Plos ONE: intraperitonealna IL-17-Pozitivna mastocitov so glavni vir za IL-17, ki lahko napoveduje preživetje želodčnega raka Patients

Povzetek

interlevkin-17 (IL-17), je razširjena v tumorsko tkivo in zavira učinkovitih protitumorskih imunske odzive. Vendar pa je še vedno vir povečane-tumorske infiltracije IL-17 in njegov prispevek k napredovanja tumorja pri raku človeške želodčne slabo razumljen. V tej študiji smo vključenih 112 bolnikov z rakom želodca, imunofluorescenčni smo uporabili za oceno colocalization s CD3, CD4, CD56, CD20, CD68 in mastocitne triptaza (MCT), pri IL-17. Imunohistokemija je bila uporabljena za oceno porazdelitve gostote microvessel (CD34), CD66b ^{+, CD68 +, in FoxP3 + celic v različnih microanatomical področjih. Prognostična vrednost je bila določena z analizo Kaplan-Meier in Cox regresijski model. Rezultati so pokazali, da mastocite, vendar ne T celic ali makrofagov so prevladujočo vrsto celic, ki proizvajajo IL-17 raka želodca. Pomembne pozitivne korelacije so bile ugotovljene med gostote mast celice, pridobljene IL-17 in microvessels, nevtrofilcev in regulatornih celic T (Tregs). Futhermore, smo ugotovili, da je večina vaskularnih endotelijskih celic, ki izražajo interlevkin-17 receptor (IL-17R). Kaplan-Meier analiza je pokazala, da povečanje intraperitonealna prepojena mastociti in IL-17 + celice, kot tudi MCT + IL-17 + celice, so bile precej povezano z slabšem preživetje. Te ugotovitve so pokazale, da so mastociti glavni vir IL-17 raka želodca in intraperitonealna IL-17 infiltracijo morda spodbuja napredovanje tumorja z večanjem angiogenezo v mikrookolju tumorja skozi os IL-17 /IL-17R. IL-17-pozitivne mastociti pokazala napovedni dejavnik pri raku želodca, kar pomeni, da lahko ciljanje imunoterapija mastocite učinkovita strategija za nadzor intraperitonealna IL-17 infiltracijo in posledično reverse imunosupresivno v mikrookolja tumorja, olajša raka imunoterapije.}

Navedba: Liu X, Jin H, Zhang G Lin X Chen C ned J, et al. (2014) intraperitonealna IL-17-Pozitivna mastocitov so glavni vir za IL-17, ki je s predvidevanjem za preživetje v želodčnih bolnikih z rakom. PLoS ONE 9 (9): e106834. doi: 10,1371 /journal.pone.0106834

Urednik: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kitajska

Prejeto: 12. maj 2014; Sprejeto: 1. avgust 2014; Objavljeno: 8. september 2014

Copyright: © 2014 Liu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v papirju in njene dodatne informacije datotek

Financiranje:. XSL je bil podprt z izdajo The National Science Foundation Kitajske (81273254 /H1006), http://www.nsfc.gov. cn /. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

v zadnjih desetletjih se je povečala pozornost nameniti mehanizmom (-e) uhaja delovanja imunskega v mikrookolja tumorja in, še posebej, odnos med vnetja in imunosupresijo. Eden izmed najpomembnejših delov imunskega sistema, vnetij, povezanih z rakom je bila nedavno priznana kot interlevkin-17 (IL-17). IL-17 ima pleiotropični funkcije in več ciljev, ki so bili večinoma raziskana pri modelih z miško, vendar je vedno bolj povezana s človekovimi bolezni [1] - [5]. IL-17 je bilo ugotovljeno v različnih tumorjev, vključno z rakom dojke [6], rak želodca [7], [8], kolorektalnega raka [9], rakotvoren, povzroča kožnega raka [10], intrahepatska holangiokarcinom [11], in jetrnih celic karcinom [12]. IL-17, ki proizvajajo celice postopno povečati število v mikrookolju tumorja med razvojem tumorja in so v korelaciji s slabo preživetje pri bolnikih, povezanih z rakom.

Že dolgo je menilo, da je glavni celični vir IL-17 število limfocitov CD4 ^{+ T (Th17 celice). Nedavno številne študije, ki ciljajo na IL-17 so pokazale, da je IL-17 proizvodnja ni omejena na limfocitov Th17, ampak je tudi v različnih prilagodljivih in prirojenih imunskih celic, vključno γδT celic NKT celic NK celic, mastocitov in granulociti [3], [13].}

rak želodca je eden izmed najpogostejših vrst raka in vodilni vzrok smrti zaradi raka na svetu [14]. Več kot 1 milijon bolnikov z diagnozo raka želodca vsako leto po vsem svetu, od tega 42,5% pa na Kitajskem. Tradicionalni terapevtskih strategij, vključno z operacijo, kemoterapijo in obsevanjem so glavni načini zdravljenja raka želodca. Nedavno je bil imunoterapije malignih obolenj vneseno poudarkom [15] - [17]. Vendar tumorjem povezan imunskega odziva in je velik izziv za imunoterapijo, saj slabi citotoksično učinkovitih celic T in naravnih celic ubijalk. Med razvojem tumorja, ki je tumor imunosupresijo pogosto povezano s prekomerno in nenadzorovano vnetja v mikrookolje tumorja [18]. Znano je, da je več vnetne celice infiltrirajo tumorjev, vključno z mastociti, makrofagi podtipe, nevtrofilcev, kot tudi limfocitov T in B, zaščitni znak raka povezana vnetja [19].

V sedanjem študiji , smo pregledali celičnih virov IL-17, distribucijo, funkcionalno ustreznost in napovedne vrednosti IL-proizvodnjo 17 celic pri 112 bolnikih z rakom želodca. Nudimo nove vpogled v potencialne mehanizma (ov) IL-17 v mikrookolje tumorja pri bolnikih z rakom želodca z oceno razmerja med IL-proizvodnjo 17 celic in vnetnih mediatorjev. Naš cilj je zagotoviti več informacij, ki so lahko koristne za oblikovanje učinkovitejših imunoterapije raka, ki ciljajo na IL-17.

Materiali in metode

Etika izjava

Pred raziskave je bila privolitev pridobljena iz vsakega bolnika. Ustrezno dovoljenje, je bila odobrena s strani odbora za etiko prve odvisnimi Hospital, Medical College, Zhejiang University.

Vzorce bolnikov

Skupno je bilo vključenih 112 bolnikov, med februarjem 2009 in marcem 2010 v naši bolnišnici . Bolniki, ki so izpolnjevali so bili izbrani naslednji kriteriji: a) diagnosticirali raka želodca, ki temelji na patologijo; b) so bile učinkovite resekcijo. Merila za izključitev so bili bolniki, ki so imeli dokaze o oddaljenih metastaz, dokazov o sočasni avtoimunske bolezni, HIV, ali sifilis in bolniki, ki so prejemali terapijo proti raku, pred operacijo. Merila učinkovitega resekcijo so bili opredeljeni kot resekcijo brez ostanka tumorja (R0) ali mikroskopskega ostanka tumorja (R1) v skladu s 7 ^{th izdaji ameriškega Skupnega odbora raka. Po kurativno resekcijo so bolniki prejemali adjuvantno kemoterapijo na osnovi 5-fluorouracil in platine po patološkem klasifikaciji TNM. Bolnike so spremljali v razmaku 3-6 mesecev, vključno testih njihove periferne krvi za tumorskih markerjev in ultrazvokom, in okrepljeno CT vsakih 6 mesecev, endoskopa vsakih 12 mesecev. Klinične značilnosti bolnikov so prikazane v tabeli 1.}

Imunohistokemija in Imunofluorescenčni

Redno hematoksilin in eozin obarvanje je bila izvedena za potrditev patološko diagnozo, intraperitonealna je regija opredeljena kot manj kot 2 cm, ki mejijo na mejo želodčne tumorja, medtem ko je bila normalna regija opredeljena kot vsaj 5 cm, ki mejijo na maržo tumorja na želodcu.

Imunohistokemija

Imunohistokemija je bila izvedena, kot je opisano v prejšnji raziskavi [20]. Primarna protitelesa so kozji anti-IL-17 (R & D Systems, UK), miška anti-CD66b (BD Pharmingen, ZDA), miška anti-CD68 (Abcam, ZDA), miška anti-FoxP3 (Abcam, ZDA), in mouse anti-CD34 (Peking Zhongshan Golden Bridge Biotech, Kitajska). Za negativno kontrolo smo primarno protitelo nadomeščen z fosfatnim pufrom (PBS).

imunofluoroscenca
za imunofluorescenco, uporabljen

bile podobne metode, razen da endogeno aktivnost peroksidaze ni bil blokiran in primarna Ab uporabljena bil koktajl protiteles. Kozji anti-IL-17 in kozje anti-IL-17R (oba iz R &D Systems, USA) so bili uporabljeni za odkritih IL-17 + celic ^{in IL-17R izražanja. Panel protiteles reagira z CD3, CD20, CD34, CD56, c-kit (miške monoklonskih, vse od pekinških Zhongshan Golden Bridge Biotech, Kitajska), CD4 (miške monoklonskih, Leica, Nemčija), CD66 (miška monoklonska, BD Pharmingen, smo uporabili ZDA), CD68, foxP3 in mastocitne triptaza (MCT) (miš monoklonsko vse od Abcam, ZDA). Po inkubaciji čez noč pri 4 ° C, sekcije doživel inkubacijo z mešanico sekundarnih protiteles: Alexa Fluor 488/568 konjugiranih osel anti-miške ali Cy3 /Alexa Fluor 488 konjugiranih osel anti-kozjega ali Alexa Fluor 488 osel anti-zajec ( vse od Invitrogen, ZDA) pri 37 ° C za 1 uro. Diapozitivi so bili nameščeni s Vectashield vsebuje DAPI (Vector Laboratories, ZDA) in vizualizirali s pomočjo fluorescence slikanje mikroskopom a (Olympus BX51, Japonska), skupaj s CCD kamero (Nikon DS-Ri1). Podobe so bili analizirani s pomočjo 3,2 programske opreme NIS-elementi BR.}

Negativne kontrole, v katerem je bila PBS uporabljajo namesto primarnih protiteles, je bilo vključenih za vsako oznako.

količinskim imunskim barvanjem parametre

Podatki so bili pridobljeni z ročnim štetjem pozitivno obarvajo celice v 10 reprezentativnih področjih normalnih in intratumorska regijah pod 400 × visoke moči povečavo. Še posebej so bili žilne endotelijske celice ali grozdi rjavega obarvanih celic opredeljena kot microvessels le, če bodo imeli jasne meje s sosednjimi objekti [21]. Gostote smo določili z izračunom povprečno število pozitivno obarvanih celic na visoke moči mikroskopskega polja (HPF). Double obarvanje je bila določena z ročnim štetjem pozitivnih celic v 10 visoke moči področjih; Izračunali smo deleži IL-17-ekspresirajočih celic na površini marker. Vse analize so bile izvedene z dvema neodvisnima, slepo opazovalci (GE Z in XK L) in povprečne grofov dveh opazovalcev so bili uporabljeni v naslednji analizi.

Statistična analiza

srednje vrednosti CD34 ^{+, CD66b +, CD68 +, foxP3 +, in mast cell triptaza (MCT +) in IL-17 + celic so bili uporabljeni kot izklopa vrat odpisi določiti podskupin v naših rezultatih. t-testi študenta so bili uporabljeni za primerjavo infiltracijo različnih delih imunskih celic v tumorsko tkivo in ustrezno normalnega tkiva. Chi-kvadrat preizkus je bila uporabljena za oceno razmerja med IL-proizvodnjo 17 celic in clinicopathological funkcije. Korelacija med gostoto microvessel (CD34), nevtrofilce (CD66b), makrofagov (CD68), regulativne celice T (FoxP3), in celice, ki proizvajajo IL-17, so bile ocenjene z uporabo koeficient korelacije Pearson ali uporabnik Spearman je. Celokupnega preživetja je bila opredeljena kot interval med datumom operacije in datum smrti ali od zadnjega spremljanja, se je pripetila najprej. Preživetje funkcijske ocene so bile izračunane po metodi Kaplan-Meier. COX sorazmernih tveganj model je bil uporabljen za oceno učinka IL-17-celice, ki proizvajajo na celotnem preživetju. Obojestranskega vrednost p < 0.05 se je štelo, da kažejo statistično značilna. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo GraphPad Prism (ver 5.00 za Windows;. GraphPad programske opreme, San Diego, CA, ZDA) in SPSS. (Ver 16,0;. SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA) programsko}

Rezultati

Študija prebivalstva

značilnosti bolnikov so prikazane v tabeli 1. v celoti je bilo vključenih 78 moških in 34 žensk. Starost študijske populacije v razponu od 33 do 89 (mediana 60) let. Od 112 bolnikov želodca z rakom, je bilo stanje H. pylori okužbe pozitiven za 65 bolnikov, medtem ko je bilo 47 negativnih. 110 bolnikov prejelo kurativna R0 resekcijo in 2 bolniki prejeli R1 resekcijo. Patološke klasifikacije TNM temeljijo na 7 ^{th izdaji ameriškega Skupnega odbora raka: 33 bolnikov ni imel bezgavko metastaze, medtem ko je bilo 21 N1, 22 je bilo N2, in je bilo 36 N3. 1 bolnik pripadala tis, 23 bolnikov je pripadal fazi I, in 25, 63 bolnikov v fazi II, III, v tem zaporedju. 3 (2,7%) bolnikov izgubil spremljala in 39 (34,8%) bolnikov je umrlo v opazovanem obdobju. Mediana spremljanja, ko je bil 51 mesecev, in sicer od 39 do 57 mesecev in stopenj celokupno preživetje (OS) po 1 letu je bilo 83,0%, 71,4% na 3 leta in 65,7% v 4 letih, v tem zaporedju.}

IL-17 je bila izražena predvsem z MCT + mastociti

Naključni vzorci 20 pacientov iz celotne kohorte so bili uporabljeni za oceno distribucijo in fenotip IL proizvodnjo-17-celic v intraperitonealna regiji in ustrezna normalno tkiva (Slika 1). Ugotovili smo, citoplazemsko IL-17 obarvanja v celicah z jajčaste fenotipa, kot smo že prej [13] opisan in v celicah bolj nepravilne oblike. Poleg tega smo ugotovili, da je IL-17, ki izražajo celice so pogostejše pri intraperitonealna tkivih kot pri normalnih tkivih. Če želite ugotoviti, IL-17 + celice ^{v intraperitonealna tkivih, smo izvedli colocalization poskuse in izračunali delež IL-17 + celic v vsaki podskupini. Najprej smo izvedli colocalization v c-kit, dodatno mastocitov označevalec, z mastocitov triptaze (MCT), so rezultati pokazali, da so vsi MCT + celicami, ki izražajo c-kit (sl. S1), kar kaže, da je lahko MCT uporablja za ugotovljene mastociti reprezentativno. V celicah jajčaste fenotip, smo izbrali število T celice, B celice in NK-celičnih označevalcev: natančneje, CD3, CD4, CD20 in CD56, in ocenili njihovo colocalization z IL-17. Vendar je bilo ugotovljeno CD20 + IL-17 + in CD56 + IL-17 + celice, čeprav redko (< 1%, Slika 2, zgornje desno plošče). V obeh podskupinah so opazili, čeprav občasno CD3 + IL-17 + in CD4 + IL-17 + celice, srednje odstotke-17 IL + celic je bilo 12,4% ( 2,2-34,1%) in 8,4% (0-26,7%, Slika 2, zgornji levi plošče; tabela 2), zraven smo raziskovali fenotip IL-17 + celice nepravilne oblike; Makrofagi so predlagali kot potencialne vire proizvodnje IL-17 [22]. Skladno s tem so bili do 18,5% za IL-17, ki proizvajajo celice v želodcu tkivih rakom na makrofagi (Slika 2, spodnji levi plošči; tabela 2). Vendar je večina IL-proizvaja 17 celic ostal neznan. Če želite ugotoviti, ali so mastociti dodaten vir IL-17 proizvodnje raka želodca, smo izvedli colocalization IL-17 in mast celic triptazo (MCT). Ugotovili smo, da je večina IL-17 + celice colocalized z MCT + celic. (40-60% of-17 IL + celic , Slika 2, spodnji desni plošči; tabela 2)}

Distribucija MCT ^{+ IL-17 + celic in soodvisnost z clinicopathological funkcije}

za potrditev, da jambor celicami izhaja IL-17 je bil glavni celični vir IL 17 v želodčni mikrookolja raka, smo izvedli imunofluorescenčni dvojno barvanje intraperitonealna in normalnih vzorcev tkiva od 112 bolnikov. Večina IL-17 ^{+ celice dvojno obarvajo močno z MCT (14-68,1% IL-17, ki izražajo celic) v intraperitonealna tkivih (sl. 3A). Ugotovili smo, da je bilo ugotovljeno, da se je znatno višja kot pri zdravih tkiv (MCT + _{T vs. MCT + mastocitov in IL-17 + celic v intraperitonealna tkivih> + N, 10.02 ± 4.06 vs. 8.66 ± 3,29, p = 0,0023; IL-17 + T v primerjavi z IL-17 + N, 8.16 ± 3.89 vs. 7,18 ± 3,48, p = 0,0165;. slika 3B). Poleg tega je gostota MCT + IL-17 + celice v intraperitonealna tkivih je bila bistveno višja od tiste, ki v normalnih tkivih (4,55 ± 2,48 vs. 3,93 ± 2,24, p = 0,0154;. Slika 3B).}}

Če želite ugotoviti pomembne povezave med clinicopathological funkcij in MCT ^{+ IL-17 <> + celic sup smo uporabili hi-kvadrat preizkus ali Fisherjev natančni test (prikazano v tabeli 1). Vendar pa MCT + IL-17 + celice v intraperitonealna tkivu ni bilo povezano z nobeno klinično značilno ocenil, vključno s statusom okužbe pylori H., velikost tumorja, stopnjo diferenciacije in klasifikacijo TNM.}

Povečana intraperitonealna MCT ^{+ celice, IL-17 + celic, MCT + IL-17 + so bile gostote celic povezana s slabim celokupno preživetje}

Na univariantne analizo (tabela 3), konvencionalno clinicopathological ima Predvideno slabe celokupno preživetje (OS) je bilo slabo diferencirane tumorje in napredno stopnjo TNM. Za nadaljnjo analizo, so bile številke v MCT ^{+ celice, IL-17 + celice, in MCT + IL-17 + celice razdelimo v dve skupini: nad in pod mediano vrednosti. Kaplan-Meier krivulje preživetja bili pripravljeni na podlagi testa log-rang nadalje razišče povezave z OS. Bolniki z velikim številom intraperitonealna infiltrirajoče MCT + celice in-17 IL + celice imeli slabšo OS kot tisti z nižjimi številkami MCT + celic (p = 0,004) in IL-17 + celice (p = 0,014, sl. 4B). Pri bolnikih z višjimi številkami MCT + IL-17 + celice imela krajše trajanje preživetja kot tisti z nižjimi številkami MCT + IL-17 + celic (p = 0,018, sl. . 4C)}

Spremenljivke p < 0,1 v univariatne analize so bile vključene v multivariatno Cox analizi sorazmernih tveganj, smo ugotovili, da oba intraperitonealna MCT-pozitivnih celic (HR = 2,057; 95% iZ: 1.048-4.037; p = 0,036) in faza TNM (HR = 3,832; 95% IZ: 1,679-8,745; p = 0,001) so neodvisni napovedni dejavniki (tabela 3). Kaže, da so bolniki z višjimi številkami intraperitonealna Srednjeverižne-pozitivnih celic, skoraj 2,1-krat bolj verjetno, da umrejo kot tisti z nižjimi številkami teh celic.

imunohistokemičnim lastnosti in povezava med MCT + IL-17 + gostota celic in imunokemijskega spremenljivke

IL-17 je znano proinflamatoren dejavnik, ki lahko spodbujajo rast tumorja s spodbujanjem angiogeneze in zaposlovanje nevtrofilcih, kakor tudi rekrutiranjem drugih vnetnih in imunskih tipov celic. Da razišče morebitno mehanizem (-e) akumulacije IL-17 v mikrookolje tumorja s slabo prognozo. Izvedli smo imunohistokemično raznih vnetnih mediatorjev, še posebej, gostota microvessel, nevtrofilcev, makrofagov in regulatornih celic T v celotni populaciji študije ( n
= 112). Reprezentativni področja CD34 ^{+ microvessels, CD66b + nevtrofilcev, CD68 + makrofagov in FoxP3 + regulatornih limfocitov T v intraperitonealna in normalnega tkiva so prikazani na sliki. 5A. Gostotami intraperitonealna CD34 + microvessels (p = 0,0030), CD66b + nevtrofilci (p < 0,0001), CD68 + makrofagov (p < 0,0001) in FoxP3 + regulatorni limfociti T (p <0.0001) so bistveno višje od tistih v normalnih tkivih (slika 5B)}

Nato smo analizirali povezavo med intraperitonealna MVD, gostote nevtrofilci, gostoto makrofagov, ureditve gostote T celic, in gostote IL.. 17 ^{+ celic, predvsem MCT + IL-17 + celice. Rezultati so pokazali pomembno povezavo med MVD in IL-17 + celic (r = 0,4040, p = 0,0001), medtem ko je pomembna, vendar šibka, so bile ugotovljene korelacije med IL-17 + celic in nevtrofilcev (r = 0,2135, p = 0,0238) in Tregs (r = 0,2963, p = 0,0017) (podatki niso prikazani). Vendar pa smo dodatno analizirali povezavo med MCT + IL-17 + celic in teh vnetnih mediatorjev. Močnejši značilno korelacijo je bilo med MCT + IL-17 + celic in MVD (r = 0,4396, p < 0,0001). Vendar pa korelacije med MCT + IL-17 + celic in nevtrofilcev (r = 0,2578, p = 0,0061) in Tregs (r = 0,2898, p = 0,0021) je bila podobna tisti za IL-17 + celic (prikazano na sliki 6).}

Colocalization med IL-17R in različnih vnetnih in imunskih celic

da bi raziskali mehanizem (e) v skladu s tem tesno razmerje med IL 17 proizvajajo celice in MVD, kakor tudi druge vnetne in imunske celice. Izvedli smo colocalization poskusov za oceno izražanja IL-17R v vaskularnih endotelijskih celic, nevtrofilcev, makrofagov in regulatornih T celic (naključno izbrana, n = 20). Naši rezultati so pokazali, da je večina vaskularnih endotelijskih celic, ki izražajo IL-17R (6-58% vaskularnih endotelialnih celicah; Fig.7) v intraperitonealna tkivih. V skladu z našo hipotezo, komaj so odkrili nevtrofilcev in regulatorne celice T izražajo IL-17R. Zanimivo je, da smo ugotovili izražanje IL-17R na površini tumorskih celic. (Sl. S2).

Pogovor

Imunski pobeg igra ključno vlogo pri nastanku in razvoju raka. Mediatorjev in celično efektorji imunskega sistema so pomembne komponente imunosupresivno okolju tumorja. Vloga interlevkin-17, kot pro-vnetne faktorja, je nedavno privlači pozornost raka, avtoimunskih bolezni in imunske bolezni. CD4 ^{+ Th17 celice so dolgo mislili, da je edini celični vir IL-17 v tumorja mikrookolja prehrano [23]. Vendar pa je naraščajoča so pokazali, da je mogoče z različnimi tipi celic proizvajajo IL-17 [3], [24]. Mastociti, pomemben celična komponenta prirojenega imunskega sistema, je bil priznan kot pomemben celični vir IL-17. Dejansko se lahko proizvajajo in /ali izločajo različnih citokinov in Kemokini ki prispevajo k imunske obrambe in vnetja, vključno z zaposlovanjem levkocitov in širjenja vaskularno celic. Nedavno je bilo dokazano, da mastociti infiltrirajo v mikrookolju tumorja preko signalne poti v SCF /c-kit, kar vodi do poslabšanja vnetja in imunosupresije [25]. Mast celicami pridobljene IL-17 je bil raziskan v več avtoimunskih bolezni, vključno z revmatoidnim artritisom [13], psoriaze [26] in spondilartritis [27], pri čemer mastocitov sta glavni celični vir IL-17, in so pokazale močna korelacija s patogenezo in napredovanju bolezni. Vendar ostala vir povečane ravni tumorjem infiltracije IL-17 in prispevek k napredovanja tumorja, kot tudi osnovni mehanizem (i), slabo razumemo.}

V tej študiji smo ugotovili da IL-17-izražajo celic v človeškem želodcu vzorcih raka razstavljeni dve fenotipe. Nekateri so imeli razmeroma redno fenotip, jajčaste /plazmocitnih oblik, nekateri pa so imeli bolj nepravilnih oblik. Poleg tega smo ugotovili, da IL-17 ^{+ limfociti sestavljala le ~ 10% za IL-17, ki izražajo celic, v nasprotju s prejšnjimi raziskavami na človeških tumorskih mikrookolje [7], [23]. Nedavno Bo Wang et al. [28] ugotovila, da mastocite, vendar ne T celice ali makrofagi so prevladujoči tip ekspresijo IL-17 v ezofagealnega ploščatoceličnega karcinoma tkiva. Zanimivo je, da smo tudi ugotovili, da je bila večina, 17 IL + celic colocalized z MCT + celic (14-68,1% of-17 IL + celic ), kar pomeni, da mastocite prevladujoč celični vir IL-17 v želodcu raka pri ljudeh. Številne študije so pokazale, da IL-17 oslabi imunski nadzor ter pospešuje angiogenezo in karcinogenezo pri tumorjih [1], [29], kar kaže, da lahko vnetja okolje s stopnjami endogenega IL-17 poganja prispevajo k napredovanja tumorja. Naši rezultati kažejo, da je raven IL-17-ekspresijo celic večja pri vzorcih tumorja tkiva od ustreznih normalnih vzorcev tkiva in da jambor-celic, pridobljenih IL-17 je bolj obilen v želodcu raka pri ljudeh. Kaplan-Meier analiza je pokazala, da intratumorska IL-17 + celice in intratumorska MCT + IL-17 + celice so povezana z slabšemu preživetju pri bolnikih človekovih želodca z rakom.}

Natančen mehanizem (-i), na katerem temelji povezavo med povečanjem ravni IL-17 v tumor mikrookolje in napredovanje tumorjev ostali (e) nejasen. Študija je poročal, da IL-17 spodbuja razvoj tumorja z zaposlitvijo mieloične izhaja zaviralcih celic (MDSCs), kot CD11b ^{+ gr1 + celic, okolja tumorja [30]. Medtem so številne študije pokazale, da IL-17 povečajo rast vaskularnih endotelijskih celic in vpliva na angiogenski napredek s povečanjem izločanje citokinov, kot je TNF-a, IL-8 in VEGF [29], [31] vključno s študijo, ki je poročal IL-17 posredovano parakrin omrežje spodbuja odpornost tumor na antiangiogensko zdravljenja [32]. Skladno s tem, naši rezultati pokazali pomembno povezavo med MVD in IL-17 + celic. Ugotovljeno je bilo tudi ugotovljeno, da bi mastociti spodbujanje širjenja žilno [33], v naši raziskavi smo ugotovili, da je bolj pomembno povezanost med MVD in MCT + IL-17 + celic, ki dokazujejo, da ti IL-17, ki proizvajajo mastociti imajo močnejši učinek na spodbujanje angiogenezo. Poleg tega smo ugotovili, da je večina žilnih endotelijskih celicah, ki izražajo IL-17R, bolj zanimivo, smo ugotovili, da so želodčni rakave celice pozitivne na IL-17R. Prejšnje študije so poročali, da je IL-17R izraz povezan z tumorja maligne bolezni [34], [35]. Kombiniranjem teh rezultatov lahko IL-17 infiltracija se spodbuja napredovanje tumorja z večanjem angiogenezo v mikrookolju tumorja skozi os IL-17 /IL-17R, funkcija na vaskularnih endotelijskih celic in tumorskih celic. Druga možna mehanizem leži v zaposlovanju vnetnih celic z IL-17, kot nevtrofilcev in makrofagov. Dokazano je, da je IL-17 spodbuja napredovanje tumorja prek neposrednih učinkov na zaposlovanje nevtrofilcev [36], [37]. V naši raziskavi, intratumorska IL-17 + celice in MCT + IL-17 + celic sta pokazala šibke, vendar pomembne, korelacije s številom intraperitonealna nevtrofilcev, medtem ko intraperitonealna makrofagov pokazala nobenega pomena. Čeprav je, komaj je bilo ugotovljeno, nevtrofilci izražanje IL-17R. Mast-izpeljana IL-17 lahko igrajo ključno vlogo pri zaposlovanju nevtrofilcev ga CXC kemokinov, kot CCL2, kot je bilo prej [38] opisano. Dokazi iz različnih raka kaže, da je delež predpisani T celic (Tregs) v tumorskem tkivu poveča pri bolnikih s številnimi malignimi boleznimi [39], [40]. Ugotovljeno je bilo, da je Tregs zaposlovanja ključno vlogo pri vzpostavitvi VEGF bogate tumorsko mikrookolje in povečanje tumorja angiogenezo [41]. Predhodna raziskava je poročala regulatorno vlogo mastocitov v tem, da so interakcije s konvencionalnimi CD4 + T celic za proizvodnjo IL-10, ki proizvajajo regulatornih T celic skozi os ICOSL /ICOS [42]. Ganeshan sod. [43] so poročali, da Tregs dejansko poveča, ne zavira, proizvodnjo mast celic IL-6, pleiotropen citokinov, katerega se je pokazalo, da igrajo ključno vlogo pri uravnavanju ravnovesja med IL-17, ki proizvajajo celice in FoxP3 + T regulatorne celice. Tako lahko obstaja intenzivno korelacije med Tregs in IL-17, ki proizvajajo mastociti. V naši raziskavi, je korelacija med IL-17 + celic in Tregs šibka, vendar pomembno, kot tudi MCT + IL-17 + celice. Ti rezultati pokazali, da IL-17, ki proizvajajo mastocite lahko inducira diferenciacijo in kopičenje Tregs jih izločajo različnih citokinov in Kemokini, ki jih je treba dodatno pojasniti.}

Kolikor nam je znano, je to prvo poročilo od fenotip in distribucija intraperitonealna IL-proizvodnjo 17 celic in njihov klinični pomen, in zlasti prognostično vrednost intraperitonealna mast celic, pridobljenih IL-17 pri raku želodca. Naši podatki kažejo, da je bila večina IL-proizvodnjo 17 celice mastociti, medtem ko so IL-17 ^{+ limfociti redki. Poleg tega smo ugotovili, da so bile intratumorska IL-17 + celice in intratumorska MCT + IL-17 + celic v korelaciji s slabše preživetje. Vendar pa mehanizem (i) mastocitov infiltracijo v mikrookolju tumorja in poseben mehanizem med povečano izražen IL-17 in vnetnih in imunskih celic, ostajajo večinoma neznane. Poleg tega je značilen funkcija skladiščijo in izločanja IL-17 še vedno potrebna za prikazano. Zato so potrebne za oceno napovedno vrednost intraperitonealna mast celicami, pridobljenimi IL-17 še naprej.}

dodatne informacije
sliki prihodnje študije, ki se osredotočajo na zaposlovanje mastocitov in IL-17 proizvodnje v mikrookolje tumorja na želodcu S1.
Colocalization med c-kit in mastocitov triptaze (MCT)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0106834.s001
(IOD)
Slika S2.
Colocalization med IL-17R (zelena) in nevtrofilcev, makrofagov, regulatornih celic T (oranžno)
DOI:. 10.1371 /journal.pone.0106834.s002
(TIF)

Zahvala

zahvaljujemo Lin Zhou, Haiyang Xie in Xiaowen Feng v Key laboratoriju za kombinirane Multi-presaditvah organov, Ministrstvo za javno zdravje, prve odvisnimi Hospital, School of Medicine, Zhejiang University za tehnično podporo v imunohistokemija in imunofluorescence.

• Plos ONE: zaviralnega učinka Pseudolaric Acid B na Rak želodca in rezistenco po Cox-2 /PKC-alfa /P-gp Pathway
• Plos ONE: miR-30b, Down urejeno želodčnega raka, spodbuja apoptozo in zavira rast tumorja, ki ga ciljanje aktivator plazminogena inhibitor-1