PLoS ONE: Smanjen Mir-204 u povezane s H.pylori rak želuca Promiče proliferacije stanica raka i Najezda Ciljanje SOX4

Sažetak pregled

Pozadina pregled

molekularni mehanizam između Helicobacter pylori (H. pylori) infekcija i raka želuca u velikoj mjeri ostaje nepoznanica. U ovom istraživanju utvrdili smo ulogu Mirne na H. pylori induciranog raka želuca. Pregled

Metode i rezultati

Otkrili smo da je Mir-204 je smanjen u H. pylori pozitivnih tkiva koje qRT- PCR. Obaranje Mir-204 pojačan invaziju i proliferaciju mogućnost želučanih stanica raka in vitro. Luciferaza analitički otkrila je da SOX4 je ciljni gen Mir-204, koja je pronađena viša u H. pylori pozitivnih tkiva. Down-regulacija Mir-204 i prekomjerna ekspresija SOX4 promovirala tranzicijski proces epitela-mezenhimalne. Pregled

Zaključak pregled

Sve u svemu, naši rezultati su pokazali da Mir-204 može djelovati kao supresor tumora u H. pylori induciranog raka želuca ciljajući SOX4 pregled

Izvor:. Zhou X, Li L, Su J, Zhang G (2014) Smanjen Mir-204 u povezane s H.pylori rak želuca Promiče proliferacije stanica raka i Invasion ciljajući SOX4. PLoS ONE 9 (7): e101457. doi: 10,1371 /journal.pone.0101457 pregled

Urednik: Jin P Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Sjedinjene Američke Države

Primljeno: 18. ožujka 2014; Prihvaćeno: 5. lipnja 2014; Objavljeno: 1. srpnja 2014 pregled

Copyright: © 2014 Zhou i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Data Dostupnost:. The autori potvrđuju da su svi podaci na kojima se temelji nalaze u potpunosti na raspolaganju bez ograničenja. Svi relevantni podaci u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled

Financiranje:. Guoxin Zhang je financirala Nacionalna zaklada prirodoslovni Kine (br 81270476) (http://www.nsfc.gov.cn/). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći karcinom i drugi vodeći uzrok raka povezanih smrti u svijetu [1]. Do sada, molekularni mehanizmi na raka želuca su istraženi, međutim, oni nisu u potpunosti razumjeli [2]. Želučani karcinom se trebao razvijati prema nekoliko koraka procesa karcinogeneze, koji je snažno povezan s infekcijom bakterijske patogena, Helicobacter pylori pregled ( H. Pylori pregled) [3]. H. pylori pregled, koji kolonizira želudac od 50% svjetske populacije, je klasificiran kao klasa I kancerogen zbog uzročnu ulogu u razvoju raka želuca. [4] pregled

On je izvijestio da je razvoj i napredovanje karcinoma želuca može se pripisati mikroRNA (miRNAs) [5] - [8]. MiRNAs su male, sobe za kodiranje RNA koji reguliraju ekspresiju ciljnih gena kroz translacijske represiju ili RNK (mRNK) degradacija [9]. Mir-204 nenormalna ekspresija je izvijestila da povezati s različitim oblicima raka [10], [11]. Međutim, malo se zna o Mirna-204 funkcija u raka želuca. Matsushima izvode Mirna niz studija u H. pylori pozitivnih tkiva i contols i utvrdili da Mir-204 je izraz lica bio je značajno niži u H. pylori pozitivnih tkiva [12]. Pregled

U ljudi, seks područje koje određuje Y (SRJ ) box obitelj, također iz obitelji SOX, sastoji se od 20 visoko konzervirane transkripcijskih faktora koji igraju važnu ulogu u razvoju raka prostate [13]. Ovi transkripcijski faktori su definirani konzerviranom potpisna sekvenca u visokim mobilnosti skupina (HMG) domene DNA-vezivanja (DBD) [14], [15]. SOX4 je 47-kDa protein visoko konzerviran u kralješnjaka i njezin klinički značaj je dobio veću pozornost u posljednjih nekoliko godina, s brojnim izvješćima ukazuje da SOX4 može doprinijeti progresije tumora [16], [17]. Povećana ekspresija SOX4 se nalazi u tumorima mjehura, prostate i debelog crijeva, te s ne-malih stanica pluća tumora [18] - [21]. Deregulirani ekspresija SOX4 je povezana s povećanom staničnom proliferacijom raka, preživljavanja stanica, inhibiciju apoptoze i progresiju tumora u želučanom raka [22]. Njegova prekomjerna ekspresija također je povezana s lošom prognozom u klinikama i to je pokazatelj da se predvidjeti ishod bolesnika s rakom želuca [23]. Pregled

Međutim, sve do nedavno, nije jasno da li H. pylori infekcije mogu izazvati izraz SOX4 kroz smanjiti regulaciju Mir-204. Dakle, proveli smo našu studiju dodatno istražiti ulogu Mir-204 i SOX4 u H. pylori inducirane karcinogeneze.

Materijali i metode

kliničkim uzorcima

pacijenata sa ili bez H. pylori pregled infekcija prošla kroz gastroskop na prvi SRODNE bolnici Nanjing Medical University, Jiangsu Province, Kina je od ožujka 2012. do prosinca 2013. uzoraka uzetih iz 250 bolesnika (150 noncancerous pacijenata i 100 tumorskih bolesnika) su sakupljene, te su identificirani pozitivnim ako je brzi ureaza test pozitivan. Ovi odabrani pacijenti su također potvrđeni ^{testu 13C daha. Noncancerous pacijenti su svrstani u površnom gastritis, atrofični gastritis i displazije prema patološke klasifikacije. Ovaj protokol je odobren od strane Etičkog povjerenstva prvog povezanih bolnici Nanjing medicinskog sveučilišta, a svaki pacijent je napisao informirani pristanak. Pregled}

stanična kultura pregled

SGC-7901 /MKN45 želučani stanične linije raka ( kupljene od ATCC) uzgojene su u RPMI-1640 mediju s dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) (Gibico) i penicilinom (100 u /ml). Stanice su uzgojene na 37 ° C u vlažnoj atmosferi s 5% CO _{2. Pregled}

Bakterijska kultura i infekcije Model pregled

H. pylori nasadi se u tanjur i uzgajaju na 37 ° C u microaerophilic atmosferi s 5% O _{2, 10% CO 2 i 85% N 2. Nakon 3 dana, bakterijski se resuspendira u RPMI-1640 mediju bez FBS i stanice inficirane na MOI od 100. Stanice su zatim sakupljene nakon 48 sati od infekcije. Pregled}

Izolacija cijele RNA i kvantitativna RT-PCR

Ukupno RNA su iz prikupljenih tkiva i stanične linije pomoću Trizol (Tarkara, Japan), a zatim i Mirne i mRNA naličju su na prijepis na cDNA. Obrnuta transkripcija provedena je pomoću reverzne transkripcije kit (Takara, Japan). Ekspresija zrelih miRNAs i potencijalnih ciljnih gena je mjerena QRT-PCR s SYBR Green PCR Kit (Takara) na Applied Biosystems StepOne-Plus real-time PCR sustavu i ljudskih U6 RNA je amplificiran kao internom kontrolom. Relativni odnos izraz Mir-204 je izračunata na 2 ^{-ΔΔCT metodom. PCR reakcije provedene su sa sljedećim primerima: za HSA-Mir-204, prema naprijed, 5'-CAUCUUCCAGUACAGUGUUGGA-3 'i U6, naprijed 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'. Relativne razine ekspresije mRNA SOX4 ispitan je SYBR Green PCR u realnom vremenu (RT-PCR) i normaliziraju za GAPDH. Primeri za SOX4 bili naprijed, 5 'AGCCATCTCGGAGGAATA 3' i natrag, 5 'CAGACAACCGGCCTTTAT 3'; i za GAPDH, naprijed, 5'-CGTGGGCCGCCCTAGGCACCA-3 'i natrag, 5'-TTGGCTTAGGGTTCAGGGGGG-3'. RT-PCR pomoću ABI 7500 Fast Real-Time PCR sustav (ABI, CA, USA). Pregled}

Imunohistokem pregled

Tkiva su fiksirani u 4% formaldehidom i izrezati iz parafinskog bloka u 5 um debljine. Nakon odvoštavanj s ksilenom i rehidracije sa stupnjevanim nizom etanola stakalca grije se u autoklavu kroz tri minute koriste citratni natrij pufera (pH 6,0) i inkubirane s SOX4 antitijela (Cell Signaling Technology) na 4 ° C preko noći. Blokiranje serum ili razrjeđivanje antitijela pufer je korišten kao negativna kontrola. Antitijela se koriste prije bili su isti kao za Western blot analize. Fotografije su snimljene od strane microsope (Nikon, Eclipse 50i). Broj pozitivnih obojanih stanica pokazuju imunoreaktivnost SOX4 deset reprezentativnim mikroskopskih polja se broje, a također je izračunat postotak pozitivnih stanica. Postotak ocjenjivanje imunoreaktivnih stanica tumora je opisan kao što slijedi: 0 (0%), 1 (1-10%), 2 (11-50%) i 3 (> 50%). Intenzitet je zabio kao što slijedi: 0 (negativna), 1 (slabo), 2 (umjerena) i 3 (jaka). Razina izraz SOX4 je mjerena množenjem postotka i ocjene intenziteta. Visoke uzorci izraz znači tumora s umnožene rezultatom većim od 4, dok su drugi smatra niskim izraz. Pregled

Razmnožavanje stanica assasy pregled

Razmnožavanje stanica ispitana je pomoću testa tetrazolij slanoj vodi topljivi koristite Cell Brojanje Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). Ukratko, stanica (1,5 × 10 ^{3 /šupljini) nasađeno je u kulture ploča s 96 jažica u tri primjerka i inkubira se 4 dana pri 37 ° C /5% CO2 u vlažnom inkubatoru. Žive stanice su kvantificirani na svakom 24 h interval mjerenjem OD450 pomoću mikroploče čitač. (Epohi; BioTek, Winooski, VT) pregled}

Ćelije (2 × 10 ^{6) su fiksirane sa 75% etanola, na 4 ° C preko noći i zatim se ispere s hladnim PBS i pomiješa s RNaseI, praćeno bojanjem s propidij jodidom tijekom 30 min u mraku. Analiza staničnog ciklusa nakon toga provedena pomoću protočne citometrije (FACSCalibur; Becton Dickinson, Sparks, MD). pregled}

Stanice su tripsinizirane i stavljene na ploče sa 6 jažica (500 stanica /jažica), te uzgajane tijekom 2 tjedna. Kolonije su obojene s 1% kristalno ljubičastog 30 minuta nakon fiksiranja s 4% paraformaldehidom tijekom 30 minuta. Broj kolonija, definirane kao > 50 stanica /kolonije su izbrojene. Tri neovisna eksperimenta. Podaci su izračunati koristeći uparene t testom. Pregled

Migracija Cell Test (zacjeljivanje rana) pregled

Test za liječenje rana se koristi za procjenu sposobnosti tumorskih stanica pokretljivosti. Ukratko, stanice (1 x 10 ^{6 /šupljini) nasađeno je u pločicama sa šest jamica, kultivirane preko noći, a koje su transfektirane s miR-204 oponaša ili inhibitora, pcDNA-SOX4 ili pcDNA-NC. Na postizanju konfluentnosti, stanice sloj grebe sterilnom plastičnom vrha i zatim se ispere s medijem kulture dvaput i uzgajane ponovno do 48 s medijem bez seruma smanjena koji sadrži 1% FBS-a. Zatvarač razmak je izmjerena i podaci su sažeo temelju šesterostrukih ispitivanjima za svaki eksperiment. Pregled}

Cell Test invazije pregled

invazije stanica aktivnost određena je pomoću stanične kulture pločicama s presvlakom od bazalne membrane matriksa (BD Biosciences Bedford, MA) u skladu s uputama proizvođača. Ukratko, ukupno 1 × 105 stanica u 0,2 ml RPMI-1640 mediju su nasađene na Transwell aparata. RPMI-1640 koji sadržava 10% FBS (600 ul) doda se u donje komore. Nakon inkubacije stanica tijekom 24 sata na 37 ° C u 5% CO2 inkubatoru, stanice na gornjoj površini umetka su uklonjeni brisanjem pamučnom krpom. Stanice koje su izvršile invaziju u donjoj površini umetka su fiksirani u 100% -tnom metanolu prethodno hlađenje je kroz 30 min, obojena s 0,5% kristalno ljubičastog 30 minuta, isprane u PBS-u i podvrgnuti mikroskopskog pregleda. Stanice su izbrojene pod mikroskopom u pet slučajnih polja i relativna invazija i migracija su interpretirani kao prosječan broj stanica ± standardna devijacija po terenu. Pregled

pripremljeni su Western blot pregled

Ukupno bjelančevina i kvantificirati pomoću u udjelu protein (BCA metoda, Thermo, USA). Proteini su s natrijevim dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE), prenosi na poliviniliden fluorida (PVDF) membranu, blokirane u 5% suhog mlijeka na sobnoj temperaturi 1 sat i imuno s antitijelima na 4 ° C preko noći koristeći anti-SOX4 ( 1:1000, CST, USA), anti-N-kadherina (1:1000, CST, USA) i anti-E-kadherin (1:1000, CST, USA). Anti-GAPDH (1:5000, sigma, USA) je korišten kao kontrola za punjenje. Rezultati su prikazani kroz kemiluminescentan sustav detekcije (Pierce ECL podloge Western blot sustav detekcije, Thermo, Pittsburgh, PA), a zatim izložen u molekularnu Imager ChemiDoc XRS sustava (Bio-Rad, Hercules, CA). Pregled

plazmida gradnje pregled

Predviđanje vezna mjesta mir-204 je izveden korištenjem TargetScan software (http://www.targetscan.org). 3'-UTR sekvenca SOX4 koji se predviđa da će komunicirati sa Mir-204 ili njegov mutant sekvence predviđenih ciljnim mjestima ubačena mjestima KpnI i Sad pGL3 promotora vektora (Invitrogen). Ime su dobili pGL3-SOX4 i pGL3-SOX4-mut. Stanice su nasađene na ploče sa 6 jažica, a su transficirane s 100 ng pGL3-SOX4 ili pGL3-SOX4-Mut i miR-204 oponaša (50 nM) pomoću Lipofectamine 2000 (Invitrogen Corp, CA, USA). normalizira se na razlike u učinkovitosti transfekcije ko-transfekcijom Renilla luciferaze vektor pRL-SV40 (5 ng). pregled

SOX4 gen je sintetiziran (kupljen od GenScript, Piscataway, NJ), sa ograničavajućim digestijom pomoću MIU I i subkloniran PLV-GFP plazmid, koji su nazvali PLV-GFP-SOX4. Rekombinantni lentivirus je generiran od 293T stanica pomoću precipitacije kalcijevog fosfata. SGC-7901 stanične linije transfecirane lentivirus korištenjem polibren (8 ug /ml). Pregled

aktivnosti luciferaze analiza

Stanice su uzgojene u pločama s 24 bunarića i transfektirane s 0,2 ug ili Širok tip ili mutant PGL-SOX4 sadrže plazmid luciferaze krijesnice, zajedno s 0.01 ug PGL-SOX4 vektor (Invitrogen) koji sadrži Renilla luciferaze i 1 ug oligonukleotide. Transfekcija je provedena pomoću reagens lipofektamin 2000 (Invitrogen). Relativna aktivnost luciferaze je izračunata 48 h nakon transfekcije od Dual Luciferase Reporter Assay (Promega). Svi eksperimenti su provedeni transfekcije u tri ponovljena su tri puta neovisno. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Pregled

Statistička analiza pregled

t-test ili jednosmjerna analiza varijance se upotrebljava za statističku analizu, prema potrebi. Sve statističke analize provedene su pomoću SPSS 17.0 (SPSS, Chicago, IL). Dva kraka vrijednost P < 0,05 smatrana je statistički značajna pregled

Rezultati pregled

Mir-204 je nenormalno dolje regulirana u H.. pylori pregled pozitivnih tkiva i stanice

ekspresija odabranih miRNAs prema dosadašnjim podacima microarray [10] otkrivene su u 75 parova H. pylori pozitivnih i negativnih normalna tkiva, i 50 pari H. pylori pozitivni i negativnih tumorskih tkiva u realnom vremenu PCR. Otkrili smo da je Mir-204 je bio jedan od najznačajnijih miRNAs podregulirani nakon infekcije H. pylori (Slika S1A, Slika 1A, B). Osim toga, miR-204 je izražen u manjoj mjeri u težim gastritisa (Slika 1C). Mi i dalje u odnosu na njegovu ekspresiju u tumorskim tkivima s normalnim tkivima, bez obzira na status H. pylori i utvrdili da Mir-204 je izražen je značajno niža u tumorima (Slika S1B). Podijelili smo pacijente s tumorom u skladu s različitim fazama TNM i T2-T4 i M1 pacijenata izrazio je značajno manji Mir-204 od T1 i M0 bolesnika (Slika S1C, S1D). Također smo ispitali Mir-204 ekspresiju u stanicama inficiranim s H. pylori i utvrdili smo da je izraz Mir-204 bila je značajno niža u više H. pylori zaražene stanice od kontrole (Slika 1D, slika S1E). Pregled

Mir-204 potiskuje migraciju /invaziju i proliferaciju stanica želuca raka u SGC-7901 i MKN-45 stanica pregled

transficirana smo SGC7901 i MKN45 stanica s HSA-Mir-204 oponašaju /nukleotida inhibitora i ispituje učinke na stanična proliferacija i migracija /invaziju. Kao prvo, proveli smo QRT-PCR za provjeru efikasnosti transfekcije, kao što je naznačeno na slici. 2A, Transformacija stanice sa Mir-204 imitira /inhibitora značajno je pokazao povećanje /smanjenje od Mir-204 izražavanja u usporedbi s njihovom negativnom kontrolom (NC /Inc). Rana test zarastanja pokazala je da prekomjerna ekspresija Mir-204 može potisnuti migracija stanica, dok je obaranje inducirane migracije stanica, sa značajnim bliže raspor nego kontrole (slika 2B). Dosljedno Matrigelovu invaziju pokus također je pokazao da prekomjerna ekspresija Mir-204 oslabljena staničnu invaziju, dok obaranje toga može preokrenuti simpatije (Slika 2C). Također smo proveli MTT testa i utvrdili da je stopa rasta stanica transficiranih Mir-204 inhibitora značajno je povećana u usporedbi s kontrolama, a stanice s Mir-204 oponaša je pokazao da je drugačiji (slika 3A, B). Također smo ispitali da li je stanični ciklus će biti pogođene obaranje /prekomjerna ekspresija Mir-204 pomoću fluorescencijom aktiviranog staničnog razvrstavanja (FACS) Analiza propidij-jodida-obojenih stanica. Obaranje Mir-204 je rezultiralo značajnim povećanjem postotka stanica u G2, dok prekomjerna ekspresija pokazao suprotan učinak (Slika 3C). testovi tvorbe kolonija otkrila je da inhibicija Mir-204 značajno povećava stopu rasta staničnih linija (Slika 3D). Također smo u odnosu stanične funkcije transfekcijom sa Mir-204 oponaša s oponaša i H. pylori infekcije. otkrili smo da miR-204 oponaša mogao potisnuti migracija stanica, invaziju i proliferaciju nakon infekcije H. pylori (Slika S2). Ovi rezultati su pokazali da zajedno podreguliranje miR-204 uzrokuje H. pylori infekcija promovirati migracija /invaziju i proliferaciju želučanog raka stanične linije in vitro. Pregled

Mir-204 doregulirani SOX4 ekspresije u raka želuca pregled

identificirali smo nizvodne mete Mir-204 računalnom predviđanja da se objasne mehanizme kojima Mir-204 potisnute invazija želučano stanica raka. Među stotinama gena predviđenim online Mirna meta predviđanja web stranica (starBase, http://starbase.sysu.edu.cn/~~HEAD=pobj), forcused smo našu pažnju na SOX4. SOX4 su izvijestili da regulira želučanu progresiju raka i EMT ili djelovati kao temeljne funkcionalne meti Mir-204. Kako prepoznati predviđanja, kroz QRT-PCR i imunohistokemijski, otkrili smo da SOX4 bila viša u H. pylori pozitivnih tkiva. Njegov je izraz bio također veći u CAG od CG u H. pylori pozitivnih tkiva. (N = 75, p < 0.05 Slika 4A-C), koji je obrnutoj su korelaciji s Mir-204. Korištenje Pearsonov analizu korelacije od SOX4-Mir-204 mRNA ekspresije, dobili smo statistički značajnu inverznu korelaciju (Slika S3A, r = -0.849, p = 0.002). Pomoću imunohistokemije, također otkrili da je ekspresija SOX4 značajno povezana s želučanom histologiju (p < 0.05, Tablica 1). In vitro, također otkrili da SOX4 mRNA i razina proteina su up-regulirana u želučanim stanicama raka zaraženih H. pylori (Slika S3B, S3C). Mi smo tada određuje izraz SOX4 kao odgovor na promjene u Mir-204 izražavanja. Western blot i QRT-PCR testovi pokazali su da prekomjerna ekspresija Mir-204 može značajno dolje reguliranja mRNA i proteina od SOX4, dok je učinak obaranje Mir-204 bio je suprotan (Slika 3D). Također smo otkrili da je izraz EMT markera, N-kadherina i E-kadherina, promijenjena je u vezi s Mir-204 izražavanja (slika 4E), koji je sugerirao da Mir-204 bi mogao utjecati na proces EMT. pregled

SOX4 je izravna meta gen Mir-204 u želučanim stanicama raka pregled

Iako SOX4 je smatran kao izravna meta Mir-204, nije jasno je li Mir-204 može izravno prepoznati 3'-UTR SOX4 mRNA. Prema predviđenoj ciljno mjesto iz Targetscan, klonirali smo 3'-UTR fragment koji sadrži predviđenu lokaciju u pGL3 luciferaza reporter vektor pGL3 (-SOX4). 3'-UTR fragment mutiranog slijeda u predviđenoj ciljnog mjesta je također kloniran kao kontrole (pGL3 SOX4-Mut). Rezultati su pokazali da je ko-transfekcija s miR-204 oponaša i pGL3 vektorom SOX4 smanjena aktivnosti luciferaze u SGC-7901 stanice. Međutim, miR-204 oponaša nije imao učinka na aktivnost luciferaze kada su stanice transfektirane s pGL3 SOX4-mut vektor (Slika 5). Ovi podaci sugerirao da SOX4 gen je bio jedan od izravnih ciljeva MIR-204. Pregled

Prekomjerna ekspresija SOX4 ima učinak Mir-204 na želučanih stanica raka invazija pregled

Da bi se odredilo SOX4 kao funkcionalna izaziva, Mir-204 u želučanom invazije karcinoma, mi pretjerano izražen SOX4 transfekcijom s lentivirus i pregledao svoje učinke u želučanim stanicama raka. Prekomjerna ekspresija SOX4 u staničnoj liniji je potvrđena pomoću Western blot (Slika 6A). Također smo otkrili da E-kadherina se regulirati na dolje dok je N-kadherina je do regulirane nakon PLV-SOX4 ubacivanja. Kroz zacjeljivanje rana i ispitivanja Matrigelove invazije, onda smo otkrili da je prekomjerna ekspresija SOX4 značajno unaprijeđen stanica migraciju i invaziju (Slika 6B i 6C). Da bi se dalje pokaže da miR-204 inducirani gubitak SOX4 potisnuti proliferaciju i invazije želuca stanica raka, stanice su transfektirane s miR-204 imitatima i SOX4 prekomjerna ekspresija vektora zajedno, a rezultati su pokazali da je supresija migracije, invazije, proliferacija od Mir-204 je oslabljena (Slika S4). pregled

Rasprava pregled

rak želuca je svjetski bolest s visokom učestalošću, posebno u jugoistočnoj Aziji [21]. Stopa preživljavanja od 5 godina za rak želuca je vrlo niska. Neki od pacijenata oboljelih od raka želuca su H. pylori vezani. Dakle, potrebno je temeljito istražiti patogeneze i razvoj novih ciljanih tretmana za H. pylori povezana raka želuca. Pregled

MiRNAs su velika obitelj regulatora gena koji negativno reguliraju svoje ciljne mRNA na način specifičan za slijed. miRNAs također mogu funkcionirati kao tumora smetnji ili onkogena [22]. Nedavni dokaz sugerira da miRNAs igraju osnovne uloge u različitim biološkim procesima koji se odnose na rak, uključujući staničnu diferencijaciju, proliferaciju, tumorignesis, angiogeneze, invazija i metastaza, [23]. Mir-204 je izvijestila da djeluje kao supresor tumora i izraz niske razine Mir-204 je povezana s lošom prognostički fenotipa u bolesnika s rakom [24], [25]. Međutim, bilo je nekoliko studija koje istražuju Mir-204 funkcija u H. pylori povezana rak želuca. Evo, bili smo prvi prezentirati dokaze da je Mir-204 bio je znatno dolje regulirana u H. pylori pozitivnih tkivima (normalnim i tumorskim tkivima) i da prekomjerna ekspresija Mir-204 potisnute izražavanja SOX4 proteina i rast stanica potječe od želučani tumor. pregled

prvo smo kvantitativno izražavanje Mir-204 u H. pylori infekciju tkiva i kontrola i utvrdili smo da je Mir-204 ekspresija značajno niža u H. pylori zaražene pacijente. Također smo otkrili da se izraz odnosi se na histologiju pacijenata, to jest, izraz Mir-204 je znatno niža u H. pylori pozitivnih bolesnika s kroničnim atrofični gastritis od kroničnog ne-atrofični gastritis. Ovaj izraz uzorak je pokazao da mogućnost da Mir-204 se odnosi na različite vrste gastritisa i težih pacijenata bili su, to je niža ekspresija Mir-204 je. Na temelju razine ekspresije Mir-204, odabrali smo SGC-7901 i MKN45 stanica za naknadni dobitak-of-funkcije i gubitak-of-funkcije studija, respektivno. Rezultati su pokazali da se na regulaciju Mir-204 u želučanom stanica raka je povezano s njegovim napredovanjem. Iako je veliki broj humanih miRNAs su izvijestili, mnogi od njihovih mRNA ciljeva i dalje neidentificirani [9]. U ovom istraživanju koristili smo kombinirano bioinformatika i eksperimentalni pristup prepoznati da SOX4 su funkcionalni nizvodno meta Mir-204. Pregled

SOX4 je pretjerano izražen u različitim oblicima raka te je usko povezana s Invazija tumora i metastaze [ ,,,0],16] - [19]. To je također jedan od članova EMT-transkripcije induktora [26]. EMT je ključni razvojni program koji se često aktivira tijekom progresije raka, te može promovirati otpornost na terapije [27]. Zhang i sur [20] pokazalo je da prekomjerna ekspresija SOX4 u ljudskim stanicama epitela dojke dovelo do stjecanja mezenhimalnim osobina i poboljšane migracija stanica i invazije. Nadalje, SOX4 pozitivno regulira ekspresiju poznatih EMT induktora i aktivirao TGF-ß put doprinijeti EMT [28]. Do sada, EMT je atraktivna meta za terapijske intervencije, pruža novu osnovu progresije raka prema dedifferentiated i više maligna stanja [29]. Naše istraživanje prvo je pokazala da je H. pylori infekcija izazvana Mir-204 se regulacija može dovesti do raka želuca strane EMT procesa. Pregled

Na kraju, naš dokazi pokazuju da Mir-204 je dolje regulirano, dok SOX4 je nad- regulirana u H. pylori infekcije i raka želuca. Ektopično Mir-204 ekspresija smanjenje ekspresije SOX4 na razini mRNA i proteina u stanice raka linije želuca. Mi smo također pokazali da miR-204 je direktno vezan na 3'-UTR od SOX4. Mir-204 ekspresija inhibirana EMT preko represije SOX4. Nadalje, Mir-204-EMT put da smo identificirali može se iskoristiti u terapijskom pristupu za liječenje H. pylori raka povezanih. Pregled

popratne podatke
Slika S1. pregled (a) izraz 5 miRNAs u H pylori pozitivni i negativni tkiva utvrđena je na temelju QRT-PCR. (B) izraz razine Mir-204 u tumor i kontrole tkiva. (C) izraz razine Mir-204 prema TNM stadija. (D) razina ekspresije Mir-204 u tri vrste H. pylori zaražene stanice. (* P < 0,05) pregled, doi:. 10,1371 /journal.pone.0101457.s001 pregled (TIF) pregled Slika S2.
Stanice transfektirane s Mir-204 oponaša i oponaša s H. pylori infekcije i (A) Životna sposobnost je određena s CCK-8 testu (b) slike fotografirane na 0 h (gornji) i 24 sata (donji) nakon ranjavanja prikazani su na povećanje od X200 (c) reprezentativne slike invazivnih stanica na dnu membrane obojene kristalno ljubičasto su vizualizirani kao što je prikazano. (* P < 0,05) pregled, doi:. 10,1371 /journal.pone.0101457.s002 pregled (TIF) pregled slika S3. pregled (a) relativne ekspresije mRNA Mir-204 i SOX4, normalizirani s U6 i GAPDH, ocijenjeno je u 15 primjeraka H. pylori pozitivnih i negativnih tkiva koje QRT-PCR. (B) Inverzna korelacija SOX4 i Mir-204 razinama ekspresije ispitana (R = -0,920, P = 0,001). (C) Ekspresija mRNA SOX4 je određena QRT-PCR u H. pylori zaražene stanice. (D) Ekspresija razine SOX4 proteina određena je pomoću Western Blot da H.pylori inficirane stanice. (* P < 0,05) pregled, doi:. 10,1371 /journal.pone.0101457.s003 pregled (TIF) pregled slika S4.
Stanice transfektirane s Mir-204 oponaša i oponaša s PLV-SOX4 i (A) Životna sposobnost je određena s CCK-8 testu (B) Predstavničko slike invazivnih stanica na dnu membrane obojene kristalno ljubičasto su vizualizirani kao prikazano na slici. (C) Fotografije fotografirane na 0 h (gornji) i 24 sata (donji) nakon ranjavanja prikazani su na povećanje od x200 (* p < 0,05) pregled, doi:. 10,1371 /journal.pone.0101457.s004
(TIF) pregled

• PLoS ONE: Da li tumor veličine poboljšati točnost prognostičku predviđanja u čvoru-Negative rak želuca (pT1-4aN0M0 Stage)
• PLoS ONE: D-Dimer: nije samo pokazatelj venske tromboze, ali prediktor asimptomatska hematogenozni metastaza u bolesnika s rakom želuca