Plos ONE: Tetrandrine povzroča Mitohondrij-posredovana apoptozo v Human želodca raka BGC-823 celice

Povzetek

Tetrandrine, bis-benzylisoquinoline alkaloid izolirali iz posušene korenine Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore), je bila poročali, da ima učinke proti raku na številnih tumorjev. V tej študiji smo raziskovali-tetrandrine inducirano apoptozo o raku človeške želodčne BGC-823 celic in vitro
in in vivo
. Rezultati so pokazali, da tetrandrine močno zaviral viabilnost celic na od odmerka in časovno odvisni način in inducirane apoptoze. To je povečalo apoptozo; Povecanje za Bax, Bak, in Bad; in downregulation za Bcl-2 in Bcl-XL BGC-823 celic. Poleg tega tetrandrine povečala aktivacije kaspaze-3 in 9, sprostitev citokroma c
in uravnavanjem aPAF-1, kar pomeni, da-tetrandrine povzroča apoptozo je bilo povezano s mitohondrijske poti. Medtem, predobdelava s pan-kaspaze zaviralcev z-VAD-fmk v BGC-823 celic zmanjšanih-tetrandrine inducirano apoptozo tako, da zavira aktivacijo kaspazah. Poleg tega tetrandrine učinkovito inhibira rast tumorjev preko apoptoze indukcije, ki je bila preverjena s imunohistokemičnim analizo v golih modelu miši ksenotransplantskih. Skupaj, smo ugotovili, da tetrandrine pomembno zavirala širjenje raka želodca BGC-823 celic z mitohondriji odvisna od apoptoze, ki lahko igrajo obetavno vlogo pri zdravljenju raka želodca

Navedba. Qin R, Shen H, Cao Y, Fang Y Li H, Chen Q, et al. (2013) Tetrandrine inducira Mitohondrij-posredovana Apoptoza v človekove želodca Rak BGC-823 celic. PLoS ONE 8 (10): e76486. doi: 10,1371 /journal.pone.0076486

Urednik: Lucia R. Languino, Thomas Jefferson University, Združene države Amerike

Prejeto: 16. december 2012; Sprejeto: 27. avgust 2013; Objavljeno: 1. oktober 2013

Copyright: © 2013 Qin et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je bila podprta z naslednjimi donacij: nepovratna sredstva iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (81070423 in 81101677), donacij iz Natural Science Foundation provinci Jiangsu (BK 2.010.332). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Kitajske, rak želodca, eden izmed najpogostejših malignih tumorjev, ki izhajajo iz akumulacije genetskih in epigenetskih dogodke, še vedno visoko pogostost in smrtnost [1-3]. Obstaja več dejavnikov, ki povzročajo nastanek raka želodca, kot Helicobacter pylori
okužba, prehrana, uporaba tobaka in tako naprej [4]. Odvisno od okoliščin, večina bolnikov z rakom želodca potrebna operacija, kemoterapija in /ali kemoradioterapijo [5]. Predhodne študije so pokazale, da je rak želodca kompleksna genetska bolezen povezana z onkogenov ali tumorske dušilne člene [6].

Tetrandrine (C _{38H 42N 2O 6, MW 622,730 ) je bis-benzylisoquinoline alkaloid izolirali iz posušene korenine Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore). V zadnjem času so raznolike biološke aktivnosti tetrandrine so intenzivno raziskovali zaradi njegove široke uporabe pri artritisu, aritmija, vnetje, silikozo, različnih vrst tumorjev, in obratno odpornost več drog [7,8]. Sporočeno je, da ima tetrandrine pomembno vplivali na tumorjev, vključno upočasnjuje rast tumorjev in povečuje čas preživetja živali in stopnjo preživetja [9-12]. Tetrandrine povzroči blokado s G1 celičnega cikla in inducira apoptozo v različnih vrstah celic. Vendar pa natančne mehanizme, s katerimi tetrandrine izvedenih apoptozo in zavirajo rast celic v želodčnih tumorskih celicah, še vedno nejasna [13]. Poročali so, da lahko codelivery paklitaksela (PTX) in tetrandrine z nanodelci učinkovito povečati citotoksičnost PTX z zaporednim zaviranjem ROS odvisni Akt poti in aktivacije apoptotičnih poti, ki temelji na oksidacijskem terapiji proti raku želodca [14]. Vendar, kot terapevtsko sredstvo, PTX neizogibno resne stranske učinke, ki nastanejo zaradi svojih nespecifičnih toksičnih učinkov in posebnih topil in tumorskih celic lahko postanejo bolj odporne na PTX-inducirane apoptoze [15-17]. Prejšnja študija je pokazala, da ima tetrandrine sinergistični učinek z kemoterapevtikov na apoptozo želodčnega raka celičnih linij [18]. Poleg tega je derivat (H1) za tetrandrine izvaja dober anti-mnogovrstnimi aktivnost odpornost z uvedbo notranjo apoptozo poti in inhibira aktivacijo Erk1 /2 in Akt1 /2 [19]. Te ugotovitve kažejo, da bi lahko tetrandrine zamenjati PTX kot prvi liniji kemoterapijo raka želodca.}

Ker tetrandrine ima velik potencial pri zdravljenju raka, je pomembno, da preuči sistematično za razumevanje mehanizma. Zato se v tej študiji smo raziskovali možne mehanizme tetrandrine na človeške želodčne rakave celice in vitro
in vivo
.

Materiali in metode

materiali in reagenti

Tetrandrine je bilo pridobljeno iz Jiangxi Yintao Pharmaceutical Development Company (Jiangxi, Kitajska). Protitelesa so bili pridobljeni iz naslednjih virov: protitelesa proti Bcl-2, Bax, Bcl-XL, kaspaze-3, -8, -9, citokrom c
, aPAF-1 in β-aktina so Božičkov Cruz Biotechnology (santa Cruz, CA, ZDA); anti-Bad in Bak je bilo iz Bioworld tehnologijo (Louis Park St., MN, ZDA). Reagent kit Trizol je bila kupljena od Invitrogen (Grand Island, NY, ZDA). MTT (3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolijevega bromid) smo kupili pri Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ZDA).

celične kulture

človeško raka celična linija želodca BGC-823 je bila kupljena od Shanghai Cell Biology, kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska). Celice gojimo v Dulbeccovem modificiranem mediju Eagle stranke (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY, ZDA), dopolnjen z 10% fetalnim bovinim serumom (Hyclone, Logan, UT, ZDA), 1% penicilin in 1% streptomicin je z navlaženi atmosferi s 95% zraka in 5% CO _{2 pri 37 ° C.}

preživetja celic vsebnosti

preživetja celic je bila merjena z MTT testom. Na kratko smo celice zasejali v 96 vdolbinami z gostoto 1 x 10 ^{4 celic /jamico. Po 36 urah smo celice obdelali z ali brez tetrandrine različnih koncentracij za 24, 48 in 72 ur; in fosfatni pufer s soljo (PBS) je služila kot negativno kontrolo. Nato 20 ul raztopine barvila MTT (0,5 mg /ml, raztopimo v PBS in filtrirali skozi 0,2 mm membrano) dodamo v vsako vdolbino in inkubiramo pri 37 ° C 4 ure. Zatem je bilo 150 ul dimetilsulfoksida dodamo v vsako vdolbino in plošče inkubiramo pri 37 ° C dodatnih 10 minut. Absorbanco smo merili pri 490 nm z uporabo 96-dobro mikroploščnem čitalniku. IC _{50 vrednost je definirana kot koncentracija zdravila, ki inhibira 50% rast celic v primerjavi s kontrolo.}}

Western blotting

želodcu rakave celice smo dvakrat izprali s PBS in nato 100 ul RIPA liznega pufra (Beyotime, Kitajska) dodamo v vsako vdolbino, da liziramo celice za približno 20 minut. Naslednja zmes centrifugirali pri 12.000 g
15 minut in supernatantu zberemo. Koncentracijo proteina smo zaznali z uporabo BCA protein analiznega kompleta (Beyotime, Kitajska) v skladu z navodili proizvajalca. Skupaj protein smo ločili s SDS-PAGE na 8%, 10% in 12% poliakrilamidnih gelov in elektroforetsko prenese na poliviniliden difluorida (PVDF) membrane (Millipore, Bedford, MA, ZDA). Po blokiranje 2 h ali preko noči pri 5% suhe nemastnega mleka (raztopljenega v Tris-pufer-Tween 20 blažilnik; TBST) smo membrane inkubirali s primarnimi protitelesi (1: 500-1: 1000 razredčenja) 2 uri pri sobna temperatura ali preko noči pri 4 ° C in nato sprali trikrat s TBST (5 mM Tris-HCl, pH 7,4, 136 mM NaCl, 0,1% Tween 20), pred reakcijo s hrenovo peroksidazo (HRP) označenih s sekundarnih protiteles (1: 5000 -1: 10.000) za 1 h pri sobni temperaturi. Po trikratnem spiranju za vsako s TBST 10 minutah smo membrane obdelamo z ECL Western blot Detection Reagent.

Kvantitativna realnem času verižne reakcije s polimerazo

Skupna celični RNA smo izolirali ob uporabi TRIzola reagenta ( Invitrogen) po protokolu za proizvodnjo in raztopimo v-DEPC obdelani vodi. Koncentracija celotnega RNA je bila izmerjena z UV absorbance. Reverzno transkripcijo smo izvedli s pomočjo RevertAid ™ First Strand cDNA zbirno Kit (Fermentas tržnih instrumentov, Waltham, MA, ZDA) po protokolu proizvajalca. Novo sintetizirali cDNA smo pomnožili s verižni reakciji s polimerazo (Fermentas). Sekvence vsako netilko uporabljene v tej študiji, so prikazani v tabeli 1. veriga polimerazo reakcijski pogoji so naslednji: 95 ° C za 3 min, 95 ° C za 5 minut, 58 ° C za 30 min in 72 ° C 30 min, čemur sledi 40 ciklov pri 94 ° C 15 sekund in 60 ° C 1 min. Vse teste smo izvedli v treh izvodih.
Gene
oligonukleotidni (5 'do 3')
protismerni oligonukleotidni (5 'do 3’)
bcl-2GGATCCAGGATAACGGAGGCCCAGATAGGCACCCAGGGTbaxACCAAGAAGCTGAGCGAGTGTACAAACATGGTCACGGTCTGCbclxlGGCAGGCGACGAGTTTGACCCATCCCGGAAGAGTTCATβ-actinTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCATable 1. Zaporedja primerji za gene uporabljene v tej študiji.
CSV prenos CSV

vezavo aneksin V-propidijevim jodidom vsebnosti

Na kratko smo celice zasejali v 6 vdolbinami in obdelamo z različnimi koncentracije tetrandrine za 24 ur, in PBS služil kot negativno kontrolo. Nato smo celice resuspendirali v 500 ul hladnega vezavnega pufra. suspenzije celic smo obarvali proti aneksin-v in propidijevim jodidom (BD Pharmingen ^{TM, Becton Dickinson, San Jose, CA, ZDA) po navodilih proizvajalca, nato pa citometrija analizo smo izvedli s FACS (Coulter, Becton Dickinson).}

kaspazne-3 aktivnost test

na kratko, celice inkubiramo v 6 vdolbinami pri koncentraciji 4 x 10 ^{5 /jamico in obdelamo z navedeno koncentracijo zdravila. enak volumen PBS smo uporabili kot negativno kontrolo. kaspazne-3 aktivnost je bila izmerjena z uporabo kaspaze-3 aktivnosti test kit (Beyotime, Kitajska), po navodilih proizvajalca. Absorbanco smo nato merjena pri 405 nm z uporabo mikroploščnem čitalniku. Vse poskuse smo izvajali v treh izvodih.}

Etika izjava

Postopki, ki vključujejo živali in njihovo oskrbo so bile izvedene v skladu s smernicami NIH (NIH Pub. No.85-23, revidiran 1996) in je odobril odbor za živali Nega in uporabo odvisnih Ljudske bolnišnica, Jiangsu univerzi.

poskusi na živalih

Female nude miši (BALB /c nu /nu), stare 4-6 tednov, smo pridobili iz poskusnega centra živali kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska) in se hranijo pod posebnimi pogoji, brez patogenov v biološkem omari v objektu laboratorij živali Univerze Jiangsu. Živali smo vzdrževali pri 12-h svetlobe in teme cikla. Sobna temperatura vzdržuje na približno 20 ° C in vlažnost je bila v sobi z dobavo filtriranega zraka hranijo na približno 50%.

obdelava Tetrandrine od podkožnih BGC-823 tumorjev pri miših

Da bi ugotovili, BALB /c miši ksenogenskega model človeškega raka želodca BGC-823 celic pri koncentraciji 5,0 x 106/150 ul smo injicirali v desnega krila vsakega BALB /c golih miši. Približno 10 dni kasneje (velikost tumorja dosegla 120-150 mm3), je bilo golih miši naključno razdelili v tri skupine (N = 5) in ob naslednji postopki: nadzor (obdelane z fiziološke raztopine), majhna skupina odmerek (zdravljenih z 40 mg /kg tetrandrine), in skupina z velikim odmerkom (zdravljenih s 120 mg /kg tetrandrine). BALB /c miši smo intraperitonealno vbrizgali tetrandrine (200 ul, 40 mg /kg ali 120 mg /kg) ali enako količino fiziološke raztopine, enkrat na dan za 3 tedne, v tem zaporedju. Velikost tumorja smo merili vsakih 3 dni v dveh pravokotnih dimenzij z Vernier in volumen tumorja (TV) smo izračunali po formuli: TV = dolžina (mm) x širina ^{2 (mm 2) x 0,5 . Relativna količina tumor (RTV) je bila izračunana v skladu z naslednjo formulo: RTV = TV _{t /TV 0, kjer je 0 je TV prostornina tumor na dan 0 in TV t je tumor obseg v danem dan t. Medtem, smo živali stehtali dvakrat tedensko. Na koncu poskusa smo tumorje izrežemo in fiksirana s formalinom za nadaljnjo analizo.}}

Imunohistokemično analiza

Vzorci-parafin vgrajeni izrezali iz BGC-823 golih miši smo obarvali z naslednjimi protiteles : Bcl-2 in Bax (Boster), Bcl-xl, aktivira kaspaze-3, in aktivira kaspaze-9 (santa Cruz) za imunohistokemijo. Slike so bile posnete s fluorescenčno mikroskopu (Carl Zeiss).

Statistična analiza

Vsi eksperimenti so bili izvedeni vsaj trikrat, in vsi podatki, ki so bili predstavljeni kot sredstvo ± standardni odklon (SD). Statistične razlike smo določili z enosmerno ANOVA pomočjo SPSS 16,0 programske opreme. P vrednost manjša od 0,05 je bila ocenjena kot pomembna.

Rezultati

citotoksični učinek tetrandrine na BGC-823 celic

Kemična sestava tetrandrine je prikazano na sliki 1A. Anti-proliferativni učinek tetrandrine so raziskovali v BGC-823 celic z uporabo MTT testom. Kot je prikazano na sliki 1B, smo celice obdelamo 24, 48 in 72 ur z različnimi koncentracijami tetrandrine. Tetrandrine je bilo ugotovljeno, da znatno zavira rast BGC-823 celic od odmerka in časovno odvisni način. BGC-823 celice smo močno zavira tetrandrine pri 10 ug /ml ( P
< 0,05). IC _{50 vrednost je 6,104 ± 0,786, 4,471 ± 0,650 in 3,744 ± 0,573 po 24, 48 in 72 urah zdravljenja tetrandrine oz. Tako je bilo 6, 8, 10 ug /ml določimo kot reprezentativne koncentracije v naslednjih študijah.}

Indukcija apoptoze s tetrandrine

Tetrandrine-posredovane sposobnosti proti raku so poročali povezana z apoptozo [9-12]. Skladno s tem smo raziskali sposobnost-tetrandrine inducirano apoptozo BGC-823 celicah pomočjo pretočne citometrije testu. Merjena s pretočno citometrijo, so učinki tetrandrine na BGC-823 celične apoptoze prikazano na sliki 2A in B, tetrandrine zdravljenja v 24-urnih na 0, 6, 8 in 10 ug /ml za posledico 4,35%, 11,4% , 17,72% in 32,34% od apoptotskih celic, v tem zaporedju, in tetrandrine (8 ug /ml) za 0, 12, 24 in 48 ur za posledico 3,4%, 6,64%, 19.15% in 25,85% od apoptotskih celic oz (slika 2C in D). Ti podatki jasno pokazala, da tetrandrine inducirano apoptozo v BGC-823 celic od odmerka in časovno odvisni način. Število apoptotskih celic povečal skupaj s časom koncentracije in zdravljenja tetrandrine.

Tetrandrine posredovano izraz Bcl-2 družinske člane

Da bi raziskali več posebnega mehanizma za indukcijo apoptoze v BGC -823 celic po tetrandrine, smo zaznali izražanje, povezanih z apoptoze proteinov z metodo Western blot in njihovo raven mRNA, ki ga v realnem času (RT) -PCR. Tukaj smo raziskovali izražanje Bax, Bad, Bak, Bcl-2 in Bcl-xl v celicah BGC-823, zdravljenih z tetrandrine. Po 24 urah izpostavljenosti tetrandrine, Bax, Bad in Bak protein izraz je v odvisnosti od odmerka povečal, medtem ko je Bcl-2 in Bcl-xl protein izraz odmerka odvisno znižal (slika 3A). Prav tako smo ugotovili, da lahko tetrandrine upregulate izraz Bax in upocasnjujejo ekspresijo Bcl-2 v odvisnosti od časa način (slika 3B). Ugotoviti, ali bi tetrandrine vplivalo na gensko transkripcijo Bcl-2, Bcl-XL in BAX, je bila njihova mRNA izraz pregledal RT-PCR (slika 3C). Rezultati RT-PCR jasno sovpadal s tistimi, predstavljene na sliki 3A.

Tetrandrine inducirano apoptozo preko mitohondrijske poti v 823 BGC celic

Da bi raziskala, ali-tetrandrine inducirane apoptoze je bila povezana z aktiviranje članov kaspaznih, smo izmerili izražanje kaspazah v celicah BGC-823, zdravljenih z različnimi koncentracijami tetrandrine z metodo Western blot. Rezultati so pokazali zvišanje odmerka odvisni od odcepimo kaspaza-3 in odcepimo kaspaza-9 v tetrandrine- obdelanih celic (slika 4A). Vendar nondetectable raven cepljen kaspaze-3 in cepimo kaspaza-9 so našli v celicah v odsotnosti zdravljenja tetrandrine (podatki niso prikazani). Da bi še dodatno opredeliti vlogo aktivacije kaspaze in-tetrandrine inducirane apoptoze, so BGC-823 celice obdelamo s pan-kaspaze zaviralcev z-VAD-fmk (10 mikrometrov) za 4 ure, nato pa obdelamo z 8 ig /ml tetrandrine za 24 h. V primerjavi s kontrolo, so relativne aktivnosti kaspaze-3 v celicah BGC-823, zdravljenih s tetrandrine samo (slika 4B) poveča. Poleg tega je sprostitev citokroma c
bila leta od odmerka odvisen od povečalo za tetrandrine. Predstavnik za pretočno citometrijo rezultat je pokazal, da celice predhodno obdelane z z-VAD-fmk močno znižani tetrandrine inducirane apoptoze in da so odkrili le majhno število apoptotskih celic (slika 4C). Dostavo, smo pregledali nivo ekspresije citoplazemskega citokroma c
, ki se sprošča iz mitohondrije v citoplazmo med apoptoze delovala na apoptotske proteaze aktivira faktor-1 (aPAF-1) tako, da poveča vezavo Apaf- 1 do ATP /dATP in inducirane kaspaza-9-odvisne aktivacija kaspaze-3 [20-22]. Ugotovljeno je bilo, da tetrandrine znatno povečala ekspresijo citoplazemskega citokroma c
in aPAF-1 v BGC 823 celic na način, odvisen od doze (slika 4D). Skupaj, te ugotovitve kažejo, da so a-mitohondriji posredovano kaspaze kaskadno pot vključena v-tetrandrine inducirane apoptoze.

Anti-tumor učinek tetrandrine na BGC-823 golih presadkov miško

Ker tetrandrine je bilo ugotovljeno, pomembno zaviranje rasti BGC-823 celic in vitro
smo dodatno ocenili učinek protitumorsko tetrandrine in vivo
z uveljavljenimi modeli ksenotransplantskih. Kot je prikazano na sliki 5A, lahko tetrandrine učinkovito zavira rast tumorjev po zdravljenju 24 dni. Na koncu 24 dni, so bile povprečne količine tumorske 493.06 mm ^{3 in 1243.00 mm 3 v visoki skupini odmerka in nizke tretirani skupini, v tem zaporedju, ki ustreza 80.52% in 50,9% stopnja inhibicije v primerjavi s kontrolo skupina. Poleg tega se je teža tumorja zmanjša zaradi zdravljenja z tetrandrine na obeh koncentracijah (slika 5B & tabela 2). Ta rezultat je pokazala, da je imel velik odmerek tetrandrine močnejši anti-tumor učinek kot z majhnim odmerkom na BGC-823 ksenotransplantskih modelu.
Skupini (n = 5)
volumen tumorja (mm 3)
Zaviralni Stopnja (%)
težo tumor (g)
Zaviralni Stopnja (%)
control2531.78 ± 153.251.194 ± 0.10Tet (40 mg /kg) 1243,00 ± 55.19 ** * 50.900.641 ± 0,06 *** 46.31Tet (120 mg /kg) 493,06 ± 145,63 *** 80.520.298 ± 0,09 *** 75.04Table 2. Zaviranje tetrandrine (Tet) na rast tumorja golih miših
*** P
. < 0,001 v primerjavi
kontrolna skupina. CSV prenos CSV}

Tetrandrine-inducirano apoptozo v BGC-823 presadkov

analiza Imunohistokemija tumorskih tkiv se izrežejo iz BGC-823 ksenotransplantirali golih miškah je ponovno potrdil, da je prišlo do apoptoza in-tetrandrine zdravljenih tumorjih, da mitohondrijsko pot igre pomembno vlogo pri apoptozi. Bilo je pet golih miši v vsaki skupini. Opazili smo, da je bila ekspresija Bcl-2 in Bcl-XL znižala, medtem ko se količina beljakovin iz Bax, aktivirani kaspaza-3, in aktivira kaspazo 9 so znatno poveča s tetrandrine (slika 6). Vse te ugotovitve močno potrjuje, da tetrandrine lahko povzročijo apoptozo, v skladu s in vitro
študiji.

Pogovor

Rak želodca, četrta najpogosteje diagnosticiran tumor za rakom od pljuč, dojke, debelega črevesa in danke, povzroča skoraj milijon letnih smrti in je bil drugi vzrok smrti, povezanih z rakom po celem svetu [23-26]. Kirurgija, kemoradioterapija in molekularna ciljno terapijo so glavni strategije zdravljenja pri zdravljenju raka želodca [27]. Čeprav je kirurška resekcija bil najbolj učinkovit kurativno zdravljenje, rezultati so v nasprotju omejena z tumorja ponovitve in chemoresistance. Konvencionalne kemoterapevtiki droge, kot PTX, 5-fluorouracila in cisplatina ubiti tumorskih celic z induciranje apoptoze in avtofagija; lahko pa tumorske celice postanejo odporne na apoptozo zaradi droge [17,28,29].

To je poročala, da je tetrandrine močno aktivnost proti tumorjem tako in vitro
in v vivo
v mnogih rakavih celic, kot so A549 humani pljučnih celic karcinoma, raka sečnega mehurja celic, celic raka kolona, ​​hepatomom celic in tako naprej [9-12]. Prejšnja študija je pokazala, da bi lahko tetrandrine igrajo obetavno vlogo, sinergijski interakciji s kemoterapevtiki morebiti njihovih sinergijskih učinkov na indukcijo apoptoze in downregulating kemoterapije-agenta, povezanih genov v MKN-28 celic in BGC-823 celic [18]. Vendar pa se ni izkazalo, da je mehanizem tetrandrine na raka želodca BGC-823 celic. V tej študiji smo dokazali, da tetrandrine razstavljene močno protitumorsko aktivnost proti raku človeške želodčne in vitro
in in vivo
, pojasnjevanje osnovnih mehanizmov delovanja.

Prvič, naša Rezultati so pokazali, da tetrandrine učinkovito inhibira proliferacijo BGC-823 celic analizirali s MTT v odmerka in časovno odvisni način. Medtem, IC _{50s iz tetrandrine bilo približno 6,1, 4,5 in 3,7 ug /ml v BGC823 celic za 24, 48 in 72 ur oz. Po predhodnih študijah, kemoterapevtiki droge ubil solidnih tumorjev predvsem z indukcijo apoptoze [30-32]. Ugotovili smo, da apoptozo bila povzročena z tetrandrine v odvisnosti od koncentracije skozi pretočna citometrija analizo s povečanimi zgodnjih apoptotskih celic in dolgo apoptotskih celic v rakave želodčni BGC-823 celicah.}

V celicah sesalcev, apoptoza lahko sproži zunanja pot aktivira s smrtno receptorjem in intrinzične poti z Bcl-2 družinskim članom in kaspaznih kaskadah v mitohondrijske [33,34] reguliran. V naši raziskavi, tetrandrine povečala izražanje pro-apoptotskih proteinov Bax, Bad in Bak ter zmanjšala raven beljakovin za Bcl-2 in Bcl-xl. Zato povečano razmerje izražanja anti- pro-apoptotske proteina, kot je razmerje Bax /Bcl-2, bi vodila do izgube membranskega potenciala mitohondrijske. Nepravilnega mitohondriji sporočila citokrom c
, ki se nabira v citosolu in tvori kompleks s aPAF-1. Realne poti, kot efektor, ki je kaspaza-3 cepi aktivacije kaspaze-9 [35-37]. V tej raziskavi smo pokazali, da so bile kaspaza-9 in kaspaza-3 aktivira tetrandrine. Inhibitor pan-kaspaze z-VAD-fmk zmanjša apoptoza v 823 BGC celic, kar pomeni, da ima mitohondrijske poti osrednjo vlogo pri-tetrandrine inducirane apoptoze.

To je poročal, da bi tetrandrine povratne odpornost na veliko zdravila za kemoterapijo, kot PTX in doksorubicin v KBv200 in K562 golih modelov miške ksenotransplantskih [38,39]. Tetrandrine ima tudi močno sposobnost, da inhibira angiogenezo v gliomov pri podganah [40]. Poleg tega naši rezultati so pokazali, da tetrandrine razstavljene močno aktivnost proti tumorjem, da zavira rast tumorjev in inducira apoptozo v ustaljeni BGC-823 golih modelu miši ksenotransplantskih.

Skratka, naši podatki pokazali, da tetrandrine bistveno povzroča apoptozo pri človeku rak želodca BGC-823 celice in njene ksenotransplantskih modeli nude miške. Tetrandrine-inducirano apoptozo bila povezana z aktivacijo intrinzično apoptozo poti. Na podlagi teh rezultatov lahko tetrandrine imajo velik potencial pri zdravljenju raka človeškega želodca v prihodnosti.

Priznanja

Radi bi se zahvalil članom klinične medicine oddelka Univerze Jiangsu za njihovo tehnična pomoč.

• Plos ONE: SULF2 metilacije je povezana z vitro cisplatin občutljivost in klinične učinkovitosti za Rak želodca bolnikih, zdravljenih z spremenjenih FOLFOX Regimen
• Plos ONE: Dol-Regulacija Claudin-18 je povezana z proliferacije, in invazivni potencial želodčnega raka na invazivno Front