PLoS ONE: Intratumor IL-17-Teigiamas putliųjų ląstelių yra pagrindinis šaltinis IL-17 Tai Ar Nuspėjamasis išlikimo skrandžio vėžio Patients

Anotacija

Interleukinas-17 (IL-17) paplitę naviko audinio ir slopina veiksmingas antinavikinį imuninį atsaką. Tačiau padidėjęs naviko infiltruojanti IL-17 šaltinis ir jos įnašas į naviko progresavimo žmogaus skrandžio vėžiu tebėra menkai suprantamas. Šiame tyrime mes mokosi 112 skrandžio vėžiu pacientams, imunofluorescencinio buvo naudojamas įvertinti CD3, CD4, CD56, CD20, CD68 colocalization ir putliųjų ląstelių triptazės (MCT) su IL-17. Imunohistocheminis buvo naudojamas įvertinti kraujagyslių tankio pasiskirstymą (CD34), CD66b ^{+ CD68 + ir FoxP3 + ląstelių įvairių microanatomical srityse. Prognostinė vertė buvo nustatoma pagal Kaplan-Meier analizė ir Cox regresijos modelį. Rezultatai parodė, kad putliųjų ląstelių, bet ne T ląstelių arba makrofagai, buvo vyraujanti ląstelių tipo gamybos IL-17 skrandžio vėžiu. Statistiškai patikima teigiama koreliacija buvo aptikta tarp tankių stiebo ląstelių kilmės IL-17 ir kraujagyslėms, neutrofilų ir reguliavimo T ląstelių (Tregs). Be to, abi, mes nustatėme, kad iš kraujagyslių endotelio ląstelių dauguma išreikšti Interleukinas-17 receptorių (IL-17R). Kaplan-Meier analizė parodė, kad vis intratumor infiltruotų putliųjų ląstelių ir IL-17 + ląstelių, taip pat MCT + IL-17 + ląstelių, buvo reikšmingai susijęs su blogesne bendro išgyvenamumo. Šie rezultatai rodo, kad putliosios ląstelės buvo pagrindinis šaltinis IL-17 skrandžio vėžio, ir intratumor IL-17 infiltracija gali būti skatinamas naviko progresavimas didinant angiogenezę naviko mikroaplinkoje per IL-17 /IL-17R ašį. IL-17-teigiami putliųjų ląstelių parodė prognostinę veiksnys skrandžio vėžiui, nurodant, kad imunoterapija orientacija putliųjų ląstelių, gali būti veiksminga strategija kontroliuoti intratumor IL-17 infiltracija, ir todėl pakeisti imunosupresija į naviko mikroaplinkos, palengvinti vėžio imunoterapija.}

nurodomoji: Liu X, Jin yra H, Zhang G, Lin X, Chen, C, nuo saulės J, ir kt., (2014) Intratumor IL-17-Teigiamas putliųjų ląstelių yra pagrindinis šaltinis IL-17, kuri yra Nuspėjamasis išlikimo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. PLoS ONE 9 (9): e106834. Doi: 10,1371 /journal.pone.0106834

redaktorius: Xin-juanis Guan, Honkongo universitetas, Kinija

Įstojo: Gegužės 12, 2014; Priimtas rugpjūčio 1, 2014 m Paskelbta: Spalis 8, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Liu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. autoriai patvirtina, kad visi duomenys, kuriais grindžiamos išvados visiškai prieinama be apribojimų. Visi atitinkami duomenys yra per popieriaus ir jo Pagalbinė informacija failus

Finansavimas:. XSL parėmė Nacionalinės mokslo fondo Kinijos (81.273.254 /H1006), http://www.nsfc.gov suteikimo. CN /. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

per pastaruosius dešimtmečius, vis daugiau dėmesio buvo skiriama mechanizmo (-ų) pabėgti imunologinės į naviko mikroaplinkos, o ypač tarp uždegimas ir imuninės sistemos slopinimo santykius. Vienas iš svarbiausių komponentų imuninė sistema, uždegimui, susijusiam su vėžio neseniai buvo pripažinta kaip interleukino-17 (IL-17). IL-17 yra pleiotropic funkcijas ir kelis tikslus, kurie daugiausia buvo nagrinėjami pelės modelių, bet vis labiau susijęs su žmogaus ligų [1] - [5]. IL-17 buvo aptikta įvairių navikų, įskaitant krūties vėžio [6], skrandžio vėžio [7], [8], gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [9], kancerogenas sukeltos odos vėžys [10], intrahepatinė cholangiokarcinomos [11], ir hepatoceliulinė karcinoma [12]. IL-17-produkuojančios ląstelės palaipsniui didėja jų skaičius ir auglio mikroaplinkos metu auglių vystymuisi ir yra susiję su prastos išlikimo su vėžiu susijusios pacientams.

ilgą laiką buvo manoma, kad pagrindinis korinio šaltinis IL-17 yra CD4 ^{+ T limfocitai (Th17 kameros). Pastaruoju metu daug tyrimų skirtos IL-17 parodė, kad IL-17 gamyba neapsiriboja Th17 limfocitų, bet taip pat rasta prisitaikanti ir įgimtų imuninių ląstelių, įskaitant γδT ląstelių, NKT ląstelių, NK ląstelių, putliųjų ląstelių įvairovę, ir granulocitų [3], [13].}

Skrandžio vėžys yra viena iš labiausiai paplitusių vėžio rūšių ir pagrindinė priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių visame pasaulyje [14]. Daugiau nei 1 mln naujų pacientų diagnozuotas skrandžio vėžys kasmet visame pasaulyje, iš kurių 42,5% yra Kinijoje. Tradiciniai gydymo strategijas, įskaitant chirurgija, chemoterapija ir radioterapija yra pagrindiniai gydymo skrandžio vėžio. Neseniai imunoterapija piktybinių navikų buvo sufokusuotas [15] - [17]. Tačiau naviku susijęs imunosupresija yra didelis iššūkis imunoterapija, nes tai silpnina citotoksinis aktyvumas veiksmingų T ląstelių ir NK ląstelė. Per auglių vystymuisi, naviko imunosupresija paprastai būna susijęs su pernelyg didelis ir nekontroliuojamas uždegimas naviko mikroaplinkos [18]. Ji yra gerai žinoma, kad keli uždegiminių ląstelių įsiskverbti auglių, įskaitant putliosios, makrofagų potipių, neutrofilų, taip pat T ir B limfocitų, vėžio-susijęs uždegimas [19] prabos.

dabartinės tyrimo mes išnagrinėjo ląstelių šaltinių IL-17, platinimo, funkcinės reikšmės ir prognostinė vertė IL-17-gaminančių ląstelių 112 pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu. Mes teikiame naujų įžvalgų apie galimą mechanizmą (-us) IL-17 naviko mikroaplinkos pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, vertinant tarp IL-17-gaminančių ląstelių ir uždegiminių mediatorių santykius. Mūsų tikslas yra suteikti daugiau informacijos, kuri gali būti naudinga kuriant efektyvesnes vėžio imunoterapijos, kurie skirti IL-17.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

Prieš mokslinių tyrimų , informuoti sutikimą buvo gauta iš kiekvienam pacientui. Atitinkamas leidimas buvo išduotas etikos komisijos Pirmojo filialas ligoninė, medicinos koledžo, Zhejiang universiteto.

Ligonių mėginiai

Iš viso 112 pacientai nuo 2009 vasario iki 2010 kovo mūsų ligoninėje buvo įtraukti , Pacientai, kurie atitinka buvo atrinkti šie kriterijai: a) diagnozuotas skrandžio vėžys remiantis patologijos; b) gautų veiksmingą rezekcija. Atmetimo kriterijai buvo pacientai, kurie sirgo tolimoje metastazėmis įrodymų vienu metu autoimunine liga, ŽIV, ar sifiliu ir pacientams, kurie vartojo gydymo nuo vėžio prieš operaciją. Efektyvios rezekcijos kriterijai buvo apibrėžiami kaip rezekcija be likutinės naviko (R0) arba mikroskopiniu likutinės naviko (R1) pagal 7 ^{-osios redakcijos Amerikos bendru komiteto vėžio. Po radikalių rezekcija, pacientai gavo adjuvantinis chemoterapija remiantis 5-flurouracil ir platinos pagal patologinio TNM klasifikaciją. Pacientai buvo stebimi su 3-6 mėnesių pertrauka, įskaitant tyrimus jų periferinį kraują naviko žymenų ir echoskopija, ir sustiprintas CT kas 6 mėnesius, endoskopų kas 12 mėnesių. Klinikiniai charakteristikos pacientų rodomi 1 lentelėje}

imunohistocheminis ir Imunofluorescentinis

Įprastiniai hematoksilinu ir eozinas dažymo buvo atliktas patvirtinti patologinę diagnozę, intratumor regionas apibrėžiamas kaip mažesnis nei 2 cm ribojasi marža skrandžio naviko, o normalus regionas buvo ne mažiau kaip 5 cm, kurios ribojasi su skrandžio naviko maržą.

imunohistocheminis

imunohistocheminis buvo vykdomi, kaip aprašyta mūsų ankstesniame tyrime [20]. Pirminiai antikūnai buvo ožkos anti-IL-17 (R & D Systems, UK), pelės anti-CD66b (BD Pharmingen, JAV), pelės anti-CD68 (Abcam, JAV), pelės anti-FoxP3 (Abcam, JAV), ir pelės anti-CD34 (Pekinas Zhongshan Golden Bridge Biotech ", Kinija). Už neigiama kontrolė, pagrindinis antikūnas buvo pakeistas su fosfato-buferio druskų tirpalo (PBS).

Imunofluorescentinis
už imr.rnofluorescencija, buvo naudojami

​​panašūs metodai, išskyrus tai, kad endogeninio peroksidazės aktyvumo nebuvo blokuojama ir pagrindinis Ab "buvo naudojamas antikūnas kokteilis. Ožys prieš IL-17 ir ožkų anti-IL-17R (abu iš R & D Systems, JAV) buvo naudojami aptiktų IL-17 ^{+ ląstelių ir IL-17R išraiška. Antikūnų skydelis reaktyvus su CD3, CD20, CD34, CD56, c-Kit (pelės monokloniniai, visi iš Pekino Zhongshan Golden Bridge Biotech, Kinija), CD4 (pelės monokloniniai, Leica, vokiečių), CD66 (pelės monokloninis BD Pharmingen, buvo naudojami JAV), CD68, FoxP3 ir putliųjų ląstelių triptazės (MCT) (pelės monokloninis, visi iš Abcam, JAV). Po inkubacijos naktį 4 ° C, skyriai patyrė inkubacijos su antrinių antikūnų mišinio: Alexa Fluor 488/568 konjuguoto asilas kovos su pelės arba Cy3 /Alexa Fluor 488 konjuguoto asilas kovos su ožkų arba Alexa Fluor 488 asilas kovos su triušiena ( visi iš Invitrogen, JAV), esant 37 ° C temperatūroje 1 val. Skaidrės buvo sumontuoti su Vectashield, kurių sudėtyje yra DAPI (Vector Laboratories, JAV) ir ryškinamos naudojant fluorescencijos vaizdavimo mikroskopu ( "Olympus BX51, Japonija), sujungtą su CCD kamera (" Nikon "DS-Ri1). Vaizdai buvo analizuojami naudojant tinklų ir elementai BR 3.2 programinę įrangą.}

Neigiami kontroliniai mėginiai, kuriuose PBS buvo naudojami vietoj pirminių antikūnų, buvo įtraukti kiekvienos persekiotoją.

kiekybiškai imunodažymu parametrus

"duomenys buvo gauti rankiniu būdu skaičiuoti teigiamai tamsintas ląsteles per 10 atstovybių sričių normaliomis ir naviką regionuose pagal 400 × aukštos galios didinimas. Tiksliau, kraujagyslių endotelio ląstelių arba grupes rudos tamsintas ląstelių buvo identifikuoti kaip kraujagyslėms tik tada, jei jie turėjo aiškias ribas su gretimų struktūrų [21]. Tankiai buvo nustatytas apskaičiuojant vidutinį skaičių teigiamai tamsintas ląstelių viename didelės galios mikroskopinių srityje (HPF). Dvigubai dažymo buvo nustatomas rankiniu būdu skaičiavimo teigiamų ląstelių 10 didelės galios srityse; buvo apskaičiuojamas prie IL-17-išreikšti ląstelių viename paviršiaus persekiotoją proporcijos. Visi tyrimai buvo atlikti du nepriklausomi, apakinti stebėtojų (GE Z ir XK L), o vidutinė kaltinimus dėl dviejų stebėtojų buvo naudojami tolesnėje analizėje.

Statistinė analizė

mediana vertės CD34 ^{+ CD66b + CD68 + FoxP3 + ir putliųjų ląstelių triptazės (MCT +) ir IL-17 + ląstelės buvo naudojamas kaip cut- kompromisai apibrėžti pogrupius mūsų rezultatus. Stjudento t bandymai buvo naudojamas palyginti infiltracija įvairių imuninių ląstelių pogrupiuose į naviko audinio ir atitinkamą normalaus audinio. Chi-kvadrato testas naudojamas įvertinti tarp IL-17-gaminančių ląstelių ir klinikos ypatybių santykį. Koreliacija tarp kraujagyslių tankio (CD34), neutrofilų (CD66b), makrofagai (CD68), reguliavimo T ląstelės (FoxP3), ir IL-17 gaminančios ląstelės buvo vertinamas naudojant Pearsono ar Spearman koreliacijos koeficientą. Bendras išgyvenamumas buvo apibrėžiama kaip tarp dienos chirurgijos ir mirties dieną arba paskutinės tolesnių intervalu, kuris įvyko anksčiau. Išgyvenimo funkcija sąmatos buvo skaičiuojamas naudojant Kaplan-Meier metodu. Cox proporcinės rizikos modelis buvo naudojamas siekiant įvertinti IL-17 gaminančias ląsteles Gydymo poveikis bendram išgyvenamumui. Dvipusis p reikšmė < 0,05 buvo laikomas rodo statistinį reikšmingumą. Visi statistinės analizės buvo atliekamos naudojant GraphPad Prism (5,00 ver Windows,. GraphPad Programinė įranga, San Diegas, CA, JAV) ir SPSS. (Ver 16.0,. SPSS Inc., Chicago, IL, JAV) programinės įrangos}

rezultatai

Studijų gyventojų

Pacientų charakteristikos parodytos 1 lentelėje iš viso 78 vyrai ir 34 moterys buvo įtraukti. Studijų gyventojų amžius svyravo nuo 33 iki 89 (mediana 60) metų. Iš 112 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, H. pylori infekcija statusas buvo teigiamas 65 pacientams, o 47 buvo neigiamas. 110 pacientai gavo R0 rezekcijos ir 2 pacientams buvo R1 rezekcija. Patologiniai TNM klasifikacijos buvo grindžiamas 7 ^{-osios redakcijos Amerikos bendru komiteto vėžiu: 33 pacientai neturėjo limfmazgių metastazių, o 21 buvo N1, 22 buvo N2 ir N3 kategorijų transporto 36 buvo. 1 pacientui priklausė tis, 23 pacientai priklausė I etapas, ir 25, 63 pacientus į etapus, II, III, atitinkamai. 3 (2,7%) pacientai prarado sekti ir 39 (34,8%) pacientai mirė per stebėjimo laikotarpį. Mediana sekti laikas buvo 51 mėnesių, nuo 39 iki 57 mėnesių ir bendras išgyvenamumas (BI) normos buvo 83,0% per 1 metus, 71,4% po 3 metų ir 65,7% po 4 metų, atitinkamai.}

IL-17 buvo išreikštas daugiausia per MCT + putliųjų ląstelių

atsitiktiniai mėginiai iš 20 pacientų iš visos kohortos buvo naudojamas įvertinti pasiskirstymą ir fenotipą IL-17-gaminančias ląsteles intratumor regione ir atitinkamas normalūs audiniai (1 pav). Mes nustatėme, citoplazminio IL-17 dažymo ląstelėse su kiaušinio fenotipo, kaip aprašyta anksčiau [13], ir ląstelėse labiau netaisyklingos formos. Be to, mes nustatėme, kad IL-17-išreiškiantys ląstelės buvo dažnesnės intratumor audinių negu normaliuose audiniuose. Norėdami nustatyti IL-17 ^{+ ląstelių intratumor audinių, mes atliekame colocalization eksperimentus ir apskaičiavo IL-17 + ląstelių dalį kiekvienoje pogrupyje. Pirma, mes atliekame colocalization c-komplektas, papildomai putliųjų ląstelių persekiotoją, su putliųjų ląstelių triptazės (MCT), rezultatai parodė, kad visi MCT + ląstelių išreiškiantys c-KIT (pav. S1), nurodant, kad MCT gali būti naudojamas nustatytų putliųjų ląstelių tipiniai. Ląstelėse kiaušinio fenotipo, mes pasirinkote T ląstelių, B ląstelių ir NK ląstelių žymenų numeris: Tiksliau, CD3, CD4, CD20 ir CD56, ir įvertinti jų colocalization su IL-17. Tačiau buvo nustatyta, CD20 + IL-17 + ir CD56 + IL-17 + ląstelių, nors retai (< 1%; 2 pav, viršutiniame dešiniajame plokštes). Nors kartais CD3 + IL-17 + ir CD4 + IL-17 + ląstelių buvo pastebėtas vidutinis procentinių IL-17 + ląstelių abiejuose pogrupiuose buvo 12,4% ( 2,2-34,1%) ir 8,4% (0-26,7%; 2 pav, viršutiniame kairiajame plokštės; 2 lentelė) Mes šalia tyrė IL-17 fenotipą + ląstelių netaisyklingos formos; makrofagų buvo siūloma kaip galimų šaltinių IL-17 gamybos [22]. Atitinkamai laikantis, iki 18,5% kurį iš IL-17-gaminančių ląstelių skrandžio vėžio audiniuose buvo makrofagų (2 pav, kairėje apačioje pultą; 2 lentelė). Tačiau, IL-17-gaminančių ląstelių dauguma išliko nenustatytos. Norėdami nustatyti, ar stiebo ląstelės buvo papildomas šaltinis IL-17 gamybos skrandžio vėžio, mes atliekame colocalization IL-17 ir putliųjų ląstelių triptazės (MCT). Mes nustatėme, kad IL-17 + ląstelių colocalized su MCT + ląstelių dauguma. (40-60% IL-17 + ląstelių; 2 pav, apatiniame dešiniajame skydelis; 2 lentelė)}

pasiskirstymas MCT ^{+ IL-17 + ląstelių ir koreliacija su klinikos funkcijų}

Jei patvirtinama, kad putliųjų ląstelių kilmės IL-17 buvo pagrindinis ląstelių šaltinis IL 17 skrandžio vėžiu mikroaplinkos, mes atliekame imunofluorescencinį dvigubo dažymas intratumor ir normalių pavyzdžių audinių iš 112 pacientų. IL-17 ^{dauguma + ląstelių dukart tamsintas stipriai su MCT (14-68,1% IL-17, išreiškiančius ląsteles) intratumor audinių (pav. 3A). Mes nustatėme, kad buvo nustatyta, kad MCT + putliųjų ląstelių ir IL-17 + ląstelių intratumor audinių tankis yra daug didesnis nei įprastų audinių (MCT + _{, T vs MCT + N 10,02 ± 4,06 vs 8,66 ± 3,29, p = 0,0023; IL-17 + , T vs IL-17 + N, 8.16 ± 3.89 vs. 7,18 ± 3,48, p = 0,0165; 3B pav).. Be to, MCT tankis + IL-17 + ląstelių intratumor audiniuose buvo reikšmingai didesnis negu sveikų audinių (4.55 ± 2.48 vs 3.93 ± 2.24, p = 0,0154; pav. 3B).}}

Jei turi nustatyti svarbius ryšius tarp klinikos funkcijų ir MCT ^{+ IL-17 + ląstelių, buvo naudojamas Chi kvadrato testas ar tiksli Fišerio testas (parodyta 1 lentelėje). Tačiau MCT + IL-17 + ląstelių intratumor audinių ne koreliuoja su bet klinikinė charakteristika vertinama, įskaitant H. pylori infekcijos būklę, naviko dydį, diferenciacijos laipsnis ir klasifikavimo TNM.}

Padidėjęs intratumor MCT + ląstelių, IL-17 + ląstelių ir MCT + IL-17 + ląstelių tankis buvo susijęs su prasta bendro išgyvenamumo

Apie vieną požymį analizės (3 lentelė), paprastųjų klinikos funkcijos Nuspėjamasis prastos bendro išgyvenamumo (OS) buvo menkai diferencijuotų navikų ir pažangių TNM etapą. Dėl išsamesnės analizės, numeriai MCT ^{+ ląstelių, IL-17 + ląstelių ir MCT + IL-17 + ląstelių buvo suskirstyti į dvi grupes: aukščiau ir žemiau medianos reikšmės. Kaplan-Meier išgyvenimo kreivės buvo parengtos remiantis log-rank testą toliau tirti asociacijos OS. Pacientus, sergančius didelio skaičiaus intratumor infiltrating MCT + ląstelių ir IL-17 + ląstelių turėjo blogesnę OS nei tie, su mažesnėmis skaičių MCT + ląstelių (p = 0,004) ir IL-17 + ląstelių (p = 0,014, 4B pav.). Be to, pacientams, kurių didesnių skaičių MCT + IL-17 + ląstelių turėjo trumpesnį išgyvenimo trukmę nei tie, su mažesnėmis skaičių MCT + IL-17 + ląstelių (p = 0,018, pav. . 4c)}

Kintamieji p < 0,1 iš Vienaveiksnės analizių buvo įtraukti į daugiamatis Cox proporciniai pavojų analizę, mes nustatėme, kad abi intratumor MCT-teigiamas ląsteles (HR = 2,057; 95% PI: 1.048-4.037; p = 0,036) ir TNM stadija (RS = 3,832; 95% PI: 1,679-8,745; p = 0,001) buvo nepriklausomi prognostiniai veiksniai (3 lentelė). Rodo, kad pacientams, sergantiems aukštojo skaičių intratumor MCT-teigiamas ląsteles buvo beveik 2,1 karto didesnė tikimybė mirti nei su mažesnės skaičių šių ląstelių.

Imunohistocheminiais charakteristikos ir tarp MCT asociacija + IL-17 + ląstelių tankis ir imunocheminiu kintamieji

IL-17 yra žinomas PRO-uždegiminis faktorius, kuris gali skatinti navikų augimą, skatinant angiogenezėje ir įdarbinti neutrofilų, taip pat įdarbinimo ir kitų uždegiminių ir imuninių ląstelių tipų. Ištirti galimą mechanizmą (-us) IL-17 kaupimosi naviko mikroaplinkos su blogos prognozės. Mes atlikome imunohistocheminis dėl įvairių uždegiminių mediatorių, ypač kraujagyslių tankis, neutrofilų, makrofagų ir reguliavimo T ląstelių visos tirtos populiacijos ( N
= 112). Reprezentacinės sritys CD34 ^{+ kraujagyslėms, CD66b + neutrofilų, CD68 + makrofagų ir FoxP3 + reguliavimo T limfocitų intratumor ir normalaus audinio yra parodyta pav. 5A. Į intratumor CD34 + kraujagyslėms (p = 0,0030) tankį, CD66b + neutrofilai (p < 0,0001), CD68 + makrofagai (p < 0,0001) ir FoxP3 + reguliavimo T limfocitai (p < 0,0001) buvo reikšmingai didesnis negu sveikų audinių (5b pav)}

Be to, mes analizavo tarp intratumor MVD, neutrofilų tankis, makrofagų tankis, reguliavimo, T ląstelių tankio, ir IL tankio ryšį.. 17 ^{+ ląstelių, ypač MCT + IL-17 + ląstelių. Rezultatai parodė reikšmingą koreliaciją tarp MVD ir IL-17 + ląstelių (r = 0,4040, p = 0,0001), o didelis, bet silpna, koreliacija buvo rasta tarp IL-17 + ląstelių ir neutrofilų (r = 0,2135, p = 0,0238) ir Tregs (R = 0,2963, p = 0,0017) (duomenys neparodyta). Tačiau mes ir toliau analizavo tarp MCT + IL-17 + ląstelių ir šių uždegiminių mediatorių koreliaciją. Stipresnė reikšminga koreliacija buvo nustatyta tarp MCT + IL-17 + ląstelių ir VRM (r = 0,4396, p < 0,0001). Tačiau tarp MCT koreliacijos + IL-17 + ląstelių ir neutrofilų (r = 0,2578, p = 0,0061) ir Tregs (r = 0,2898, p = 0,0021) buvo panašus į IL-17 + ląstelių (parodyta Fig.6).}

Colocalization tarp IL-17R ir įvairių uždegiminių ir imuninių ląstelių

siekiant ištirti mechanizmą (-us) pagal atidžiai santykių IL 17 gaminančios ląstelės ir VRM, taip pat kitų uždegimo ir imuninės ląstelės. Mes atlikome colocalization eksperimentus įvertinti IL-17R išraišką kraujagyslių endotelio ląstelių, neutrofilų, makrofagų ir reguliavimo T ląstelių (atsitiktinai pasirinktą, N = 20). Mūsų rezultatai parodė, kad kraujagyslių endotelio ląstelių dauguma išreikšti IL-17R (6-58% kraujagyslių endotelio ląstelių; fig.7) į intratumor audiniuose. Suderinamas su mūsų hipotezę, vos neutrofilų ir reguliavimo T ląstelių buvo aptikta išreikšti IL-17R. Įdomu tai, kad mes nustatėme, išraiška IL-17R į naviko ląstelių paviršiuje. (Pav. S2),.

Diskusijos

Imuninės pabėgti vaidina svarbų vaidmenį genezė ir raida vėžio. Tarpininkai ir ląstelių vykdymo imuninės sistemos yra svarbūs komponentai imunosupresinis naviko aplinkoje. Interleukino-17 vaidmuo, kaip pro-uždegiminių faktoriaus, pritraukė dėmesį neseniai vėžio, autoimuninių ligų, ir imunodeficito ligų. CD4 ^{+ Th17 ląstelės buvo ilgai manoma, kad vienintelis mobiliojo šaltinis IL-17 žmogaus naviko mikroaplinkos [23]. Tačiau, vis daugiau įrodymų parodė, kad įvairūs tipų ląstelės gali gaminti IL-17 [3], [24]. Putliųjų ląstelių, svarbus ląstelių komponentas įgimtą imuninę sistemą, buvo pripažintas svarbiu ląstelių šaltinis IL-17. Iš tiesų, jie gali gaminti ir /arba išskiria citokinų ir chemokinus, kurie padeda imuninės sistemos ir uždegimas, įskaitant įdarbinimą leukocitų ir kraujagyslių ląstelių proliferacijos įvairovė. Pastaruoju metu ji buvo įrodyta, kad putliųjų ląstelių įsiskverbti į naviko mikroaplinkos per MMK /c-KIT signalizacijos keliu, todėl paūmėja uždegimas ir imuninės sistemos slopinimo [25]. Putliųjų ląstelių kilmės IL-17 buvo tiriamas keliose autoimuninių ligų, įskaitant reumatoidinį artritą [13], psoriazė [26], ir spondilartritas [27], kurioje putliosios ląstelės buvo pagrindinė korinio šaltinis IL-17, ir parodė, stipri koreliacija su patogenezės ir ligos progresavimo. Tačiau padidėjusio naviko infiltruojanti IL-17 lygiu šaltinis ir indėlis į naviko progresavimo, taip pat Šio reiškinio atsiradimo mechanizmas (-ai), liko prastai suprantamos.}

šiame tyrime, mes nustatėme, kad IL-17-išreiškiantys ląstelės žmogaus skrandžio vėžio mėginių eksponuojami du fenotipų. Kai buvo santykinai reguliariai fenotipas, kiaušinio /plasmacytoid figūras, bet kai turėjo daugiau netaisyklingos formos. Be to, mes nustatėme, kad IL-17 ^{+ limfocitai sudaro tik ~10% IL-17-išreiškiančius ląstelių, priešingai ankstesnių studijų žmogaus navikų mikroaplinkos [7], [23]. Neseniai Bo Wang et al., [28] nustatė, kad putliųjų ląstelių, bet ne T ląstelių ar makrofagus, buvo dominuojantis tipas išreikšti IL-17 stemplės suragėjusių ląstelių karcinoma audiniuose. Įdomu tai, kad mes taip pat nustatyta, kad IL-17 + ląstelių dauguma colocalized su MCT + ląstelių (14-68,1% IL-17 + ląstelių), nurodant, kad putliųjų ląstelių buvo dominuojantis korinio šaltinis IL-17 žmogaus skrandžio vėžio. Keletas tyrimų parodė, kad IL-17 susilpnina imuninę priežiūrą ir skatina angiogenezę ir kancerogenezės į navikus [1], [29], o tai rodo, kad uždegimas aplinka lemia lygių endogeninio IL-17, gali prisidėti prie naviko progresavimo. Mūsų rezultatai parodė, kad IL-17-išreikšti kūnelių kiekis buvo didesnis naviko audinių mėginių dalį už atitinkamų normalių audinių pavyzdžių ir kad stiebas-ląstelių kilmės IL-17 buvo gausiai žmogaus skrandžio vėžio. Kaplan-Meier analizė parodė, kad naviką IL-17 + ląstelių ir naviką MCT + IL-17 + ląstelės buvo susijęs su blogesne išlikimo žmogaus skrandžio vėžiu sergantiems pacientams.}

Tikslus mechanizmas (-ai), kuriuo grindžiama tarp augančios IL-17 asociaciją auglio mikroaplinkos ir auglio progresavimo ir toliau (-ai) neaiškios. Tyrimas pranešė, kad IL-17 skatina auglio vystymąsi per kaulų čiulpais kilęs slopintuvas ląstelių (MDSCs), pavyzdžiui, CD11b ^{+ GR1 + ląstelių įdarbinimo, į naviko aplinkoje [30]. Tuo tarpu, kai kurie tyrimai parodė, kad IL-17 gali padidinti kraujagyslių endotelio ląstelių augimą ir daryti įtaką angiogeninf pažangą didinant citokinų, pavyzdžiui, TNF-alfa, IL-8 sekreciją, ir VEGF [29], [31], įskaitant tyrimą, pranešė IL-17-tarpininkaujant paracrine tinklą skatina naviko atsparumą antiangiogeninį terapija [32]. Atitiko tai, mūsų rezultatai parodė reikšmingą koreliaciją tarp MVD ir IL-17 + ląstelių. Ji buvo gerai nustatyta, kad putliųjų ląstelių galėtų skatinti kraujagyslių proliferaciją [33], mūsų tyrime mes radome daugiau reikšminga koreliacija tarp MVD ir MCT + IL-17 + ląstelių, įrodančius, kad jie IL-17 gaminti putliųjų ląstelių turi stipresnį poveikį skatinant angiogenezę. Be to, mes nustatėme, kad iš kraujagyslių endotelio ląstelių, ekspresuojančių IL-17R, kas įdomiau dauguma, mes nustatėme, kad skrandžio vėžio ląstelės buvo teigiamas IL-17R. Ankstesni tyrimai, pranešė, kad IL-17R išraiška buvo susijęs su naviko piktybiškumo [34], [35]. Derinant šiuos rezultatus, IL-17 infiltracija gali būti skatinamas naviko progresavimas didinant angiogenezę naviko mikroaplinkoje per IL-17 ašį /IL-17R, funkcija kraujagyslių endotelio ląstelių ir vėžinių ląstelių. Kitas galimas mechanizmas yra ta, kad uždegiminių ląstelių IL-17, pavyzdžiui, neutrofilų ir makrofagų įdarbinimo. Buvo įrodyta, kad IL-17 skatina naviko progresavimas per tiesioginio poveikio neutrofilų įdarbinimo [36], [37]. Mūsų tyrimo duomenimis, naviką IL-17 + ląstelių ir MCT + IL-17 + ląstelių abu parodė silpnąsias, bet reikšmingas, koreliacijas su intratumor neutrofilų skaičiaus, o intratumor makrofagai neparodė reikšmę. Nors, vos buvo rasta neutrofilų išreikšti IL-17R. Stiebas gautas IL-17, gali vaidinti svarbų vaidmenį neutrofilų įdarbinimas CXC chemokinus, pavyzdžiui, CCL2, kaip aprašyta anksčiau [38]. Įrodymai iš įvairių vėžio rodo, kad reguliavimo T ląstelių (Tregs) santykis padidėjo naviko audinyje pacientams su keliais piktybinių navikų [39], [40]. Buvo pranešta, kad Tregs įdarbinimas turėjo labai svarbų vaidmenį kuriant VEGF-turtingas naviko mikroaplinka ir didinti naviko angiogenezę [41]. Ankstesnis tyrimas pranešė reguliavimo vaidmenį putliųjų ląstelių, kad jie sąveikauja su įprastine CD4 + T ląstelių generuoti IL-10 gamybos reguliavimo T ląstelių per ICOSL /ICO [42] ašį. Ganeshan ir kt. [43] pranešė, kad Tregs tikrųjų pagerinti, o ne slopinti, putliųjų ląstelių gamybą IL-6, yra pleiotropic citokino, kuris buvo įrodyta, kad vaidinti pagrindinį vaidmenį tarp IL-17-gaminančių ląstelių ir FoxP3 + T reguliavimo ląstelės. Taigi, intensyvios koreliacijos gali egzistuoti tarp Tregs ir IL-17-gaminančių putliųjų ląstelių. Mūsų tyrimo duomenimis, tarp IL-17 + ląstelių ir Tregs koreliacija buvo silpna, bet reikšmingas, taip pat MCT + IL-17 + ląstelių. Šie rezultatai parodė, kad IL-17 gaminti putliųjų ląstelių gali sukelti diferenciaciją ir kaupimą Tregs išskyrė įvairių citokinų ir chemokinus, kurios turi būti toliau neaiški.}

Mūsų žiniomis, tai pirmas ataskaita fenotipas ir platinimas intratumor IL-17-gaminančių ląstelių ir jų klinikinė reikšmė, ir ypač prognostinė vertė intratumor stiebo ląstelių kilmės IL-17 skrandžio vėžiu. Mūsų duomenys rodo, kad dauguma IL-17 gaminančios ląstelės buvo putliųjų ląstelių, o IL-17 ^{+ limfocitai buvo reti. Be to, mes nustatėme, kad naviką IL-17 + ląstelių ir naviką MCT + IL-17 + ląstelių buvo susijęs su blogesne išlikimui. Tačiau, šis mechanizmas (-ai) putliųjų ląstelių infiltracija į naviko mikroaplinkoje ir specifinį mechanizmą tarp padidėjusia IL-17 ir uždegiminių ir imuninių ląstelių daugiausia lieka nežinomas. Be to, savita funkcija saugomi ir sekrecijos IL-17 dar reikia iliustruoti. Taigi, perspektyviniai tyrimai daugiausia dėmesio skiriant putliųjų ląstelių įdarbinimo ir IL-17 gamybos skrandyje naviko mikroaplinkos yra būtina įvertinti nuspėjimo vertę intratumor putliųjų ląstelių, gautų IL-17 toliau.}

Pagalbinė informacija
pav S1.
Colocalization tarp c-KIT ir putliųjų ląstelių triptazės (MCT)
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0106834.s001
(TIF)
S2 pav.
Colocalization tarp IL-17R (žalia) ir neutrofilų, makrofagų, reguliavimo T ląstelių (oranžinė)
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0106834.s002
(TIF)

Padėka

ačiū Lin Zhou, Haiyang Xie ir Xiaowen Feng Key Lab Kombinuotosios daugelio organų transplantacijos ministerijos visuomenės sveikatos pirmasis filialas ligoninė, medicinos mokyklos, Zhejiang universiteto techninės paramos imunohistocheminis ir iMUNOFLUORESCENCIJOS.

• PLoS ONE: slopinantis poveikis Pseudolaric Acid B skrandžio vėžio ir naviko atsparumą daugeliui per COX-2 /PKC-alfa /P-gp būdas
• PLoS ONE: Pasaulis-30b, žemyn reguliuojama skrandžio vėžio, skatina apoptozę ir slopina naviko augimą nukreipiant plazminogeną aktyvatoriaus inhibitoriaus-1