cadherin-17 (CDH17), en medlem av 7D-cadherin super, överuttrycktes i magcancer (GC) och förknippas med dålig överlevnad, tumörrecidiv, metastaser, och avancerade tumörstadium. Hittills har cellfunktion och signalmekanism av CDH17 i GC är fortfarande oklart. I denna studie visade vi att över 66% av GC cellinjer (20/30) var CDH17 positiva. Tissue microarray (TMA) analys visade att 73,6% kinesiska GC vävnader (159/216) var CDH17 positiva, medan 37% respektive intilliggande normala vävnader var CDH17 positiv. Knockdown av CDH17 hämmade celltillväxt, migration, vidhäftning och kolonibildning, och även framkallade en cellcykelstopp och apoptos i AGS human GC-celler. På den andra sidan, överexpression av CDH17 underlättas MGC-803 GC tumörtillväxt i nakna möss. Antikropps array och Western blotting analys visade att knockdown av CDH17 i AGS-celler nedreglerade grin β serie proteiner, ytterligare inaktive Ras /Raf /MEK /ERK-vägen och ledde till p53 och p21 ackumulering, vilket resulterade i en ökning inhibition, cellcykeln arrestera och apoptos induktion. Kollektivt, våra data visar först kapacitet CDH17 att reglera aktiviteten hos Ras /Raf /MEK /ERK-vägen för celltillväxt i GC, och föreslår att CDH17 kan fungera som en attraktiv terapeutiska mål för framtida forskning.
Citation: Lin Z, Zhang C, Zhang M, Xu D, Fang Y, Zhou Z, et al. (2014) Targeting cadherin-17 inaktiverar Ras /Raf /MEK /ERK signalering och hämmar cell Proliferation i magcancer. PLoS ONE 9 (1): e85296. doi: 10.1371 /journal.pone.0085296
Redaktör: Claude Prigent, Institut de Génétique et Développement de Rennes, Frankrike
Mottagna: 10 juni 2013, Accepteras: 26 november 2013, Publicerad: 20 januari 2014
Copyright: © 2014 Lin et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit
Finansiering:. Författarna har inget stöd eller finansiering för att rapportera
Konkurrerande intressen: Alla författare är anställda eller tidigare anställda hos Roche R & D Center (Kina) utom Yanfen Fang, som är anställd av östra Kina Normal University, Shanghai, Kina.. Detta ändrar inte författarnas anslutning till alla PLOS ONE politik för att dela data och material.
Gastric cancer (GC) rankas som den näst vanligaste orsaken till den globala cancerdödlighet och den fjärde vanligaste cancerformen i världen [1], [2]. Medianöverlevnaden för GC patienter är 7~10 månader. De flesta patienter med GC närvarande med sent skede av sjukdomen med en total 5-års överlevnad på cirka 20% och objektiv respons till konventionella kemoterapeutiska regimer intervall kan förbättras från 20% till 40% [1], [3]. För närvarande är cisplatin-baserad terapi fortfarande används i kliniska inställningar för avancerad och metastaserande GC. Dessutom, för HER2-neu överuttrycker gastric adenokarcinom, trastuzumab (Herceptin) i kombination med kemoterapi förlänger medianöverlevnaden från 11,1 månader (enbart kemoterapi) till 13,8 månader [4]. Med tanke på den höga dödligheten i GC, finns det fortfarande stort medicinskt behov att hitta den känsliga och pålitliga biomarkör för tidig diagnos av GC och potent terapeutiskt mål för behandling av GC.
CDH17, en medlem av 7D-cadherin super, presenterar i fetal lever och mag-tarmkanalen under embryogenes, vilket också benämns lever-tarm cadherin (LI cadherin). CDH17 är överuttryckt i levercancer [5], [6], magsäckscancer [7], duktal pankreascancer [8] och kolorektal cancer [9] - [11]. Som rapporterats, CDH17 främst närvarande på cellmembranet och frånvarande i normala mag vävnader och den positiva hastigheten var nästan 78,4% [12]. Uttrycksnivån för CDH17 var karakteristisk för den avancerade magkarcinom som var associerad med dålig prognos [13]; och det var också signifikant associerade med lymfkörteln metastasering i magcancer [14]. Knockdown CDH17 med lentivirus-medierad miRNA inhiberade proliferation, följsamhet, tumörtillväxt och metastasering av BGC823 mänskliga gastric cancerceller både in vitro och in vivo [15] - [17]. CDH17 har föreslagits som en onkogen och en användbar markör för diagnos av magcancer [18]. Det har bevisats att CDH17 medierad onkogen signalering i HCC förbinds med Wnt-signalväg [5]. Nyligen rapporterades det att CDH17 inducerad tumörbildning och lymfatiska metastasering i GC genom aktivering av NFkB signalväg [19]. CDH17 reglerad α2β1-integrin signalering till inducera specifik fokaladhesion kinas och Ras-aktivering, vilket ledde till ökningen i cellvidhäftning och proliferation i koloncancerceller [11]. Dock fortfarande huvudrollen och signalering mekanism av CDH17 i GC oklart. I denna studie, att validera CDH17 som ett potentiellt terapeutiskt mål för GC och för att undersöka signalmekanism av CDH17 i GC, vi karaktäriserat uttryck av CDH17 i humana GC cellinjer och kinesiska GC vävnader, kontrollerat inflytande CDH17 knockdown eller över- uttryck på tumörframkallande och metastaserande effekten av GC cellinjer, och utforskade de möjliga signalkaskader rör CDH17. Vi observerade en hög CDH17 uttryck i humana GC cellinjer och kinesiska GC vävnader, och en tydlig inhibering i cellproliferation, migration, adhesion, kolonibildning, apoptosinduktion, och cellcykelstopp efter tysta av CDH17 i humana GC cellinjer. Dessutom våra resultat för det första visar förmåga CDH17 att reglera aktiviteten hos integrin-Ras /Raf /MEK /ERK-vägen för celltillväxt i GC, och föreslår att CDH17 kan fungera som en attraktiv terapeutiska mål för framtida forskning.
Material och metoder
Etik uttalande
användningen och skötsel av försöksdjur har godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC), Roche R &D Center (Kina). Den mänskliga GC vävnadsblock med motsvarande intilliggande vävnadsblock erhölls från Shanghai Biochip Company, ett CRO serviceföretag. Alla mänskliga vävnader samlades med skriftligt medgivande från käll patienter. Alla cellinjer köptes från ATCC, USA, Japan Insamling av forsknings bioresurser och Shanghai Institute of biokemi och cellbiologi, Chinese Academy of Science.
Alla cellinjer från American typisk cell Collection (ATCC), japanska Insamling av forsknings bioresurser och Shanghai Institute of biokemi och cellbiologi, var kinesiska vetenskapsakademin hålls i respektive odlingsmedium som rekommenderades av säljarna. PMD-18T-CDH17 plasmid var från Sino Biological Inc. Tetracyklin (Tet) var från Sigma, cellräkning Kit-8 var från Dojindo Molecular Tech. Humant plasmafibronektin var från R &D systems. Transwell kammaren var från Corning (6,5 mm diameter, 8-pm porstorlek). CDH17 oligo siRNA var från Genepharma Co. med sekvensen 5'AAGGCCAAGAACCGAGUCATT 3 '. Snabbstopp RNA kontroll (Allstar®) var från QIAGEN.
Två hundra och sexton paraffininbäddade magcancer vävnadsblock tillsammans med motsvarande intilliggande vävnadsblock (intilliggande vävnad samplades åtminstone 5 cm från primära tumörer) tillvaratogs och deponerats av Shanghai Biochip Company. Vävnader sektione och slumpmässigt beredd på 3 microarray diabilder. Åldrarna patienter var 32-84 år (medianålder 65) med iscensättning från 1A-4 enligt amerikanska kommittén för cancer (AJCC) riktlinjer ver.7. Samtliga fall diagnostiserades med två ledande patologer med erfarna specialitet i magcancer patologi. Objektglasen inkuberades i blockerande serum under 20 minuter, därefter täcks av 100 mikroliter anti-humant cadherin-17 affinitetsrenat monoklonal Ab, mus IgG (R &D MAB1032 1:2000 i TBS /T) vid 4 ° C över natten. Glasen täcktes med 100 mikroliter DAKO Envision + /HRP, Kanin /mus efter att tvättas noggrant med TBS. Etthundra mikroliter av substrat-kromogenlösning (DAB) applicerades på objektglasen och inkuberades vid rumstemperatur under 10 min. Färgade objektglasen undersöktes mikroskopiskt med hjälp av två immunohistokemi experter. Den normala mus-IgG användes som en negativ kontroll. Färgning ansågs vara negativ när ingen positiv cellmembranfärgning kunde identifieras och positivt när mer än 10% av tumörcellerna uppvisade cellmembran positiv immunfärgning.
pLenti6 /TR-vektor (Invitrogen, Cat. No. V48020) och pLenti3.3 /TR-vektor (Invitrogen, Cat. No. A11114) användes för att generera stabila cellinjer som konstitutivt uttrycker höga nivåer av den Tet-repressor. Dessa expressionsplasmider innehåller element som tillåter packning av konstruktionen i virioner och blasticidin eller geneticin resistans markör för selektion av stabilt transducerade cellinjer. I korthet 293FT paketeringsceller (Invitrogen, Cat. No. R700-07) transfekterades med pLenti6 /TR eller pLenti3 /TR och ViraPower TM Förpackning Mix (Invitrogen, Cat. No. K4975-00) för att producera lentiviral partiklar. Lentivirus användes för att transducera AGS celler eller MGC-803 och den blasticidin (8
Alkohol skadar mikrobiom i munnen
Höjdpunkter och viktiga saker att hämta från Boston Bacterial Meeting 2019 (BBM)
Oralt kön kan utlösa bakteriell vaginos
Forskare identifierar en bakterie med anti-SARS-CoV-2-aktivitet in vitro:Dolosigranulum pigrum
Spermamikrobiom avslöjades med RNA -sekvensering
Kronisk hosta kan lindras med nytt läkemedel
Husdjur som osannolikt kommer att överföra SARS-CoV-2,
säger forskare Forskare i Spanien och Tyskland har genomfört en studie som visar att tamhundar sannolikt inte kommer att bidra till överföring och spridning av allvarligt akut respiratoriskt syndrom c
Kvinnor födda med kejsarsnitt har större risk för fetma och diabetes
En ny studie publicerad i open-access journal JAMA Network Open i april 2020 tyder på att kvinnor födda med kejsarsnitt löper högre risk att utveckla fetma samt typ 2 -diabetes mellitus i vuxenlivet
RNA -sekvensering ger nya insikter i mikrobiomet
Forskare vid University of Chicago har kommit med en revolutionerande strategi för att studera tarmmikrobiomets aktivitet-med hjälp av hög genomströmningssekvensering av tRNA. Alpha Tauri