Abstract
β, β-Dimethylacrylshikonin, één van de actieve bestanddelen in de wortel extracten van Lithospermum erythrorhizon, bezitten antitumor activiteit. In deze studie hebben we gesproken over de moleculaire mechanismen van β, β-dimethylacrylshikonin in de apoptose van SGC-7901 cellen. β, β-Dimethylacrylshikonin verminderde de cellevensvatbaarheid van SGC-7901 cellen op een dosis- en tijdsafhankelijke wijze en geïnduceerde apoptose. β, β-Dimethylacrylshikonin behandeling SGC-7901-cellen neerwaarts gereguleerd de expressie van XIAP, CIAP-2 en Bcl-2 en up-gereguleerd de expressie van Bak en Bax en veroorzaakte het verlies van mitochondriale membraanpotentiaal en afgifte van cytochroom c . Bovendien, β, β-dimethylacrylshikonin behandeling leidde tot activatie van caspases-9, 8 en 3, en splitsing van poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), die werd opgeheven door voorbehandeling met het pan-caspaseremmer Z-VAD-FMK . β, β-Dimethylacrylshikonin geïnduceerde fosforylatie van extracellulair signaal gereguleerde kinase (ERK) in SGC-7901 cellen. U0126 een specifieke MEK remmer, blokkeerde de ERK activatie door β, β-dimethylacrylshikonin ingetrokken en β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose. Onze resultaten toonden dat β, β-dimethylacrylshikonin remde groei van maagkanker SGC-7901 cellen door het induceren ERK signaleringsroute, en gaven een aanwijzing voor preklinische en klinische evaluaties van β, β-dimethylacrylshikonin maagkanker therapie.
Visum: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin induceert Mitochondriën afhankelijke apoptose door de ERK Pathway in Human maagKanker SGC-7901 Cells. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10.1371 /journal.pone.0041773
Editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, de Verenigde Staten van Amerika
Ontvangen: 1 maart 2012; Aanvaard: 25 juni 2012; Gepubliceerd: 27 juli 2012
Copyright: © Shen et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd
Financiering:. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de provincie Zhejiang Natural Science Foundation of China naar X-QM (LY12H28005), en de wetenschappelijke fundering van Zhejiang Chinese Medical University om H-BW (2011ZY05). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript
Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan
Introductie
Maagkanker is een van de agressieve kwaadaardige tumors, hoewel de ontwikkeling van radiotherapie, chemotherapie en biotherapie, de ernstige bijwerkingen onvermijdelijk [1] derhalve effectievere antitumor geneesmiddelen met minder bijwerkingen voor de behandeling van maagkanker nodig zijn.
Lithospermum erythrorhizon is een belangrijke Chinese kruid. Het heeft een aantal actieve componenten: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (afb. 1A) en shikonin [2]. In de traditionele Chinese geneeskunde, vertoont verschillende biologische functies waaronder anti-microbiële, anti-inflammatoire, anti-tumor, immuunregulatie en anti-HIV eigenschappen [3] - [6]. Het antitumoreffect van shikonin en zijn derivaten werd eerst aangetoond door hun activiteiten tegen tumorgroei in muizen Sarcoma-180 [7]. Shikonin effect vertoont niet alleen door direct doden van tumorcellen, maar ook door het remmen van tumorangiogenese [8]. Studies bleek dat shikonin geïnduceerde apoptose in humane kwaadaardige melanoom, blaaskanker, baarmoederhalskanker, longkanker en leverkanker, etc. [9] - [13]. Echter, het heeft minder bijwerkingen en meer beschermende effect in humane normale cellen [14], [15]. Hsu PC et al gebleken dat shikonin tot apoptose door middel van opwaartse regulatie van p27, p53, Bax en down-regulatie van Bcl-2 en Bcl-xL in humane colorectaal carcinoom Colo 205 cellen [16]. De tumorinvasie geremd door shikonin in sommige kankercellen kan door de neerwaartse regulatie van NF-KB gemedieerde MMP-9 expressie [17]. Shikonin induceert ook apoptose via ROS productie in leverkanker [12]. Singh F et al vond ook dat Shikonin verlaagde gefosforyleerd niveaus van EGFR, ERK en proteïne tyrosine kinases en verhoogde intracellulaire niveaus van apoptose-gerelateerde eiwitten, die veroorzaakt epidermoïde carcinoma cellen om apoptose [18] ondergaan.
Uit recente gegevens is gebleken dat β, β-dimethylacrylshikonin had significante anti-tumor effect op hepatocellulair carcinoom door het activeren van caspase-3 [19]. Echter dit effect van β, β-dimethylacrylshikonin menselijke maagkanker cellen niet beschreven en de moleculaire mechanismen zijn nog weinig begrepen. Zo is in de huidige studie, zullen we bespreken effect van β, β-dimethylacrylshikonin op de menselijke maagkanker cel SGC-7901 en de bijbehorende signalering naar een beter begrip van het mechanisme van β, β-dimethylacrylshikonin op maagkanker.
materialen en reagentia
SGC-7901-cellen werden gekocht van de Chinese Academie van Wetenschappen Cell Bank of Type Culture Collection (Shanghai, China). β, β-Dimethylacrylshikonin werd gekocht bij Tokyo Chemical Industry (Tokyo, Japan). MTT en DAPI werden gekocht bij Calbiochem (San Diego, CA, USA). U0126 werd gekocht bij Cell Signaling (Boston, MA, USA). Pan-caspase-remmer (Z-VAD-FMK) werd gekocht van Beyotime Instituut voor Biotechnologie (Shanghai, China). Antilichaam voor cytochroom c werd gekocht van Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Antilichamen tegen ERK, fosfo-ERK, Bcl-2, Bcl-xl, XIAP, CIAP-2, survivn, Bax, Bak, gesplitst caspase-9, gesplitst caspase-3, gesplitst PARP en β-actine werden gekocht bij Cell Signaling ( Boston, MA, USA). FITC-Annexine V Apoptose Detectie Kit werd gekocht bij Becton Dickinson (San Diego, CA, USA).
SGC-7901 cellen werden gekweekt in RPMI 1640 medium met 10% foetaal runderserum (Hyclone, UT), en gehandhaafd op 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO 2. Daarna werden cellen gezaaid in een 96-putjes tot een eindconcentratie van 5 x 10 3 cellen /putje en geïncubeerd in RPMI 1640 medium dat 10% FCS gedurende 24 uur, daarna werden de cellen behandeld met de aangegeven concentratie van β, β-dimethylacrylshikonin gedurende 24 uur en 48 uur. Medium verwijderd en vers medium werd toegevoegd aan elk putje samen met 20 ul MTT-oplossing (5 mg /ml). Na 4 uur incubatie werd 150 pl DMSO aan elk putje toegevoegd. De platen werden afgelezen bij een golflengte van 570 nm gebruikt Varioskan Flash Multimode Reader (Thermo Scientific, USA). Reduplicate vier putjes werden gebruikt voor elke behandeling en experimenten werden driemaal herhaald. SGC-7901-cellen werden in de put van zes-putjes plaat. Na 24 uur celkweek, werden ze behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin gedurende de aangegeven tijdsperioden. De cellulaire morfologie werd waargenomen met behulp van een omgekeerde microscoop. (Model IX70, Olympus, Tokyo, Japan) DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenylindool) kleuring SGC-7901-cellen werden in het putje van een zes-puts plaat. Na 24 uur celkweek, werden ze behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin gedurende de aangegeven perioden, toen de cellen werden gefixeerd in koude aceton gedurende 30 minuten en geïncubeerd met DAPI (1 mg /ml) gedurende 30 min. De apoptotische nuclei kenmerk zo intensief gekleurd werden gedetecteerd met fluorescentie microscopie. (Model IX71, Olympus, Tokyo, Japan) Annexine V /PI assays voor apoptose Voor Annexine V /PI assays cellen werden gekleurd met AnnexinV-FITC en PI en geëvalueerd voor apoptose door doorstroomcytometrie volgens het protocol mannufacturer (BD PharMingen, San Diego, CA, USA). Kort samengevat, 1 x 10 5 cellen werden tweemaal met PBS gewassen en gekleurd met 5 gl AnnexinV-FITC en PI 5 pl in 500 ul bindingsbuffer gedurende 15 min bij kamertemperatuur in het donker. De apoptotische cellen werden bepaald met BD FACS Diva (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Annexine V kleuring dient als een maat voor fosfatidylserine externalisatie en cellen die Annexine V + /PI -. Vertegenwoordigen vroege apoptotische cellen Meting van mitochondriale membraanpotentiaal Cells ( 5 x 10 5 cellen /ml) werden behandeld met of zonder β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /l) gedurende 24 uur en gekleurd met JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, USA) voor 15 min bij 37 ° C. Mitochondriale membraanpotentiaal werd gedetecteerd door stromingscytometrie (FACSCanto II, Becton Dickinson, USA). De cellen werden behandeld met de aangegeven concentratie van β, β-dimethylacrylshikonin gedurende de aangegeven tijd in RPMI 1640 medium met 10% FCS. De cellen werden in ijskoude PBS, en de celextracten werden bereid in RIPA-buffer met proteinase inhibitor cocktail van Calbiochem (San Diego, CA). De proteïneconcentraties van de cellysaten werd bepaald en gekookt met gel-laadbuffer gedurende 10 min bij 100 ° C. Monsters met 30 ug totaal eiwit werden geëlektroforeerd op 10% SDS-polyacrylamidegels en overgebracht naar PVDF-membraan (Millipore, Temecula, CA). Na overdracht werd het membraan geblokkeerd in TBST (TBS bevattende 0,1% Tween 20) met 5% afgeroomde melk gedurende 2 uur, gevolgd door incubatie overnacht bij 4 ° C met geschikte primaire antilichamen. Na driemaal wassen in TBST werden de membranen gedurende 2 uur bij 37 ° C met 1:5000 mierikswortel peroxidase-geconjugeerde secundaire antilichamen geschikt. Tenslotte werden de membranen zichtbaar gemaakt met versterkte chemiluminescentie het detectiesysteem (Immun-Star WesternC Kit, Bio-Rad, USA). Immunofluorescene kleuring werd toegepast om de subcellulaire verdeling van analyseren cytochroom c in SGC-7901-cellen geïnduceerd door β, β-dimethylacrylshikonin. Cellen gekweekt op steriele glazen coverlips werden gefixeerd in koude aceton gedurende 10 minuten. Na gepermeabiliseerd met 0,3% Triton X-100 gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur werden de cellen geblokkeerd in 3% bovine serum albumine gedurende 30 min en overnacht geïncubeerd bij 4 ° C met anti-cytochroom c antilichaam (1:30). Na driemaal wassen in PBS, werden SGC-7901 cellen gelabeld met Alexa Fluor 488-geconjugeerd secundair antilichaam. DAPI werd vervolgens toegevoegd voor de nucleaire kleuring. Microscopische analyse werd uitgevoerd met een fluorescentiemicroscopie (model IX71, Olympus, Tokyo, Japan). verkregen resultaten zijn het gemiddelde ± standaardafwijking (SD) van drie onafhankelijke experimenten. Zij werden beoordeeld door één variantieanalyse (ANOVA). Significante verschillen werden vastgesteld op p. ≪ 0.05 Resultaten β, β-Dimethylacrylshikonin remt levensvatbaarheid van SGC-7901 cellen Om de cytotoxische effecten van β te bepalen, β-dimethylacrylshikonin op maagkanker cellen. SGC-7901 cellen werden behandeld met 2,5, 5, 7,5, 10 umol /L van β, β-dimethylacrylshikonin gedurende 24 uur en 48 uur, de verminderde levensvatbaarheid van de cellen behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin was 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82% en 61,76 ± 0,18% in 24 uur in vergelijking met de met drager behandelde cellen (Fig. 1B) respectievelijk. Voor de 48 uur behandeling, cellevensvatbaarheid was 52,03 ± 9,45%, 38,99 ± 1,43%, 30,70 ± 1,58% en 27,4 ± 0,31% (Fig. 1B). De half-maximale remmende concentratie (IC 50) van β, β-dimethylacrylshikonin voor SGC-7901-cellen was 11,04 uM en 2,89 uM bij 24 uur en 48 uur respectievelijk. SGC-7901 cellen werden eerst behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin volgende resultaten de cellen onderging gemarkeerde morfologische veranderingen na behandeling met 10 umol /L β, β-dimethylacrylshikonin vergelijking met de onbehandelde controle voor 24 h. In aanwezigheid van β, β-dimethylacrylshikonin, SGC-7901 celaantal verminderd en de cellen werden door kleine en vorm, en loskomen van de plaat ten opzichte van de negatieve controlegroep (Fig. 2A). β, β-dimethylacrylshikonin ook geïnduceerde nucleaire condensatie met intensieve DAPI kleuring vergeleken met de nucleaire controle SGC-7901 cellen gedurende 24 uur (fig. 2B). Om te bepalen of cytotoxity van β, β-dimethylacrylshikonin betrokken apoptose evalueerden we het apoptotische effect van β, β-dimethylacrylshikonin in SGC-7901 cellen door flowcytometrie voor Annexine V en propidiumjodide (PI) kleuring. Het percentage vroege apoptotische cellen (annexine V + /PI -) was 1,6%, 7,2%, 18,1%, 24,3% en 24,4% in responsie op het voertuig, 2,5, 5, 7,5 en 10 umol /L β, β-dimethylacrylshikonin respectievelijk 24 uur (fig. 2C). Interessant is dat de late apoptotische cellen (annexine V + /PI +) waren significant toegenomen in SGC-7901-cellen (29,7% met 7,5 micromol /l en 33,6% met 10 micromol /l β, β-dimethylacrylshikonin behandeling ) (Fig. 2C). β, β-dimethylacrylshikonin induceert mitochondriale geassocieerd met apoptose in SGC-7901 cellen Bcl-2 familie eiwitten omvatten pro-apoptotische eiwitten (Bax, Bak bid) en anti-apoptotische eiwitten (Bcl-2, Bcl-xL, CIAP-2, XIAP en survivine). Ze kunnen activeren of remmen de afgifte van stroomafwaartse factoren die leiden tot de activatie van caspase-3 en PARP in de uitvoering van apoptose [20]. Om de apoptose-gerelateerde eiwitten, pro-apoptotische eiwitten (Bax, Bak) en anti-apoptotische eiwitten te detecteren (XIAP, CIAP-2, Bcl-2, Bcl-xL, survivine) werden gedetecteerd door Western blotting na SGC-7901 cellen werden behandeld met verschillende concentraties van β, β-dimethylacrylshikonin (0, 2,5, 5, 7,5 en 10 umol /l) gedurende 24 uur. De resultaten gaven aan dat β, β-dimethylacrylshikonin de expressie van XIAP, CIAP-2, Bcl-2 (Fig. 3A) te verlagen. De neerwaartse regulatie van XIAP en Bcl-2 waren minder uitgesproken terwijl de neerwaartse regulatie van CIAP-2 was vrij dramatisch en dosisafhankelijk. Er was geen significante verandering van Bcl-XL en survivn in SGC-7901-cellen. Of β, β-dimethylacrylshikonin kan de expressie van pro-apoptotische eiwitten (Bax, Bak) moduleren werd eveneens onderzocht. We vonden dat β, β-dimethylacrylshikonin verhoogde de expressie van Bak in een dosis-afhankelijke manier, maar had weinig effect op Bax (fig. 3B). Caspase Eiwitten zijn essentieel enzymen apoptose voeren. Onder Caspase familieleden, caspase-3 is een belangrijke uitvoerder van apoptose in zoogdierlijke cellen [21]. Het kan worden geactiveerd door dood-receptor gemedieerde extrinsieke caspase-8 route en de mitochondria afhankelijke caspase-9 intrinsieke route [22], [23]. Om verder inzicht in de moleculaire mechanismen van apoptose werden SGC-7901 cellen behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin en gedetecteerd door Western blotting analyse voor de expressie verandering van caspase-3, caspase-8 en caspase-9, resultaten toonden een dosisafhankelijke verhoging van gesplitst caspase-3, gesplitst caspase-8 en caspase-9 gesplitst in β, β-dimethylacrylshikonin behandelde cellen. PARP klieving ander bekend kenmerk van apoptose is ook gevonden in β, β-dimethylacrylshikonin behandelde cellen (Fig. 3C). Mitochondriale dysfunctie geïnduceerde apoptose die vaak het gevolg van een afname van mitochondriale membraanpotentiaal. Aangetoond is centraal in de apoptotische route te zijn. SGC-7901 cellen werden behandeld met of zonder β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /l) gedurende 24 uur de volgende resultaten mitochondria membraanpotentiaal werd verminderd van 98,6% tot 56,9% na β, β-dimethylacrylshikonin werd behandeld om de SGC- 7901 cellen (fig. 3D). We vervolgens onderzocht de verdeling en de subcellulaire lokalisatie van cytochroom c te vinden of de mitochondria pathway betrokken bij β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose. Na SGC-7901 cellen werden behandeld met β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /l) gedurende 24 uur, werd de verdeling van cytochroom c gevisualiseerd met een confocale laser microscoop, het β, β-dimethylacrylshikonin behandelde cellen vertoonden wazig morfologie (Fig. 3E) in tegenstelling tot de duidelijk helder uiterlijk in de controleputjes, waarin de translocatie van cytochroom C uit de mitochondria in het cytoplasma in β, β-dimethylacrylshikonin behandelde cellen. de rol van caspase activatie verder vast te β, β-dimethylacrylshikonin- geïnduceerde apoptose, behandelden wij SGC-7901 cellen met pan-caspaseremmer Z-VAD-fmk (10 umol /L) voor β, β-dimethylacrylshikonin behandeling. De pan-caspaseremmer Z-VAD-FMK voorbehandeling verminderde de expressie van gesplitst caspase-3, gesplitst PARP en verminderde β, β-dimethylacrylshikonin-geïnduceerde apoptose (Figuur 3F &. G). Deze gegevens toonden aan dat mitochondriale gemedieerde caspase cascade pathway een zeer belangrijke rol in β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose. Er werd aangetoond dat MAPK signalering betrokken bij verschillende gebeurtenissen van cellulaire stress en stimuli geïnduceerde apoptose [24], [25]. Daarom onderzochten wij de activering van ERK, JNK en p38 na β, β-dimethylacrylshikonin behandeling. Zoals getoond in Fig. 4A & B, de fosforylering niveaus van ERK en JNK waren blijkbaar stijgen na de β, β-dimethylacrylshikonin behandeling van 2 uur, en de fosforylering niveaus vertoonde een dosisafhankelijke wijze. Daarnaast fosforylatie van ERK niveaus laatste vierentwintig uur. Echter, geen significante veranderingen van fosforylering van p38 niveaus werden na β, β-dimethylacrylshikonin behandeling (Fig. 4C). Deze resultaten suggereerden dat langdurige activering van de ERK betrokken bij β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901 cellen. vervolgens hebben we onderzocht of de β,-β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde aanhoudende activering van de ERK signaleringsroute een rol in apoptose speelt. Zoals getoond in Fig. 5A & B, Western blot analyse onthulde dat U0126 (een bepaalde MEK remmer) remde aanhoudende ERK activatie en splitsing van caspase-3, PARP in β, β-dimethylacrylshikonin behandeling, terwijl de pan-caspaseremmer Z-VAD-fmk geen effect had op β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde activatie van ERK (fig. 5D). Bovendien U0126 verminderde β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901-cellen (Fig. 5C). Deze resultaten toonden aan dat β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901 cellen worden gemedieerd door aanhoudende activatie van de ERK signaleringsroute. Shikonin derivaten worden de actieve componenten geïsoleerd uit de Chinese kruiden Lithospermum erythrorhizon [5]. Deze verbindingen zijn veelbelovende geneesmiddelkandidaten mocht zijn gemeld meerdere antikanker effecten in vivo en in vitro [5], [26]. Onder de componenten van Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin heeft belangrijke anti-tumor effecten in vergelijking met andere werkzame stoffen [27]. Betreffende antikanker activiteit-shikonin rendered apoptose door activatie van caspase-afhankelijke route is in veel kwaadaardige tumoren. In deze studie hebben we het effect van β, β-dimethylacrylshikonin menselijke maagkanker SGC-7901 cellen. Onze resultaten gaven aan dat de behandeling van SGC-7901 cellen met β, β-dimethylacrylshikonin toonde een significant cytotoxisch effect tegen SGC-7901 cellen op een dosis- en tijdsafhankelijke wijze en β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901-cellen werd aangetoond door een verhoogde vroege apoptotische cellen (annexine V + /PI -). en late apoptotische cellen (annexine V + /PI +) De verhouding tussen anti- en pro-apoptotische eiwitexpressie, zoals Bcl-2 /Bax, cruciaal is voor de inductie van apoptose, en bepaalt de gevoeligheid van cellen voor apoptose [28] ondergaan. Mitochondriën spelen een belangrijke rol in de signaaltransductie van apoptose [29]. De translocalization apoptotische eiwitten van het cytosol naar de mitochondriën leidt tot de afgifte van cytochroom c en tweede-afgeleide mitochondria activator van caspases door een verlaging van mitochondriale membraanpotentiaal [30], [31]. Shikonin is beschreven om apoptose te induceren via mitochondriën route in HepG2-cellen [32]. In deze studie hebben we aangetoond dat β, β-dimethylacrylshikonin neerwaarts gereguleerd de expressie van XIAP, CIAP-2 en Bcl-2 en up-gereguleerd de expressie van Bak en Bax, en veroorzaakte het verlies van mitochondriale membraanpotentiaal en afgifte van cytochroom c in SGC-7901 cellen, consistent met mitochondria afhankelijke apoptose. De waarneming van β, β-dimethylacrylshikonin gemedieerde activering van caspase-9, caspase-3, en daaropvolgende splitsing van PARP, en waardoor de pan-caspaseremmer Z-VAD-FMK verminderde β,-β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901 cellen, wat suggereert dat mitochondriale-gemedieerde caspase cascade route speelt een belangrijke rol in β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose. Bij elkaar genomen, onze resultaten gaven aan dat β, β-dimethylacrylshikonin reguleert expressie van apoptose-gerelateerde eiwitten, zorgt ervoor dat cytochroom c vrijlating en Trigs caspase-afhankelijke cel apoptotische dood. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) te reguleren diverse cellulaire programma's waaronder embryogenese, proliferatie, differentiatie en apoptose [33]. De MAPK Eiwitten bestaan uit drie eiwitkinasen: ERK1 /2 (extracellulair signaal-gereguleerde kinases 1 en 2), JNK (c-Jun-N-terminaal kinase), en p38 [34], [35]. In het algemeen voorbijgaande ERK activatie leidt tot celproliferatie, maar aanhoudende activatie van ERK is assoctiated met differentiatie [36]. Opkomende bewijs suggereert dat de activering van ERK bijdraagt tot apoptose. Jeong et al. bleek dat kaempferol veroorzaakt kankercel apoptose via een ERK-afhankelijke route [21], [37], [38]. Recent is gerapporteerd dat icaritin induceert groeiremming en apoptose in humane PSMCs via ERK signaleringsroute [39]. Li et al. aangetoond dat activatie van RAF /MEK /ERK signaleringsroute een cruciale rol in de calcium geïnduceerde apoptose lens epitheelcellen [40] speelt. Hier vonden we ook dat de aanhoudende activatie van ERK betrokken bij β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde groeiremming en apoptose in SGC-7901 cellen. U0126, een specifieke remmer van MEK (MAPK /ERK kinase), effectief geblokkeerd β,-β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde ERK activatie en verzwakte β,-β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose, wat suggereert dat de pro-apoptotische effecten van β, β-dimethylacrylshikonin in SGC-7901 cellen worden gemedieerd door aanhoudende activatie van ERK1 /2 signaleringsroute. Tot slot vonden wij dat β, β-dimethylacrylshikonin remde celgroei en geïnduceerde apoptose in SGC-7901 cellen. We bestudeerden ook de onderliggende mechanismen die betrokken zijn bij β, β-dimethylacrylshikonin-geïnduceerde apoptose. Onze resultaten gaven aan dat β,-β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose betreft de vermindering van XIAP, CIAP-2 en Bcl-2 eiwit expressie en inductie van Bak en Bax eiwitexpressie, en veroorzaakte het verlies van mitochondriale membraanpotentiaal en afgifte van cytochroom c in SGC-7901 cellen. Onze resultaten toonden ook aan dat β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose omvat de activatie van caspase-3, caspase-8 en caspase-9 en de splitsing van PARP. Trouwens, ERK signaleringsroute ook deelgenomen aan β, β-dimethylacrylshikonin-geïnduceerde apoptose. Onze resultaten geven aan dat β, β-dimethylacrylshikonin kan worden ontwikkeld als een potentieel antikankermiddel tegen menselijke maagkanker. We zouden H-BW bedanken voor hun technische bijstand en wij danken ook X -QM en J-HC voor nuttige reacties op dit artikel.
morfologische veranderingen
Western analyse Bloting
Immunofluorescentiekleuring
Statistische analyse
β, β-Dimethylacrylshikonin induceert SGC -7901 cellen apoptose
β, β-Dimethylacrylshikonin induceert langdurige ERK activering in SGC-7901 cellen speelt
De ERK signaleringsroute is betrokken bij β, β-dimethylacrylshikonin geïnduceerde apoptose in SGC-7901 cellen
Discussie
Dankwoord
Microbioom kan helpen bij het identificeren van pre-kankerrisico bij vrouwen met HPV
Nieuwe computationele modelleringsmethode voorspelt hoe darmmicroben in de loop van de tijd veranderen
Bloedonderzoek voor microbieel DNA kan waarschuwen voor kanker
Dieet met weinig gefermenteerde koolhydraten verbetert de kwaliteit van leven van patiënten met IBD
Op geitenmelk gebaseerde formule goed voor de darmgezondheid van zuigelingen
De eerste bevindingen van het Human Microbiome Project leidden tot 'honderden vervolgonderzoeken'
Landen met een oudere bevolking hebben hogere SARS-CoV-2-infecties en sterfgevallen,
zegt studie Meer dan een jaar in de pandemie van de coronavirusziekte 2019 (COVID-19), veroorzaakt door het ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2), het verschil in de ernst va
Sterk microbioom in het vroege leven gekoppeld aan minder luchtweginfecties
Er zijn kolonies van microscopisch kleine bacteriën in verschillende delen van het menselijk lichaam, waaronder de neus, mond, ingewanden, en longen. collectief, deze bacteriën staan bekend als de m
Onderzoek koppelt SARS-CoV-2-prevalentie,
ziekenhuisoppervlakken en patiëntmicrobioom Onderzoekers vonden een hogere bacteriële diversiteit in SARS-CoV-2-patiëntenkamers en oppervlakken in de kamer, wat suggereert dat bacteriële diversiteit