PLoS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin izaziva Mitohondriji Ovisno Apoptoza kroz ERK staze u ljudski rak želuca SGC-7901 stanica

Sažetak pregled

β, β-Dimethylacrylshikonin, jedan od aktivnih sastojaka u korijen ekstrakata Lithospermum erythrorhizon, posjeduju antitumorsku aktivnost. U ovom istraživanju, razgovarali smo molekularne mehanizme p, p-dimethylacrylshikonin u apoptoze SGC-7901 stanica. β, β-Dimethylacrylshikonin smanjio stanica održivost SGC-7901 stanica u dozi i vremenski ovisan način i inducirane stanične apoptoze. β, β-Dimethylacrylshikonin liječenje u SGC-7901 stanica dolje regulira ekspresiju XIAP, cIAP-2 i Bcl-2 i regulira prema gore ekspresiju Bak i Bax i prouzročio gubitak mitohondrijske membrane potencijala i oslobađanje citokroma c , Osim toga, β, β-dimethylacrylshikonin Tretman je doveo do aktivacije kaspaze-9, 8 i 3, i odcjepljenjem poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP), koji je ukinut prethodnom obradom s inhibitorom pan-kaspaze Z-VAD-FMK , β, β-Dimethylacrylshikonin inducirane fosforilacije ekstracelularnog kinaze signalom-regulirane (ERK) u SGC-7901 stanice. U0126, specifičan inhibitor MEK, blokira aktivaciju ERK po p, p-dimethylacrylshikonin i ukinuta p, p-dimethylacrylshikonin inducira apoptozu. Naši rezultati pokazuju da β, β-dimethylacrylshikonin inhibira rast raka želuca SGC-7901 stanica zbog izazivanja ERK signalni put, i pod uvjetom pojma za pretkliničkih i kliničkih vrednovanja P, β-dimethylacrylshikonin za želučane terapije protiv raka. Pregled

Izvor: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin izaziva Mitohondriji Ovisno Apoptoza kroz ERK staze u Raku ljudskog želuca SGC-7901 stanica. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10,1371 /journal.pone.0041773 pregled

Urednik: Salvatore V. Pizzo Sveučilišta Duke Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 1. ožujka 2012; Prihvaćeno: 25. lipanj 2012; Objavljeno: 27. srpnja 2012 pregled

Copyright: © Shen et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od potpora iz Zhejiang Provincial Natural Science Foundation Kine u X-QM (LY12H28005), te zaklade za znanost Zhejiang kineski Medicinskom fakultetu Sveučilišta u H-BW (2011ZY05). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je jedan od agresivnih zloćudnih tumora, iako s razvojem radioterapijom, kemoterapijom i biotherapy, a ozbiljne nuspojave su neizbježni [1], dakle, učinkovitiji antitumorskih lijekova s ​​manje popratnih pojava za liječenje raka želuca su potrebne. pregled

Lithospermum erythrorhizon je važan kineska biljka. To ima neke aktivne komponente: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (Sl. 1a) i shikonin [2]. U tradicionalnoj kineskoj medicini, to pokazuje više bioloških funkcija, uključujući antimikrobno, protuupalno, protiv tumora, imunološkog regulacije i anti-HIV svojstava [3] - [6]. Učinak protiv tumora shikonin i njeni derivati ​​su prvo pokazao svojim djelovanjem na rast tumora u mišjim Sarkoma-180 [7]. Shikonin izlošci učinak ne samo po ubijanju tumorskih stanica direktno, ali i inhibiciju tumorske angiogeneze [8]. Studije su pokazale da induciranu apoptozu shikonin u ljudskom malignog melanoma, raka mokraćnog mjehura, rak vrata maternice, rak pluća i rak jetre i tako dalje [9] - [13]. Međutim, to ima manje nuspojave i više zaštitne učinke na normalne ljudske stanice [14], [15]. Hsu PC i suradnici su pokazali da shikonin dovelo do stanične apoptoze putem up-regulaciji p27, p53, Bax i down-regulacije Bcl-2 i Bcl-XL u ljudskoj kolorektalnog karcinoma Colo 205 stanice [16]. Tumor invazija inhibirana shikonin u nekim stanicama karcinoma može kroz podreguliranjem NF-kB posredovanih MMP-9 ekspresija [17]. Shikonin također inducira apoptozu preko proizvodnje ROS u hepatocelularnog karcinoma [12]. Singh F i ostali su također otkrili da Shikonin smanjen fosforilirane razine EGFR, ERK i protein tirozin-kinaze i povećanje unutarstanične razine apoptoze vezane proteine, što uzrokuje stanice epidermoidni karcinom podliježu apoptozi [18]. Pregled

Novija istraživanja pokazala da β, β-dimethylacrylshikonin imala značajan protu-tumorski učinak na hepatocelularni karcinom aktiviranjem caspase-3, [19]. Međutim, takav učinak p, p-dimethylacrylshikonin o ljudskim stanicama raka želuca nije prijavio i molekularni mehanizmi još uvijek nije dobro shvaćen. Dakle, u ovom istraživanju, mi ćemo raspravljati učinak p, p-dimethylacrylshikonin na ljudski stanica raka želuca SGC-7901 i njegovog povezanog signalizacije kako bi se bolje razumjeli mehanizam p, β-dimethylacrylshikonin na rak želuca. Pregled

Materijali i metode

Materijali i reagensi pregled

SGC-7901 stanice su kupljene od kineske akademije znanosti Cell Bank of Type Culture Collection (Shanghai, Kina). β, β-Dimethylacrylshikonin je kupljen od Tokyo kemijske industrije (Tokyo, Japan). MTT i DAPI su kupljeni od Calbiochem (San Diego, CA, USA). U0126 je kupljen od tvrtke Cell Signaling (Boston, MA, USA). inhibitor Pan-kaspaze (Z-VAD-FMK) se nabavlja od Beyotime Instituta za biotehnologiju (Shanghai, Kina). Antitijelo za citokroma c je kupljen od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Antitijela protiv ERK, fosfo-ERK, Bcl-2, Bcl-XL, XIAP, cIAP-2, survivn, Bax, Bak, cijepa kaspaze-9, cijepa kaspaze-3, cijepa PARP i p-aktin nabavljeni su od staničnu signalizaciju ( Boston, MA, USA). FITC-Aneksin V Apoptoza Detection Kit je kupljen od Becton Dickinson (San Diego, CA, USA). Pregled

Kultura stanica i stanične proliferacije Test pregled

SGC-7901 uzgajane su u 1640 mediju s 10% fetalnog goveđeg seruma (Hyclone, UT) i održava se na 37 ° C u vlažnoj atmosferi 5% CO _{2. Potom stanice su posađene na ploču s 96 jažica posudu do konačne koncentracije od 5 x 10 ^{3 stanica /jažica i inkubirane u RPMI 1640 mediju koji sadrži 10% FCS tijekom 24 sata, nakon toga, stanice su tretirane s naznačenim koncentracijom β, β-dimethylacrylshikonin za 24 sata i 48 sati. Medij se ukloni, a svježi medij je dodan u svaku jažicu, zajedno s 20 ul MTT otopine (5 mg /ml). Nakon 4 sata inkubacije, 150 ul DMSO, dodaje se u svaku jažicu. Ploče se očitavaju na valnoj duljini od 570 nm pomoću Varioskan Flash Multimode Reader (Thermo Scientific, USA). Četiri ponoviti jažice su korištene za svaki tretman i eksperimenti su ponovljeni tri puta. Pregled}}

Morfološki mijenja

sGC 7901 stanice su stavljene u jamice u šest jažica. Nakon kulture od 24 h stanica, liječeni su p, p-dimethylacrylshikonin za naznačenim vremenskim razdobljima. Pokretnu morfologija zabilježen je korištenjem obrnuti mikroskopije. (Model IX70, Olympus, Tokyo, Japan) pregled

DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenilindol) bojenje pregled

SGC-7901 stanica su smješteni u izvoru šest jažica koja. Nakon kulture od 24 h stanica, liječeni su p, p-dimethylacrylshikonin za naznačenim vremenskim periodima, zatim su stanice fiksirane u hladnom acetonu 30 min, i inkubirane sa DAPI (1 mg /ml) kroz 30 min. Apoptoze jezgre okarakterizirati kao intenzivno obojani su detektirani pomoću fluorescentne mikroskopije. (Model IX71, Olympus, Tokyo, Japan)

Aneksin V /PI testovi za apoptoze Netlogu

Aneksin V /PI testove, stanice su obojeni AnnexinV-FITC i PI, te ocjenjuju apoptoze protočnom citometrijom u skladu s protokolom mannufacturer-a (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA). Ukratko, 1 × 10 ^{5 stanice su isprane dva puta s PBS i oboje sa 5 ul AnnexinV-FITC i 5 ul PI u 500 ul pufera za vezivanje za 15 min na sobnoj temperaturi u mraku. Apoptoze Stanice su određena BD FACS Diva softvera (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Aneksin V bojenje služi kao mjera fosfatidilserina eksternalizacije i stanice koje su Aneksin V + /PI -. Predstavljaju rano apoptoze stanica pregled}

Mjerenje mitohondrijske membrane Netlogu potencijalnog

Ćelije ( 5 × 10 ^{5 stanica /mL) su tretirani sa ili bez P, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) tijekom 24 h, a mrlja s JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, USA) za 15 min na 37 ° C. Mitohondrijski Potencijal membrane je protočnom citometrijom (FACSCanto II, Becton Dickinson, USA). Pregled}

Western upijajući analiza pregled

Stanice su tretirane s naznačenoj koncentraciji p, p-dimethylacrylshikonin za određenog vremena u RPMI 1640 mediju s 10% FCS. Stanice su skupljene u ledeno hladnom PBS-u, te se stanični ekstrakti su pripravljeni na RIPA puferu s inhibitora proteinaze koktelom od Calbiochem (San Diego, CA). Koncentracija proteina u staničnim lizatima određena je i kuhana s gel-pufera za nanošenje tijekom 10 minuta na 100 ° C. Uzorci koji sadrže 30 ug ukupnog proteina su elektroforezom na 10% SDS-poliakrilamidnim gelovima i preneseni na PVDF membranu (Millipore, Temecula, CA). Nakon prijenosa, membrane su blokirana u TBST (TBS koji sadrži 0,1% Tween 20) koji sadrži 5% obranog mlijeka 2 sata, nakon čega slijedi inkubacija tijekom noći na 4 ° C s odgovarajućim primarnim antitijelima. Nakon ispiranja tri puta u TBST, membrane se inkubiraju 2 sata na 37 ° C uz 1:5000 peroksidaza-konjugiranog odgovarajućih sekundarnih protutijela. Konačno, membrane su vizualizirani pomoću unaprijeđen sustav detekcije chemiluminescence (Immu-Star WesternC Kit, Bio-Rad, USA). Pregled

Imunofluorescencija bojenje pregled

Immunofluorescene bojanje se koristi za analizu subeelularnim distribuciju citokroma c u SGC-7901 stanica induciranih p, p-dimethylacrylshikonin. Stanice uzgojene u sterilnim staklenim coverlips su fiksirani u hladnim acetonom 10 min. Nakon natopljeni s 0,3% Triton X-100 tijekom 20 minuta na sobnoj temperaturi, stanice se blokiran u 3% albumina goveđeg seruma tijekom 30 min i držana na 4 ° C s anti-citokroma c antitijelom (1:30). Nakon ispiranja tri puta u PBS-u, SGC-7901 stanice su označene s Alexa Fluor 488-konjugiranih sekundarnih antitijela. DAPI naknadno dodana za nuklearnu bojenja. Mikroskopska analiza je provedena pomoću fluorescentnog mikroskopa (model IX71, Olympus, Tokyo, Japan). Pregled

Statistička analiza pregled

Podaci iskazani su srednje vrijednosti ± standardna devijacija (SD) od tri neovisna pokusa. Su procijenjene su jednosmjernom analizom varijance (ANOVA). Značajne razlike su uspostavljeni na p. ≪ 0,05 pregled

Rezultati pregled

β, β-Dimethylacrylshikonin inhibira održivost SGC-7901 stanica pregled

Kako bi se utvrdilo citotoksični učinak ß, β-dimethylacrylshikonin na želučanih stanica raka. SGC-7901 stanice su tretirane s 2.5, 5, 7.5, 10 umol /L P, P-dimethylacrylshikonin za 24 sata i 48 sati, smanjenog vijabilnost stanica tretiranih sa P, P-dimethylacrylshikonin bio 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82% i 61.76 ± 0.18% respektivno na 24 sata u usporedbi sa stanicama koje su tretirane nosačem (Sl. 1B). 48 h tretmana, održivost stanica bila je 52,03 ± 9,45%, 38,99 ± 1,43%, 30,70 ± 1,58%, a 27,4 ± 0,31% (Sl. 1b). Maksimalna inhibitorne koncentracije polovica (IC _{50) p, β-dimethylacrylshikonin za SGC-7901 stanica bila je 11,04 iM i 2,89 uM na 24 i 48 h respektivno. Pregled}

β, β-Dimethylacrylshikonin izaziva SGC -7901 stanice apoptoza pregled

sGC 7901 stanice su prvo tretirani sa p, p-dimethylacrylshikonin Rezultati ukazuju stanice su podvrgnuti označena morfološke promjene nakon tretmana s 10 umol /L p, p-dimethylacrylshikonin usporedbi s neobrađenom kontrolom za 24 h. U prisutnosti P, β-dimethylacrylshikonin, SGC-7901 broj stanica smanjena i stanice postaju okrugla i mala u formi, a odvajanje od ploče usporedbi s negativnom kontrolnom skupinom (Sl. 2A). β, β-dimethylacrylshikonin također izazvana nuklearna kondenzaciju s intenzivnim DAPI bojanjem u odnosu na nuklearnu kontrole SGC-7901 stanica 24 h (sl. 2b). pregled

Kako bi se utvrdilo je li citotoksičnosti od p, β-dimethylacrylshikonin uključeni apoptoze , procijenili smo apoptotski učinak p, p-dimethylacrylshikonin u SGC-7901 stanica protočnom citometrijom na Annexin V i propidij jodida (PI) obojenja. Postotak ranim apoptotičnih stanica (Aneksin V ^{+ /PI -) bio je 1,6%, 7,2%, 18,1%, 24,3% i 24,4% u odgovoru na vozilu, 2.5, 5, 7.5 i 10 umol /L β, odnosno 24 sata (Sl. 2C) β-dimethylacrylshikonin. Zanimljivo, pokojni apoptotične stanice (Aneksin V + /PI +) su značajno povećana u SGC-7901 stanica (29,7% sa 7,5 umol /L i 33,6% sa 10 umol /L p, β-dimethylacrylshikonin liječenja ) (Sl. 2C). pregled}

β, β-dimethylacrylshikonin izaziva mitohondrijske događaje povezane s apoptoze u SGC-7901 stanica pregled

Bcl-2 obitelji proteini su pro-apoptoze proteina (Bax, Bak i Bid) i antiapoptotski proteini (bcl-2, bcl-XL, cIAP-2, XIAP i survivina). Oni mogu aktivirati ili inhibirati oslobađanje nizvodno faktora koji dovodi do aktivacije kaspaze-3 i PARP u izvršenju apoptoze [20]. Kako bi se otkrili apoptoze-srodnih proteina, proapoptotska proteini (Bax, Bak) i anti-apoptotičkim proteinima (XIAP, cIAP-2, Bcl-2, Bcl-XL, survivin) su detektirani Western blotting nakon sGC 7901 stanice su tretirane s različitim koncentracijama P, P-dimethylacrylshikonin (0, 2.5, 5, 7.5 i 10 umol /L) tijekom 24 h. Rezultati su pokazali da β, β-dimethylacrylshikonin smanji ekspresiju XIAP, cIAP-2, Bcl-2 (Sl. 3A). Međutim, down-regulacije XIAP i Bcl-2 bili manje izraženi, dok je down-regulacije cIAP-2 je bio prilično dramatičan, a ovisi o dozi. Nije bilo značajne promjene Bcl-XL i survivn u SGC-7901 stanica. Bilo P, β-dimethylacrylshikonin mogu modulirati ekspresiju pro-apoptotičkim proteinima (Bax, Bak) je također ispitan. Otkrili smo da je β, β-dimethylacrylshikonin povećao ekspresiju Bak na način ovisan o dozi, ali je imao malo utjecaja na Bax (sl. 3b). pregled

Kaspaza obitelji proteini su ključni enzimi za izvršavanje apoptozu. Među kaspaze članova obitelji, kaspaza-3 je ključni krvnik za apoptozu u stanicama sisavaca [21]. To se može aktivirati putem smrti receptor-posredovane vanjsko kaspaza-8 puta i mitohondriji ovisni kaspaza-9 unutarnja staza [22], [23]. Da bi se dalje razumjeli molekularni mehanizam apoptoze, SGC-7901 stanice su tretirane s P, P-dimethylacrylshikonin i detektirani Western blot analizu za promjenu ekspresije caspase-3, caspase-8 i caspase-9, rezultati su pokazali povišenje ovisan o dozi cijepanog kaspaze-3, caspase-8 cijepa i cijepa kaspaze-9 u P, β-dimethylacrylshikonin pomiješa stanice. PARP cijepanje, drugi poznati svojstvo apoptoze, također je pronađen u P, β-dimethylacrylshikonin tretirane stanice (Sl. 3C). Mitohondrijske disfunkcije inducirana apoptoza koje je često posljedica smanjenja mitohondrijske membranskog potencijala. Pokazano je da se središnji dio apoptoze. SGC-7901 stanice su tretirane sa ili bez P, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L), 24 sata, rezultati su pokazali mitohondrije Potencijal membrane smanjena je s 98,6% do 56,9% nakon β, β-dimethylacrylshikonin se tretira s SGC- 7901 stanice (Sl. 3d). Potom smo ispitali distribuciju i subeelularnim lokalizaciju citokroma c naći da li se mitohondriji put sudjeluje u p, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze. Nakon SGC-7901 stanice su tretirane s P, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) tijekom 24 h, raspodjela citokroma c je vizualizirana sa konfokalne laserske mikroskopom, β, β-dimethylacrylshikonin tretirane stanice pokazuju zamagljen morfologiju (sl. 3E) za razliku od očito bistro nastupa u kontrolnim stanicama, što ukazuje na translokaciju citokroma c iz mitohondrija u citoplazmu u p, β-dimethylacrylshikonin tretiranih miševa. pregled

Kako bi dodatno utvrdili ulogu aktivacije kaspaze u β, β-dimethylacrylshikonin- inducirana apoptoza, tretira se SGC-7901 stanica s inhibitorom pan-kaspaze Z-VAD-FMK (10 umol /L) prije p, p-dimethylacrylshikonin liječenja. Je inhibitor kaspaze pan-Z-VAD-FMK predtretman smanjio ekspresiju cijepaju caspase-3, cijepa PARP i smanjenje P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze (Slika 3F & g.). Ovi podaci su pokazali da je mitohondrijski posredovane kaspaze kaskada put igra vrlo važnu ulogu u P, β-dimethylacrylshikonin inducirana apoptoza. Pregled

β, β-Dimethylacrylshikonin izaziva neprekidne aktivacijski ERK u SGC-7901 stanica pregled

pokazalo se da MAPK signaliziranje uključeni u nekoliko događaja iz stanične stresove i podražaje induciraju staničnu apoptozu [24], [25]. Stoga smo ispitali aktivaciju ERK, JNK i p38 nakon p, p-dimethylacrylshikonin liječenja. Kao što je prikazano na slici. 4A & B, razine fosforilacije ERK i JNK očito su povećani odgovor na p, p-dimethylacrylshikonin tretmana 2 sata, te su razine fosforilacije pokazuju način ovisan o dozi. Osim toga, razine fosforilacije ERK posljednjih dvadeset i četiri sata. Međutim, nema značajne promjene razine fosforilacije p38 su uočeni nakon P, β-dimethylacrylshikonin tretmana (sl. 4C). Ovi rezultati sugeriraju da za trajno aktiviranje ERK sudjeluje u P, β-dimethylacrylshikonin-induciranu apoptozu u SGC-7901 stanice. Pregled

ERK signalni put sudjeluje u P, β-dimethylacrylshikonin induciranu apoptozu u sGC 7901 stanice

zatim ispitati da li je β, β-dimethylacrylshikonin inducirane za trajno aktiviranje ERK signalnog puta igra ulogu u apoptozi. Kao što je prikazano na slici. 5A & B, Western blot analiza pokazala je da U0126 (specifični inhibitor MEK) inhibiran produljeno ERK aktivacija i cijepanje kaspaze-3, PARP u p, p-dimethylacrylshikonin liječenje dok inhibitor pan-kaspaze Z-VAD-FMK nije imala učinka na P, β-dimethylacrylshikonin inducirane aktivaciju ERK (Sl. 5D). Osim toga, smanjuje U0126 p, β-dimethylacrylshikonin-induciranu apoptozu u SGC-7901 stanice (Sl. 5c). Ovi rezultati pokazuju da je β, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze u SGC-7901 stanica posredovan produženo aktivacije ERK signalni put, pregled

Rasprava pregled

Shikonin derivati ​​su aktivni sastojci izolirani iz Kineski biljni Lithospermum erythrorhizon [5]. Ovi spojevi su obećavajući kandidata za lijekove kao što su izvijestili da su višestruke antikancerogeno djelovanje in vivo i in vitro [5], [26]. Između komponenti Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin ima značajne antitumorske učinke u usporedbi s drugim aktivnim sastojcima [27]. S obzirom na djelovanje protiv raka, shikonin iscrtati apoptoze stanica preko aktivacije kaspaze ovisan put je pronađen u mnogim malignih tumora. U ovoj studiji istraživali smo učinak p, p-dimethylacrylshikonin na humanog karcinoma želuca sGC 7901 stanica. Naši rezultati pokazuju da tretiranje SGC-7901 stanica s P, β-dimethylacrylshikonin su pokazali značajno citotoksični učinak protiv SGC-7901 stanice u dozi i vremenu ovisan način i P, inducira apoptozu β-dimethylacrylshikonin u SGC-7901 stanica dokazano povećani rano apoptotične stanice (Aneksin V ^{+ /PI -). i kasno apoptotične stanice (Aneksin V + /PI +) pregled}

omjer anti-i pro-apoptoze ekspresija proteina, kao što je bcl-2 /Bax, od presudne je važnosti za indukciju apoptoze, te odluči osjetljivost stanica na apoptozu [28]. Mitohondrija igraju važnu ulogu u prijenosu signala apoptoze [29]. Translocalization u apoptotičkim proteinima iz citosola u mitohondrijima dovodi do otpuštanja citokroma c i drugi mitohondrija izveden iz aktivatora kaspaze smanjenjem mitohondrijskog membranskog potencijala [30], [31]. Shikonin je izvijestila da inducira apoptozu preko mitohondrija put u HepG2 stanicama [32]. U ovom istraživanju, pokazali smo da β, β-dimethylacrylshikonin dolje regulira ekspresiju XIAP, cIAP-2 i Bcl-2 i up-regulirana ekspresija Bak i Bax i uzrokovao gubitak mitohondrijske membrane potencijal i otpuštanja citokroma c u SGC-7901 stanica, u skladu s mitohondrija ovisnom apoptoze. Promatranje P, β-dimethylacrylshikonin posredovane aktivacije kaspaze-9, kaspaze-3, a zatim cijepanjem PARP, kao rezultat da pan-kaspaze inhibitor Z-VAD-FMK smanjuje β, β-dimethylacrylshikonin inducirana apoptoza u SGC-7901 stanice, što upućuje da je mitohondrijski posredovane kaspaze kaskadni put igra ključnu ulogu u P, β-dimethylacrylshikonin-inducirane apoptoze. Uzeti zajedno, naši rezultati ukazuju da β, β-dimethylacrylshikonin regulira razinu ekspresije apoptoze povezanih proteina uzrokuje citokrom c oslobađanja i trigs kaspaze ovisnih stanica apoptotski smrt. Pregled

aktivirane mitogenom protein kinaze (MAPK) reguliraju različiti stanični programi, uključujući embriogeneze, proliferacije, diferencijacije i apoptoze [33]. Obiteljska proteini MAPK su sastavljeni od tri protein kinaze: ERK1 /2 (izvanstaničnim signalom-regulirane kinaze 1 i 2), JNK (c-Jun N-terminalne kinaze) i p38 [34], [35]. Općenito, prolazne aktivacije ERK dovodi do stanične proliferacije, ali s produljenim aktivaciju ERK je assoctiated sa diferencijacijom [36]. Sve je više dokaza upućuje na to da aktivacija ERK doprinosi apoptoze. Jeong et al. su pokazali da kempferol uzrokuje stanica raka na apoptozu putem ERK puta ovisne [21], [37], [38]. Nedavno je objavljeno da icaritin inducira inhibiciju rasta i apoptozu u ljudskim PSMCs putem ERK signalnog puta [39]. Li et al. pokazali su da aktivacija raf /MEK /ERK signalni put ima važnu ulogu u apoptozi kalcija induciranom leća epitelnih stanica [40]. Ovdje ćemo također utvrdio da je za trajno aktiviranje ERK je uključen u p, β-dimethylacrylshikonin-inducirane inhibicije rasta i apoptozu u SGC-7901 stanica. U0126, specifičan inhibitor MEK (MAPK /ERK kinaza) učinkovito blokira β, β-dimethylacrylshikonin inducirane ERK aktivacija i atenuiranog β, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze, što upućuje na pro-efekte apoptoze od p, p-dimethylacrylshikonin u SGC-7901 stanice posredovan produženo aktivacijom ERK1 /2 signalnog puta. pregled

Zaključno, otkrili smo da β, β-dimethylacrylshikonin inhibirao stanični rast i inducirana apoptoza u SGC-7901 stanice. Također smo ispitivali temeljne mehanizme uključene u P, β-dimethylacrylshikonin-inducirane apoptoze. Naši rezultati pokazuju da β, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze uključuje u smanjenju XIAP, cIAP-2, i bcl-2 ekspresiju proteina i indukciju Bak i Bax ekspresije proteina, i uzrokovala gubitak mitohondrijskog membranskog potencijala i oslobađanje citokroma c u SGC-7901 stanica. Naši rezultati također pokazali da β, β-dimethylacrylshikonin inducirana apoptoza uključuje aktivaciju kaspaze-3, caspase-8 i caspase-9 i cijepanjem PARP. Osim toga, ERK signalni put je sudjelovao u P, β-dimethylacrylshikonin-inducirane apoptoze. Naši rezultati pokazuju da β, β-dimethylacrylshikonin mogla biti razvijena kao potencijalni antitumorski agens protiv ljudskog raka želuca. Pregled

priznanja

Želimo zahvaliti H-BW za njihovu tehničku pomoć, a isto tako, što je X -QM i J-HC za korisne komentare na ovaj članak. pregled

• PLoS ONE: Plazma mikroRNA, Mir-223, Mir-21 i Mir-218, kao novi snažni Biomarkeri za rak želuca Detection
• PLoS ONE: povezanost pojedinih SNP ili haplotipova matrične metaloproteinaze 1 i rak želuca osjetljivošću, prohodnost i Prognosis