PLoS ONE: adenovirusni Dostava EMX2 Gene sprječava rast u ljudskim karcinoma želuca

Sažetak pregled

Pozadina pregled

EMX2 je ljudsko orthologue od Drosophila pregled homeobox gena prazna spiracles da je upleten u embriogeneze. Nedavne studije ukazuju na to da su EMX2 u ljudskim karcinoma; Međutim, uloga EMX2 u karcinogeneze potrebna daljnja istraživanja. pregled

Rezultati pregled

U ovom istraživanju smo izvijestili da je down-regulacija EMX2 izražavanja je značajno korelira s EMX2 promotora Hipermetilacija u raka želuca. Obnavljanje EMX2 izraz koristi sistem za isporuku adenovirus u želučanim staničnim linijama raka nedostaje endogeni EMX2 ekspresiju dovelo do inhibicije proliferacije stanica i Wnt signalnog puta i in vitro i in želučani rak modelu ksenografta in vivo. Osim toga, mi smo opazili da životinje koje su tretirane s adenovirusnim EMX2 ekspresijskog vektora imao značajno bolje preživljavanje od onih tretiranih s praznim adenovirusnog vektora. Pregled

Zaključak

Naša studija pokazuje da je navedena EMX2 tumor supresor za ljudskog raka želuca. Adenovirusne-EMX2 može imati potencijal kao novi genske terapije u liječenju pacijenata s karcinomom želuca pregled

Izvor. Li J, Mo M, Chen Z, Chen Z, Sheng Q, Mu H, et al. (2012) adenovirusni Dostava EMX2 Gene sprječava rast u ljudskim karcinoma želuca. PLoS ONE 7 (9): e45970. doi: 10,1371 /journal.pone.0045970 pregled

Urednik: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan pregled

Primljeno: 13. travnja 2012; Prihvaćeno: 23. kolovoz 2012; Objavljeno: 21. rujna 2012 pregled

Copyright: © Li i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od sredstava iz National Key Osnovni istraživanja i razvoja (973) programa Kine (2011CB910800 i 2012CB917304), Nacionalna zaklada Natural Science of China (31170732), Natural Science Foundation Zhejiang Province (Y2101329), a Postdoktorska Znanost zaklada Zhejiang provinciji (2010-BSH-031). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći oblik raka i drugi najčešći uzrok smrti od raka povezanih na svijetu [1], [2], [3]. Iako je njezina globalna pojava je u padu, incidencija i dalje ostaje visoka u zemljama Azije [2], [4], [5]. Većina pacijenata oboljelih od raka želuca se dijagnosticira u naprednim fazama [6]. Unatoč poboljšanju strategije liječenja [7], [8], 5-godišnje preživljavanje pacijenata s uznapredovalim rakom želuca koji su primali konvencionalne terapije i dalje je manja od 30% [4]. Stoga, alternativni pristupi hitno su potrebni.

genske terapije, uključujući virusne i ne-virusni sustava za isporuku gena, je obećavajući pristup za liječenje raka [9]. Među svih trenutno dostupnih sustava, rekombinantni adenovirus (AD) vektori su naročito obećavajuće. Prednosti oglasa vektora uključuju sposobnost da proizvedu visoki titar, sposobnost da se zaraziti dijeljenjem i ne-diobu stanica učinkovito, stabilnost genoma, te niske razine integracije DNA u genomu domaćina [9], [10]. To je izvijestio da je obnova gena kroz ovaj pristup dovodi do regresije tumora i inducira apoptozu In vivo pregled bez utjecaja na normalna tkiva [11], [12], [13]. Pregled

EMX2, ljudski ortologa od Drosophila pregled prazne spiracles (EMS) homeobox gena, pripada obitelji gena Homeobox koji kodira transkripcijski regulatorni proteini (Homeoprotein) bitne za mnoge aspekte rasta i diferencijacije [14]. EMX2 igra vitalnu ulogu tijekom mozgu [15] i skeletnim razvoj [16]. Miševi nose homozigotna EMX2 mutacije pokazuju smanjenje dramatičan veličine repne-medijalna područjima, uključujući okcipitalnog korteksa i hipokampusa [17], [18], [19]. Ometanje EMX2 izražavanja može promijeniti brzinu širenja odraslih živčanih matičnih stanica [20]. EMX2 također kontrolira reprodukciju sisavaca podešavanjem endometrija proliferaciju stanica bez izazvalo diferencijaciju [21]. Pregled

Nedavne studije ukazuju na to da su EMX2 u ljudskim tumorima [22], [23], [24], [25]. Primjerice EMX2 se pokazao kao tumor-supresor u raka pluća, i niske ekspresije EMX2 povezana sa smanjenjem ukupno preživljenje i ponavljanja preživljenje bez bolesnika s plućnim adenokarcinoma [22], [23]. Također je izvijestio da EMX2 izraz je u izobilju u normalnom endometrija kod žena u postmenopauzi, ali odsutan ili smanjena endometrija tumora, a razina EMX2 u negativnoj korelaciji s proliferacijom [24], [25]. Štoviše, EMX2 mogu regulirati tumorigenezi kroz Wnt signalnom putu, kritični put koji regulira određivanje stanične sudbina, razvoj tkiva i nastanku tumora [26], [27], [28]. EMX2 nalazimo kao izravna represor Wnt1 izražavanja, i kuca-dolje EMX2 gena uzrokuje izvanmaterničnu izraz Wnt1 u telencephalon u razvoju i kortikalne displazije [29]. Epigenetičko utišavanje ekspresije EMX2 mogli biti važni za aktivaciju aberantnih od Wnt signaliziranja u raka pluća, i posljedično širenje i metastaziranje [22]. Međutim, funkcija EMX2 u nastanku tumora i odgovarajući mehanizam još treba dodatno razjasniti. U ovom istraživanju, navodimo EMX2 kao potencijalnog tumor supresor u ljudskoj raka želuca. Smo pokazati EMX2 downregulation i njihov odnos s metilacije statusom promotorske regije gena u raka želuca. Mi također pokazuju da obnova EMX2 pomoću adenovirusni sustav za isporuku inhibira proliferaciju stanica i Wnt signalnog puta in vitro pregled, a zbog toga bolje preživljavanje raka želuca modelu ksenografta in vivo pregled. Naši podaci snažno ukazuju na terapijski potencijal korištenja Ad-EMX2 kao gensku terapiju za buduće liječenje bolesnika s rakom želuca.

materijali i postupci

Izjava Etika pregled

Ova studija je odobren od strane etičkog povjerenstva Xuanwu bolnica, Medicinskom fakultetu Sveučilišta Capital u Pekingu. Pisani pristanak odobren od strane odbora za etiku, dobiven je za svakog pacijenta prije prikupljanja uzoraka tkiva. Pregled

Kultura stanica, 5-aza-2'-deoksicitidin (DAC) /trihostatin A (TSA) Liječenje i uzorci tkiva

ljudska stanične linije raka želučani (AZ521, AGS i MKN28) dobiveni su iz Kine Centra za Type Culture Collection (Wuhan, Kina). Stanične linije uzgajane su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju obogaćenom s 10% fetalnog goveđeg seruma, penicilin i streptomicin na 37 ° C u vlažnoj inkubatoru sa 5% CO _{2. Analizirati obnovu EMX2 gena, stanice su tretirane sa 4 uM DAC ili 300 nM TSA (Sigma, St. Louis, SAD), 4 dana, uz zamjenu svježim medijem koji sadrži istu dozu DAC ili TSA svaki dan. Kontrolne stanice su kultivirane sa svježim medijem koji sadrži DMSO. Stanice se prikupe u svrhu stoga DNA /RNA ekstrakciju. Pregled}

Ukupno 20 formalinom fiksiranih parafin uklopljenih tkiva blokova (10 želučane tkiva karcinoma i 10 susjednih normalnim tkivima), te je ukupna RNA iz 15 uzoraka želučane displazija a 20 raka želuca kirurški uzorci su dobiveni iz Xuanwu bolnice Medicinskog Sveučilišta Capital u Pekingu. Ukupna RNA i genomska DNA izvađen iz odraslih ljudi normalne želučanog tkiva su kupljeni od Biochain (Hayward, CA, USA). Pregled

DNA konstrukti

Topflash /Fopflash novinari koji sadrže divlji tip i mutirani TCF /LEF veznih mjesta redom su ljubazno daje dr Yeguang Chen (Tsinghua University, Peking, Kina). Mutant CTNNB1 (S45Y) cDNA konstrukt također je ljubazno od Dr. Yeguang Chen (Tsinghua University, Peking, Kina). Rekombinantni adenovirus vektori koji eksprimiraju EMX2 i kontrolni vektor su kupljeni od Vector Biolabs (vektorski Biolabs, Burlingame, CA, USA). Pregled

Metilacija specifičan PCR (MSP) i bisulfita sekvenciranje (BS) pregled

bisulfitnog pretvorbe iz tkiva i stanica su izvedeni bez preduvjeta za pročišćavanje DNA pomoću EZ metilacije DNA-Direct Kit (Zymo, Orange, CA, USA). Su FFPE tkiva su najprije de-parafin u ksilenu (Sigma) i rehidriraju u gradiranog etanola prije bisulfita liječenja po uputama proizvođača. Za MSP, mijenjati DNA je pojačan korištenjem MSP klica (dolje navedene) koje su posebno prepoznate bilo metiliranog ili nemetilirane EMX2 promotorske sekvence nakon bisulfita liječenja. PCR se izvodi u konačnom volumenu od 20 ul koji sadrži 1 × MSP reakcijski pufer [30] 0,5 uM svakog primera i 1 U of Zymo Taq pregled ™ DNA polimeraze (Zymo). PCR uvjeti bili su kako slijedi: 10 minuta na 95 ° C; 40 ciklusa od 30 sekundi na 95 ° C, 30 s pri 50 ° C i 30 na 72 ° C; i 7 min finalna ekstenzija na 72 ° C. BS, amplifikaciju bisulfit-pretvorena DNA se izvodi u konačnom volumenu od 50 ul koji sadrži 1 uM svakog primera BS i 2. U od Zymo Taq pregled ™ DNA polimeraze. PCR uvjeti bili su kako slijedi: 10 minuta na 95 ° C; 40 ciklusa od 30 sekundi na 95 ° C, 40 s pri 55 ° C i 1 min na 72 ° C; i 7 min finalna ekstenzija na 72 ° C. PCR produkti su klonirani u PMD-18T (Takara, Dalian, Kina). Ili 5 ili 3 slučajno odabranih pozitivna klona iz svake grupe su sekvencionirani u Shanghai Invitrogen (Shanghai, Kina). Primeri su kako slijedi: pregled

MSP-M (naprijed): 5'TAGTTTTTTGTTCGTTTCGCGTTTC-3 'pregled

MSP-M (natrag): 5'GAATTAAAATAAACGCCCCTACCGAC-3' pregled

MSP-U (naprijed): 5'-GTTTTTTGTTTGTTTTGTGTTTTGA-3 'pregled

MSP-U (natrag): 5'-CCAAATTAAAATAAACACCCCTACCAAC-3' pregled

BS-A (naprijed): 5 ' -GTTTGTAAATTTTTTTGGAAGGATTT-3 'pregled

BS-A (natrag): 5'-AACAAAAAACTATCCTTAACCACCA-3' pregled

BS-B (naprijed): 5'-GGTTAGGGATTTTGTAGGGAT-3 'pregled

BS-B (natrag): 5'-AAAATCACATAAACAACTTCCTCC-3 'pregled

Imunohistokem (IHH) pregled

IHC je provedeno standardnim protokolom. Antitijela koja se koriste u ispitivanju uključeno mišji anti-humani Ki67 (1:100, BD, San Jose, CA, USA) i mišjeg anti-humanog EMX2 (1:500, Pierce, Rockford, IL, USA) i Alexa 594-konjugiranog kozji sekundarno antitijelo anti-miš (1:200, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Stakalca su također negativno hochest 33342 (Invitrogen). Zeiss LSM 710 Konfokalni mikroskop (Oberkochen, njemačka) se koristi za ispitivanje bojenje. Intenzitet Ki67 se kvantificira korištenjem slika Pro® Plus. EMX2 Bojenje je vizualizirano pomoću Histostain Plus DAB kit (široki spektar, Invitrogen) prema proizvodnji uputama, uz kontrastnu boju hematoksilin (Sigma), te fotografirani pomoću Leica SCN400 kliznu skener (Leica, Njemačka). Pregled

Test luciferaze

stanica pri gustoći od 5 × 10 ^{3 po jamici posađeno je u 24 jažica prije transfekcije. Topflash ili Fopflash plazmidi su ko-transfektirane s PRL-TK plazmida. Nakon Stanice su uzgajane 18 sati, aktivnost luciferaze mjerena je Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega, Madison, USA). Omjer između krijesnice aktivnosti luciferaze (Topflash /Fopflash) i Renilla aktivnosti korišten je za TCF /LEF transkripcije aktivnosti. Pregled}

Imunobloting pregled

Oba ukupnih proteina (20 ug) i citoplazmi ekstrakti (40 ug) podvrgnuti su imunoblot. Primarna antitijela uključuju anti-EMX2 (1:500, Pierce), anti-β-aktin (1:5000, Sigma), anti-ciklin D1 (1:500, BD) i anti-c-myc (1:200; santa Cruz Biotechnology, CA, USA). pregled

proliferacije pregled

rast stanica je određen Celltiter 96 vodena proliferacije kit (Promega). Stanična linije su nasađene na ploče za uzgoj kulture s 96 jažica s ukupnim brojem 5 × 10 ^{2 stanica /jažici. Nakon stanice su uzgojene na dane 0, 2, 3 i 4, MTS otopine su dodani u medij i inkubirani 1,5 sata. Apsorbancija na 490 nm je mjerena pomoću mikroploča čitač modela 680 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Pregled}

Kolonija Formacija Test

Ćelije (1 × 10 ^{3) zaraženo s adenovirusni vektor izražavanja EMX2 ili praznim vektorom su nasađene u tri primjerka u posude od 100 mm. Svježi medij je mijenjan svaka 3 dana. Nakon uzgajane tijekom 3-4 tjedna, stanice su fiksirane s 4% paraformaldehidom tijekom 10 minuta, ispere s PBS, obojene s 0.1% kristalno ljubičastog 20 min i fotografiran. Pregled}

RNA ekstrakcija i kvantitativna stvarnom vremenu reverzne transkripcije -PCR (RT-PCR) pregled

ekstrakcija RNA i u realnom vremenu RT-PCR su izvedene kao što je ranije opisano [31]. Sekvencijama su prethodno opisano [22]. Pregled

Životinjski model i adenovirusni vektor Isporuka pregled

Svi pokusi su miševi provodi pod određenim patogena stanja u životinjskom pogonu Sveučilišta Tsinghua i odobren od strane institucionalne njega životinja i uporaba Odbor Sveučilišta Tsinghua. Želučani ksenografta raka su uspostavljeni u 5 tjedana stare ženke BALB /c miševa. Ukratko, poslije do konfluentnosti, MKN28 ili AGS stanice trypisnized i ponovo suspendirane u PBS (pH 7,4) i zatim se pomiješa 01:01 (v /v) sa Matrigel (snažno) pri 4 ° C, kako bi se uvelo jednu miš u ukupnom volumenu od 150 ul. Smjesu s.c se ubrizgava u desni bok od 16 ženki miševa sa 10 ^{7 stanica po mišu (dan 0). Na dan 7, miševi koji nose lokalnih tumora u rasponu od 50 do 100 mm 2 primili izravno unutar tumorskih injekciju 1 × 10 9 plak-formiranih jedinica od navedenog adenovirusa (razrijeđena s PBS-om u ukupnom volumenu od 100 ul). Formiranje tumora je praćen do 1½ mjeseci. veličina tumora je izmjerena pomoću šestara, a određen množenjem 0,5 × širina 2 × duljine. Kaplan-Meier postupak se koristi za procjenu preživljavanja dvaju skupina tretiranih životinja. Nakon završetka pokusa, tumori iz svake obrade se sakupe u 10% puferiranom formalinu, uklopljeno u parafin i izrezati na 5-p.m debele kriške daljnjeg Ki-67 detekcije. Citosolne proteina i stanični lizat cijeli također su iz tih tumora za Western analizu. Pregled}

Statistička analiza pregled

Svi podaci su izračunati kao prosjek ± standardna devijacija. Razlike među skupinama uspoređeni su s dvostranu t-test. P pregled vrijednost 0,05 ili manje se smatra značajnim. Pregled

Rezultati

silazni EMX2 u ljudskoj rak želuca Netlogu

Ispitali smo ekspresiju EMX2 u devet ljudskih staničnih linija raka želuca, kao i tumora i upareni susjedne normalnih tkiva iz deset pacijenata oboljelih od raka želuca (Slika 1). Korištenje u realnom vremenu RT-PCR, pronašli smo da je ekspresija EMX2 značajno regulirani u osam staničnih linija devet ispitan u usporedbi s onom u normalnom tkivu želuca (P < 0.01, Slika 1A). S druge strane, stanična linija AZ521 pokazali sličnu razinu ekspresije EMX2 kao u normalnoj kontroli (slika 1A). U cilju otkrivanja EMX2 ekspresije proteina u uzorcima bolesnika tkiva, imunohistokemijski (IHH) provedena je i intenzitet IHC bojenja je kvantificira slike Pro® Plus. Svih deset uzorci analizirani pronađeno je da pokazuju ili nedostatak EMX2 ekspresiju ili smanjenu razinu EMX2 ekspresije u tkivu raka u odnosu na normalne kolege (p 0,01, slika 1B). Da bi se uspostavila moguću ulogu EMX2 u patološkog napredovanja ljudskog karcinoma želuca, analizirali smo EMX2 izraz pomoću ukupne RNA koje smo dobili od petnaest želučana displazija uzoraka i dvadeset raka želuca kirurških uzoraka. otkrili smo da EMX2 ekspresija značajno regulirani na uzorcima displazija (P 0,05), i gotovo izgubljeni u uzorcima karcinoma u usporedbi s onom kod odraslih normalnim tkivu želuca (slika 1C), što ukazuje da EMX2 downregulation može pojaviti u neinvazivnim pretkarcinomsku fazi

Ispravak između EMX2 izražavanja i njegova promotorska metilacije status Netlogu

ispitali smo metilacija status EMX2 promotora u devet želučanih staničnim linijama karcinoma i normalno želučanog tkiva. Regije CpG otocima (CGI) su identificirali s MethPrimer od -800 do -470 i od -55 do 459 u odnosu na očekivane transkripcija startna mjesta (+1) od EMX2 gena (Slika 2). Status Metilacija je analiziran pomoću bisulfita sekvenciranje (BS) (Slika 2b) i metilacije specifična PCR (MSP) (Slike 2C-2D). Naš BS i rezultati MSP pokazala da je EMX2 promotor u normalnom tkivu i stanicama želuca AZ521 je nemetiliran, dok je u ostalih osam staničnih linija ispitan je gusto metiliran (Slike 2B-2C). Ovi rezultati su u skladu s razinama EMX2 ekspresije u tim staničnim linijama: visoko u normalnom tkivu i AZ521, ali malo ostalih osam staničnih linija ispitanih. Smjesa metiliranog i unmethylated pojasu se naći u nekoliko staničnih linija, uključujući MKN28, N87 i SNU16 ukazuje djelomično metilacije. Nadalje, utvrdili smo da metilacije status uzorcima bolesnika tkiva koje ukazuje MSP u skladu s razinama EMX2 ekspresije u tim uzorcima (Slika 2D, četiri od deset parova uzoraka tkiva su ispitane zbog nedostupnosti genomske DNA iz ostalih šest pari ). Ovi podaci ukazuju na to da podreguliranje EMX2 izražavanja može biti rezultat njegovog promotora hiper-metilacije u raka želuca. Pregled

Kako bi se dodatno istražiti povezanost između ekspresije EMX2 i promotora metilacije, tretira se MKN28 i AGS stanične linije s inhibitor metiltransferaze DAC i inhibitor TSA histon deacetilaze. Stanična linija AZ521 se koristi kao negativna kontrola kao njegova promotorska regija nemetiliran. Uočili smo da je specifičan bend unmethylation je značajno povećao (Slika 3A) s razinama EMX2 ekspresije nadregulirani u skladu s tim (slika 3B) po DAC liječenje u oba AGS i MKN28 stanicama, dok su one u AZ521 stanica ostao je nepromijenjen (slika 3). Liječenje TSA imali minimalne učinke na oba metilacije status i EMX2 razina ekspresije. Uzeti zajedno, naši rezultati snažno sugeriraju down-regulacija EMX2 izražavanja znatno je povezana s EMX2 promotora Hipermetilacija u ljudskoj raka želuca. Pregled

sprečavanje rasta stanica koje adenovirus-dostavljene EMX2 in vitro pregled

Sljedeće smo ispitali ulogu EMX2 na rast stanica želučane stanica raka. Rast AGS i MKN28 stanica značajno je potisnut na infekciju s adenovirus izražavajući EMX2 (Ad-EMX2) u usporedbi s praznim vektorsko upravljanje (Ad-ctrl) (P < 0,001, Slika 4A), dok je rast AZ521 stanica nije bio pod utjecajem (P 0,05, slika 4A). Ova opažanja su također potvrdila formacije kolonije analizom (Slika 4B). Naši rezultati pokazuju da anti-proliferacije funkciju EMX2 u želučanim stanicama raka pregled

Suzbijanje Wnt signalni put adenovirus isporučuje EMX2 pregled

Funkcija EMX2 je vezan za Wnt signalizacijski put. Stoga smo proučavali odnos između EMX2 i Wnt signaliziranja u raka želuca. Koristili smo Topflash /Fopflash reporterski test za mjerenje TCF /LEF-ovisnu transkripcije aktivnosti reguliran kanonskim Wnt put. otkrili smo da transkripcija aktivnost TCF /LEF ovisna je bila značajno inhibirana Ad-EMX2 u AGS i MKN28 stanica kojima nedostaje endogeni EMX2 ekspresiju (P 0,05), ali ne i u AZ521 stanicama koje eksprimiraju endogeni EMX2 (P > 0,05, slika 5A). Dosljedno, razina proteina u citosolu beta-katenina i kanonskog Wnt put nizvodno cilja c-myc i ciklin D1 su potisnuti u ovim AGS i MKN28 stanicama inficiranim s Ad-EMX2, ali ne u AZ521 stanicama (obnova EMX2 izražavanja u tim staničnim linijama, nakon Ad-EMX2 infekcija je potvrđeno Western) (slika 5B). Kako bi se dodatno istražiti relevantnost Wnt put down-regulacije i proliferacije represije Ad-EMX2, transficirane smo i izrazio stabiliziran P-katenina (S45Y mutaciju) u tih želučanih stanica raka zaraženih Ad-EMX2. Ustanovljeno je da se pre-ekspresija P-katenina znatno oslabljena suzbijanje učinak rasta Ad-EMX2 u oba AGS i MKN28 stanica (P < 0,01), ali ne u AZ521 stanica (Slika 5C). Uzeti zajedno, ovi rezultati potvrđuju važnu ulogu EMX2 u suzbijanju Wnt put u rak želuca. Pregled

Suzbijanje rak želuca rast od adenovirus-dostavljene EMX2 in vivo

Utvrdili smo MKN28 i AGS modelima stranog tijela istražiti terapijski potencijal adenovirus-isporučio EMX2 za rak želuca in vivo pregled. Tjedan dana nakon inokulacije, miševi koji nose lokalnih tumora u rasponu od 50 do 100 mm ^{2 dobio izravnu intratumoralne injekcije od 1 × 10 9 jedinice koje tvore plak od navedenog adenovirusa. Rast tumora oglasa EMX2 inficiranih miševa su signifikantno manji nego u kontrolnoj skupini (P < 0.05, Slika 6A lijevo dvije ploče). Na završetku tumora eksperiment mase u Ad-EMX2 zaraženih miševa također znatno manje nego u kontrolnoj skupini (P < 0,05 za MKN28 tumora, P < 0,01 za AGS tumora, Slika 6A donji dio). Bojenje intenzitet proliferacijskog markera Ki67 tumorskih uzoraka na završetku pokusa pokazali su da isporuka Ad-EMX2 značajno smanjilo Ki-67 za bojenje (P < 0.01, Slika 6B), sugerirajući stanica inhibicije proliferacije u tumorima. Štoviše, opstanak Ad-EMX2 zaražen skupine bio je znatno bolje nego u kontrolnoj skupini (P = 0,014, Slika 6C). U skladu s našim In vitro pregled analiza, citoplazmatski β-katenina i kanonske Wnt put prolazi nizvodno cilja c-myc i ciklin D1 također su regulirani u Ad-EMX2 zaraženo MKN28 i AGS tumora (obnova EMX2 izražavanja u ovim in vivo tumori također je potvrdio i zapadne) (Slika 6D). Uzeti zajedno, naši rezultati pokazuju terapijski potencijal adenovirus-isporučio EMX2 u liječenju raka želuca. Pregled}

Rasprava pregled

Homeobox geni su dobro poznati po svojoj važnosti u razvoju već desetljećima, dok je proučavanje ovi geni tijekom onkogcnczom je još uvijek u povojima. Su neprirodne homeobox gena izrazi su dokumentirani u različitim oblicima raka [32], [33], što ukazuje na promjene hemeobox izraza moglo biti važno za onkogcnczom. Ovo može pružiti molekularne osnove za potencijalne kliničke primjene. Međutim, nekoliko temeljnih pitanja još uvijek je potrebno da se u potpunosti riješiti, uključujući molekularne mehanizme koji pokreću neprirodni izraz, i nizvodno ciljeve i signalnih putova koje promiču razvoj raka. U ovom istraživanju, pružamo uvid u ova pitanja istraživanjem EMX2 u ljudskoj raka želuca. Pregled

Naša studija utvrđeno je značajno smanjenje i gubitak ekspresije EMX2 u želučanom staničnim linijama karcinoma i primarnih tumora tkiva, te su pokazali da je silazni bilo značajno povezano sa hiper-metilacije EMX2 promotora, sugerirajući epigenetičku utišavanje kao važan mehanizam za EMX2 poremećajem u ljudskoj raka želuca. Doista, epigenetičko modifikacija je predložen kao ključni mehanizam odgovoran za homeobox gene smanjenom ili odsutnost u drugim tipovima raka tkiva gdje ovi geni djeluju na supresiju tumora [14], [32]. Osim toga, naša promatranja EMX2 dowregulation u neinvazivnom želučane displazija podupire moguću važnu ulogu EMX2 u patološkog napredovanja ljudskog raka želuca. Jedno ograničenje naše studije je broj uzoraka tkiva analiziranih. Veći broj uzoraka bolesnika treba ispitati da bi se potvrdilo nalaz metilacije-odsutnost EMX2 u raka želuca. Ipak, naši rezultati daju prve izravne dokaze da podrži ovaj mehanizam za rak želuca i identificirati EMX2 kao urođeni novi tumor supresor u raka želuca. Pregled

Osim toga, istražili smo važne onkogene puteve kroz koje EMX2 funkcioniralo kod raka želuca i otkrili da Wnt signalni put može igrati ključnu ulogu posredovanju funkciju EMX2. ilustrirano smo proliferacije da visoka ekspresija egzogenog EMX2 značajno je smanjen rast želučanih staničnim linijama karcinoma nedostaje ekspresije endogenog gena (AGS i MKN28 stanice), u skladu s prethodnim izvješćima koja razlika u EMX2 izražavanja negativno korelira s proliferacijom u drugim vrstama raka stanica [ ,,,0],24], [25]. Također smo pokazali da Wnt signalni put dramatično je inhibirana EMX2 In vivo pregled i In vitro pregled, pružajući još jedan dokaz da Wnt signalni put može posredovati funkciju EMX2 u raka kao što je ranije predloženo [22 ]. pregled

Najzad, naši rezultati ukazuju na mogućnost korištenja gensku terapiju EMX2 za liječenje karcinoma želuca. Infekcija tumora s Ad-EMX2 značajno potisnuti proliferaciju i što je još važnije, poboljšanog preživljavanja. Važno je napomenuti da je sustav za isporuku koje smo koristili za liječenje je rekombinantni adenovirus serotip 5 (Ad5), najčešće se koristi vektor u nekoliko tipova genskom liječenju [11], [12], [34], [35]. U usporedbi s adenovezne (AW) i retrovirusne sustave isporuke, adenovirusne vektore, kao što su Ad5 očito imaju mnoge prednosti. Na primjer, adenovirusni vektori imaju široku tropizam omogućuje učinkovito ciljanje na mnogim tkivima od interesa, velikim kapacitetom korisne nosivosti i visokog prijenosa učinkovitosti u odnosu na AAA sustava [10], a također ne-integraciju karakteristike koje inače izazivaju rizik od slučajnih mutagenezu genoma [ ,,,0],10], [36] [36], [37], [38]. Štoviše, adenovirusni vektori mogu biti konstruirani da rak selektivni onkoloških virusa [39], [40], [41], koji su kritični za kliničku primjenu genske terapije raka. Međutim, još uvijek postoje mnogi izazovi korištenja adenovirusne vektora za isporuku genske terapije u bolesnika. Na primjer, oni se mogu brzo gubi iz stanica koje se ubrzano dijele nakon infekcije. Ostali faktori koji utječu na kliničku primjenu adenovirusom isporuke uključuje sposobnost za pakiranje i raspon domaćina adenovirusnih vektora, njihov genski profil izlučivanja i tendenciju da ispoljavaju imuni odgovor, osobito važno ako se ponavlja administracija je potrebna [42], [43]. Ipak, naš in vivo pregled studija Ad-EMX2 infekcije sugerira da EMX2 genska terapija može imati potencijal da postane klinički antitumorski terapijska strategija za liječenje karcinoma želuca u budućnosti. Pregled

• PLoS ONE: diferencijalne ekspresije fosfolipaze C Epsilon 1 je povezano s kroničnim atrofični gastritis i želudac Cancer
• PLoS ONE: odsutnost XB130 je povezana s obje prognozu i kemijske osjetljivosti želučane Cancer