PLoS ONE: Tetrandrine Skatina Mitochondrijos tarpininkaujant apoptozę žmogaus skrandžio vėžys BGC-823 Cells

Anotacija

Tetrandrine, bis-benzylisoquinoline alkaloidas išskirtas iš džiovintų šaknų Hang-Fang-Či ( Stephania
tetrandra
S. Moore), buvo pranešama, kad turi priešvėžinių poveikį daugelio navikų. Šiame tyrime mes ištirti tetrandrine sukeltos apoptozės žmogaus skrandžio vėžio BGC-823 ląstelių in vitro, parsisiųsti ir vivo
. Rezultatai parodė, kad tetrandrine smarkiai slopino ląstelių gyvybingumas nuo dozės ir laiko priklausomu būdu ir sukeliama apoptozė. Tai padidino apoptozę; ląstelę Bax, Bak, ir bloga; ir downregulation iš BCL-2 ir BCL-XL BGC-823 ląstelių. Be to, tetrandrine padidino kaspazė-3 ir -9, išleidimo citochromo C
ir ląstelę aPAF-1 aktyvavimo, rodo, kad tetrandrine sukeltos apoptozės buvo susijęs su mitochondrijų keliu. Tuo tarpu, išankstinis apdorojimas su visos kaspazės inhibitorių z VAD-FMK į BGC-823 ląstelių sumažėjusių tetrandrine sukeltos apoptozės blokuoja aktyvavimo kaspazių. Be to, tetrandrine efektyviai slopina naviko augimą ir apoptozės būdu indukcija, kuri buvo patikrinta pagal imunohistocheminio analizei nuogas pelės ksenografiniuose modelį. Kartu mes padarė išvadą, kad tetrandrine žymiai slopina skrandžio vėžio BGC-823 ląstelių proliferaciją per mitochondrijų priklauso nuo apoptozės, kuris gali žaisti daug žadančią vaidmenį skrandžio vėžio gydymo

nurodomoji dalis:. Čin R Shen O Cao Y, Fang Y, Li, yra H, Chen Q, ir kt. (2013) Tetrandrine Skatina Mitochondrijos tarpininkaujant apoptozę žmogaus skrandžio vėžio BGC-823 ląstelių. PLoS ONE 8 (10): e76486. Doi: 10,1371 /journal.pone.0076486

redaktorius: Lusija R. Languino, Tomas Džefersonas universitetas, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Gruodžio 16, 2012 m Priimtas rugpjūčio 27, 2013 m Paskelbta: Balandis 1, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Čin et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė šias dotacijas: dotacijų iš nacionalinių Gamtos mokslo fondo Kinijos (81070423 ir 81101677), dotacijų iš natūralių mokslo fondo Dziangsi provincijos (BK 2.010.332). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Kinijoje, skrandžio vėžys, viena iš labiausiai paplitusių piktybinių navikų, todėl iš genetinių ir epigenetinių įvykių kaupimo, vis dar turi didelį sergamumą ir mirtingumą [1-3]. Yra keletas veiksnių, sukeliančių skrandžio vėžio atsiradimo, pavyzdžiui, Helicobacter pylori
infekcija, mityba, tabako vartojimas ir tt [4]. Priklausomai nuo aplinkybių, dauguma pacientų su skrandžio vėžiu, reikia chirurgija, chemoterapija ir /arba chemoradioterapija [5]. Ankstesni tyrimai parodė, kad skrandžio vėžys yra sudėtinga genetinė liga, susijusi su onkogenų ar naviko slopintuvai [6].

Tetrandrine (C _{38H 42N 2O 6 MW 622,730 ) yra bis-benzylisoquinoline alkaloidas išskirtas iš džiovintų šaknų Hang-Fang-Či ( Stephania
tetrandra
S. Moore). Pastaruoju metu įvairių biologinių veikla tetrandrine buvo intensyviai tiriami dėl savo plataus vartojimo artrito, aritmija, uždegimas, silikozės, įvairių tipų auglių, ir atvirkštinės atsparumas kelių narkotikų [7,8]. Ji pranešė, kad tetrandrine turi reikšmingą poveikį navikų, įskaitant lėtėja naviko augimą ir didinti gyvūnų išgyvenamumo laikas ir išgyvenamumas [9-12]. Tetrandrine sukelia G1 ląstelės ciklo blokadą ir indukuoja apoptozę įvairių tipų ląstelių. Tačiau tikslių mechanizmų, kuriuos tetrandrine inicijuoja apoptozės ir slopina ląstelių augimą skrandžio naviko ląstelių lieka neaišku, [13]. Jis pranešė, kad paklitakselio (PTX) ir tetrandrine codelivery iki nanodalelių gali efektyviai padidinti PTX citotoksiškumo eilės slopinimu ROS-priklausomo Akt kelio ir aktyvacijos apoptozinių kelius remiantis oksidacijos terapijos su skrandžio vėžiu [14]. Tačiau, kaip terapinio agento, PTX neišvengiamai turi didelių šalutinį poveikį, atsižvelgiant į jo nespecifinių toksinio poveikio ir specialių tirpiklių ir vėžinių ląstelių gali tapti atsparios PTX sukeltos apoptozės [15-17]. Ankstesnis tyrimas parodė, kad tetrandrine turi sinergetinį poveikį su chemoterapiniais preparatais dėl apoptozės skrandžio vėžio ląstelių linijų [18]. Be to, darinys (H1), iš tetrandrine daro gera anti-naviko atsparumą daugeliui veiklą inicijuojant vidinę apoptozę kelią ir slopina ERK1 /2 ir Akt1 /2 [19] aktyvacijos. Šie rezultatai rodo, kad tetrandrine gali pakeisti PTX kaip pirmos eilės chemoterapijos skrandžio vėžio.}

Nuo tetrandrine turi didelį potencialą turintis vėžio gydymo, svarbu mokytis sistemingai suprasti jo mechanizmą. Todėl šiame tyrime mes ištirti galimus mechanizmus tetrandrine žmogaus skrandžio vėžio ląstelių in vitro, parsisiųsti ir vivo
.

Medžiagos ir metodai

medžiagos ir reagentai

Tetrandrine buvo gauta iš Jiangxi Yintao farmacijos Development Company (Jiangxi, Kinija). Antikūnai buvo gauti iš šių šaltinių: antikūnų prieš BCL-2, Bax, BCL-XL, kaspaze 3 -8, -9, citochromo C pervežimas, aPAF-1 ir β-aktino buvo iš Santa cruz biotechnologijos (Santa Krusas, Kalifornija, JAV); Anti-blogas ir Bak buvo iš Bioworld technologijos (St Louis Park, MN, JAV). Trizol reagentas rinkinys buvo įsigytas iš Invitrogen (Grand Island, NY, JAV). MTT (3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-diphenyltetrazolium bromidas) pirktas iš Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, JAV).

Ląstelių kultūros

žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linija BGC-823 buvo įsigytas iš Šanchajaus ląstelių biologijos, Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija). Ląstelės buvo auginamos Dulbecco modifikuota Eagle terpėje (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY, JAV), po to papildomai su 10% vaisiaus galvijų serumo (Hyclone, Logan, UT, JAV), 1% penicilino, ir 1% streptomicino A sudrėkintas atmosfera 95% oro ir 5% CO _{2 37 ° C temperatūroje.}

Mobilusis gyvybingumo tyrimą

ląstelių gyvybingumas buvo matuojamas MTT. Trumpai tariant, ląstelės buvo pasėjamos į 96-duobučių lėkštelėse esant 1 × 10 ^{4 ląstelių tankio /duobutėje. Po to, kai 36 h, ląstelės buvo apdorotas arba be tetrandrine įvairios koncentracijos dėl 24, 48, ir 72 h; ir fosfato buferio druskų tirpalo (PBS) tarnavo kaip neigiama kontrolė. Tada, 20 pL MTT dažo tirpalą (0,5 mg /ml, ištirpinama PBS ir filtruojamas per 0,2 mm membranos a) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir inkubuojamos 37 ° C temperatūroje iki 4 h. Po to, 150 mikrol, dimetilsulfoksido buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį, o plokštelės buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje, ir papildomai 10 min. Absorbcija buvo matuojamas esant 490 nm, naudojant 96-ių šulinėlių mikroplokštelės skaitytuvą. IC _{50 vertė yra apibrėžiama kaip vaisto koncentracija, kuris slopina 50% ląstelių augimą palyginus su kontroliniu.}}

Imunoblotingo

Skrandžio vėžio ląstelės buvo plaunama du kartus PBS, ir tada 100 įxL Ripa lizės buferiniame tirpale (Beyotime, Kinija) buvo įtraukta į kiekvieną duobutę į Łyse ląstelių apie 20 min. Be to, mišinys buvo centrifuguojamas 12.000 "g
15 min, ir supernatanto buvo surinkti. Baltymų koncentracija buvo aptikta naudojant BCA Baltymai Analizės rinkinį (Beyotime, Kinija), pagal gamintojo nurodymus. Iš viso baltymas atskirtas SDS-PAGE 8%, 10% ir 12% poliakrilamido geliai ir perkelti elektroforezės ant polivinilideno difluoridą (PVDF) membranas (MILLIPORE, Bedford, MA, JAV). Po blokavimo 2 h arba visą naktį su 5% ne-riebalų sausojo pieno (ištirpinto Tris-buferiniame valgomosios druskos tirpale-Tween 20 buferį; TBST), Membranos buvo inkubuojami su pirminių antikūnų (1: 500-1: 1000 praskiedimas) už 2 h kambario temperatūra arba visą naktį 4 ° C temperatūroje ir po to tris kartus plaunamos TBST (5 mM tris-HCl, pH 7,4, 136 mM NaCl, 0,1% Tween 20) prieš reakciją su krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto antriniai antikūnai (1: 5000 -1: 10000) už 1 val kambario temperatūroje. Triskart nuplovus kiekvienam su TBST 10 min, Membranos buvo gydomi "ECL Imunoblotingo aptikimo reagentu.

Kiekybiniai realaus laiko polimerazės grandininė reakcija

Viso korinio RNR buvo išskirta naudojant Trizol reagentą ( Invitrogen) po gamybos protokole ir ištirpinama DEPC gydytų vandeniu. Į bendro RNR koncentracija buvo matuojamas UV absorbcijos spektroskopijos. Atvirkštinės transkripcijos buvo atliekama naudojant RevertAid ™ First Strand sintezei rinkinį (Fermentas RP, Waltham, MA, JAV) pagal gamintojo protokolą. Naujai susintetintas kDNR buvo amplifikuotas polimerazės grandinine reakcija (Fermentas). Kiekvienos naudojami šiame tyrime gruntas sekos yra parodyta 1 lentelėje polimerazės grandininė reakcija sąlygos yra išvardytos, kaip taip: 95 ° C temperatūroje 3 min, 95 ° C temperatūroje 5 min, 58 ° C temperatūroje 30 min, ir 72 ° C 30 min, po 40 ciklų 94 ° C temperatūroje 15 s ir 60 ° C temperatūroje 1 min. Visi bandymai buvo atliekami tris kartus.
Gene
Sense gruntas (5 'iki 3 ")
antiprasmiq gruntas (5' iki 3’)
bcl-2GGATCCAGGATAACGGAGGCCCAGATAGGCACCCAGGGTbaxACCAAGAAGCTGAGCGAGTGTACAAACATGGTCACGGTCTGCbclxlGGCAGGCGACGAGTTTGACCCATCCCGGAAGAGTTCATβ-actinTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCATable 1. sekos pradmenis, genų naudojami šiame tyrime.
CSV Atsisiųsti CSV

aneksinu-propidiumo jodidas Prisirišimo tyrimo

trumpas, ląstelės buvo pasėjamos į 6-duobučių lėkštelėse ir gydomiems kitokia koncentracijos tetrandrine 24 val, ir PBS tarnavo kaip neigiamos kontrolės. Tada ląstelės buvo sumaišymo 500 įxL šalto privalomą rezervą. ląstelių suspensijos buvo tamsintas prieš aneksino-V ir propidiumo jodido (BD Pharmingen ^{TM, Becton Dickinson, San Chosė, CA, USA) pagal gamintojo instrukcijas, ir tada tėkmės citometrijos analizė buvo atlikta pagal FACS (Coulter, "Becton Dickinson).}

kaspazė-3 aktyvumo tyrimas

Trumpai tariant, ląstelių buvo inkubuojami 6-šulinėlių plokštelės esant koncentracijai 4 × 10 ^{5 /duobutėje ir apdorojimo su rodoma koncentracija nuo narkotikų. tokį patį tūrį PBS buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. kaspazė-3 aktyvumas buvo matuojamas naudojant kaspazės-3 veikla tyrimas komplektas (Beyotime, Kinija) pagal gamintojo instrukcijas. tada absorbcija buvo matuojamas 405 nm, naudojant microplate skaitytuvą. Visi eksperimentai buvo atliekami tris kartus.}

Etika pareiškimas

procedūromis, kuriose dalyvauja gyvūnus ir jų priežiūrą buvo atliekami laikantis NIH gaires (NIH paskelbimo. No.85-23, peržiūrėta 1996) ir buvo patvirtintos gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto kontroliuojamų Liaudies ligoninė, Jiangsu universitete.

Animal eksperimentai

Vyras nuogas pelėms (Balb /c nu /nu), 4-6 savaičių amžiaus, buvo gauti iš eksperimentinių gyvūnų centras Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija) ir saugomi pagal konkrečias patogenais neužkrėstų sąlygų biologinės kabineto laboratorijoje gyvūnų priemonę Dziangsi universitete. Gyvūnai buvo palikti 12-h šviesos-tamsos ciklo. Kambario temperatūra palaikoma apie 20 ° C, o drėgmė buvo laikomi apie 50% į kambarį su filtruotu oro tiekimo.

Tetrandrine gydymas poodinio bgc-823 navikų pelių

Jei nustatyti Balb /c pelių svetimo modelis žmogiškosios skrandžio vėžio, BGC-823 ląstelės esant 5,0 × 106/150 įxL koncentracijos buvo švirkščiamas į dešinio krašto kiekvieno BALB /c nuogas pele. Maždaug 10 dienų (naviko dydis siekė 120-150 mm3), nude pelėms buvo atsitiktinai suskirstyti į tris grupes (N = 5) ir atsižvelgiant į šios procedūros: kontrolės (gydomi fiziologinio tirpalo), mažos dozės grupės (gydomi 40 mg /kg tetrandrine) ir didelės dozės grupė (gydomi 120 mg /kg tetrandrine). BALB /c buvo suleidžiama į pilvo ertmę su tetrandrine (200 ml, 40 mg /kg arba 120 mg /kg) arba vienodo tūrio izotoninio natrio chlorido tirpalo, vieną kartą per parą 3 savaites, atitinkamai. Navikas dydis buvo matuojamas kas 3 dienas dviem statmenomis matmenys su Vernier Slankmatis, o naviko tūris (televizija) buvo apskaičiuojamas pagal formulę: TV = ilgis (mm) × plotis ^{2 (mm 2) × 0,5 , Santykinis naviko tūris (RTV) buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: RTV = TV _{t /TV 0, kai TV 0 yra navikas tūris, esant 0 dieną ir TV t yra navikas apimtis tam tikru paros t. Tuo tarpu, kad gyvūnai buvo pasverti du kartus per savaitę. Pasibaigus eksperimento pabaigoje, navikai pašalintų ir fiksuojami formalinu tolesnei analizei.}}

Imunohistocheminis analizė

akcizais apmokestinamos iš parafino įterptųjų mėginiai bgc-823 nude pelėms buvo dažomi šiuos antikūnus : BCL-2 ir Bax (Boster), BCL-XL, aktyvuota kaspazės-3, ir aktyvuota kaspaze 9 (Santa Cruz) už imunohistocheminiu. Foto darytos su fluorescencijos mikroskopu (Carl Zeiss).

Statistinė analizė

Visi eksperimentai buvo atliekami ne mažiau kaip tris kartus ir buvo pristatyti visi duomenys, kaip tai ± standartinis nuokrypis (SD). Statistinių skirtumų lėmė vieną pusę ANOVA naudojant SPSS 16.0 programą. P reikšmė mažesnė nei 0,05 buvo laikomas reikšmingu.

Rezultatai

citotoksinio poveikio iš tetrandrine ant BGC-823 ląstelių

cheminės struktūros tetrandrine rodomas 1A pav. Anti-proliferacijos poveikis tetrandrine buvo tiriamas BGC-823 ląstelių, taikant MTT. Kaip yra parodyta 1B pav, ląstelės buvo gydomi 24, 48, ir 72 h su įvairios koncentracijos tetrandrine. Tetrandrine buvo nustatyta, kad reikšmingai slopina BGC-823 ląstelių augimą nuo dozės ir laiko priklausomu būdu. BGC-823 ląstelės buvo žymiai slopinamas esant 10 g /ml iki tetrandrine ( P
< 0,05). IC _{50 vertė buvo 6,104 ± 0,786, 4,471 ± 0,650, o 3,744 ± 0,573 po 24, 48, ir 72 h tetrandrine gydymo, atitinkamai. Taigi, 6, 8, ir 10 mikrogramų /ml nustatoma kaip atstovas koncentracijos šiose studijose.}

Įsiurbimo apoptozės iki tetrandrine

Tetrandrine tarpininkaujant priešvėžinių gebėjimai buvo pranešta, kad būti susijęs su apoptozės [9-12]. Taigi, mes tyrė tetrandrine sukeltos apoptozės BGC-823 ląstelių gebėjimą, naudojant tėkmės citometrijos metodu. Kaip matuojamas tėkmės citometrijos, iš tetrandrine dėl BGC-823 ląstelių apoptozės efektai rodomi 2A ir B paveiksle, su 24-H tetrandrine gydymo būdais, tuo 0, 6, 8, ir 10 mikrogramų /ml todėl 4.35%, 11,4% , 17.72%, ir 32.34% Apoptozė ląstelių, atitinkamai, ir tetrandrine (8 mikrogramai /ml) 0, 12, 24, ir 48 val todėl 3,4%, 6,64%, 19.15%, ir 25,85% Apoptozė ląstelių, atitinkamai (2c ir D pav.) Šie duomenys aiškiai rodė, kad tetrandrine sukeltas apoptozę BGC-823 ląstelių nuo dozės ir laiko priklausomu būdu. Į apoptozinių ląstelių išaugo kartu su tetrandrine koncentracijos ir gydymo metu numeriai.

Tetrandrine tarpininkaujant išraiška BCL-2 šeimos nariams

Jei ištirti daugiau konkretų mechanizmą apoptozės indukcija bgc -823 ląstelės pagal tetrandrine, mes nustatėme, apoptozės susijusių baltymų imunoblotingo metodu ir jų iRNR lygiu realiuoju laiku (RT) -PCR išraiška. Čia mes studijavo Bax, Bad, Bak, BCL-2 išraišką, ir BCL-XL BGC-823 ląstelių gydomiems tetrandrine. Po 24 h poveikio į tetrandrine, Bax, blogas ir bak baltymo ekspresija buvo priklausomai nuo dozės padidėjo, o BCL-2 ir BCL-XL baltymo ekspresija buvo priklausomai nuo dozės sumažėjo (3a paveikslas). Mes taip pat nustatė, kad tetrandrine galėtų upregulate, kad Bax išraišką ir downregulate, kad Bcl-2 ekspresiją laiko priklausomu būdu (3B pav). Norėdami nustatyti, ar tetrandrine turėtų įtakos genų transkripciją BCL-2, BCL-XL, ir Bax, jų iRNR raiška išnagrinėjo RT-PCR (3C pav.) RT-PGR rezultatai aiškiai sutapo su tais, pateikta 3A pav.

Tetrandrine sukeltos apoptozės per mitochondrijų keliu į bgc-823 ląstelių

Jei ištirti, ar tetrandrine sukeltos apoptozės buvo susijęs su aktyvavimo kaspazės nariai, mes matuojamas kaspazių išraišką bgc-823 ląstelių gydomi įvairių koncentracijų tetrandrine imunoblotingo metodu. Rezultatai parodė, nuo dozės priklausomas aukštį virš jūros lygio suskaldoma kaspazė-3 ir suskaldyti kaspazė-9 tetrandrine- paveiktų ląstelių (4a paveiksle). Tačiau nondetectable lygiai suskaldyti kaspazė-3 ir suskaldyti kaspazės-9 buvo rastas į tetrandrine gydymo nėra ląstelių (nerodomas duomenys). Toliau nustatyti kaspazės aktyvavimo vaidmenį tetrandrine sukeltos apoptozės, BGC-823 ląstelės buvo išvalytos su visos kaspazės inhibitorių z VAD-FMK (10 mikromolių) 4 h, o tada gydomi 8 mikrogramai /ml tetrandrine už 24 val. Lyginant su kontrole, santykinis veikla kaspazė-3 buvo padidintas bgc-823 ląstelių gydomiems tetrandrine tik (4b paveikslas). Be to, citochromo spaudai C
buvo padidintas nuo dozės priklausomu būdu tetrandrine. Atstovas tėkmės citometrijos rezultatas parodė, kad ląstelės gydytiems su z-VAD-FMK stipriai sumažintas tetrandrine sukeltos apoptozės ir kad buvo aptiktas (4C paveikslas) tik nedidelis skaičius apoptozinių ląstelių. Be to, mes išnagrinėjo išraiška lygį citoplazmos citochromo C
, kuris išsiskiria iš mitochondrijų į citoplazmą apoptozės metu veikė apoptozės proteazės aktyvavimo faktoriaus-1 (aPAF-1), didinant privalomas Apaf- nuo 1 iki ATP /dATF, ir sukeliama kaspazė-9-priklauso nuo aktyvinimo kaspazės-3 [20-22]. Buvo nustatyta, kad tetrandrine žymiai padidino citoplazmos citochromo išraišką C parsisiųsti ir aPAF-1 bgc-823 ląstelių dozės priklausomu būdu (4d pav.) Kartu šie rezultatai parodė, kad mitochondrijos tarpininkaujant kaspazės kaskados kelias buvo įtrauktas į tetrandrine sukeltos apoptozės.

Anti-auglys tetrandrine poveikis bgc-823 nuogas pelės audiniuose,

Nuo tetrandrine buvo nustatyta ženkliai slopina BGC-823 ląstelių augimą in vitro
, mes ir toliau vertinami priešnavikinis poveikis tetrandrine vivo, pervežimas su nustatytais ksenografiniuose modelių. Kaip parodyta 5A pav, tetrandrine galėtų veiksmingai slopina naviko augimą po 24 dienų gydymą. Pasibaigus 24 dienų pabaigoje, vidutinis naviko apimtys 493.06 mm ^{3 ir 1243.00 mm 3 didelės dozės grupės ir mažos dozės grupėje, atitinkamai, atitinkančio 80.52% ir 50,9% slopinimo norma, palyginti su kontrole grupė. Be to, naviko svoris buvo sumažintas taip, kaip gydymo su tetrandrine iš abiejų koncentracijoms, (5b & Fig 2 lentelę). Šis rezultatas rodo, kad didelė dozė tetrandrine turėjo stipresnį Priešnavikinio poveikį nei maža doze dėl BGC-823 ksenografiniuose modelį.
Grupėje (n = 5)
auglio apimtis (mm 3)
slopinamąjį tarifas (%)
auglio svoris (g)
slopinamąjį tarifas (%)
control2531.78 ± 153.251.194 ± 0.10Tet (40 mg /kg) 1243,00 ± 55,19 ** * 50.900.641 ± 0,06 *** 46.31Tet (120 mg /kg) 493,06 ± 145,63 *** 80.520.298 ± 0,09 *** 75.04Table 2. slopinimas tetrandrine (Tet) naviko augimo nuogas pelių
*** P
. < 0,001 , palyginti
kontrolinė grupė. CSV Atsisiųsti CSV}

Tetrandrine sukeltas apoptozę bgc-823 audiniuose,

imunohistocheminis analizė navikų audiniuose akcizais apmokestinamų nuo BGC-823 xenografted nuogas pelių dar kartą patvirtino, kad apoptozė įvyko per tetrandrine gydytų navikų ir kad mitochondrijų kelias minutę reikšmingas vaidmuo apoptozės metu. Nebuvo penki nuogi pelės kiekvienoje grupėje. Mes pastebėjo, kad BCL-2 ir BCL-XL išraiška sumažėjo, o baltymų lygis Bax, aktyvuotos kaspazės-3, ir aktyvuota kaspaze 9 buvo žymiai sustiprinta tetrandrine (6 paveikslas). Visi šie faktai stipriai patvirtina, kad tetrandrine gali sukelti apoptozę, suderinamas su in vitro pervežimas tyrimas.

Diskusijos

Skrandžio vėžys, ketvirtas dažniausiai diagnozuojama navikas už vėžį plaučių, krūties, storosios žarnos, ir tiesiosios žarnos, sukelia beveik vienas milijonas metines mirčių ir buvo antra priežastis, dėl vėžio susijusio mirtingumo visame pasaulyje [23-26]. Chirurgija, chemoradioterapija ir molekulinės skirta terapija buvo pagrindinis gydymo strategijas skrandžio vėžio [27] gydymą. Nors chirurginis buvo efektyviausias gydomųjų priemonių, rezultatai yra nenuoseklūs ir riboja vėžinių pasikartojimo ir Atsparumas cheminėms. Įprastiniai chemoterapiniai vaistai, kaip PTX, 5-fluorouracilo, ir cisplatina nužudyti vėžinių ląstelių pagal apoptozės sužadinimui ir autofagija; bet naviko ląstelės gali tapti atsparus narkotikų sukeltos apoptozės [17,28,29].

Jis pranešė, kad tetrandrine turi stiprią Priešnavikinio veiklą tiek in vitro, parsisiųsti ir in vivo
daugelyje vėžio ląstelių, tokių kaip A549 žmogaus plaučių karcinoma ląstelių, šlapimo pūslės vėžio ląstelių, storosios žarnos vėžinių ląstelių, hepatomos ląstelių, ir taip toliau [9-12]. Ankstesnis tyrimas parodė, kad tetrandrine gali žaisti daug žadančią vaidmenį sinergetinį sąveika su chemoterapiniais preparatais galbūt jų sinergetinį poveikį sukeliančių apoptozę ir downregulating chemoterapinis agentas susijęs genų MKN-28 ląstelių ir BGC-823 ląstelių [18]. Tačiau tetrandrine mechanizmas žmogaus skrandžio vėžio BGC-823 ląstelių nebuvo identifikuoti. Šiame tyrime mes parodė, kad tetrandrine eksponuojami stiprus priešvėžiniai aktyvumą link žmogaus skrandžio vėžio in vitro parsisiųsti ir vivo
, nušviečiantis pagrindinius veikimo mechanizmai.

Pirmiausia, mūsų rezultatai parodė, kad tetrandrine efektyviai slopinamas BGC-823 ląstelių proliferacija tiriami MTT į dozės ir laiko priklausomu būdu. Tuo tarpu, IC _{50s tetrandrine buvo maždaug 6,1, 4,5 ir 3,7 mikrogramų /ml BGC823 ląsteles 24, 48, ir 72 h, atitinkamai. Pagal ankstesnių tyrimų, chemoterapiniai vaistai nužudyti solidinių navikų daugiausia skatinančius apoptozę [30-32]. Mes nustatėme, kad apoptozė buvo sukeltas tetrandrine į koncentracijos priklausomu būdu per tėkmės citometrijos analizės padidėjo ankstyvųjų apoptozinių ląstelių ir pabaigoje apoptozinių ląstelių skrandžio vėžio BGC-823 ląstelių.}

žinduolių ląstelėse, apoptozė gali būti sukeltas išorinė kelias aktyvuojamas mirties receptorius ir vidinės kelio reglamentuoja BCL-2 šeimos nariai ir kaspazės kaskadomis į mitochondrijų [33,34]. Mūsų tyrimo duomenimis, tetrandrine padidino proapoptozinis baltymų Bax, Bad išraiška, ir Bak ir sumažėjęs baltymų lygius BCL-2 ir BCL-XL. Todėl, padidėjęs santykis anti- ir proapoptotinį baltymų raiškos, pavyzdžiui, Bax /Bcl-2 santykis, sukeltų mitochondrijų membranos potencialo praradimą. Sutrikimus Mitochondrija spaudai citochromo C
, kuris kaupiasi citozolyje ir sudaro kompleksą su aPAF-1. Į vidinę būdo, kaip efektoriaus, kaspazės-3 yra skaldyti aktyvavimo kaspazės-9 [35-37]. Šiame tyrime mes parodėme, kad kaspazės-9 ir kaspazės-3 buvo aktyvuota tetrandrine. Visos kaspazės inhibitorius Z-VAD-FMK sumažintas apoptozė į bgc-823 ląstelių, nurodant, kad mitochondrijų kelias vaidina pagrindinį vaidmenį tetrandrine sukeltos apoptozės.

Jis pranešė, kad tetrandrine gali pakeisti atsparumas daugeliui chemoterapijos vaistai, tokie kaip PTX ir doksorubicino į KBv200 ir K562 nude pelės ksenografiniuose modeliai [38,39]. Tetrandrine taip pat turi stiprų gebėjimą slopinti angiogenezę gliomose žiurkių [40]. Be to, mūsų rezultatai rodo, kad tetrandrine eksponuojami stiprus anti-vėžinių aktyvumą slopina naviko augimą ir sukelia apoptozę nustatyta BGC-823 nuogas pelės ksenografiniuose modelį.

Taigi, mūsų duomenys parodė, kad tetrandrine gerokai sukeltos apoptozę žmogaus skrandžio vėžio BGC-823 ląstelės ir jos nuogas pelės ksenografiniuose modeliai. Tetrandrine sukeltos apoptozės buvo susijęs su aktyvavimo būdingą apoptozės keliu. Remiantis šiais rezultatais, tetrandrine gali turėti didelį potencialą žmogaus skrandžio vėžio gydymo ateityje.

Padėka

Mes norėtume padėkoti nariams klinikinės medicinos departamento Jiangsu universiteto už savo techninė pagalba.

• PLoS ONE: SULF2 Metilinimas yra susijęs su in vitro Cisplatin jautrumas ir klinikinio veiksmingumo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, gydomiems modifikuotą FOLFOX Regimen
• PLoS ONE: Down reguliavimas Claudin-18 yra susijęs su proliferacijos ir invazinių potencialo skrandžio vėžio į Invazinių Front