PLOS ONE: tétrandrine Induit mitochondries-Mediated Apoptose dans Human Cancer gastrique BGC-823 Cells

Résumé

tétrandrine, un alcaloïde bis-benzylisoquinoline isolé à partir de la racine séchée de Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore), a été signalé à posséder des effets anti-cancer sur de nombreuses tumeurs. Dans cette étude, nous avons étudié l'apoptose induite par tétrandrine sur le cancer gastrique humain BGC-823 cellules in vitro
et in vivo
. Les résultats ont montré que tétrandrine inhibé de manière significative la viabilité des cellules dans une dose et d'une manière dépendante du temps et de l'apoptose induite. Il a augmenté l'apoptose; surexpression de Bax, Bak et Bad; et la régulation négative de la protéine Bcl-2 et Bcl-xL dans BGC-823 cellules. En outre, tétrandrine augmenté l'activation de la caspase-3 et -9, la libération de cytochrome c
, et une régulation positive de Apaf-1, suggérant que l'apoptose induite par tétrandrine-était liée à la voie mitochondriale. Pendant ce temps, le prétraitement avec le pan-caspase inhibiteur z-VAD-fmk en BGC-823 cellules réduites apoptose induite tétrandrine-en bloquant l'activation des caspases. En outre, la tétrandrine inhibe efficacement la croissance tumorale par l'induction de l'apoptose, qui a été vérifiée par analyse immunohistochimique dans un modèle de xénogreffe de souris nude. Pris ensemble, nous avons conclu que tétrandrine significativement inhibé la prolifération des cellules cancéreuses gastriques BGC-823 par les mitochondries l'apoptose dépendante, qui peut jouer un rôle prometteur dans le traitement du cancer gastrique

Citation:. Qin R, Shen H, Cao Y, Y Fang, Li H, Chen Q, et al. (2013) tétrandrine Induit mitochondries médiée Apoptose en droits de cancer gastrique BGC-823 cellules. PLoS ONE 8 (10): e76486. doi: 10.1371 /journal.pone.0076486

Editeur: Lucia R. Languino, Thomas Jefferson University, États-Unis d'Amérique

Reçu le 16 Décembre 2012; Accepté le 27 Août 2013; Publié: 1 Octobre, 2013 |

Droit d'auteur: © 2013 Qin et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenue par les subventions suivantes: les subventions de la national science Foundation naturel de Chine (81070423 et 81101677), les subventions de la Fondation des sciences naturelles de la province du Jiangsu (BK 2010332). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

En Chine, le cancer gastrique, l'une des tumeurs malignes les plus courantes, résultant d'une accumulation d'événements génétiques et épigénétiques, a encore une forte incidence et le taux de mortalité [1-3]. Il y a plusieurs facteurs causant l'apparition du cancer gastrique, tels que l'infection de Helicobacter pylori, l'alimentation, la consommation de tabac, et ainsi de suite [4]. Selon les circonstances, la plupart des patients atteints d'un cancer gastrique ont besoin d'une chirurgie, la chimiothérapie et /ou chimio-radiothérapie [5]. Des études antérieures ont révélé que le cancer gastrique est une maladie génétique complexe lié à oncogènes ou suppresseurs de tumeurs [6].

tétrandrine (C _{38H 42N 2O 6, 622,730 MW ) est un alcaloïde bis-benzylisoquinoline isolé à partir de la racine séchée de Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore). Récemment, les diverses activités biologiques de tétrandrine ont été étudiés de manière intensive en raison de sa large utilisation dans l'arthrite, l'arythmie, l'inflammation, la silicose, divers types de tumeurs, et inverser la résistance multi-drogues [7,8]. Il est rapporté que tétrandrine a des effets significatifs sur les tumeurs, y compris le ralentissement de la croissance tumorale et l'augmentation de la durée de survie des animaux et le taux de survie [9-12]. Tétrandrine provoque un blocage G1 du cycle cellulaire et induit l'apoptose dans différents types cellulaires. Cependant, les mécanismes précis par lesquels tétrandrine initie l'apoptose et inhibe la croissance cellulaire dans les cellules tumorales gastriques restent peu claires [13]. Il est rapporté que la codelivery du paclitaxel (PTX) et tétrandrine par des nanoparticules peut efficacement améliorer la cytotoxicité par inhibition de Ptx séquentielle de la Akt ERO-dépendante et l'activation des voies apoptotiques sur la base de la thérapie contre le cancer gastrique oxydation [14]. Cependant, à titre d'agent thérapeutique, Ptx a inévitablement des effets secondaires graves en raison de ses effets toxiques, non spécifiques et des solvants spéciaux, et les cellules tumorales peuvent être plus résistantes à l'apoptose induite par Ptx [15-17]. Une étude antérieure a montré que la tétrandrine a un effet synergique avec les agents chimiothérapeutiques sur l'apoptose de lignées cellulaires de cancer gastrique [18]. En outre, un dérivé de (H1) de tétrandrine exerce une bonne activité anti- résistance multidrogue en ouvrant la voie de l'apoptose intrinsèque et l'inhibition de l'activation de ERK1 /2 et Akt1 /2 [19]. Ces résultats suggèrent que tétrandrine pourrait remplacer Ptx comme la première ligne de chimiothérapie pour le cancer gastrique.}

Depuis tétrandrine a un grand potentiel dans la thérapie anti-cancer, il est important d'étudier systématiquement à comprendre son mécanisme. Par conséquent, dans cette étude, nous avons étudié les mécanismes possibles de tétrandrine sur les cellules cancéreuses gastriques humaines in vitro
et in vivo
.

Matériaux et réactifs

tétrandrine a été obtenu à partir de Jiangxi Yintao Pharmaceutical Development Company (Jiangxi, Chine). Des anticorps ont été obtenus à partir des sources suivantes: des anticorps contre Bcl-2, Bax, Bcl-xl, Caspase-3, -8, -9, cytochrome c
, Apaf-1 et β-actine étaient de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA); anti-Bad et Bak étaient de Bioworld Technology (St. Louis Park, MN, USA). Le kit de réactif Trizol a été acheté chez Invitrogen (Grand Island, NY, USA). MTT (3- (4, 5-diméthylthiazol-2-yl) -2, le bromure de 5-diphényltétrazolium) a été acheté auprès de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

Culture cellulaire

La lignée cellulaire de cancer gastrique BGC-823 humaine a été acheté à Shanghai biologie cellulaire, Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine). Les cellules ont été cultivées dans un milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), complété par 10% de sérum de veau fœtal (Hyclone, Logan, UT, USA), 1% de pénicilline, et 1% de streptomycine dans un atmosphère humidifiée de 95% d'air et 5% de CO _{2 à 37 ° C.}

la viabilité des cellules test

la viabilité cellulaire a été mesurée par le test MTT. En bref, les cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits à une densité de 1 x 10 ^{4 cellules /puits. Après 36 h, les cellules ont été traitées avec ou sans tétrandrine à des concentrations variables pendant 24, 48 et 72 h; et un tampon phosphate salin (PBS) a servi de contrôle négatif. Ensuite, 20 pl de solution de colorant MTT (0,5 mg /ml, dissous dans du PBS et on a filtré à travers une membrane de 0,2 mm) ont été ajoutés à chaque puits et incubées à 37 ° C pendant 4 h. Ensuite, 150 pi de diméthylsulfoxyde ont été ajoutés à chaque puits et les plaques ont été incubées à 37 ° C pendant 10 min supplémentaires. On a mesuré l'absorbance à 490 nm en utilisant un lecteur de microplaques à 96 puits. Le circuit intégré _{50 valeur a été définie comme la concentration de médicament qui inhibe la croissance des cellules de 50% par rapport au témoin.}}

Blot

cellules cancéreuses gastriques Western ont été lavées deux fois avec du PBS, puis 100 pi de tampon de lyse RIPA (Beyotime, Chine) a été ajouté à chaque puits pour lyser les cellules pendant environ 20 minutes. Ensuite, le mélange a été centrifugé à 12 000 g
pendant 15 min, et le surnageant a été recueilli. La concentration en protéine a été détectée en utilisant un kit BCA Protein Assay (Beyotime, Chine) selon les instructions du fabricant. La protéine totale a été séparé par SDS-PAGE sur 8%, 10% et 12% de gels de polyacrylamide et transféré par électrophorèse sur polyfluorure de vinylidène (PVDF) membranes (Millipore, Bedford, MA, USA). Après blocage pendant 2 heures ou pendant une nuit avec 5% de lait sec non gras (dissous dans du tampon Tris-solution saline tampon de Tween 20; TBST), les membranes ont été incubées avec des anticorps primaires (1: 500 à 1: 1000 dilution) pendant 2 h à la température ambiante ou une nuit à 4 ° C, puis lavées trois fois avec du TBST (5 mM de Tris-HCl, pH 7,4, NaCl 136, 0,1% de Tween 20), avant la réaction avec la peroxydase de raifort (HRP) conjuguée à des anticorps secondaires (1: 5000 -1: 10000) pendant 1 h à température ambiante. Après trois lavages pendant 10 minutes à chaque fois avec du TBST, les membranes ont été traitées avec des réactifs de détection ECL Western Blot.

en temps réel, la réaction en chaîne par polymérase quantitative

ARN cellulaire total a été isolé en utilisant le réactif Trizol ( Invitrogen) suivant le protocole de la fabrication et dissous dans l'eau traitée par DEPC. La concentration de l'ARN total a été mesurée par spectroscopie d'absorption UV. La transcription inverse a été réalisée en utilisant un premier brin Kit RevertAid ™ cDNA Synthesis (Fermentas MBI, Waltham, MA, USA) en suivant le protocole du fabricant. L'ADNc nouvellement synthétisé a été amplifié par réaction en chaîne par polymérase (Fermentas). Les séquences de chacune des amorces utilisées dans cette étude sont présentés dans le tableau 1. La chaîne de la polymérase conditions de réaction sont énumérés comme suit: 95 ° C pendant 3 min, 95 ° C pendant 5 min, 58 ° C pendant 30 min, et 72 ° C pendant 30 min suivie de 40 cycles à 94 ° C pendant 15 s et 60 ° C pendant 1 min. Tous les tests ont été effectués en triple.
Gene Sense de primaire (5 'à 3')
amorce antisens (5 'à 3’)
bcl-2GGATCCAGGATAACGGAGGCCCAGATAGGCACCCAGGGTbaxACCAAGAAGCTGAGCGAGTGTACAAACATGGTCACGGTCTGCbclxlGGCAGGCGACGAGTTTGACCCATCCCGGAAGAGTTCATβ-actinTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCATable 1. Les séquences d'amorces pour les gènes utilisés dans cette étude.
CSV Télécharger CSV

liaison Annexin V-iodure de propidium test

En bref, les cellules ont été ensemencées dans des plaques 6 puits et traité avec différents les concentrations de tétrandrine pendant 24 h, et le PBS a servi de témoin négatif. Ensuite, les cellules ont été remises en suspension dans 500 pi de tampon de liaison froid. les suspensions de cellules ont été colorées contre l'annexine V et l'iodure de propidium (BD Pharmingen ^{TM, Becton Dickinson, San José, CA, USA) selon les instructions du fabricant, puis l'analyse de cytométrie en flux a été réalisée par un FACS (Coulter, Becton Dickinson).}

Caspase-3 test d'activité

en bref, les cellules ont été incubées dans une plaque à 6 puits à une concentration de 4 x 10 ^{5 /puits et traitées avec la concentration des médicaments indiqués. un volume égal de PBS a été utilisé comme témoin négatif. la caspase-3 a été mesurée en utilisant un caspase-3 kit d'activité de dosage (Beyotime, Chine) suivant les instructions du fabricant. L'absorbance a été ensuite mesurée à 405 nm en utilisant un lecteur de microplaques. Toutes les expériences ont été réalisées en triple.}

Éthique déclaration

Procédures impliquant des animaux et leur prise en charge ont été effectuées en conformité avec les directives du NIH (NIH Pub. No.85-23, révisée en 1996) et ont été approuvés par le soin et l'utilisation des animaux Comité de l'Hôpital des affiliés gens, Université du Jiangsu.

l'expérimentation animale

souris nude Femme (BALB /c nu /nu), âgé de 4-6 semaines, ont été obtenus à partir du Centre expérimental des animaux de l'Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine) et conservé dans des conditions exemptes d'agents pathogènes spécifiques dans une armoire biologique à l'installation des animaux de laboratoire de l'Université de Jiangsu. Les animaux ont été maintenus dans un cycle lumière-obscurité de 12 h. La température ambiante maintenue à environ 20 ° C, et l'humidité est maintenue à environ 50% dans une chambre avec une alimentation en air filtré.

Traitement tétrandrine des sous-cutanées BGC-823 tumeurs chez les souris

Pour établir un modèle de xénogreffe de souris BALB /c d'un cancer gastrique humain, BGC-823 cellules à une concentration de 5,0 x 106/150 ul ont été injectées dans le flanc droit de chaque souris BALB /c nude. Environ 10 jours plus tard (taille de la tumeur a atteint 120-150 mm3), des souris nues ont été répartis au hasard en trois groupes (N = 5) et compte tenu des traitements suivants: contrôle (traités avec une solution saline normale), le groupe à faible dose (traités avec 40 mg /kg tétrandrine), et le groupe à dose élevée (traités avec 120 mg /kg tétrandrine). des souris BALB /c ont été injectées par voie intrapéritonéale avec tétrandrine (200 ul, 40 mg /kg ou 120 mg /kg), soit un volume égal de solution saline normale, une fois par jour pendant 3 semaines, respectivement. La taille de la tumeur a été mesurée tous les 3 jours en deux dimensions perpendiculaires avec un pied à coulisse et le volume tumoral (TV) a été calculé selon la formule suivante: N = longueur (mm) x largeur ^{2 (mm 2) x 0,5 . le volume tumoral relatif (RTV) a été calculé selon la formule suivante: RTV = TV _{t /TV 0, où TV 0 est le volume tumoral au jour 0 et TV t est la tumeur volume à un jour donné t. Pendant ce temps, les animaux ont été pesés deux fois par semaine. A la fin de l'expérience, les tumeurs ont été excisées et fixées dans de la formaline pour une analyse ultérieure.}}

L'analyse immunohistochimique

Les échantillons enrobés de paraffine excisés de BGC-823 des souris nude ont été colorées en utilisant les anticorps suivants : Bcl-2 et Bax (Boster), Bcl-xL, caspase-3 activé et activé caspase-9 (Santa Cruz) pour l'immunohistochimie. Les images ont été prises avec un microscope à fluorescence (Carl Zeiss).

L'analyse statistique

Toutes les expériences ont été réalisées au moins trois fois, et toutes les données ont été présentées sous forme de moyenne ± écart-type (SD). Les différences statistiques ont été déterminées par une ANOVA en utilisant le logiciel SPSS 16.0. Une valeur de P inférieure à 0,05 a été considérée comme significative.

Résultats

Effet cytotoxique de tétrandrine sur BGC-823 cellules

La structure chimique de tétrandrine est représentée sur la figure 1A. L'effet anti-prolifératif de la tétrandrine a été étudiée chez BGC-823 cellules en utilisant le test MTT. Comme cela est représenté sur la figure 1B, les cellules ont été traitées pendant 24, 48 et 72 heures avec diverses concentrations de tétrandrine. Tétrandrine a inhibé significativement la croissance de cellules BGC-823 d'une manière dose et dépendante du temps. BGC-823 cellules ont été significativement inhibée par tétrandrine à 10 pg /ml ( P
< 0,05). L'IC _{50 valeur était 6.104 ± 0.786, 4.471 ± 0.650 et 3.744 ± 0,573 suivant 24, 48, et 72 h de traitement de tétrandrine, respectivement. Ainsi, 6, 8 et 10 pg /ml ont été déterminées comme les concentrations représentatives dans les études suivantes.}

L'induction de l'apoptose par la tétrandrine

capacités anti-cancer à médiation par tétrandrine ont été rapportés être associée à l'apoptose [9-12]. Par conséquent, nous avons étudié la capacité de l'apoptose induite tétrandrine-du BGC-823 cellules en utilisant un flux cytométrie dosage. Telle que mesurée par cytométrie en flux, les effets de la tétrandrine sur BGC-823 l'apoptose cellulaire sont représentés sur la figure 2A et B, avec les 24 h traitements de tétrandrine à 0, 6, 8 et 10 pg /ml pour résultat 4,35%, 11,4% , 17,72% et 32,34% de cellules apoptotiques, respectivement, et tétrandrine (8 pg /ml) pendant 0, 12, 24 et 48 h entraînant 3,4%, 6,64%, 19,15% et 25,85% de cellules apoptotiques, respectivement, (figure 2C et D). Ces données indiquent clairement que l'apoptose induite par tétrandrine BGC-823 cellules de manière dose et dépendante du temps. Le nombre de cellules apoptotiques a augmenté avec la concentration et le traitement tétrandrine temps.

expression tétrandrine médiation de Bcl-2 membres de la famille

Pour étudier le mécanisme plus spécifique sur l'induction de l'apoptose dans BGC -823 cellules par tétrandrine, nous avons détecté l'expression de protéines liées à l'apoptose par Western blot et leur niveau d'ARNm par temps réel (RT) -PCR. Ici, nous avons étudié l'expression de Bax, Bad, Bak, Bcl-2 et Bcl-xl en BGC-823 cellules traitées avec tétrandrine. Après 24 h d'exposition à la tétrandrine, Bax, Bad, Bak et expression de la protéine a été dépendante de la dose a augmenté, alors que Bcl-2 et Bcl-xL expression de la protéine est dépendante de la dose diminuée (figure 3A). Nous avons également constaté que la tétrandrine pourrait réguler à la hausse l'expression de Bax et de réguler négativement l'expression de Bcl-2 d'une manière dépendante du temps (figure 3B). Pour déterminer si tétrandrine aurait une incidence sur la transcription du gène de bcl-2, bcl-xL et Bax, l'expression de l'ARNm a été examinée par RT-PCR (figure 3C). Les résultats de RT-PCR clairement coïncidé avec celles présentées dans la figure 3A.

apoptose tétrandrine induite par une voie mitochondriale chez BGC-823 cellules

Pour explorer si l'apoptose induite tétrandrine a été associée à la l'activation des membres de la caspase, nous avons mesuré l'expression des caspases dans BGC-823 cellules traitées avec diverses concentrations de tétrandrine par Western blot. Les résultats ont montré une élévation dépendante de la dose de caspase-3 et de caspase-9 clivée dans les cellules traitées tetrandrine- (figure 4A). Cependant, des niveaux indétectables de caspase-3 et de caspase-9 n'a été trouvée dans les cellules en l'absence d'un traitement tétrandrine (données non présentées). Pour déterminer davantage le rôle de l'activation des caspases dans l'apoptose induite par tétrandrine, BGC-823 cellules ont été prétraitées avec le pan-caspase inhibiteur z-VAD-fmk (10 uM) pendant 4 heures, puis traitées avec 8 pg /ml tétrandrine pour 24 h. Par rapport au témoin, les activités relatives de la caspase-3 a augmenté chez BGC-823 cellules traitées avec tétrandrine seulement (figure 4B). En outre, la libération de cytochrome c
a été augmenté d'une manière dose-dépendante par tétrandrine. Un courant représentatif de cytométrie résultat a montré que les cellules prétraitées avec z-VAD-fmk fortement réduit l'apoptose induite par tétrandrine et que seul un petit nombre de cellules apoptotiques ont été détectées (figure 4C). Ensuite, nous avons examiné le niveau du cytochrome cytoplasmique d'expression c
, qui est libéré de la mitochondrie dans le cytoplasme pendant l'apoptose, ont agi sur la protéase apoptotique facteur d'activation-1 (Apaf-1) en augmentant la liaison de Apaf- 1 à l'ATP /dATP, et l'activation de la caspase-9-dépendante de la caspase-3 [20-22] induit. On a constaté que la tétrandrine a augmenté de manière significative l'expression du cytochrome cytoplasmique c hôtels et Apaf-1 dans les cellules BGC-823 d'une manière dépendante de la dose (figure 4D). Ensemble, ces résultats suggèrent que la caspase voie de cascade de mitochondries médiée a été impliqué dans l'apoptose induite par tétrandrine.

Effet anti-tumoral de tétrandrine sur BGC-823 xénogreffes de souris nude

Depuis tétrandrine a été trouvé pour inhiber significativement la croissance de BGC-823 cellules in vitro
, nous avons évalué en outre l'effet anti-tumoral des tétrandrine in vivo
avec des modèles de xénogreffes établies. Comme cela est représenté sur la figure 5A, la tétrandrine peut inhiber efficacement la croissance tumorale après un traitement de 24 jours. Au bout de 24 jours, les volumes tumoraux moyens étaient 493.06 mm ^{3 et 1243.00 mm 3 dans le groupe à dose élevée et un faible groupe de dose, respectivement, correspondant à 80,52% et le taux d'inhibition de 50,9% par rapport au contrôle groupe. En outre, le poids de la tumeur a été réduite à la suite d'un traitement par tétrandrine aux deux concentrations (figure 5B & tableau 2). Ce résultat a montré qu'une dose élevée de tétrandrine a eu un effet anti-tumeur plus forte que d'une faible dose sur le modèle de xénogreffe BGC-823.
Groupe (n = 5)
volume des tumeurs (mm 3)
inhibitrice Taux (%)
poids de la tumeur (g)
inhibitrice Taux (%)
control2531.78 ± 153.251.194 ± 0.10Tet (40 mg /kg) 1243,00 ± 55,19 ** * 50.900.641 ± 0,06 *** 46.31Tet (120 mg /kg) 493,06 ± 145,63 *** 80.520.298 ± 0,09 *** 75.04Table 2. inhibition de tétrandrine (Tet) sur la croissance tumorale de souris nues
*** P
<. 0,001 par rapport
le groupe témoin. CSV Télécharger CSV}

apoptose tétrandrine induite par BGC-823 xénogreffes

analyse immunohistochimique des tissus tumoraux excisés de BGC-823 des souris nues xénogreffée reconfirmé que l'apoptose avait eu lieu dans les tumeurs tétrandrine traitées et que la voie mitochondriale joués un rôle important au cours de l'apoptose. Il y avait cinq souris nude dans chaque groupe. Nous avons observé que l'expression de Bcl-2 et Bcl-XL a été diminuée, tandis que les niveaux de protéine de Bax, caspase-3 activée, et active la caspase-9 a été significativement améliorée par tétrandrine (figure 6). Tous ces résultats fortement corroborées que tétrandrine peut induire l'apoptose, compatible avec la in vitro
étude.

Discussion

Le cancer gastrique, le quatrième néoplasme le plus souvent diagnostiqué après le cancer du poumon, du sein, du côlon et du rectum, est responsable de près d'un million de décès annuels et a été la deuxième cause de mortalité liée au cancer dans le monde entier [23-26]. Chirurgie, radiochimiothérapie, et la thérapie moléculaire ciblée ont été les principales stratégies de traitement dans le traitement du cancer gastrique [27]. Bien que la résection chirurgicale a été le traitement curatif le plus efficace, les résultats sont contradictoires et limitées par récurrence de la tumeur et la chimiorésistance. médicaments chimiothérapeutiques classiques, tels que Ptx, 5-fluorouracile, et les cellules tumorales cisplatine tuer en induisant l'apoptose et l'autophagie; mais les cellules tumorales peuvent devenir résistantes à l'apoptose induite par le médicament [17,28,29].

Il est rapporté que tétrandrine a une activité anti-tumorale forte à la fois in vitro
et vivo Emploi de nombreuses cellules cancéreuses telles que des cellules de poumon humain A549 de carcinome, des cellules de cancer de la vessie, des cellules cancéreuses du côlon, des cellules d'hépatome, etc. [9-12]. Une étude antérieure a indiqué que tétrandrine pourrait jouer un rôle prometteur par l'interaction synergique avec les agents chimiothérapeutiques éventuellement par leurs effets synergiques sur l'induction de l'apoptose et la régulation négative des gènes de l'agent associé chimiothérapeutiques dans MKN-28 cellules et BGC-823 cellules [18]. Cependant, le mécanisme de tétrandrine sur le cancer gastrique cellules BGC-823 humaines n'a pas été identifié. Dans cette étude, nous avons démontré que tétrandrine ont présenté une activité antitumorale puissante vers le cancer gastrique humain in vitro
et in vivo
, élucidant les mécanismes sous-jacents de l'action.

Tout d'abord, notre résultats ont montré que la tétrandrine inhibe efficacement BGC-823 prolifération cellulaire dosée par MTT d'une manière dose et dépendante du temps. Pendant ce temps, l'IC _{50s de tétrandrine étaient environ 6,1, 4,5, et 3,7 pg /ml dans BGC823 cellules pendant 24, 48 et 72 h, respectivement. Selon des études antérieures, les médicaments chimiothérapeutiques tuent les tumeurs solides principalement en induisant l'apoptose [30-32]. Nous avons constaté que l'apoptose a été induite par tétrandrine d'une manière dépendante de la concentration par cytométrie de flux avec une augmentation des premières cellules apoptotiques et des cellules apoptotiques tardives dans le cancer gastrique cellules BGC-823.}

Dans les cellules de mammifères, l'apoptose peut être déclenchée par la voie extrinsèque activée par le récepteur de la mort et la voie intrinsèque réglementée par Bcl-2 membres de la famille et des cascades de caspases dans la mitochondrie [33,34]. Dans notre étude, tétrandrine a augmenté l'expression des protéines pro-apoptotiques Bax, Bad, et Bak et une diminution des niveaux de Bcl-2 et Bcl-xl protéines. Par conséquent, un rapport accru d'expression anti et pro-apoptotique des protéines, tels que le ratio Bax /Bcl-2, conduirait à la perte de potentiel de la membrane mitochondriale. mitochondries disfonctionnement presse cytochrome c
, qui accumule dans le cytosol et forme un complexe avec Apaf-1. Dans la voie intrinsèque, comme effecteur, la caspase-3 est clivée par l'activation de la caspase-9 [35-37]. Dans la présente étude, nous avons montré que la caspase-9 et la caspase-3 ont été activés par tétrandrine. L'inhibiteur pan-caspase z-VAD-fmk réduit l'apoptose dans les cellules BGC-823, ce qui indique que la voie mitochondriale joue un rôle central dans l'apoptose induite par tétrandrine.

Il est rapporté que tétrandrine pourrait inverser la résistance à de nombreux les médicaments de chimiothérapie, comme Ptx et doxorubicine dans le KBv200 et K562 modèles nus de xénogreffe de souris [38,39]. Tétrandrine possède également une forte capacité à inhiber l'angiogenèse dans les gliomes chez le rat [40]. De plus, nos résultats ont indiqué que la tétrandrine ont présenté une activité anti-tumorale forte en inhibant la croissance tumorale et l'induction de l'apoptose dans le nu modèle de xénogreffe de souris BGC-823 établi.

En conclusion, nos données ont démontré que tétrandrine induit de manière significative l'apoptose chez l'homme cancer gastrique BGC-823 cellules et ses modèles de xénogreffe de souris nude. l'apoptose induite par tétrandrine a été associée à l'activation de la voie de l'apoptose intrinsèque. Sur la base de ces résultats, tétrandrine pourrait avoir un grand potentiel dans le traitement du cancer gastrique humain dans l'avenir.

Remerciements

Nous tenons à remercier les membres du département de médecine clinique de l'Université de Jiangsu pour leur l'assistance technique.

• PLOS ONE: SULF2 méthylation est associée à In Vitro cisplatine sensibilité et l'efficacité clinique pour les patients du cancer gastrique traités avec un régime FOLFOX modifié
• PLOS ONE: Down-règlement de Claudin-18 est associée à la proliférante et le potentiel invasif du cancer gastrique au Front Invasive