PLoS ONE: Regelgeving B cel functie wordt onderdrukt door roken en obesitas in H. pylori-geïnfecteerde personen en is gecorreleerd met een verhoogd risico op maagkanker

Abstract

Helicobacter pylori
infectie optreedt in meer dan de helft van de wereldbevolking en is de belangrijkste oorzaak van maagkanker. Een reeks leefstijl en voedingsfactoren, zoals roken, zwaarlijvigheid, is vastgesteld dat het risico op kankerontwikkeling verheffen. In deze studie hebben we getracht de immunologische aspecten tijdens de H
bepalen. pylori
infecties en maag de ontwikkeling van kanker. We vonden dat de B-cellen uit H
. pylori
geïnfecteerde patiënten gepresenteerd veranderde samenstelling en functie in vergelijking met niet-geïnfecteerde patiënten. IL-10 tot expressie CD24 ^{+ CD38 + B-cellen werden opgereguleerd in H
. pylori
geïnfecteerde patiënten, die krachtige regulerende activiteit bij het remmen van T-cel pro-inflammatoire cytokine secretie, en direct gereageerd op H
. pylori
antigen stimulatie. Interessant is dat in H
.
pylori geïnfecteerde patiënten roken en obesitas, het aantal IL-10 + B-cellen en CD24 + CD38 + B-cellen werden verlaagd vergeleken met H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen. Regulerende functies gemedieerd door CD24 + CD38 + B-cellen werden ook aangetast. Bovendien had maagkanker positieve patiënten verminderde IL-10-producerende B-cel frequenties na H
. pylori
-stimulation. Al met al suggereren deze gegevens dat in H
. pylori
-infection, CD24 + CD38 + B-cellen opgereguleerd en speelt een rol bij het onderdrukken van pro-inflammatoire responsen, eventueel door IL-10 productie, een eigenschap die niet werd waargenomen bij rokers en obese patiënten}

Visum:. Li G, H Wulan, Song Z, Paik PA, Tsao ML, Goodman GM, et al. (2015) Wettelijk B Cell Functie wordt onderdrukt door roken en obesitas in de H
. pylori
geïnfecteerde onderwerpen en is gecorreleerd met een verhoogd risico op maagkanker. PLoS ONE 10 (7): e0134591. doi: 10.1371 /journal.pone.0134591

Editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, JAPAN

Ontvangen: 3 februari 2015; Aanvaard: 13 juli 2015; Gepubliceerd: 30 juli 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier

financiering:.. de auteurs hebben geen steun of financiering aan te melden

Competing belangen. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Helicobacter pylori (H
. pylori)
is een soort van Gram-negatieve pathogene bacteriën gevonden in meer dan de helft van de wereldbevolking en bij voorkeur remt het bovenste maag-darmkanaal, waaronder de maag epitheel en de twaalfvingerige darm kanaal [1,2]. Hoewel de overgrote meerderheid (> 80%) van de infecties zijn asymptomatisch, zal 10-20% geïnfecteerde patiënten maagzweren ontwikkelen, terwijl 1-2% maagkanker [3] zal verwerven. Het precieze mechanisme van de ontwikkeling van kanker als gevolg van H
.
pylori infectie is niet goed gedefinieerd, maar chronische ontsteking onbehandeld in het bovenste maagdarmkanaal wordt verondersteld bij te dragen aan de verdere schade aan de maag epitheel [4,5]. Specifiek, met ontsteking geassocieerde signaalmoleculen, zoals tumornecrosefactor-alfa (TNF-a), bleken maag tumorvorming bevorderen en is opgereguleerd in H
. pylori
infectie [6]. Andere pro-inflammatoire cytokinen uitgescheiden door T-cellen, zoals IL-2, IL-17 en interferon gamma (IFN-g), worden ook opgereguleerd in H
. pylori
infectie en worden geassocieerd met een verhoogd risico op het ontstaan ​​van tumoren maag [7-10]. Enkele andere factoren, zoals continue blootstelling aan roken en obesitas, zijn positief gecorreleerd met een verhoogd risico op kanker maag, hoewel het onderliggende mechanisme is onduidelijk [3,11].

Onlangs heeft de rol van tolerance- induceren van B-cellen is het kenmerk een aantal infectieziekten en auto-immuunziekten [12]. Bij muizen CD1d ^{hiCD5 + B-cellen zijn gevonden om vast tolerogene milieu in weefsels en een rol spelen bij het voorkomen van auto-inductie [13]. Bij mensen CD19 + CD24 hiCD38 hi B-cellen hebben dezelfde tolerantie-inducerende rol bij gezonde en HBV-geïnfecteerde individuen [14]; het ontstaan ​​van auto-immuunziekten is gecorreleerd met verlies van regulerende functie in B cel subsets [15]. IL-10 is een pleiotrope immunoregulatoire cytokine dat kan remmen een aantal pro-inflammatoire cytokines, waaronder IL-2, IL-17, IFN-g en TNF-a, en wordt krachtig te onderdrukken de antigeen presenterende capaciteit van antigeenpresenterende cellen [16]. Centraal in alle tolerantie inducerend B cellen, IL-10 productie cruciaal voor cellen gemedieerde regulatie B bij het onderdrukken van T-cel gemedieerde inflammatie [12,17]. De rol van de B-cel-gemedieerde regulering in H
.
pylori infectie en daaropvolgende inductie van maagkanker, echter niet eerder bestudeerd.}

In deze studie hebben we de B-cel samenstelling en cytokine expressieprofiel in H
geanalyseerd . pylori
geïnfecteerde onderwerpen. Verhoogde percentages van CD24 ^{+ CD38 + B-cellen en een verminderde percentages van naïeve B-cellen en rustende geheugen B-cellen werden gevonden in H
. pylor
i-geïnfecteerde patiënten. De CD24 + CD38 + B-cellen in de H
. -pylori geïnfecteerde patiënten had
toegenomen percentage van de IL-10-productie, en had pro-inflammatoire cytokine-expressie onderdrukt als co-gekweekt met autologe T-cellen. H
. pylori-s
timulated CD24 + CD38 + B-cellen uit H
. pylori
geïnfecteerde patiënten krachtig uitgescheiden IL-10. Interessant, H
. -pylori geïnfecteerde roken onderwerpen en obese subects niveaus van CD24 + CD38 + B-cellen had verlaagd. Bovendien, de CD24 + CD38 + regulerende B-cellen in rokers en obese patiënten bleken verlies of onderdrukkende functie vertonen als co-gekweekt met autologe T-cellen en gestimuleerd verlaagde IL-10 na rechtstreekse H
. pylori
stimulatie. Bovendien, in rokers en zwaarlijvige patiënten die later maagkanker ontwikkeld, de frequentie van IL-10-afscheidende B-cellen werden verder verlaagd, in vergelijking met de patiënten die maagkanker ontwikkelden. Al met al, deze gegevens laten zien dat CD24 + CD38 + B-cellen werden opgereguleerd in H
. pylori
geïnfecteerde en had functioneel onderdrukt T-cel inflammatoire cytokine productie. De CD24 + CD38 + B-cellen in de rokers en obese proefpersonen waren echter ongevoelig voor H
. pylori
-stimulation, produceerde minder IL-10, en ontbrak onderdrukkende capaciteit.}

Materialen en methoden

Proefpersonen

Primary perifere bloedmonsters werden verkregen vanaf 55 H
. pylori
geïnfecteerde ulcus-vrije patiënten, waarvan 15 primaire consumenten van tabaksrook en 15 zijn klasse I zwaarlijvig (30 kg /m ^{2 < BMI < 35 kg /m 2 ) onderwerpen, alsook 15 gezonde H
. pylori
-uninfected ulcus-vrije individuen. Personen met chronische blootstelling aan passief roken werden uitgesloten van de studie. Er werden geen significante verschillen met betrekking tot leeftijd, geslacht, en eerdere infectie geschiedenis tussen de studiegroepen werden gevonden. Alle proefpersonen werden gedurende 5 jaar voor de status van de ontwikkeling van kanker. Alle proefpersonen waren niet verwante individuen uit de provincie Henan en de omliggende regio. Patiënten werden aangeworven tussen januari 2008 en december 2013 van The 155 Centraal Ziekenhuis van PLA in China. Controles waren kanker-vrije individuen willekeurig geselecteerd uit een gemeenschap kanker-screening programma voor de vroegtijdige opsporing van kanker in dezelfde regio in dezelfde periode de patiënten werden gerekruteerd uitgevoerd. De respons voor zowel de controles en gevallen was 95%. De selectiecriteria voor gezonde controlepersonen opgenomen kanker-vrije individuen en frequentie matching gevallen geslacht en leeftijd (± 5 jaar). Bij werving, werd geschreven geïnformeerde toestemming verkregen van elk onderwerp en persoonlijke gegevens zoals geslacht, leeftijd, gewicht, lengte en het roken van tabak werden verzameld door middel van een vragenlijst. Niet alle monsters proefpersonen werden in alle experimenten door onvolledige therapietrouw en onvoldoende cellen bij sommige patiënten. Dit onderzoek werd goedgekeurd door de Institutional Review Board van de 155e Centre Hospitalier PLA.}

Monstervoorbereiding

perifeer bloed mononucleaire cellen (PBMC) werden geïsoleerd uit perifeer bloed monsters met standaard Ficoll-Hypaque procedure en direct ingevroren bij -150 ° C tot gebruik, of gebruikt in experimenten onmiddellijk als genoteerd. Regelmatige kweekmedium is RPMI-1640 aangevuld met 10% foetaal runderserum, 5 ml 100 U penicilline /0,1 mg /ml streptomycine en 5 ml 2 mM L-glutamine. Cellen werden gekweekt in 5% CO _{2 bij 37 ° C gedurende de aangegeven tijdsduur.}

celisolatie

T en B-cellen werden geïsoleerd met behulp van menselijke T-cel of B-cel negatief Selection Kit (STEMCELL, Vancouver, Canada), volgende protocollen van de fabrikant. De zuiverheden van T- en B-cel isolatie waren meer dan 94% door middel van flowcytometrie. Voor depletie van CD24 ^{+ CD38 + B-cellen in sommige experimenten werden gezuiverde B-cellen gekleurd met PE antihumaan CD24 APC en antihumaan CD38 gedurende 30 minuten. De cellen werden vervolgens verstuurd naar celsortering wonen en CD24 + CD38 + cellen werden uitgeput. In de hele B-cel setting, waren de totale B-cellen naar de cel te leven zonder het sorteren van de antilichamen}

Flowcytometrie

De volgende anti-humane monoklonale antilichamen werden gebruikt:. IL-10, TNF een (eBioscience, San Diego, CA, USA); CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD24, CD27, CD38 (Biolegend, San Diego, CA, USA); IFN-g (BD Biosciences, San Jose, CA, USA); CD8 (Invitrogen, Grand Island, NY, USA). Gezuiverd humaan IgG (Biolegend, San Diego, CA, USA) werd gebruikt voor Fc-receptoren blokkeren wanneer kleuring populatie met B-cellen. Voor sommige experimenten, forbol-12-myristaat-13-acetaat (PMA, Sigma), ionomycine (Sigma, München, Duitsland), of hitte gedode H
. pylori
(Sigma, München, Duitsland) werden gebruikt om cellen te stimuleren. GolgiStop en GolgiPlug werden 6 uur toegevoegd voorafgaand aan oogsten cel voor intracellulaire kleuring van IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a en IL-10. FlowJo werd gebruikt flowcytometrie analyse.

Luminex test

IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a en IL-10 door T-cellen en B-cellen werden kwantitatief gemeten door multiplex Luminex assay volgende protocollen die door de fabrikant met modificaties (EMD Millipore, Etobicoke, Canada). Een totaal van 2x10 ^{5 T-cellen en /of B-cellen werden uitgeplaat in elk putje van 96-putjes plaat (Corning, Tewksbury, MA, USA). Voor de B-cel stimulatie, warmte gedode H
. pylori
toegevoegd aan de B-cellen, die op de bodem van een 96-well plaat transwell (Corning, Tewksbury, MA) werden uitgeplaat. Voor T-cel stimulatie, het onderste deel van de transwell plaat werd vooraf geïncubeerd met anti-humaan CD3 (OKT3 kloon) gedurende de nacht en gewassen, waarna gezuiverde T cellen werden overgebracht in de plaat. Humaan cytokine invangantilichaam parels werden toegevoegd aan de bovenste kamer van de 96-well plaat Transwell. Twaalf uur later werden de parels geoogst, gewassen en gelezen volgens het protocol van de fabrikant.}

Statistische analyse

D'Agostino en Pearson omnibus normaliteit test werd gebruikt om te onderzoeken of de gegevens normaal werden verspreid. One-way variantieanalyse (ANOVA) werd gebruikt voor vergelijkingen tussen verschillende groepen, gevolgd door testen Dunn's. Student's t-test werd gebruikt voor vergelijkingen tussen twee groepen. Als datasets significant afweek van de normale verdeling, werden niet-parametrische tests die worden gebruikt. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van Prism (GraphPad Software). P < 0,05 werd beschouwd als significant. De resultaten werden getoond als gemiddelde ± S.E.M..

Resultaten

H
. pylori
geïnfecteerde proefpersonen had veranderd circulerende B-cel samenstelling

Om de mogelijke veranderingen in de rol van B-cel responsen in H
analyseren. pylori
infectie en hoe het kan worden beïnvloed door roken en zwaarlijvigheid, 15 gezonde H
. pylori
-uninfected ( H
. pylori
-uninfected) vrijwilligers, 20 H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische rookvrije non-obese (asymptomatische) onderwerpen, 15 H
. pylori
geïnfecteerde roken niet-obese (roken) onderwerpen, en 15 H
. pylori
geïnfecteerde niet-roken obesitas (overgewicht) proefpersonen werden gerekruteerd voor deze studie. De demografische en klinische gegevens zijn samengevat in tabel 1.

Circulerende B-cellen in het perifere bloed van gezonde vrijwilligers bestaan ​​voornamelijk IgD ^{+ CD27 - naïeve B-cellen en CD21 + CD27 + rustende geheugen B-cellen, terwijl in chronische infecties, is er vaak een afname van naïeve B-cellen en rustende geheugen B-cellen, en een toename in CD21 lo geactiveerde B-cellen en CD24 + CD38 + B-cellen [15,18]. We onderzochten eerst de samenstelling van circulerende B-cellen in de H
. pylori
geïnfecteerde onderwerpen. Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMCs) werden gekleurd voor oppervlakte marker expressie direct ex vivo
(figuur 1A). We vonden dat in vergelijking met H
. pylori
-uninfected gezonde proefpersonen, allemaal H
. pylori
geïnfecteerde groepen bevatte lagere percentages van IgD + CD27 - naïeve B-cellen (P < 0,001 voor alle, Fig 1B en 1C). De percentages van CD21 + CD27 + rustende geheugen B-cellen werden verlaagd H
. pylori
geïnfecteerde roken onderwerpen en zwaarlijvige patiënten dan bij gezonde proefpersonen (P < 0,001 voor beide), en het percentage van CD21 + CD27 + B-cellen in obese proefpersonen werd verminderd in vergelijking met H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische patiënten (P < 0,01). Interessant is dat de percentages van CD24 + CD38 + B-cellen werden varieerden tussen de verschillende groepen van H
. pylori
geïnfecteerde onderwerpen. H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen bevatte veel hogere percentages van CD24 + CD38 + B-cellen dan gezonde controles (P < 0,001). Het percentage CD24 + CD38 + B-cellen werd verminderd Bij rokers vergeleken met die bij asymptomatische patiënten (P < 0,05), maar nog steeds hoger dan in gezonde personen (P < 0,001). In obesitas, het percentage CD24 + CD38 + B-cellen was niet significant verschillend van die bij gezonde personen, maar was verlaagd dan in asymptomatische patiënten (P < 0,001)}

H
.
pylori geïnfecteerde patiënten waren gewijzigd B-cel cytokine expressieprofiel

Voorheen werden B-cellen gevonden immuunresponsen versterken of onderdrukken door de productie van een reeks cytokinen met verschillende functies, inclusief voorzieningen inflammatoire cytokines zoals IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-g en TNF-a, en IL-10 en transformerende groeifactor beta (TGF-b) als regulerende cytokinen [19] . Hier, onderzochten we de cytokine expressie van B-cellen in de proefpersonen. We vonden dat de ex vivo
expressie van IL-2, IFN-g en TNF-a door B-cellen werden in H
verhoogd. pylori
geïnfecteerde roken onderwerpen en zwaarlijvige onderwerpen dan die bij gezonde proefpersonen (figuur 2A). Er werden geen significante verschillen gevonden in TGF-b expressie.

CD24 ^{+ CD38 + B-cellen hebben regulerende functies in andere studies en had interessante expressie niveaus in verschillende H
. pylori
geïnfecteerde groepen (figuur 1C). Onderzochten we de intracellulaire cytokine expressie door CD24 + CD38 + B-cellen. Zoals getoond in figuur 2B, de cytokine expressie van CD24 + CD38 + B-cellen verschillend van niet-CD24 + CD38 waren + B-cellen (totale B-cellen minus CD24 + CD38 + B cellen) die niet te produceren hoge niveaus van IFN-g en TNF-a na stimulatie met PMA /ionomycine, maar nemen zeer hoge niveaus van IL-10, zowel onder ongestimuleerde en gestimuleerde omstandigheden. We vergeleken de productie van IL-10 uit verschillende B cellen en vond dat CD24 + CD38 + B-cellen in alle studiegroepen uitgescheiden veel hogere IL-10 dan niet-CD24 + CD38 + B-cellen, zowel onder niet-gestimuleerde omstandigheden en PMA /ionomycine gestimuleerde omstandigheden (figuur 2C). We dus rekening houden met de CD24 + CD38 + fractie als de belangrijkste IL-10-producerende B-cel subgroep. Binnen de H
. pylori
geïnfecteerde groep, asymptomatische proefpersonen had hoger percentage van de IL-10-expressie brengen in CD24 + CD38 + B-cellen dan gezonde proefpersonen terwijl H
. pylori
geïnfecteerde obese patiënten hadden een lagere IL-10 tot expressie cellen in CD24 + CD38 + B-cellen dan asymptomatische patiënten (figuur 2C). We vermenigvuldigt de frequentie van IL-10 + cellen in de CD24 + CD38 + B-cellen het percentage van CD24 + CD38 + cellen in het totaal B cel verkregen het "aantal" IL-10 tot expressie brengende cellen in de B-cellen, en vond dat beide H
.
pylori geïnfecteerde asymptomatische patiënten en rokende proefpersonen hadden hogere niveaus van IL-10 + B-cellen dan gezonde proefpersonen (P < 0,001 en P < 0,01, respectievelijk). Binnen de H
. pylori
geïnfecteerde groep, roken en zwaarlijvigheid significante verlaging van de frequenties van IL-10 + B-cellen (P < 0,001 voor beide). Van asymptomatische proefpersonen}

Al met al, deze gegevens toonde aan dat de regelgeving cytokine IL-10 wordt voornamelijk geproduceerd door CD24 ^{+ CD38 + B-cellen en is verhoogd bij H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen. Roken en obesitas verminderde IL-10 expressie in CD24 + CD38 + B-cellen.}

H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen hadden meer tolerogene activiteit gemedieerd door CD24 + CD38 + B-cellen dan roken en obese proefpersonen

Regulatory B-cellen werden bekend dat T-cel responsen te remmen bij chronische infecties, zoals hepatitis B-infectie en humaan immunodeficiëntie virus infecties [14,20], door het instellen van tolerogene milieu door IL-10 voor de inductie van ontsteking [15,21]. We onderzocht of de IL-10 producerende CD24 ^{+ CD38 + B-cellen had soortgelijke regulerende werking in de H
. pylori
-infection. CD4 + T-cellen co-gekweekt met autologe CD24 + CD38 + - depletie van B-cellen was significant verhoogde productie van IL-2, IL-17, IFN-g en TNF-a, dan CD4 + T-cellen gekweekt samen met hele B-cellen, in de H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische patiënten (figuur 3A). Bij rokers en obese proefpersonen werd een dergelijk effect niet waargenomen. Ook CD8 + T-cellen van H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen co-gekweekt met autologe CD24 + CD38 + - uitgeputte B-cellen aanzienlijk verbeterd IFN-g en TNF-a-uitscheiding dan die samen gekweekt met hele B-cellen ( figuur 3B). Opnieuw werd een dergelijk effect niet waargenomen Bij rokers en zwaarlijvige proefpersonen. De onderdrukking van T-cel cytokine expressie lijkt te worden bemiddeld door CD24 + CD38 + B-cellen, aangezien laagste cytokine productie werd waargenomen in CD4 + en CD8 + T-cellen co-gekweekt met CD24 + CD38 + B-cellen alleen. Al met al deze data aangetoond dat de CD24 + CD38 + B-cellen in de H
. pylori
geïnfecteerde patiënten onderdrukt CD4 + en CD8 + T-cellen pro-inflammatoire cytokines in H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen. Roken en zwaarlijvigheid geremd regulerende acties van CD24 + CD38 + B-cellen.}

IL-10 secretie door CD24 + CD38 + B-cellen bij de H
. pylori
stimulatie in verschillende vakken

We zochten naast het mechanisme van IL-10 opregulatie in de B cellen van H
onderzoeken. pylori
geïnfecteerde onderwerpen. IL-10-productie is van cruciaal belang om de regelgeving B celfunctie [12,13]. Toll-like receptor signalering een belangrijke IL-10 opregulatie mechanisme in B-cellen en bleek cytokine expressie moduleren H
. pylori
infecties [22,23]. We testten of de aanwezigheid van H
. pylori
kan direct upregulate IL-10 secretie in CD24 ^{+ CD38 + B-cellen. Gezuiverde B-cellen uit PBMC werden gekweekt in de afwezigheid of aanwezigheid van hitte gedode H
. pylori
bacterie. Na 72 uur incubatie werd de afscheiding van IL-10 in het supernatant gemeten door Luminex. De B-cellen werden geoogst voor intracellulair IL-10 kleuring. Zoals getoond in figuur 4A, wordt IL-10 secretie in de supernatant verhoogd zowel H
. pylori
-uninfected gezonde proefpersonen en H
. pylori
geïnfecteerde niet-rokers niet-obese asymptomatische proefpersonen na H
. pylori
-stimulation (P < 0,01 en P < 0,05, respectievelijk). Figuur 4B toont dat het percentage van IL-10-afscheidende B-cellen opgereguleerd in CD24 + CD38 + B-cellen na H
. pylori
stimulatie bij gezonde en asymptomatische proefpersonen (P < 0,001 en P < 0,05, respectievelijk). In tegenstelling, de concentratie van IL-10 in het supernatant en het percentage van IL-10-producerende CD24 + CD38 + B-cellen van H
. pylori
geïnfecteerde roken onderwerpen en obese proefpersonen werden niet significant verhoogd na H
. pylori
-infection. Deze gegevens toonden aan dat roken en overgewicht de inductie van IL-10 van B-cellen was verminderd na de H
. pylori
stimulatie, en suggereerde dat gedeeltelijk het verlies van de regulerende functie van CD24 + CD38 + B-cellen van rokers en zwaarlijvige proefpersonen was mogelijk als gevolg van een onvermogen om opwaarts reguleren IL-10 secretie in reactie op bacteriële antigen stimulatie (zie bespreking).}

Maagkanker-positieve patiënten in de H
. pylori
geïnfecteerde roken en H
. pylori
geïnfecteerde obese groepen hadden lagere frequenties van IL-10 ^{+ B-cellen}

Roken en obesitas bekend waren om het risico voor de maag de ontwikkeling van kanker in de verhogen H
. pylori
geïnfecteerde onderwerpen. Omdat roken en overgewicht ook onderdrukt normale regulerende B-cel functies, hebben we onderzocht of deze twee fenomenen waren gekoppeld. We vonden dat in de rokers en obese proefpersonen, die voor maag-status kanker positief werd hadden significant lagere frequenties van IL-10 ^{+ cellen in CD24 + CD38 + B-cellen na H
. pylori
stimulatie dan degenen die negatief zijn gebleven voor de maag de ontwikkeling van kanker (Fig 5A P. ≪ 0,05 voor beide). Aan de andere kant hebben we niet vinden dat kanker positieve en kanker negatieve patiënten waren significant verschillend in termen van hun frequenties van CD24 + CD38 + B-cellen in de totale B-cellen (Figuur 5B). Geen H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische patiënten in deze studie werd maagkanker positief.}

Discussie

H
.
pylori infectie is de belangrijkste oorzaak van het ontstaan ​​van maagkanker. Hoewel de meeste infecties asymptomatisch en behandeld waren, een groep personen faalt behandeling en vooruitgang maagkanker. Bovendien, roken en overgewicht het risico op kankerontwikkeling terwijl de mechanismen niet geheel duidelijk. In deze studie hebben we voor het eerst waargenomen een wijziging in circulerende B-cel samenstelling H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen in vergelijking met niet-geïnfecteerde gezonde proefpersonen, met een vermindering van IgD ^{+ CD27 - naïeve B-cellen en een opregulatie van CD24 + CD38 + B-cellen . De CD24 + CD38 + B-cellen bleken ook de belangrijkste-IL-10 afscheidende B-cel subset. Vervolgens verricht T-cel-B-cel co-cultuur experimenten en vonden dat T-cellen in CD24 + CD38 + B-cel depletie coculturen afgescheiden hogere proinflammatoire cytokines dan T-cellen co-gekweekt met hele B-cellen, terwijl T-cellen gekweekt samen met CD24 + CD38 had + B-cellen alleen de laagste pro-inflammatoire cytokine productie. Verder hebben we ontdekt dat de aanwezigheid van H
. pylori
kon direct verbeteren IL-10-expressie van CD24 + CD38 + B-cellen. Samen vormen deze gegevens toonden aan dat H
. pylori
geïnfecteerde proefpersonen had een frequentie van circulerende CD24 + CD38 + B-cellen, die hoge niveaus van IL-10 tot expressie gebracht en tentoongesteld regulerende functie opgereguleerd. Interessant is dat in H
. pylori
geïnfecteerde roken onderwerpen en obese proefpersonen, de circulerende CD24 + CD38 + B-cellen werden in frequentie verminderd in vergelijking met H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische personen waren niet in staat om te onderdrukken T cel pro-inflammatoire cytokine productie in co-cultuur experimenten, en niet significant upregulate IL-10 expressie na H
. pylori
stimulatie. Daarnaast volgden we de onderwerpen vijf jaar en vervolgens vond dat in vergelijking met maagkanker-positieve patiënten, maagkanker-negatieve patiënten hadden meer IL-10 productie na H
. pylori
stimulatie. Chronische cel destructie en weefselbeschadiging blijvende H
. pylori
infectie waren de belangrijkste factoren die bijdragen aan maagkanker ontwikkeling [24]. Uit de resultaten in dit document, is het mogelijk dat IL-10-expressie verhoogd door B-cellen kan de H
beschermen. pylori
geïnfecteerde patiënten door het verminderen van T-cel-gemedieerde ontsteking en het beperken van weefselbeschadiging, maar in de rokers en obese proefpersonen, de B-cel-gemedieerde bescherming weefsel was niet aanwezig. Meer studies zijn nodig in de toekomst te onderzoeken of de aanwezigheid van IL-10 + B-cellen is gecorreleerd met een verminderde weefselbeschadiging in H
. pylori
infectie. Dit was echter niet mogelijk in deze studie aangezien daarvoor maag weefselmonsters.}

Vermeld is dat roken wordt geassocieerd met verhoogde oxidatieve stress en pro-inflammatoire cytokine afgifte, mogelijk door roken geïnduceerd weefsel schade [25,26]. Obesitas is ook geassocieerd met verhoogde laaggradige, chronische ontsteking [27]. In deze studie hebben we vastgesteld dat H
. pylori
geïnfecteerde roken onderwerpen en obese proefpersonen had minder IL-10 ^{+ B-cellen dan H
. pylori
geïnfecteerde asymptomatische proefpersonen. Vervolgens, anders dan bij asymptomatische patiënten, aanwezigheid van CD24 + CD38 + B-cellen van rokers en obesitas in de T-cel-B-cel co-cultuur niet beperken T cel pro-inflammatoire cytokineproductie. De vermindering in IL-10 productie en het gebrek aan regulerende functie in B-cellen gevolg kan zijn van de algehele toegenomen inflammatoire toestand roken en obesitas. Sterker nog, onze gegevens bleek dat B-cellen uit H
. pylori geïnfecteerde
roken en obesitas, maar niet die van asymptomatische proefpersonen hadden hogere IL-2, IFN-g en TNF-a productie dan B-cellen van geïnfecteerde gezonde personen, hetgeen een vertekening in de richting van een proinflammatoire fenotype. Tegelijkertijd blootstelling aan chronische roken en obesitas bekend te associëren met een verhoogd risico op kanker maag. Tezamen suggereren deze gegevens dat een pro-inflammatoir immuunprofiel in rokers en zwaarlijvige populatie bijdragen aan gastrische kanker.}

Vanwege het gebrek aan regelgeving B celspecifieke transcriptiefactoren en oppervlaktemoleculen, verschillende niet- specifieke sets van de oppervlakte markers, met inbegrip van CD1d ^{hiCD5 +, CD19 + CD24 hiCD38 hi, en CD19 + TIM-1 +, was gebruikt in eerdere studies naar B-cellen met regelgevende activiteiten [15,22,28,29] aan te duiden. In deze studie hebben we ons gericht op CD24 + CD38 + - expressie brengende B-cellen omdat we gevonden dat IL-10 een cruciale cytokine regulerende B-celfunctie, verrijkt in deze subgroep en figuur 3 heeft aangetoond dat deze deelgroep regulerende activiteit in het onderdrukken van T-cel cytokineproductie. Deze keuze van oppervlakmerkers had echter restricties, aangezien CD19 + CD24 hiCD38 hi werden eerder beschreven onvolwassen /overgangs- B-cellen [30,31]. B-cellen kunnen als belangrijke antigeenpresenterende cellen en bleken T cel subpopulatie differentiatie en het handhaven [32] ondersteunen. Op dit moment is het onbekend of CD24 + CD38 + B-cellen in onze studie waren potentieel onrijpe /overgangs- B-cellen, die minder effectief bij antigeenpresentatie kan zijn. Om dit probleem te voorkomen, vergeleken we hele B-cellen met CD24 + CD38 + - uitgeputte B-cellen (beide groepen met volwassen B-cellen in staat zijn "normale" antigen presentatie), en vervolgens opnieuw gestimuleerde T-cellen met anti -CD3 directe T-celreceptor (TCR) activatie. Hoewel we ook een CD24 + CD38 + B-cel-enige groep in de co-cultuur experiment, en vond dat T-cellen in deze co-culturen aanzienlijk had verlaagd pro-inflammatoire cytokine productie dan T-cellen in CD24 + CD38 + B-cel depletie hulpkweken, kunnen we de mogelijkheid dat deze vermindering was wegens de mogelijkheid van defect antigeenpresentatie tijdens de co-kweek, niet uitsluit voorafgaand aan direct TCR activatie.}

de rol van regulerende cellen in het immuunsysteem werd vaak beschouwd als een tweesnijdend zwaard chronische infecties. Enerzijds kan de onderdrukking van ontsteking door regulerende T-cellen en B-cellen overmatige weefselschade gemedieerd door het immuunsysteem te voorkomen. Anderzijds, regulatoire T-cel en B-cel-gemedieerde remming van activering van het immuunsysteem werden verondersteld bij te dragen aan persistentie, effector T-cel uitputting en verlaagd vermogen om infecties te verwijderen pathogeen. Eerder, IL-10-secretie in B-cellen bleek te dragen tot Salmonella typhimurium Kopen en muis borsttumor virus persistentie in muizen en HIV persistentie in mensen [20,33,34]. In deze studie hebben we vastgesteld dat de toevoeging van H
. pylori
kon direct activeren van B-cellen IL-10-productie, maar het is onduidelijk hoe de opregulatie van CD24 ^{+ CD38 kan + B-cellen en IL-10 secretie beïnvloeden H
. pylori
infectie. Of regulerende B-cellen bijdragen aan bacteriële persistentie in H
. pylori
infectie vereist meer studies.}

• PLoS ONE: HIF-1α induceert multidrug resistance bij maagkanker Cellen door het induceren van MiR-27a
• PLoS ONE: Zic1 Promoter Hypermethylering in Plasma DNA is een potentiële biomarker voor maagkanker en intra-epitheliale Neoplasia