PLoS ONE: внутриопухолевое IL-17-позитивных тучные клетки являются основным источником ИЛ-17, что является предиктором выживания в раке желудка Patients

Абстрактный
<р> интерлейкина-17 (IL-17) преобладает в опухолевой ткани и подавляет эффективные иммунные реакции противоопухолевой. Тем не менее, источник повышенной опухолью инфильтрации IL-17 и его вклад в развитие опухоли при раке желудка человека еще мало изучены. В этом исследовании мы зачислен 112 больных раком желудка, иммунофлюоресценции использовали для оценки колокализации CD3, CD4, CD56, CD20, CD68 и тучных клеток триптазы (MCT) с IL-17. Иммуногистохимия был использован для оценки распределения плотности микрососудов (CD34), CD66b ^{+, CD68 + и FOXP3 + клеток в различных микроанатомической областях. Прогностическое значение определяли с помощью анализа Каплана-Мейера и регрессионной модели Кокса. Результаты показали, что тучные клетки, но не Т-клетки или макрофаги, были преобладающим типом клетки, продуцирующей IL-17 при раке желудка. Значительные положительные корреляции были обнаружены между плотностями тучных клеток получают IL-17 и микрососудов, нейтрофилы и регуляторных Т-клеток (Tregs). Futhermore, мы обнаружили, что большинство сосудистых эндотелиальных клеток, экспрессирующих интерлейкин-17-рецептор (IL-17R). Анализ Каплана-Мейера показал, что увеличение внутриопухолевое проникали тучных клеток и IL-17 + клетки, а также МСТ + IL-17 + клетки, были в значительной степени связано с худшим общей выживаемости. Эти данные показали, что тучные клетки были главным источником IL-17 при раке желудка, и внутриопухолевое IL-17 инфильтрацией, возможно, способствовало развитие опухоли путем повышения ангиогенеза в опухоли микроокружения через ось IL-17 /IL-17R. IL-17-положительных тучных клеток показал прогностическим фактором при раке желудка, указывая, что иммунотерапия ориентации тучных клеток может быть эффективной стратегией для управления внутриопухолевое IL-17 инфильтрацией, и, следовательно, обратный иммуносупрессии в микросреды опухоли, что облегчает иммунотерапии рака.
<р> Образец цитирования: Лю X, Jin H, G Чжан Лин X, Chen C, J Sun и др. (2014) внутриопухолевое IL-17-позитивных Тучные клетки являются основным источником ИЛ-17, что является предиктором выживаемости у больных раком желудка. PLoS ONE 9 (9): e106834. DOI: 10.1371 /journal.pone.0106834
<р> Редактор: Синь Юань Гуан, Университет Гонконга, Китай
<р> Поступило: 12 мая 2014 года; Принято: 1 августа 2014 года; Опубликовано: 8 сентября 2014
<р> Copyright: © 2014 Лю и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник приписывают наличие
<р> Data:. авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводы полностью доступны без ограничений. Все соответствующие данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> Финансирование:. XSL была поддержана грантом Национального научного фонда Китая (81273254 /H1006), http://www.nsfc.gov. сп /. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов}

Введение
<р> в последние десятилетия все большее внимание было уделено механизму (ами) спасаясь иммунологического в микросреды опухоли и, в частности, взаимосвязь между воспалением и иммуносупрессии. Одним из наиболее важных компонентов иммунной системы в воспаления, связанного с раком недавно было признано, как интерлейкин-17 (IL-17). IL-17 имеет плейотропных функций и несколько целей, которые в основном были исследованы в моделях мыши, но все чаще связаны с заболеваниями человека [1] - [5]. IL-17 была обнаружена в различных опухолях, включая рак молочной железы [6], рака желудка [7], [8], колоректальный рак [9], канцероген-индуцированного рака кожи [10], внутрипеченочный холангиокарциному [11], и печеночно-клеточный рак [12]. IL-17-продуцирующие клетки постепенно увеличиваются в количестве в опухоли микроокружения в процессе развития опухоли и коррелируют с плохой выживаемости у больных, связанных с раком.
<Р> Давно считается, что основным источником клеточного IL-17 CD4 ^{+ Т-лимфоциты (клетки Th17). В последнее время многие исследования, направленные на ИЛ-17, показали, что ИЛ-17 производства не ограничивается Th17-лимфоцитов, но также встречается в различных адаптивных и врожденных иммунных клеток, включая клетки γδT, NKT клетки, NK-клетки, тучные клетки, и гранулоциты [3], [13].
<р> рак желудка является одним из наиболее распространенных видов рака и является основной причиной, связанной с раком смерти во всем мире [14]. Более 1 миллиона новых пациентов с диагнозом рак желудка каждый год во всем мире, 42,5% из которых находятся в Китае. Традиционные терапевтические стратегии, в том числе хирургии, химиотерапии и лучевой терапии являются основными для лечения рака желудка. В последнее время иммунотерапии злокачественных новообразований была приведена в фокусе [15] - [17]. Тем не менее, ассоциированный с опухолью иммуносупрессии является серьезной проблемой для иммунотерапии, поскольку это ослабляет цитотоксическую активность эффективных Т-клеток и естественных клеток-киллеров. Во время развития опухоли, иммуносупрессии опухоли обычно ассоциируется с чрезмерным и неконтролируемым воспаления в опухоли микроокружения [18]. Хорошо известно, что множественные воспалительные клетки инфильтрата опухоли, включая тучные клетки, макрофаги, нейтрофилы подтипов, а также Т- и В-лимфоцитов, отличительной чертой рака ассоциированных с воспалением [19].
<Р> В настоящем исследовании , мы исследовали клеточные источники IL-17, распределения, функциональной значимости, и прогностическую ценность IL 17-продуцирующих клеток у 112 больных раком желудка. Мы предлагаем новый взгляд на потенциальный механизм (ы) IL-17 в микросреде опухоли у пациентов с раком желудка путем оценки взаимосвязи между IL 17-продуцирующих клеток и медиаторов воспаления. Наша цель состоит в том, чтобы предоставить дополнительную информацию, которая может оказаться полезной для разработки более эффективных иммунотерапии рака, которые предназначаются для IL-17.}

Материалы и методы исследования

Этика заявление
<р> До исследования , информированное согласие было получено от каждого пациента. Соответствующее разрешение было предоставлено этическим комитетом Первой филиал больницы, медицинский колледж, университет Zhejiang.

Образцы пациентов
<р> В общей сложности 112 пациентов в период с февраля 2009 года по март 2010 года в нашей больнице были зачислены , Пациенты, которые встретились были выбраны следующие критерии: а) поставлен диагноз рака желудка на основе патологии; б) получил эффективную резекцию. Критерии исключения были пациенты, которые имели признаки отдаленных метастазов, что свидетельствует о сопутствующей аутоиммунной болезни, ВИЧ или сифилис и пациентов, получавших противораковой терапии перед хирургическим вмешательством. Критерии эффективной резекции были определены как резекции при отсутствии остаточной опухоли (R0) или микроскопической остаточной опухоли (R1) в соответствии с 7 е издание Американского Еврейского Объединенного Комитета по рака. После лечебной резекции, пациенты получали адъювантной химиотерапии на основе 5-flurouracil и платины в соответствии с патологической классификацией TNM. Пациенты были прослежены с 3-6 месяцев интервал, в том числе анализов периферической крови на онкомаркеры и ультразвуковое исследование, а также расширение КТ каждые 6 месяцев, эндоскопа через каждые 12 месяцев. Клинические характеристики пациентов приведены в таблице 1.

иммуногистохимии и иммунофлуоресценции
<р> Рутинное гематоксилином и эозином проводили для подтверждения Гистологический диагноз, внутриопухолевое область была определена как менее чем на 2 см, граничащих с запасом опухоли желудка, в то время как нормальная область была определена как не менее 5 см, граничащих в край опухоли желудка.

Иммуногистохимия
<р> Иммуногистохимическое проводили, как описано в предыдущем исследовании [20]. Первичные антитела были козьими антителами против IL-17 (R &Amp; D Systems, UK), мышиное анти-CD66b (BD Pharmingen, США), мышиное анти-CD68 (Abcam, США), мышиное анти-FoxP3 (Abcam, США), а также мышиное анти-CD34 (Пекин Чжуншань Золотой мост Biotech, Китай). Для отрицательного контроля, первичное антитело было заменено фосфатно-буферном солевом растворе (PBS).

Иммунофлуоресценции
<р> Для иммунофлюоресценции, использовались аналогичные методы, за исключением того, что эндогенный активность пероксидазы не блокируется, и первичный Ab использовали был коктейль антител. Козье анти-IL-17 и козье анти-IL-17R (оба из R &Amp; D Systems, США) были использованы для обнаруженных IL-17 + клеток и экспрессии IL-17R. Панель антитела, реагирующие с CD3, CD20, CD34, CD56, C-набора (мышиное моноклональное, все из Пекина Чжуншань Golden Bridge Biotech, Китай), CD4 (мышиное моноклональное, Leica, немецкий), CD66 (мышиное моноклональное, BD Pharmingen, США), CD68, FoxP3 и тучных клеток триптазы (MCT) (мышиное моноклональное, все из Abcam, США) были использованы. После инкубации в течение ночи при 4 ° С, секции прошли инкубацию со смесью вторичных антител: Alexa Fluor 488/568-конъюгированные осла против мыши или Су3 /Alexa Fluor 488-конъюгированные осла против козьего или Alexa Fluor 488 осла против кролика ( все из Invitrogen, США) при 37 ° с в течение 1 ч. Слайды были установлены с Vectashield содержащий DAPI (Vector Laboratories, США) и визуализировали с помощью микроскопа флуоресцентной томографии (Olympus BX51, Япония), соединенный с ПЗС-камерой (Nikon DS-Ri1). Изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения 3.2 NIS-Elements BR.
<Р> Отрицательные контроли, в которых PBS использовали вместо первичных антител, были включены для каждого маркера.

Количественная иммунным окрашиванием параметры

Данные были получены путем ручного подсчета положительно окрашенных клеток в 10 представительных областях нормальных и внутриопухолевых областей при 400 × большом увеличении. В частности, эндотелиальные клетки сосудов, или кластеры коричнево-окрашенных клеток были идентифицированы как микрососудов, только если они имеют четкие границы с соседними структурами [21]. Плотности определяли путем вычисления среднего количества положительно окрашенных клеток на высокой мощности микроскопического поля (HPF). Двойное окрашивание определяли с помощью ручного подсчета положительных клеток в 10 полях высокой мощности; рассчитывались пропорции ИЛ-17-экспрессирующих клеток на поверхности маркера. Все анализы были выполнены двумя независимыми наблюдателями, ослепленный (GE Z и XK L), а средняя эпизодам двух наблюдателей были использованы в последующем анализе.

Статистический анализ
<р> Средние значения из CD34 +, CD66b +, CD68 +, FoxP3 + и тучных клеток триптазы (MCT +) и IL-17 + клетки были использованы в виде разрезной офф, чтобы определить подгруппы в наших результатах. т-тесты Стьюдента были использованы для сравнения инфильтрацию различных подмножеств иммунных клеток в ткани опухоли и соответствующей нормальной ткани. Хи-квадрат тест использовали для оценки взаимосвязи между IL 17-продуцирующих клеток и клинико-патологическими особенностями. Корреляция между плотностью микрососудов (CD34), нейтрофилы (CD66b), макрофаги (CD68), регуляторные Т-клетки (FOXP3) и IL-17-продуцирующие клетки были оценены с использованием коэффициента корреляции Пирсона или Спирмена. Общая выживаемость была определена как интервал между датой операции и датой смерти или последнего наблюдения, в зависимости от того произошло раньше. оценки функции выживания были рассчитаны с использованием метода Каплана-Мейера. Кокса модель была использована для оценки влияния IL-17-продуцирующие клетки на общую выживаемость. Двусторонний значение р &л; 0,05 рассматривалось как для обозначения статистической значимости. Все статистические анализы проводились с использованием GraphPad Prism (версия 5.00 для Windows;. GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США) и SPSS. (Версия 16.0;. SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США) программное обеспечение

Результаты

Исследуемая популяция
<р> характеристики испытуемых приведены в таблице 1. в общей сложности 78 мужчин и 34 женщины были зачислены. Возраст исследуемой популяции составляла от 33 до 89 (в среднем 60) лет. Из 112 больных раком желудка, статус инфекции H.pylori был положительным для 65 пациентов, в то время как 47 был отрицательным. 110 пациентов получили R0 резекция и 2 пациентов получили R1 резекцию. Патологические классификации TNM были основаны на 7 ^{е издание Американского Еврейского Объединенного Комитета по рака: 33 пациента не имели узла метастазирование лимфы, в то время как 21 были N1, 22 были N2 и 36 были N3. 1 пациент принадлежал к Tis, 23 пациентов принадлежали к стадии I, а 25, 63 пациентов в стадии II, III, соответственно. 3 (2,7%) пациентов потеряны для наблюдения и 39 (34,8%) пациентов умерли в течение периода наблюдения. Медиане наблюдения раз был 51 месяцев, начиная от 39 до 57 месяцев, и ставок общей выживаемости (OS) было 83,0% на 1 год, 71,4% за 3 года и 65,7% в 4-х лет, соответственно.}

IL-17 была выражена преимущественно МСТ + тучные клетки
<р> Случайные образцы 20 пациентов из всей когорты были использованы для оценки распределения и фенотип IL-17-продуцирующие клетки в внутриопухолевой области и соответствующие нормальные ткани (рис.1). Мы нашли цитоплазматический IL-17 в клетках окрашивание с яйцевидной фенотип, как описано ранее [13], а также в клетках более неправильной формы. Кроме того, мы обнаружили, что IL-17-экспрессирующие клетки были более частыми в тканях внутриопухолевое, чем нормальные ткани. Для идентификации IL-17 + клеток в тканях внутриопухолевое, мы провели эксперименты колокализационные и вычислили долю IL-17 + клеток в каждой подгруппе. Во-первых, мы провели совместную локализацию с-комплекта, дополнительный тучных клеток маркером, с тучных клеток триптазы (MCT), результаты показали, что все МСТ клетки +, экспрессирующие с-набора (рис. S1), указывая, что МСТ может быть используется для определенных тучных клеток представительно. В клетках яйцевидной фенотипа, мы выбрали ряд Т-клеток, В-клеток и клеточных маркеров NK: в частности, CD3, CD4, CD20 и CD56, и оценивали их колокализацию с IL-17. Тем не менее, были выявлены CD20 + IL-17 + и CD56 + IL-17 + клетки, хотя и редко (&л; 1%; рис.2, верхняя правая панели). Хотя время от времени CD3 + IL-17 + и CD4 + IL-17 + клеток наблюдались, средний процент IL-17 + клеток в обоих подмножествах были 12,4% ( 2.2-34.1%) и 8,4% (0-26.7%; рис.2, верхние левые панели; Таблица 2) Далее мы исследовали фенотип IL-17 + клетки неправильной формы; макрофаги были предложены в качестве потенциальных источников производства IL-17 [22]. В соответствии с этим, до 18,5% от IL-17-продуцирующих клеток в раковых тканях желудка были макрофаги (рис.2, нижняя левая панель; таблица 2). Тем не менее, большинство из 17 IL-продуцирующих клеток оставались неопознанными. Для того, чтобы определить, были ли тучные клетки дополнительным источником производства IL-17 при раке желудка, мы провели колокализации IL-17 и тучных клеток триптазу (MCT). Мы обнаружили, что большинство IL-17 + клетки локализуется с МСТ + клеток. (40-60% IL-17 + клеток; рис.2, в нижнем правом углу панели; Таблица 2)

Распределение МСТ ^{+ IL-17 + клеток и корреляция с клинико-патологическими особенностями}

Для того, чтобы подтвердить, что тучных клеток, полученных IL-17 является одним из основных источников клеточного ИЛ 17 в желудочном микросреды рака, мы провели иммунофлюоресценции двойное окрашивание внутриопухолевое и нормальных тканей образца из 112 пациентов. Большинство из IL-17 ^{+ клетки двойному окрашиванию сильно МСТ (14-68.1% от IL-17, экспрессирующих клеток) в внутриопухолевое тканях (рис. 3А). Мы обнаружили, что были найдены плотности МСТ + тучных клеток и IL-17 + клеток в тканях внутриопухолевое быть значительно выше, чем в нормальных тканях (MCT + <суб> T vs. MCT + <суб> N, 10,02 ± 4,06 против 8,66 ± 3,29, р = 0,0023; IL-17 + <суб> T против IL-17 + <> к югу N 8,16 ± 3,89 против прогноза 7,18 ± 3,48, р = 0,0165;. фиг.3В). Кроме того, плотность МСТ + IL-17 + клеток в тканях внутриопухолевое была значительно выше, чем в нормальных тканях (4.55 ± 2.48 против 3.93 ± 2.24, р = 0,0154;. Фиг.3В).}

Для того, чтобы выявить существенные связи между клинико-патологическими особенностями и MCT ^{+ IL-17 + клеток, был использован критерий хи-квадрат или точный критерий Фишера (приведенные в таблице 1). Тем не менее, МСТ + IL-17 + клеток в тканях внутриопухолевое не коррелировала с какой-либо клинической характеристике оценены, включая H. статус инфекции пилори, размер опухоли, степень дифференциации и классификации TNM.}

Увеличение внутриопухолевое МСТ ^{+ клетки, IL-17 + клеток и MCT + IL-17 + плотность клеток коррелировали с плохим общей выживаемости
<р> На однофакторного анализа (таблица 3), обычные клинико-патологическими особенности можно предсказать плохой общей выживаемости (OS) плохо дифференцированные опухоли и продвинутой стадии TNM. Для дальнейшего анализа числа МСТ + клетки, IL-17 + клеток, и МСТ + IL-17 + клетки были разделены на две группы: выше и ниже медианного значения. Кривые выживаемости Каплана-Мейера были подготовлены с использованием лог-рангового для дальнейшего изучения ассоциации с ОС. Пациенты с высоким числом внутриопухолевое инфильтрирующие MCT + клеток и IL-17 + клетки имели худшую ОС, чем те, с меньшим количеством МСТ + клеток (р = 0,004) и IL-17 + клеток (р = 0,014, рис. 4Б). Кроме того, у пациентов с более высоким числом МСТ + IL-17 + клетки имели меньшую продолжительность выживания, чем те, с меньшим количеством МСТ + IL-17 + клеток (р = 0,018, рис. . 4C)
<р> Переменные P < 0,1 в однофакторного анализа были включены в анализ Кокса пропорциональных рисков многовариантного, мы обнаружили, что оба внутриопухолевое MCT-позитивных клеток (HR = 2,057; 95% ДИ: 1.048-4.037; р = 0,036) и стадия TNM (HR = 3,832; 95% ДИ: 1.679-8.745; р = 0,001) были независимыми прогностическими факторами (таблица 3). Указав, что у пациентов с более высоким числом внутриопухолевое КРТ-позитивных клеток были почти в 2,1 раза больше шансов умереть, чем те, с меньшим количеством этих клеток.}

иммуногистохимические характеристики и связь между MCT + IL-17 + плотность клеток и иммунохимических переменные
<р> ИЛ-17 является известным провоспалительного фактором, который может способствовать росту опухоли посредством содействия ангиогенеза и рекрутинга нейтрофилах, а также набор других воспалительных и иммунных типах клеток. Для того, чтобы исследовать потенциальный механизм (ы) накопления IL-17 в опухоли микроокружения с плохим прогнозом. Мы провели иммуногистохимии для выявления различных воспалительных медиаторов, в частности, плотность микрососудов, нейтрофилы, макрофаги и регуляторных Т-клеток в совокупности изучения (<ЕМ> п
= 112). Типичные поля CD34 + микрососудов, CD66b + нейтрофилы, CD68 + макрофаги и FoxP3 + регуляторных Т-лимфоцитов в внутриопухолевое и нормальной ткани показаны на рис. 5A. Плотность внутриопухолевое CD34 + микрососудов (р = 0,0030), CD66b + нейтрофилы (р &л; 0,0001), CD68 + макрофаги (р &л; 0,0001) и FoxP3 + регуляторные Т-лимфоциты (р &л; 0,0001) была значительно выше, чем в нормальных тканях (фиг.5В)
<р> Далее, мы проанализировали корреляцию между внутриопухолевой MVD, плотности нейтрофилов, плотности макрофагами, регулирующей плотности Т-клеток, а также от плотности ИЛ.. 17 + клеток, в частности МСТ + IL-17 + клетки. Результаты исследования показали существенную корреляцию между МВД РФ и IL-17 + клеток (г = 0,4040, р = 0,0001), в то время как значительное, но слабые, корреляции были обнаружены между IL-17 + клетки и нейтрофилы (г = 0,2135, р = 0,0238) и Tregs (г = 0,2963, р = 0,0017) (данные не показаны). Тем не менее, мы также проанализировали корреляцию между MCT + IL-17 + клеток и те медиаторов воспаления. Более сильная значимая корреляция была обнаружена между MCT + IL-17 + клеток и МВД РФ (г = 0,4396, р &л; 0,0001). Тем не менее, корреляции между МСТ + IL-17 + клетки и нейтрофилы (r = 0,2578, р = 0,0061) и Tregs (г = 0,2898, р = 0,0021), были аналогичны, что ИЛ-17 <вир> + клетки (показано на рис.6).

колокализацию между IL-17R и различных воспалительных и иммунных клеток
<р> для того, чтобы исследовать механизм (ы) под тесно отношения между ИЛ 17 продуцирующих клеток и МВД РФ, а также другие воспалительные и иммунные клетки. Нами были проведены эксперименты колокализационные оценить экспрессию IL-17R в эндотелиальных клетках сосудов, нейтрофилов, макрофагов и регуляторных Т-клеток (случайным образом выбранный, п = 20). Наши результаты показали, что большинство сосудистых эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-17R (6-58% эндотелиальных клеток сосудов, рис.7) в внутриопухолевое тканях. В соответствии с нашей гипотезой, едва нейтрофилы и регуляторные Т-клетки были обнаружены экспрессии IL-17R. Интересно, что мы обнаружили экспрессию IL-17R на поверхности опухолевых клеток. (Рис. S2).

Обсуждение
<р> Иммунная побег играет ключевую роль в возникновении и развитии рака. Посредники и клеточные эффекторы иммунной системы являются важными компонентами иммунодепрессивной среды опухоли. Роль интерлейкина-17, в качестве провоспалительного фактора, привлек к себе внимание в последнее время в раковых заболеваний, аутоиммунных заболеваний и иммунодефицитных заболеваний. CD4 + клетки Th17 были на протяжении долгого времени является единственным клеточным источником ИЛ-17 в человеческой микросреды опухоли [23]. Тем не менее, все больше доказательств показал, что различные типы клеток могут производить IL-17 [3], [24]. Тучные клетки, важным клеточным компонентом врожденной иммунной системы, были признаны в качестве важного клеточного источника IL-17. Действительно, они могут производить и /или секретируют множество цитокинов и хемокинов, которые способствуют иммунной защиты и воспаления, включая набор лейкоцитов и пролиферации клеток сосудов. В последнее время было показано, что тучные клетки проникают в опухоли микроокружения через сигнальный путь СКФ /с-Kit, что приводит к обострению воспаления и иммуносупрессии [25]. Мачта-клеток, полученных ИЛ-17 был исследован в нескольких аутоиммунных заболеваний, в том числе ревматоидного артрита [13], псориазе [26], и спондилоартритом [27], в котором тучные клетки были основным клеточным источником ИЛ-17, и показали, сильная корреляция с прогрессированием патогенеза и болезни. Тем не менее, источник повышенной опухоли-инфильтрации IL-17 уровня, и вклад в прогрессирование опухоли, а также основной механизм (ы), оставались плохо понимаемыми.
<Р> В настоящем исследовании мы наблюдали что ИЛ-17-экспрессирующие клетки в желудочном образцах рака человека выставлены два фенотипа. Некоторые из них относительно регулярные фенотип, яйцевидные /плазмоцитов формы, однако некоторые из них более неправильной формы. Кроме того, мы обнаружили, что IL-17 + лимфоциты составляли лишь ~10% от IL-17-экспрессирующих клеток, в отличие от предыдущих исследований в микросреды опухоли человека [7], [23]. В последнее время Bo Wang и др. [28] обнаружили, что тучные клетки, но не Т-клеток или макрофаги, были преобладающим типом экспрессии IL-17 в тканях пищевода плоскоклеточного клеточного рака. Интересно, что мы также обнаружили, что большинство из IL-17 + клеток локализуется с МСТ + клеток (14-68.1% от IL-17 + клеток), что указывает на тучные клетки были преобладающим клеточным источником ИЛ-17 при раке желудка человека. Несколько исследований показали, что IL-17 ослабляет иммунный контроль и стимулирует ангиогенез и канцерогенеза в опухолях [1], [29], предполагая, что окружающая среда воспаление обусловлено уровнем эндогенного IL-17 может способствовать прогрессии опухоли. Наши результаты свидетельствуют о том, что уровень IL 17-экспрессирующих клеток была выше в образцах опухолевой ткани, чем соответствующие образцы нормальной ткани и что тучных клеток получают IL-17 был более обильным в раковых заболеваний желудка человека. Анализ Каплана-Мейера показал, что внутриопухолевой IL-17 + клеток и внутриопухолевые MCT + IL-17 + клетки коррелировали с худшей выживаемости больных раком желудка человека.
<р> Точный механизм (ы), лежащий в основе связи между увеличением уровня IL-17 в прогрессии микроокружения опухоли и опухоли остаются (s) неясна. В исследовании сообщалось, что IL-17 способствуют развитию опухолей путем набора миелоидных полученных супрессорных клеток (MDSCs), такие как CD11b + Gr1 + клеток, к окружающей среде опухоли [30]. В то же время, несколько исследований показали, что IL-17 может усиливать рост эндотелиальных клеток сосудов и влиять на ангиогенный прогресс за счет увеличения секреции цитокинов, таких как TNF-alpha, IL-8, и СЭФР [29], [31], в том числе исследование, в котором сообщалось IL-17-опосредованного паракринной сеть способствует устойчивость опухоли к антиангиогенной терапии [32]. В соответствии с этим, наши результаты показали существенную корреляцию между МВД РФ и IL-17 + клеток. Было установлено, что тучные клетки могут стимулировать пролиферацию сосудистых [33], в нашем исследовании мы обнаружили более значимую корреляцию между МВД РФ и MCT + IL-17 + клетки, демонстрирующие, что эти IL-17 производства тучные клетки имеют сильное влияние на стимуляции ангиогенеза. Кроме того, мы обнаружили, что большинство сосудистых эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-17R, что более интересно, мы обнаружили, что раковые клетки желудка были положительными для IL-17R. Предыдущие исследования показали, что экспрессия IL-17R был связан с опухолью злокачественной опухоли [34], [35]. Сочетание этих результатов, ИЛ-17 инфильтрат, возможно, способствует прогрессии опухоли путем повышения ангиогенеза в опухоли микроокружения через ось IL-17 /IL-17R, функция на эндотелиальных клетках сосудов и опухолевых клеток. Другой возможный механизм заключается в наборе воспалительных клеток с помощью IL-17, такие как нейтрофилы и макрофаги. Было показано, что IL-17 способствует прогрессии опухоли путем прямого воздействия на рекрутингом нейтрофилов [36], [37]. В нашем исследовании, внутриопухолевые ИЛ-17 + клеток и МСТ + IL-17 + клетки оба показали слабые, но существенные корреляции с числом внутриопухолевое нейтрофилы, в то время как внутриопухолевое макрофаги не показали никакого значения. Несмотря на то, едва были обнаружены нейтрофилы экспрессии IL-17R. Мачта полученный IL-17 может играть ключевую роль в наборе нейтрофилов по СХС хемокинов, таких как CCL2, как описано ранее [38]. Данные из различных видов рака показывает, что доля регуляторных Т-клеток (Tregs) увеличивается в опухолевой ткани у пациентов с множественными злокачественными опухолями [39], [40]. Было сообщено, что Tregs набор играет ключевую роль в создании VEGF богатых микросреды опухоли и увеличение ангиогенеза опухоли [41]. Предыдущее исследование показало, регулирующую роль тучных клеток в том, что они взаимодействуют с обычными CD4 + Т-клеток для генерации IL-10 производства регуляторных Т-клеток через ось ICOSL /ICOS [42]. Ганешан и др. [43] сообщили, что Tregs фактически увеличить, а не препятствовать, производство тучных клеток ИЛ-6, плейотропных цитокина, который, как было показано, чтобы играть ключевую роль в регуляции баланса между IL-17-продуцирующие клетки и FoxP3 + Т-регуляторные клетки. Таким образом, могут существовать интенсивные корреляции между Tregs и IL-17-продуцирующих тучных клеток. В нашем исследовании, корреляция между IL-17 + клеток и Tregs был слабым, но существенным, а также МСТ + IL-17 + клетки. Эти результаты показали, что IL-17 производит тучные клетки может индуцировать дифференцировку и накопление Tregs секрецией различных цитокинов и хемокинов, которые должны быть дополнительно выяснены.
<Р> Насколько нам известно, это первый доклад фенотип и распределение внутриопухолевое IL 17-продуцирующих клеток и их клиническое значение, и в частности, прогностическое значение внутриопухолевое тучных клеток получают IL-17 при раке желудка. Наши данные показывают, что большинство IL-17-продуцирующие клетки были тучные клетки, тогда как IL-17 + лимфоциты были редки. Кроме того, мы обнаружили, что внутриопухолевой IL-17 + клеток и внутриопухолевые MCT + IL-17 + клетки коррелировали с худшей выживаемости. Тем не менее, механизм (ы) тучных клеток инфильтрации в микроокружение опухоли и конкретный механизм между гиперэкспрессией IL-17 и воспалительных и иммунных клеток, остаются в значительной степени неизвестными. Кроме того, отличительная функция сохранена и секреторную IL-17 по-прежнему необходимо, чтобы проиллюстрировать. Таким образом, перспективные исследования, сосредоточенные на наборе тучных клеток и IL-17 производства в микроокружение опухоли желудка необходимо оценить прогностическую ценность внутриопухолевое тучных клеток, полученных IL-17 в дальнейшем.

подтверждающей информации, Фигурное S1.
колокализацию между С-комплектом и тучных клеток триптазы (MCT)
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0106834.s001
(TIF) Рисунок S2
.
колокализацию между IL-17R (зеленый) и нейтрофилов, макрофагов, регуляторных Т-клеток (оранжевый)
DOI:. 10.1371 /journal.pone.0106834.s002
(TIF)

Выражение признательности
<р> Мы благодарим Линь Чжоу, Haiyang Се и Xiaowen Фэн в Key Lab комбинированных Multi-трансплантации органов, Министерства здравоохранения, Первая больница, Дочернее школа медицины, Чжэцзян университета на техническую поддержку в иммуногистохимии и иммунофлуоресценции.

• PLoS ONE: ингибирующий эффект Pseudolaric кислоты B на рака желудка и множественная лекарственная устойчивость через C…
• PLoS ONE: микроРНК-30b, понижающей регуляции в рак желудка, стимулирует апоптоз и подавляет рост опухоли путем прис…