PLOS ONE: Minskade miR-204 i H. pylori-associerade Gastric Cancer Främjar cancercelltillväxt och invasion genom att rikta SOX4

Abstrakt

Bakgrund

Den molekylära mekanismen mellan Helicobacter pylori (H. pylori) och magcancer var i stort sett okända. I denna studie har vi bestämt roll miRNA i H. pylori inducerade magcancer.

Metoder och resultat

Vi fann att MIR-204 minskade i H. pylori positiva vävnader genom qRT- PCR. Knockdown av MIR-204 förbättras invasionen och spridning förmåga gastric cancerceller in vitro. Luciferas analys visade att SOX4 var målgenen Mir-204, som konstaterades uppreglerad i H. pylori positiva vävnader. Nedreglering av MIR-204 och överuttryck av SOX4 främjas epitel-mesenkymala övergångsprocessen.

Slutsats

Sammantaget visade våra resultat att MIR-204 kan fungera som en tumörsuppressor i H. pylori inducerad magsäckscancer genom att rikta SOX4

Citation. Zhou X, Li L, Su J, Zhang G (2014) Minskad miR-204 i H. pylori-associerade gastric cancer Främjar cancercelltillväxt och invasion genom att rikta SOX4. PLoS ONE 9 (7): e101457. doi: 10.1371 /journal.pone.0101457

Redaktör: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, USA

Mottagna: 18 mars, 2014. Accepteras: 5 juni 2014. Publicerad: 1 JULI 2014

Copyright: © 2014 Zhou et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

datatillgänglighet. Det författarna bekräftar att all data som ligger till grund resultaten är helt utan begränsning. Alla relevanta uppgifter finns inom pappers- och dess stödjande information filer

Finansiering:. Guoxin Zhang har finansierats av National Natural Science Foundation i Kina (nr 81.270.476) (http://www.nsfc.gov.cn/). Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Gastric cancer är den fjärde vanligaste cancerformen och näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död i världen [1]. Hittills har molekylära mekanismer på magcancer undersökts, men har de inte helt klarlagd [2]. Gastric karcinom är tänkta att utvecklas enligt en flerstegsprocess av cancer, som är starkt förknippad med infektion med bakteriell patogen, Helicobacter pylori
( H. Pylori
) [3]. H. pylori
, som koloniserar magsäcken hos 50% av världens befolkning, har klassificerats som en klass I cancerframkallande på grund av dess orsak roll i utvecklingen av magcancer [4].

Det har rapporterats att utvecklingen och utvecklingen av magcancer kan tillskrivas mikroRNA (miRNA) [5] - [8]. MiRNA är små, icke-kodande RNA som reglerar uttrycket av målgener genom translationell förtryck eller budbärar-RNA (mRNA) nedbrytning [9]. MIR-204 onormalt uttryck rapporterades att associera med olika typer av cancer [10], [11]. Men lite är känt om miRNA-204 funktion i magcancer. Matsushima utförde miRNA array studie i H. pylori positiva vävnader och contols och fann att MIR-204 uttryck var signifikant lägre i H. pylori positiva vävnader [12].

Hos människa, kön bestämmande region Y (SRY ) behållaren familj, även hänvisad till SOX familjen, omfattar 20 mycket konserverade transkriptionsfaktorer som spelar viktiga roller vid utvecklingen av prostatacancer [13]. Dessa transkriptionsfaktorer är definierade av en konserverad signatursekvens i high-mobility group (HMG) DNA-bindande domän (DBD) [14], [15]. SOX4 är ett protein 47-kDa är mycket konserverad i vertebrater och dess kliniska betydelse har fått allt större uppmärksamhet på senare år, med många rapporter om att SOX4 kan bidra till tumörprogression [16], [17]. Ökad SOX4 uttryck finns i tumörer i urinblåsan, prostata och tjocktarm och med icke-småcellig lungtumörer [18] - [21]. Avreglerad expression av SOX4 har korrelerats med ökad cancercellproliferation, cellöverlevnad, inhibition av apoptos och tumörprogression hos magcancer [22]. Dess överuttryck har också satts i samband med dålig prognos på klinikerna och det är en markör för att förutsäga resultatet av patienter med magsäckscancer [23].

Men fram till nyligen, är det oklart om huruvida H. pylori-infektion kan inducera SOX4 uttryck genom nedreglering miR-204. Därför genomförde vi vår studie för att ytterligare undersöka vilken roll miR-204 och SOX4 i H. pylori inducerad cancer.

Material och metoder

kliniska prover

Patienter med eller utan H. pylori
infektion hade genomgått gastroskop på den första Anslutna sjukhuset i Nanjing Medical University, Jiangsu-provinsen, Kina från mars 2012 och december 2013. Prover tagna från 250 patienter (150 noncancerous patienter och 100 tumörpatienter) samlades upp och identifierades positivt när snabb ureastest var positivt. Dessa utvalda patienter bekräftades också av ^{13C utandningsprov. Noncancerous patienter klassificerades i ytlig gastrit, atrofisk gastrit och dysplasi enligt patologisk klassificering. Detta protokoll godkändes av den etiska kommittén för första anslutna sjukhus i Nanjing Medical University, och varje patient hade skriftligt informerat samtycke.}

Cellodling

SGC-7901 /MKN45 gastric cancercellinjer ( köpt från ATCC) odlades i RPMI-1640-medium kompletterat med 10% fetalt bovint serum (FBS) (Gibico) och penicillin (100 U /ml). Cellerna odlades vid 37 ° C i en fuktad atmosfär med 5% CO _2.

Bakteriell kultur och infektionsmodell

H. pylori ympades in i plattan och odlades vid 37 ° C i en mikroaerofil atmosfär med 5% O _{2, 10% CO 2 och 85% N 2. Efter 3 dagar var den bakteriella återsuspenderades i RPMI-1640-medium utan FBS och infekterade celler i ett MOI av 100. Cellerna skördades sedan efter 48 h för infektion.}

Isolering av total-RNA och Kvantitativ RT-PCR

Totalt RNA extraherades från insamlade vävnader och cellinjer med hjälp av Trizol (Tarkara, Japan) och sedan både miRNA och mRNA transkriberades omvänt till cDNA. Den omvända transkriptionen utfördes genom användning av omvänd transkription kit (Takara, Japan). Uttrycket av mogna miRNA och potentiella målgener mättes med QRT-PCR med SYBR Green PCR Kit (Takara) på Applied Biosystems StepOne-Plus realtids-PCR System och människa U6-RNA amplifierades som en intern kontroll. Den relativa uttrycket förhållandet mellan MIR-204 beräknades med 2 ^{-ΔΔCT metod. PCR-reaktioner utfördes med följande primers: för HSA-miR-204, framåt, 5'-CAUCUUCCAGUACAGUGUUGGA-3 'och för U6, framåt, 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'. Relativa uttrycksnivåer av SOX4 mRNA undersöktes genom SYBR Green realtids-PCR (RT-PCR) och normaliserad till GAPDH. Primrarna för SOX4 var framåt, 5 'AGCCATCTCGGAGGAATA 3' och omvända, 5 'CAGACAACCGGCCTTTAT 3'; och för GAPDH, framåt, 5'-CGTGGGCCGCCCTAGGCACCA-3 'och omvänd, 5'-TTGGCTTAGGGTTCAGGGGGG-3'. RT-PCR utfördes med hjälp av ABI 7500 Snabb realtids-PCR-system (ABI, CA, USA).}

Immunohistokemi

Vävnader fixerades i 4% paraformaldehyd och skär från paraffin block till 5

• PLOS ONE: Gör tumörstorlek förbättra noggrannheten i Prognostiska Förutsägelser i nodnegativ ventrikelcancer (pT1-4aN0M0 Stage)
• PLOS ONE: D-Dimer: Inte bara en indikator av venös trombos men en Predictor av asymptomatiska hematogen metastas i Gastric Cancer Patients