: 1), 0,5-kratna klopnega meningoencefalitisa, 10% glicerol, 10% formamida, 0,05% amonijevega persulfata in 30 ml TEMED) dimenzije 120 mm x 150 mm x 0,35 mm. Elektroforeza smo izvedli z 1.5x TBE pufer teče pri 500 V in 30 mA 1 uro pri sobni temperaturi. Trakovi so odkrile barvanjem gela z uporabo srebrne madež plus kit (Bio-Rad, Hercules, CA), sledijo mere, izpiranje, razvoj in ustavitev reakcije. Mutiranih trakovi, odkrite s PCR-SSCP so bile vidne na 1:64 redčenju mutiranih alelov.
Bisulfite zdravljenje izpisanih DNA
Kvantitativno-metilacija specifični PCR (Q-MSP)
. 5
, NMDAR2B
, CCNA1
ali DAPK
normalizirajo metiliran p-aktina
, ki je bila takrat, pomnoženo s 100.
obdelava Epigensko s 5-aza-DC in TSA in kemoterapije z CDDP
reporter vektor (QIAGEN) s pomočjo signalov ™ poti, reporter kompleti ( QIAGEN) in reagent Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Po 24 urah inkubacije smo aktivnost reporterski izmerjena z dvojno-luciferazno reporterskega testa System (Promega). Transfekcije smo izvedli v treh izvodih in analizirana z SoftMax Pro programsko opremo (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).
Apoptoza test
Statistična analiza
-test je bila uporabljena za zveznih spremenljivk. Podatki so izraženi kot sredstvo ± standardni odklon (SD). Metoda Kaplan-Meier je bila uporabljena za ocenjevanje kumulativnih stopenj preživetja, in razlike v stopnjah preživetja so bile ocenjene s testom log-rang. Brez recidiva preživetje (RFS) in celokupno preživetje (OS) je bilo merjeno od datuma operacije do dneva ponovitve in smrti, ali zadnjega sledenja. Glede na RFS ali OS, so bolniki, ki so preživeli več kot 60 mesecev (5 let), analizirali kot preživelih. P < 0,05 je zdelo, da kažejo statistično značilna. Vse statistične analize so bile izvedene s SRS programskih paketov (SAS Institute, Cary, NC).
Rezultati
genski status in metilacije profili PGP9
. 5
, NMDAR2B
, CCNA1
in DAPK
in pStage II-III želodčnega raka
mutacije so bile ugotovljene pri 44 od 163 osnovnih bolnikov želodca z rakom (27%), z analizo SSPC. p53
genska mutacija ni imela napovedni pomen (slika 2A). Nato smo analizirali profile metilacija PGP9
. 5
, NMDAR2B
, CCNA1
in DAPK
v teh tkivih uporabo Q-PPN. TaqMeth vrednost vseh genov je bila višja v primarnih tumorjev raka želodca z divjim tipom p53
kot pri tistih z mutiranim p53
(metilacije da genov. PGP9
5
> NMDAR2B
> CCNA1
> DAPK
) (slika 3A in S1 in S2 sliki). Metilacija promotorja DNK je bila bistveno višja za CCNA1
(p < 0,0001) in PGP9
5
(p = 0,03), in nekoliko bistveno višji za
(p = 0,10) in DAPK
(p = 0,05) in primarnim rakom želodca v primerjavi z ustrezno normalno sluznico. Pomembno je, da super-visoko stopnjo metilacija PGP9
. 5
, NMDAR2B
in CCNA1
je bilo izključno v primarnih tumorjev ni p53
mutacij, vrednosti TaqMeth cut-off bilo 50, 163 in 133, v tem zaporedju (slika 3A). Takšen super-high metilacija PGP9
. 5
, NMDAR2B
in CCNA1
je bilo leta 14, 19 in 8 vzorcev v tem zaporedju, in nekatere od teh vzorcev je bilo prekrivanja (slika 3B). DAPK
ni prikazal ta trend, saj je je DAPK
ravni metilacije precej visoke v ustreznih normalnih sluznici tkiva precejšen del primerov (S2 Sl).
imunohistokemično analiza PGP9.5, NMDAR2N in izražanja CCNA1 beljakovin v primarnim rakom želodca
Clinicopathological analiza primarnega raka želodca s patološkim stopnje II /rak želodca III s standardnim zdravljenjem
stanje mutacije kot tudi status DNA metilacija PGP9
. 5
, NMDAR2B
in CCNA1
, ki jo označi kot genomskih in epigenetske kategorije, v tem zaporedju (GEC). Te tri kategorije so bile p53
mutant, p53
zgornjih 3 p53
procesi genov (divjega tipa s super-high metilacije (SHM) p53
WT /SHM) in <> p53
divjega tipa brez (w /o) SHM ( p53
WT w /o SHM).
mutant in p53
WT /SHM skupine so bili podobni v smislu števila bolnikov za vsako klinično značilno, vendar se razlikovali v zvezi s tem, ko v primerjavi z p53
WT w /o skupini SHM. Tako smo na novo imenovani nekdanje skupine ( p53
mutant plus p53
WT /SHM skupin) kot p53
aberacija skupine, in ker ta skupina ( p53
WT w /o SHM) je bila imenovana za p53
brez aberacij skupine.
aberacij skupini, v primerjavi s p53
brez aberacij skupine (Tabela 1, ni statistično pomembne razlike). Ta trend se je ohranila v smislu ponovitve vzorca vsake od bezgavke, potrebušnice in oddaljene organe (tabela 2), kar kaže, da je p53
aberacija skupina je verjetno, da kažejo klinično edinstveno fenotip celo od A prognostični vidika. Ko smo analizirali le primeri z ponovitev, p53
aberacija skupina je ponovno močno povezana z Lauren histologijo (tabela 2, P = 0,01), pa ni bilo ponavljajoče vzorce, ki so edinstveni za p53
aberacije.
aberacija skupini (slika 5A). Ker ti bolniki večinoma se razdeli na bolj napredni stopnji, ti podatki preživetju kažejo, da je S1 postoperativni adjuvantno kemoterapijo bolj učinkovita za raka difuzna tipa želodca kot za raka želodca črevesne tipa v primerih s p53
pot aberacij (sl 5B).
) s 5 LM 5-aza-2 ' deoksicitidin ali 5 uM 5-aza-2'-deoksicitidin plus trichostatin A trdno inducirano apoptozo v odsotnosti kemoterapevtika CDDP. Dodatno zdravljenje z CDDP še naprej močno razširjena te apoptotične učinke (slika 6c). Zanimivo je, da CDDP v kombinaciji z epigenetske zdravljenja odločno poveča nivo p53 protein, ki je delno, toda ne popolnoma, odraža p53
transkripcijsko aktivnost gena luciferaze reporterskega (slika 6A in 6B). Te ugotovitve kažejo, da p53
dejavnost prepis se lahko ponovno aktivira s epigenetskih zdravljenja, pa tudi kaže, da je apoptoza le delno povzročene s p53
pot.
nič) in 1 uM 5-aza-2'-deoksicitidinska ali 1 uM 5-aza-2'-deoksicitidinska plus trichostatin A trdno inducirano apoptozo v odsotnosti CDDP, vendar dodatno zdravljenje CDDP ni nadalje bistveno okrepi apoptotične učinke (slika 6C). CDDP v kombinaciji z epigenetske zdravljenja ni povečujejo stopnjo protein p53, kar se je odrazilo s pomanjkanjem p53
transkripcijsko aktivnost luciferaze reporterskega gena (slika 6A in 6B). Te ugotovitve kažejo, da p53
prepisu dejavnost se ne zahteva za apoptoze s epigenetske zdravljenja v KATOIII celic ( p53
null celic).
Pogovor
poti nahajajo izključno v patološko fazi raka II /III želodca z divjim tipom p53
(slika 3). Izbrali smo pStage II /III, bolnikov Rak želodca s standardnimi zdravili za analize p53
poti, v ker imajo multidisciplinarne zdravljenja pri teh bolnikih najboljše možnosti za doseganje napovedni izboljšanje popolnoma curability [24, 25]. Ta ugotovitev bi morala biti prva prednostna naloga, če upoštevamo nadaljnji razvoj novih terapevtskih strategij.
pot je lahko SHM genov v funkcionalno enakovredna p53
funkcionalno aberacije, ki nastane kot posledica p53
mutacija, ker te 3 molekulami deluje na isti p53
poti.
aberacija skupina je bila močno povezana z edinstvenimi clinicopathological fenotipov kot črevesne histologijo Lauren, moškega spola, stara starost in manj infiltracijsko rast (tabela 1). Naše sedanje ugotovitve so lahko povezani s prejšnjimi poročili, ki bi dokazal, da je p53
mutacija, povezana z zgodnji fazi raka črevesne tipa želodca ali pozni fazi raka difuzna tipa želodca [26, 27], ali starejše starostne [ ,,,0],28], pa je naša clinicopathological analizo vključili predvsem raka na želodcu srednji stopnji. Zanimivo je, da pot aberacija je edinstvena in trajno tudi v ponavljajočih bolnikov (tabela 2).
mutacije pri raku želodca je sporen tako z navijači, [29] in disidenti [30 ] to možnost. Na prvi pogled se zdi, naši podatki v podporo zadnji skupini pa je treba upoštevati, da je verjetno, da so bile spremenjene s pooperativne adjuvantno kemoterapijo (standardna zdravljenja na Japonskem), naši podatki preživetje. Ker je v nasprotju s tem študije, difuzna vrsta raka želodca pokazala slabšo prognozo kot črevesne vrsto raka želodca v naših bolnišnicah desetletji [15, 31] najnovejši posodobljeni podatki o preživetju podpirajo nasprotne rezultate (tj črevesna vrsta raka želodca kaže slabšo prognozo kot difuznega tipa raka želodca), ki je domnevno zaradi s-1 pooperacijske adjuvansa učinke [32]. Pooperativna adjuvans S-1 kemoterapijo je bilo predlagano, da je bistveno bolj učinkovita za peritonealno bolezni kot za oddaljene metastaze organov [24], in je verjetno, da bo bolj učinkovita zaradi raka difuzna tipa želodca kot za raka na debelem črevesu tipa želodca [32] . Iz teh razlogov, zadnje analize preživetja kaže, da je prognoza difuznega tipa raka želodca izboljšala da intestinalnega tipa raka želodca.
aberacije skupine in p53
non-aberacija skupina, pa še ponovitve so našli v vsaki od ponovitve območij v p53
niso aberacije skupina v primerjavi s p53
aberacij skupine. Te ugotovitve bi lahko sklepali, da ima p53
non-aberacij skupini bolj agresivni fenotip kot je p53
aberacij skupine kot celote. V naši raziskavi je difuzna vrsta raka želodca so pokazali bistveno boljšo prognozo kot črevesne vrsto raka želodca v p53
aberacij skupine. Ker ti bolniki večinoma se razdeli na bolj napredni stopnji, ti podatki preživetju kažejo, da je S1 postoperativni adjuvantno kemoterapijo bolj učinkovita za raka difuzna tipa želodca kot za raka želodca črevesne tipa v primerih s p53
poti, v aberacije. Te ugotovitve so bile v skladu s prejšnjimi poročili, da je mutant p53
in /ali imunskim barvanjem proteina p53 bi bilo napovedovanje biomarkerjev za pozitivne učinke visokih odmerkov neoadjuvantno kemoterapijo pri bolnikih z rakom želodca [30].
poti na epigenetske poti v celicah želodca z rakom, zdravljenih s CDDP. Nepričakovano se je zdelo, da je malo verjetno, da igrajo zelo pomembno vlogo pri indukcijo apoptoze s CDDP (slika 6) p53
pot. Nedavno je bilo dokazano, da je epigenetsko karcinogeneza res mogoče. V tem sistemu, sistemski iPS povzročeno z reprogramiranjem dejavnike rezultate v sistemskem nastanka raka dinamičnih epigenetskih sprememb, medtem ko sistemsko vračanje teh reprogramiranja dejavnikov vrne rakave celice v normalnih celic [33]. Rak želodca je verjetno, da pristanišče manj mutacije voznika genov [34], kot kolorektalnega raka [35], in podobno, razen p53
gen so redki pri raku dojke [35], kar kaže, da epigenetske rakotvornost mutacije je mogoče velik vzrokov s kronično okužbo s Helicobacter pylori [36-38]. Pred kratkim smo dokazali hiper-metiliranje Reprimo
[39], kar je spet gen v p53
pot, ki pa jih ni bilo mogoče vključiti v tej raziskavi, in HOPX
[16] in CDO1
[40], ki sta vključeni v apoptozo, vendar domnevno ne z p53
poti. Na podlagi naših trenutnih funkcionalnih poskusov, p53
prispevek pot do epigenetske učinkov zdravljenja je verjetno precej manj kot pri drugih poti (slika 5). Uporabili smo druge celične linije (2 želodčni rak celične linije in 1 jetrnih celic celične linije raka) natančno določiti prispevek p53
poti do apoptoze s CDDP inducirane v kombinaciji z epigenetske zdravljenja. Dodatni eksperimenti Opravljeni so prikazani na S3 sl. AZ521 in HepG2 celične linije so p53
divjega tipa in SH10 celična linija je p53
mutant. p53
aktivnost je bila odkrita v p53
tip celic divje, pa je bila njegova dejavnost odvisna od vsakega celične linije. Tako, p53
aktivnost je bila odkrita v NUGC4 celice z zdravljenjem CDDP in v AZ521 in HepG2 celic brez zdravljenja CDDP. Močna apoptozo kot z apoptozo testom (kaspaze 3 ali neksinom Vsebnost) ocenil, ni nujno, da odraža stopnjo p53
transkripcijske aktivacije. V p53
mutant (SH10) ali p53
null celice, p53
transkripcijski aktivnost ni bila povzročena na vse, je bilo ugotovljeno, da je podoben tistemu v p53
tip celic divje. Zato, raka želodca, apoptotska poti, razen p53
pot lahko bolj pomembne za indukcijo apoptoze kot p53
poti.
aberacije in skupine pacientov brez aberacija obstajajo raka želodca, p53
poti bi bilo zmotno zaradi epigensko spremembe genov v poti kot tudi zaradi genomske mutacije. p53
aberacija skupina lahko imajo posebne klinične značilnosti v primerjavi s p53
non-aberacij skupine. Epigenetsko nadzor p53
procesi geni igrajo manjšo vlogo pri indukcijo apoptoze s strani kemoterapevtika in apoptozo pri raku želodca, ki jih povzroča epigenetske vsote, ki se lahko v veliki meri pojasniti z drugo od p53
pot je malo verjetno, da igrajo ključno vlogo v apoptozi s CDDP inducirane v kombinaciji z epigenetske zdravljenja. Vendar pa so poročali p53
pot, da igrajo pomembno vlogo v naravnem želodca rakotvornost [41-44]. Tako je naše odkritje, da p53
pot gen metilacija je bilo izključno v rakom želodca s p53
stanja divjega tipa lahko pomembno opazovanje, in take spremembe v tumorskih tkivih, lahko povzroči napredovanje tumorja . Prav zaradi teh razlogov, ki p53
pot aberacija lahko napovedno vrednost kemoterapevtiki učinkov pri bolnikih z rakom želodca.
Podpora Informacije
S1 Sl. Posebnosti metitiranjem PGP9
. 5
, NMDAR2B
in CCNA1
raka želodca.
(A) vrednosti TaqMeth vsakega gena raka želodca in v ustreznem normalnem sluznice so prikazani. (B) Vrednosti TaqMeth vsakega gena razvrščena glede na p53
statusa gena tumorja so prikazani. Podatki so izraženi kot vrednosti ± SD
doi:. 10,1371 /journal.pone.0139902.s001
(IOD)
S2 Sl.
Študija osvetljuje vzroke izčrpavajočih črevesnih bolečin
Črevesne imunske celice so lahko odgovorne za spremembe metabolizma, ugotavlja študija
Države s starejšim prebivalstvom imajo višje okužbe s SARS-CoV-2 in smrt,
Crohnova bolezen
Nova metoda računalniškega modeliranja napoveduje, kako se črevesni mikrobi spreminjajo skozi čas
Zdravilo Wegovy za hujšanje odobri FDA
Študija osvetljuje vzroke izčrpavajočih črevesnih bolečin
Izčrpavajoča črevesna bolečina je pogosta, vendar osnovni vzrok še vedno ni jasen. Običajno izvira iz črevesne okužbe, ki sproži imunski odziv. To lahko povzroči, da se vsakodnevna hrana šteje za škod
Države s starejšim prebivalstvom imajo višje okužbe s SARS-CoV-2 in smrt,
pravi študij Več kot leto dni v času pandemije koronavirusa 2019 (COVID-19), ki ga povzroča hud akutni respiratorni sindrom koronavirus 2 (SARS-CoV-2), razlika v resnosti kliničnega sindroma glede na
Model novorojenčka miške daje namige za povzročanje uničujoče črevesne bolezni pri anemičnih predhodnikih
Zdravniki že dolgo sumijo, da bi transfuzija rdečih krvnih celic pri nedonošenčkih z anemijo lahko ogrozila razvoj nekrotizirajočega enterokolitisa, ali NEC, potencialno smrtonosna vnetna črevesna bol