helikobakteeri Citation: Li G, Wulan H, Song Z, Paik PA, Tsao ML, Goodman GM, et al. (2015) Regulatory B Cell Toiminto on tukahdutti Tupakointi ja Liikalihavuus H Editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, JAPAN vastaanotettu: 03 helmikuu 2015; Hyväksytty: 13 heinäkuu 2015; Julkaistu: 30 heinäkuu 2015 Copyright: © 2015 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi. rahoitus: kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida. kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole. Johdanto Helicobacter pylori (H Äskettäin rooli tolerance- indusoivan B-solujen on tunnettu useita tartuntatautien ja autoimmuunisairauksien [12]. Hiirillä CD1d hiCD5 + B-solujen on todettu auttaa luomaan tolerogeenistä ympäristön kudoksissa ja on merkitystä estää autoimmuunisairaus induktio [13]. Ihmisillä CD19 + CD24 hiCD38 hi B-solut ovat samanlaisia toleranssia indusoiva rooli terveen sekä HBV-tartunnan saaneista ihmisistä [14]; puhkeamista autoimmuunisairaus korreloi menetys sääntelyn funktion tässä B-solujen osajoukko [15]. IL-10 on pleiotrooppinen immunoregulatorisia sytokiini, joka kykenee inhiboimaan sarjan pro-inflammatoristen sytokiinien, mukaan lukien IL-2, IL-17, IFN-g: n ja TNF-a, ja on osoitettu voimakkaasti tukahduttaa antigeeniä esitteleviä kapasiteetti antigeeniä esitteleviin soluihin [16]. Keski kaikille toleranssin indusoivia B solualaryhmiä, IL-10 tuotanto on keskeinen B soluvälitteistä sääntely tukahduttaa T-soluvälitteinen tulehduksen [12,17]. Rooli B soluvälitteisen sääntelyn H Tässä tutkimuksessa olemme analysoineet B-solujen koostumus ja sytokiiniekspressiota profiili H Tutkittavat Ensisijainen ääreisveren näytteet saatiin 55 H Perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) eristettiin ääreisveren näytteistä standardin Ficoll-Hypaque menettely ja jäädytettiin välittömästi -150 ° C: ssa käyttöön asti, tai kokeissa käytettyjen heti, jos huomattava. Tavanomaisessa viljelyväliaineessa on RPMI-1640, johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia, 5 ml 100 U penisilliiniä /0,1 mg /ml streptomysiiniä, ja 5 ml 2 mM L-glutamiinia. Soluja viljeltiin 5% CO 2 37 ° C: ssa määrätyn ajan. T- ja B-solut eristettiin käyttäen ihmisen T-solu- tai B Negatiivinen valinta Kit (StemCell, Vancouver, Kanada), seuraavia protokollia valmistajan toimittamat. Puhtauksien T- ja B-solujen eristäminen olivat suurempia kuin 94% virtaussytometrialla. Sillä ehtyminen CD24 + CD38 + B-solujen Joissakin kokeissa puhdistettiin B-solut värjättiin PE anti-humaani-CD24 ja APC anti-humaani-CD38: ssa 30 min. Sitten solut lähetetään asumaan solulajittelulla ja CD24 + CD38 + solut köyhdytetty. Koko B-solujen ympäristössä, koko B-solut lähetetään asumaan solulaji ilman vasta-aineita. Seuraavat anti-ihmisen monoklonaalisia vasta-aineita käytettiin: IL-10, TNF- a kappale (eBioscience, San Diego, CA, USA); CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD24, CD27, CD38 (Biolegend, San Diego, CA, USA); IFN-g (BD Biosciences, San Jose, CA, USA); CD8 (Invitrogen, Grand Island, NY, USA). Puhdistettua ihmisen IgG: tä (Biolegend, San Diego, CA, USA) käytettiin estämään Fc-reseptoreihin, kun värjäys populaatiot, jotka sisältävät B-soluja. Joillekin kokeissa forboli-12-myristaatti-13-asetaatti (PMA, Sigma), ionomysiinillä (Sigma, Munich, Saksa), tai lämmöllä tapettuja H IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a ja IL-10-T-soluista ja B-solut mitataan määrällisesti by multiplex Luminex määrityksen seuraavia protokollia valmistaja toimittanut muutoksin (EMD Millipore, Etobicoke, Kanada). Yhteensä 2x10 5 T-solujen ja /tai B-solut maljattiin kuhunkin kuoppaan 96-kuoppaisella levyllä (Corning, Andover, MA, USA). Saat B-solujen stimulaation, lämmöllä tapettuja H D'Agostino ja Pearson laadut normaaliuden testiä käytettiin tutkimaan onko tiedot normaalisti jakautunut. Yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA) käytettiin vertailua useita ryhmiä, jota seuraa Dunnin testillä. Studentin t-testiä käytettiin vertailuissa kahden ryhmän välillä. Jos aineistot huomattavasti poikkesi normaalijakaumasta, nonparametric testejä käytettiin. Kaikki tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen Prism (GraphPad Software). P < 0,05 pidettiin merkittävänä. Tulokset on esitetty keskiarvona ± SEM. H analysoitava mahdollisia muutoksia rooli B-solujen vasteita H Kiertävä B soluja ääreisveren terveiden koostuvat pääasiassa IgD + CD27 - naiivi B-solujen ja CD21 + CD27 + lepäävät B-muistisolujen, kun kroonisia infektioita, on usein lasku naiivi B-soluissa ja lepäävät B-muistisolujen, ja kasvu CD21 lo aktivoida B-soluja ja CD24 + CD38 + B-solujen [15,18]. Ensin tarkasteltiin koostumus kiertävien B-solujen H Aiemmin B-solujen havaittiin monistamiseen tai tukahduttaa immuunivaste kautta sarjatuotantoa sytokiinien eri toimintoja, kuten pro- inflammatoristen sytokiinien, kuten IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-g: n ja TNF-a, sekä IL-10 ja transformoiva kasvutekijä beeta (TGF-b) sääntelyn sytokiinit [19] . Täällä, tutkimme sytokiiniekspressiota B-solujen tutkimuksessa koehenkilöillä. Olemme havainneet, että ex vivo CD24 + CD38 + B solut ovat Sääntelytehtävät muissa tutkimuksissa ja oli mielenkiintoista ekspressiotasot erilaisissa H Kaikki yhdessä, nämä tiedot osoittivat, että sääntelyn sytokiini IL-10 on pääasiassa tuotetaan CD24 + CD38 + B-solujen ja on lisääntynyt H Regulatory B-soluja, joiden tiedetään estävän T-soluvasteita kroonisessa infektiot, kuten hepatiitti B-infektio ja ihmisen immuunikatovirus infektion [14,20], luomalla tolerogeenistä ympäristön IL-10 ennen induktioon tulehduksen [15,21]. Tutkimme, onko IL-10 tuottavat CD24 + CD38 + B-solujen oli samanlaisia sääntelyn vaikutukset H vieressä pyrittiin tutkimaan mekanismi IL-10 säätelyyn ylöspäin B-solujen H
infektio esiintyy yli puolet maailman väestöstä ja on tärkein syy mahasyövän. Sarja elämäntapa ja ravitsemukselliset tekijät, kuten tupakointi ja ylipaino, on todettu nostaa riskiä syövän kehittymisen. Tässä tutkimuksessa olemme pyrkineet määrittämään immunologisten näkökohtia aikana H
. pylori
infektio ja mahalaukun syövän kehitystä. Olemme havainneet, että B-solujen H
. pylori
infektoiduista potilaista muuttunut koostumus ja toimintaa verrattuna infektoimattomiin potilaille. IL-10-ilmentävien CD24 + CD38 + B solut yläreguloituja H
. pylori
infektoiduista potilaista, jotka sisältyvät voimakas sääntely aktiivisuutta estämällä T-solujen tulehdusta edistävä sytokiini erityksen, ja vastasi suoraan H
. pylori
antigeenin stimulaatiota. Mielenkiintoista on, että H
. pylori
tartunnan tupakointi aiheita ja lihavilla määrä IL-10 + B-solujen ja CD24 + CD38 + B solut pienempi verrattuna H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista. Sääntelytoiminnot välittyy CD24 + CD38 + B-solut myös heikentynyt. Lisäksi mahasyövän positiivisilla potilailla oli vähentänyt IL-10-tuottavien B-solujen taajuuksia jälkeen H
. pylori
stimulaatio. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot viittaavat siihen, että H
. pylori
infektiosta, CD24 + CD38 + B-solujen ylössäädellään ja sillä on merkitystä tukahduttaa pro-tulehdusreaktioita, mahdollisesti IL-10: n tuotantoa, on ominaisuus, jota ei havaittu tupakoinnin ja lihavilla potilailla.
. pylori
infektoituihin aiheet ja korreloi kohonnut mahasyövän. PLoS ONE 10 (7): e0134591. doi: 10,1371 /journal.pone.0134591
. pylori) B on eräänlainen gram-negatiivisten patogeenisten bakteerien löytyi yli puolet maailman väestöstä ja inhiboi ensisijaisesti ruoansulatuskanavan yläosassa, kuten mahalaukussa epiteelin ja pohjukaissuolen suolikanavan [1,2]. Vaikka suurin osa (> 80%) infektiot ovat oireettomia, 10-20% infektion saaneilla kehittyy mahahaava taas 1-2% hankkii mahasyövän [3]. Tarkkaa mekanismia syövän kehityksen seurauksena H
. pylori
infektiota ei ole määritelty hyvin, mutta krooninen hoitamaton tulehdus ruuansulatuskanavan yläosassa ajatellaan edistää jatkuvaa vahinkoa vatsan epiteelin [4,5]. Erityisesti, tulehdukseen liittyvä molekyylejä, kuten tuumorinekroositekijä-alfa (TNF-a), on havaittu edistävän mahalaukun tuumorigeneesiin ja esiintyminen lisääntyy H
. pylori
infektio [6]. Muut proinflammatoristen sytokiinien erittävät T-soluja, mukaan lukien IL-2, IL-17, ja interferoni-gamma (IFN-g), myös yläreguloituja H
. pylori
infektion ja liittyy lisääntynyt riski mahalaukun tumorigeneesin [7-10]. Joukko muita tekijöitä, kuten jatkuva altistuminen tupakoinnin ja liikalihavuuden, korreloivat positiivisesti lisääntynyt mahalaukun syövän riski, vaikka taustalla oleva mekanismi on epäselvä [3,11].
. pylori
infektion ja myöhemmän induktio mahalaukun syövän, ei kuitenkaan ollut aiemmin tutkittu.
. pylori
infektoiduista aiheista. Lisääntynyt prosenttiosuudet CD24 + CD38 + B-solujen ja vähentää prosenttiosuudet naiiveja B-soluja ja lepäävät B-muistisolujen löytyivät H
. pylor
i-tartunnan aiheista. CD24 + CD38 + B-solujen H
. pylori-tartunnan potilailla oli
lisääntynyt prosenttiosuus IL-10: n tuotantoa, ja oli tukahdutettu pro-inflammatoristen sytokiinien ilmentymisen, kun viljeltiin yhdessä autologisten T-solujen. H
. pylori-s
timulated CD24 + CD38 + B-solujen H
. pylori
infektion saaneilla voimakkaasti erittyvän IL-10. Mielenkiintoista, H
. pylori-tartunnan tupakoinnin
aiheita ja lihavilla subects olivat alentuneet CD24 + CD38 + B-solujen. Lisäksi CD24 + CD38 + sääntelyn B-solujen tupakointi ja lihavilla todettiin näytteille menetys ehkäisevästä toimintoa viljeltiin yhdessä autologisten T-solujen ja synnyttivät kevyemmästä IL-10 jälkeen suoraan H
. pylori
stimulaatiota. Lisäksi, tupakointi ja lihavilla potilailla, joille myöhemmin kehittyi mahalaukun syöpä, taajuudet IL-10-erittäviä B-soluja edelleen vähentää, verrattuna potilailla, jotka eivät kehittäneet mahalaukun syöpä. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot osoittivat, että CD24 + CD38 + B solut yläreguloituja H
. pylori
infektoiduista ja olivat toiminnallisesti tukahdutti T-solujen inflammatoristen sytokiinien tuotantoa. CD24 + CD38 + B-solujen tupakoitsijoihin ja lihavilla, olivat kuitenkin refraktaarisia H
. pylori
stimulaatio, tuottivat vähemmän IL-10, ja puuttui tukahduttava kapasiteettia.
Materiaalit ja menetelmät
. pylori
infektoiduista haava-vapaa potilasta, joista 15 on ensisijainen kuluttajia tupakansavun ja 15 ovat luokan I lihavia (30 kg /m 2 < BMI < 35 kg /m 2 ) aiheita sekä 15 tervettä H
. pylori
-uninfected haava-vapaiden yksilöiden. Yksilöt, joilla on krooninen altistuminen Vaihtokoneet tupakoinnin suljettiin pois tutkimuksesta. Ei merkittävää eroa iän, sukupuolen, ja edellinen infektio historiaa välillä opintoryhmiä löytynyt. Kaikki koehenkilöt seurattiin 5 vuotta syövän kehityksen tilaa. Kaikki koehenkilöt olivat sukulaisyksilöistä Henanin maakunnassa ja alueen. Potilaat rekrytoitiin välillä tammikuu 2008 ja joulukuu 2013 The 155. keskussairaala PLA Kiinassa. Kontrollit olivat syöpää vapaa henkilöt valitaan satunnaisesti yhteisön Syöpäseulontaohjelman ohjelma syövän varhainen havaitseminen suoritettiin samoilla alueilla samana aikana potilaat rekrytoitiin. Vastausprosentti sekä valvontaa ja tapauksia oli 95%. Valintakriteerit terveiden verrokkien mukana syöpää vapaiden yksilöiden ja taajuus vastaavat tapauksiin sukupuolen ja iän (± 5 vuotta). Tällä rekrytointi, kirjallinen suostumus saatiin kultakin kohteelta ja henkilökohtaisia tietoja, kuten sukupuoli, ikä, paino, pituus ja tupakoinnin kerättiin kyselylomakkeella. Kaikkia aiheita näytteitä käytettiin kaikissa kokeissa epätäydellisestä potilaan hoitomyöntyvyyttä ja riittämätön solujen joillakin potilailla. Tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of 155. keskussairaala PLA.
Näytteen valmistus
Solujen eristämisen
Virtaussytometria
. pylori
(Sigma, Munich, Saksa) käytettiin stimuloimaan soluja. GolgiStop ja GolgiPlug lisättiin 6h ennen solujen keräämistä solunsisäistä värjäystä IL-2, IL-17, IFN-g: n, TNF-a ja IL-10. FlowJo käytettiin virtaussytometria-analyysi.
Luminex määrityksessä
. pylori
lisättiin B-solut, jotka maljattiin alareunassa 96-kuoppaisen transwell levy (Corning, Andover, MA). T-solujen stimulaation, alaosassa Transvvell- levy oli esi-inkuboitiin anti-ihmis-CD3: n (klooni OKT3) yön yli ja pestään, jonka jälkeen puhdistettiin T-solut siirrettiin levyn. Ihmisen sytokiinien capture-vasta helmiä lisättiin ylempään kammioon 96-transwell levylle. Kaksitoista tuntia myöhemmin, helmet otettiin talteen, pestiin ja lukea mukaan valmistajan protokollaa.
Tilastollinen
Tulokset
. pylori
infektoiduista aiheita olivat muokanneet kiertävien B-solujen koostumus
. pylori
infektio ja miten se saattaa vaikuttaa tupakointi ja lihavuus, 15 terveellinen H
. pylori
-uninfected ( H
. pylori
-uninfected) vapaaehtoisilla 20 H
. pylori
infektoituihin oireettomia savuton ei-lihavilla (oireeton) koehenkilöillä, 15 H
. pylori
infektoituihin tupakointi ei-lihavilla (tupakointi) aiheita, ja 15 H
. pylori
infektoiduista savuttomia lihavilla (lihavilla) aiheita rekrytoitiin tähän tutkimukseen. Väestörakenteen ja kliiniset tiedot olivat yhteenveto taulukossa 1.
. pylori
infektoiduista aiheista. Perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) värjättiin pintamerkkiaine ilmaisun suoraan ex vivo
(kuvio 1A). Huomasimme, että verrattaessa H
. pylori
-uninfected terveillä koehenkilöillä, kaikki H
. pylori
infektoiduista ryhmät sisälsivät alemmat prosenttiosuudet IgD + CD27 - naiivi B-solujen (P < 0,001 kaikissa, kuvio 1B ja 1C). Prosenttiosuudet CD21 + CD27 + lepäävät B-muistisolujen vähenivät H
. pylori
infektoiduista tupakointi aiheita ja lihavilla potilailla verrattuna terveisiin henkilöihin (P < 0,001 molemmille), ja prosenttiosuus CD21 + CD27 + B-solujen lihavilla henkilöillä väheni verrattuna H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista (P < 0,01). Mielenkiintoista, prosenttiosuudet CD24 + CD38 + B solut vaihtelivat eri ryhmien H
. pylori
infektoiduista aiheista. H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista sisälsi paljon suurempi prosenttiosuus CD24 + CD38 + B-solujen kuin terveillä verrokeilla (P < 0,001). Prosenttiosuus CD24 + CD38 + B-solujen pienennettiin tupakointi koehenkilöillä verrattuna oireettomilla henkilöillä (P < 0,05), mutta silti korkeampi kuin terveillä koehenkilöillä (P < 0,001). Lihavilla henkilöillä, prosenttiosuus CD24 + CD38 + B-solujen ei ollut merkittävästi erilainen kuin terveillä koehenkilöillä, mutta väheni että oireettomilla henkilöillä (P < 0,001).
H
. pylori
infektoiduista aiheita olivat muuttaneet B-solujen sytokiinien mentymisprofiili
IL-2, IFN-g: n ja TNF-a B-solut lisääntyivät H
. pylori
infektoiduista tupakointi aiheita ja lihavilla kuin terveillä koehenkilöillä (kuvio 2A). Merkittävää eroa ei havaittu TGF-b ilme.
. pylori
infektoiduista ryhmissä (kuvio 1 C). Tutkimme solunsisäistä sytokiiniekspressiota CD24 + CD38 + B-solujen. Kuten on esitetty kuviossa 2B, sytokiinin ilmentymistä CD24 + CD38 + B-soluja eri ei-CD24 + CD38 + B-solut (yhteensä B-solut miinus CD24 + CD38 + B solut), etteivät ne tuottavat suuria määriä IFN-g: n ja TNF-a, kun stimuloidaan PMA /ionomysiinillä, mutta ilmaisi erittäin korkeita IL-10, sekä alle stimuloimattomasta ja kannustanut olosuhteissa. Vertasimme IL-10 eri B-solujen alaryhmiä ja totesi, että CD24 + CD38 + B-solujen kaikissa tutkimusryhmissä erittyy paljon suurempi IL-10 kuin ei-CD24 + CD38 + B-solujen, molemmat alle stimuloimattomasta olosuhteet sekä PMA /ionomysiinistimuloiduissa olosuhteissa (kuvio 2C). Meillä on siis harkita CD24 + CD38 + jae on tärkein IL-10-tuottavat B-solujen alaryhmälle. Sisällä H
. pylori
infektoiduista ryhmä, oireetonta rokotetuista oli suurempi prosenttiosuus IL-10-ilmentävien solujen CD24 + CD38 + B-solujen kuin terveillä koehenkilöillä, kun H
. pylori
infektoituihin lihavilla potilailla oli pienempi IL-10-ilmentävien solujen CD24 + CD38 + B-solujen kuin oireettomilla potilailla (kuvio 2C). Sitten kerrotaan taajuus IL-10 + solujen CD24 + CD38 + B-solujen osuus CD24 + CD38 + solujen koko B-solujen saamiseksi "numero" IL-10-ilmentävien solujen B-solut, ja todettiin, että sekä H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheita ja tupakointi rokotetuista oli korkeampi IL-10 + B-solujen kuin terveillä henkilöillä (P < 0,001 ja P < 0,01, vastaavasti). Sisällä H
. pylori
infektoiduista ryhmä, tupakointi ja lihavuus alensi merkittävästi taajuudet IL-10 + B-solujen (P < 0,001 molemmille) oireettomista aiheista.
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista. Tupakointi ja lihavuus vähensi IL-10 ilmentyminen CD24 + CD38 + B-solujen.
H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheita oli enemmän tolerogeenistä aktiivisuus välittyy CD24 + CD38 + B-solujen kuin tupakointi ja lihavilla
. pylori
infektiosta. CD4 + T-soluja viljeltiin yhdessä autologisten CD24 + CD38 + - köyhdytetty B-solut olivat merkittävästi kohonnut IL-2, IL-17, IFN-g: n ja TNF-a, kuin CD4 + T-soluja viljellään kokonaisilla B-solujen, vuonna H
. pylori
infektoituihin oireettomilla potilailla (kuvio 3A). Tupakoitsijoilla aiheita ja lihavilla, tällaista vaikutusta ei havaittu. Samoin CD8 + T-solujen H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista viljeltiin yhdessä autologisten CD24 + CD38 + - köyhdytetty B-solujen tehostaa merkittävästi IFN-g: n ja TNF-a eritys kuin viljeltiin yhdessä koko B-solujen ( kuvio 3B). Jälleen tällainen vaikutus ei havaittu tupakoinnin aiheita ja lihavilla henkilöillä. Tukahduttaminen T-solujen sytokiinien ekspressio näyttää välittyvän CD24 + CD38 + B-solujen, koska alin sytokiinien tuotantoa havaittiin CD4 + ja CD8 + T-soluja viljeltiin yhdessä CD24 + CD38 + B-solujen yksin. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot osoittivat, että CD24 + CD38 + B-solujen H
. pylori
infektoiduista aiheista tukahdutetaan CD4 + ja CD8 + T-solu proinflammatoristen sytokiinien tuotanto H
. pylori
infektoituihin oireetonta aiheista. Tupakointi ja lihavuus esti sääntelytoimet of CD24 + CD38 + B-solujen.
IL-10 eritystä CD24 + CD38 + B-solujen päälle H
. pylori
stimulaatiota eri aiheista
. pylori
infektoiduista aiheista. IL-10 tuotanto on keskeinen sääntelyn B-solujen toiminta [12,13]. Toll-kaltainen reseptori signalointi on merkittävä IL-10 säätelyyn ylöspäin mekanismin B-soluissa, ja sen osoitettu moduloivan sytokiinien ilmentymisen H
. pylori