PLoS One: β, β-Dimethylacrylshikonin indukál mitokondrium függő apoptózis révén ERK Humán gyomorkarcinóma SGC-7901 Cells

absztrakt katalógusa

β, β-Dimethylacrylshikonin, az egyik az aktív összetevők a gyökér kivonatát Lithospermum erythrorhizon, rendelkezünk tumorellenes aktivitást. Ebben a vizsgálatban, megbeszéltük a molekuláris mechanizmusainak β, β-dimethylacrylshikonin az apoptózis a SGC-7901 sejtek. β, β-Dimethylacrylshikonin csökkentette a sejt életképességét SGC-7901 sejtek dózis- és időfüggő módon, és az indukált sejtek apoptózisát. β, β-Dimethylacrylshikonin kezelés SGC-7901 sejtek alulszabályozott a XIAP expressziója, cIAP-2 és Bcl-2 és felülszabályozott expresszióját Bak és Bax és a kárt a mitokondriális membrán potenciál és felszabadulását a citokróm c . Továbbá, β, β-dimethylacrylshikonin kezelés vezetett kaszpázok aktiválása-9, 8 és 3, és a hasítást a poli (ADP-ribóz) polimeráz (PARP), amely eltörölte végzett előkezeléssel a pán-kaszpáz inhibitor Z-VAD-FMK . β, β-Dimethylacrylshikonin indukált foszforilezését extracelluláris szignál-szabályozott kináz (ERK) az SGC-7901 sejteket. U0126, specifikus MEK inhibitor, blokkolt az ERK aktiváció által β, β-dimethylacrylshikonin, és megszüntette a β, β-dimethylacrylshikonin indukált apoptózist. Eredményeink igazolták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin gátolt növekedés gyomorrák SGC-7901 sejtek indukálásával ERK jelátviteli útvonalat, és feltéve, egy nyom a preklinikai és klinikai értékelése β, β-dimethylacrylshikonin gyomorrák terápiában.

idézet: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin indukál mitokondrium függő apoptózis révén ERK Humán gyomorkarcinóma SGC-7901 sejteket. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10,1371 /journal.pone.0041773 katalógusa

Szerkesztő: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: március 1, 2012; Elfogadva: június 25, 2012; Megjelent: július 27, 2012 katalógusa

Copyright: © Shen és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka ben támogatták Zhejiang tartományi Természettudományi Alapítvány Kína X-QM (LY12H28005), valamint a tudomány alapja a Zhejiang kínai Orvosi Egyetem H-BW (2011ZY05). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

gyomorrák egyik agresszív rosszindulatú daganatok, bár a fejlődés a sugárterápia, kemoterápia és Biotherapy, a súlyos mellékhatások elkerülhetetlen [1], ezért hatékonyabb tumorellenes gyógyszerek kevesebb mellékhatás kezelésére gyomorrák van szükség. katalógusa

Lithospermum erythrorhizon fontos kínai gyógynövény. Van néhány aktív komponensek: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (1A.), És sikonin [2]. A hagyományos kínai orvoslás, hogy mutat többszörös biológiai funkcióit, beleértve az anti-mikrobiális, gyulladáscsökkentő, anti-tumor, immun szabályozás és a HIV-ellenes tulajdonságokkal [3] - [6]. Az anti-tumor hatását sikonint és származékai először bizonyította tevékenységük ellen tumornövekedést rágcsáló szarkóma-180 [7]. Sikonint mutat hatás nem csupán megöli tumorsejtek közvetlenül, hanem azáltal, hogy gátolja a tumor angiogenezis [8]. Vizsgálatok kimutatták, hogy a sikonint apoptózist indukált humán rosszindulatú melanoma, hólyagrák, méhnyakrák, tüdőrák és a máj rák, és így tovább [9] - [13]. Azonban kevesebb mellékhatása és védő hatással van az emberi sejtek normális [14], [15]. Hsu PC és munkatársai kimutatták, hogy a sikonint vezetett sejt apoptózis révén up-regulációját p27, p53, Bax és down-regulációja a Bcl-2 és Bcl-XL humán kolorektális karcinóma COLO 205 sejteket [16]. A tumor invázió gátolta sikonint bizonyos rákos sejtekben május és down-regulációja az NF-kB-mediált MMP-9 expresszióját [17]. Sikonint is apoptózist indukál keresztül ROS termelést hepatocelluláris karcinóma [12]. Singh F. és munkatársai azt is megállapította, hogy a sikonint csökkent foszforilált szintje EGFR, az ERK és protein-tirozin-kinázok és a megnövekedett intracelluláris szintjét az apoptózis-kapcsolatos fehérjék, ami miatt epidermoid karcinóma sejtek apoptózist [18].

Újabb bizonyítékok azt mutatták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin volt szignifikáns tumor-ellenes hatás hepatocelluláris karcinóma aktiválásával kaszpáz-3 [19]. Azonban az ilyen hatása β, β-dimethylacrylshikonin humán gyomorrák sejtek még nem számoltak be, és a molekuláris mechanizmusok még nem ismertek. Így a jelen tanulmányban fogjuk megvitatni hatása β, β-dimethylacrylshikonin humán gyomorrák sejt SGC-7901 és a hozzá kapcsolódó jelátviteli, hogy jobban megértsék a mechanizmus β, β-dimethylacrylshikonin a gyomorrák. Katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

anyagok és reagensek katalógusa

SGC-7901 sejteket vásárolt kínai Tudományos Akadémia Cell Bank of Type Culture Collection (Sanghaj, Kína). β, β-Dimethylacrylshikonin vásároltunk a Tokyo Chemical Industry (Tokió, Japán). MTT és DAPI vásároltuk a Calbiochem (San Diego, CA, USA). U0126-ben Cell Signaling cégtől (Boston, MA, USA). Pan-kaszpázgátló (Z-VAD-FMK) vásároltunk a Beyotime Institute of Biotechnology (Sanghaj, Kína). Antitesttel citokróm C-t vásárolt a Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Elleni antitestek ERK, foszfo-ERK, Bcl-2, Bcl-XL, XIAP, cIAP-2, survivn, Bax, Bak, hasított kaszpáz-9, hasított kaszpáz-3, hasított PARP és β-aktin vásároltuk a Cell Signaling ( Boston, MA, USA). FITC-Annexin V Apoptosis Detection Kit vásároltunk a Becton Dickinson (San Diego, CA, USA).

Sejttenyésztés és a sejt proliferációs vizsgálati

SGC-7901 sejteket tenyésztettünk RPMI 1640 tápközegben 10% borjúembrió-szérumot (Hyclone, Utah), és a hőmérsékletet 37 ° C-on nedvesített atmoszférában, 5% CO _{2. Ezután sejteket szélesztettünk 96 lyukú étel hogy a végső koncentráció 5 × 10 ^{3 sejt /lyuk, és inkubáljuk RPMI 1640 közegben, amely 10% FCS-t 24 órán, azt követően, hogy a sejteket kezeltük a jelzett koncentrációban β, β-dimethylacrylshikonin 24 óra és 48 óra. Táptalajt eltávolítottuk, és friss tápközeget adtunk mindegyik jól együtt 20 ul MTT oldatot (5 mg /ml). 4 óra eltelte után inkubálást 150 | il DMSO-t adunk az egyes lyukakhoz. A lemezeket leolvastuk 570 nm hullámhosszon használva Varioskan Flash-Multimódusú Reader (Thermo Scientific, USA). Négy megdupláz kutak használtunk minden egyes kezelés, és kísérleteket háromszor megismételtük.}}

morfológiai változások

SGC-7901 sejteket helyeztük a jól egy hat lyukú lemez lyukaiba. 24 óra eltelte után sejttenyészet, kezeltük őket β, β-dimethylacrylshikonin a jelzett időszakokra. A celluláris morfológia volt megfigyelhető egy invert mikroszkóp (Model IX70; Olympus, Tokió, Japán).

DAPI-t (4 ', 6-diamino-2-fenil) festéssel

SGC-7901 sejtek kerültek a jól egy hat lyukú lemez lyukaiba. 24 óra eltelte után sejttenyészet, kezeltük őket β, β-dimethylacrylshikonin a jelzett időszakokban, majd a sejteket hideg acetonban fixáltuk 30 percig, és inkubáltuk DAPI-t (1 mg /ml) 30 percig. Az apoptotikus sejtmagokat jellemezhető, mint intenzíven festett alkalmazásával detektáltuk fluoreszcens mikroszkóppal (Model IX71; Olympus, Tokió, Japán).

Annexin V /PI assay apoptózis

Annexin V /PI vizsgálatokhoz a sejteket festettük Annexin V-FITC és PI, és értékeltük az apoptózist áramlási citometriával szerint mannufacturer protokollja (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA). Röviden, 1 × 10 ^{5 sejteket kétszer mostuk PBS-sel, és festettük 5 ul Annexin V-FITC-vel és 5 | il PI 500 ul kötőpufferben 15 percig, szobahőmérsékleten, sötétben. Az apoptotikus sejteket alkalmazásával határoztuk meg a BD FACS Diva szoftvert (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Annexin V festés szolgál intézkedés foszfatidil külsővé és sejtek, amelyek az annexin-V + /PI - képviseli korai apoptotikus sejtek. Katalógusa}

mérése membránpotenciál katalógusa

Cells ( 5 × 10 ^{5 sejt /ml) kezeltük, vagy anélkül β, β-dimethylacrylshikonin (10 nmol /l) 24 órán és megfestettük JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, USA) 15 percig 37 ° C-on. Mitokondriális membránpotenciál detektáltuk áramlási citometriával (FACSCanto II, Becton Dickinson, USA).}

Western Bloting elemzés

A sejteket a jelzett koncentrációjú β, β-dimethylacrylshikonin a jelzett ideig RPMI 1640 tápközegben, amely 10% FCS-t. A sejteket összegyűjtöttük jéghideg PBS-ben, és a sejt extraktumokat készítettünk RIPA pufferben proteináz inhibitor koktél a Calbiochem (San Diego, CA). A fehérje koncentrációját a sejt lizátumot meghatározni és főtt gél-loading pufferben 10 percen át 100 ° C-on. Tartalmazó mintákat 30 ng összes fehérje elektroforézisnek 10% -os SDS-poliakrilamid gélen, és PVDF membránra (Millipore, Temecula, CA). Az áthelyezés, a membrán blokkoltuk TBST (TBS, amely 0,1% Tween 20), amely 5% fölözött tejet 2 órán át, ezt követi az inkubálás egy éjszakán át 4 ° C-on a megfelelő primer antitestekkel. Mosás után háromszor TBST a membránokat inkubáltuk 2 órán át 37 ° C-on 1:5000 tormaperoxidázzal konjugált megfelelő másodlagos antitestekkel. Végül a membránokat tettük láthatóvá használja a fokozott kemilumineszcenciás kimutatási rendszer (Immun-Star WesternC Kit, Bio-Rad, USA).

immunofluoreszcens festéssel

Immunofluorescene festést alkalmaztunk, hogy elemezze a szubcelluláris eloszlását citokróm C SGC-7901 sejtek által indukált β, β-dimethylacrylshikonin. Tenyésztett sejtek steril üveg coverlips fixáltuk hideg acetonnal 10 percig. Miután permeabilizált 0,3% Triton X-100-on 20 percig, szobahőmérsékleten, a sejteket blokkoltuk 3% szarvasmarha szérum albumin, 30 percig és egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C-anti-citokróm C antitest (1,30). Mosás után háromszor PBS-ben, SGC-7901 sejteket jelöltük Alexa Fluor 488 konjugált másodlagos antitesttel. DAPI adunk ezután hozzá, a sejtmag megfestésére. Mikroszkópos elemzés segítségével végeztük egy fluoreszcens mikroszkóppal (Model IX71; Olympus, Tokió, Japán).

Statisztikai analízis

A közölt adatok az átlag ± szórás (SD) három független kísérlet során. Ezeket értékeltük egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA). Jelentős különbséget találtunk p < 0,05. Katalógusa

Eredmények katalógusa

β, β-Dimethylacrylshikonin gátolja életképességét SGC-7901 sejtek katalógusa

Annak érdekében, hogy meghatározzák a citotoxikus hatása β, β-dimethylacrylshikonin a gyomor rákos sejteket. SGC-7901 sejteket kezeltünk 2,5, 5, 7,5, 10 nmol /l β, β-dimethylacrylshikonin 24 óra és 48 óra, a csökkentett életképességét kezelt sejtek β, β-dimethylacrylshikonin ben 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82%, és a 61,76 ± 0,18% volt 24 órával összehasonlítva a vivőanyaggal kezelt sejtek (ábra. 1B). A 48 órás kezelés, a sejtek életképessége volt 52,03 ± 9,45%, 38,99 ± 1,43%, 30,70 ± 1,58%, és 27,4 ± 0,31% (ábra. 1B). A fél-maximális gátló koncentráció (IC _{50) a β, β-dimethylacrylshikonin az SGC-7901 sejtek 11.04 uM és 2,89 | iM 24 óra és 48 óra volt.}

β, β-Dimethylacrylshikonin indukál SGC -7901-sejtek apoptózis

SGC-7901 sejteket először kezeltük β, β-dimethylacrylshikonin eredmények azt mutatták, a sejteket ment jelölt morfológiai változások kezelés hatására 10 nmol /liter β, β-dimethylacrylshikonin összehasonlítva a kezeletlen kontroll esetében 24 órán át. Jelenlétében a β, β-dimethylacrylshikonin, SGC-7901 sejtek száma csökken, és a sejtek váltak kerek fel és a kis alakú, és a lehúzó a lemez összehasonlítva a negatív kontroll csoport (2A.). β, β-dimethylacrylshikonin is indukált nukleáris kondenzáció intenzív DAPI-festés összehasonlítva a nukleáris kontroll SGC-7901 sejteket 24 órán (ábra. 2b).

Annak meghatározására, hogy cytotoxity a β, β-dimethylacrylshikonin részt apoptózis értékeltük az apoptotikus hatását β, β-dimethylacrylshikonin in SGC-7901 sejteket áramlási citometriával az Annexin V és propídium-jodid (Pl) festéssel. A százalékos korai apoptotikus sejtek (annexin V ^{+ /PI -) 1,6% volt, 7,2%, 18,1%, 24,3%, és 24,4%, válaszul a jármű, 2,5, 5, 7,5 és 10 nmol /liter β, β-dimethylacrylshikonin illetve 24 órán át (ábra. 2C). Érdekes, hogy a késői apoptotikus sejtek (annexin V + /PI +) száma szignifikánsan megnövekedett SGC-7901 sejteket (29,7% 7,5 nmol /l, és 33,6%, 10 nmol /liter β, β-dimethylacrylshikonin kezelés ) (ábra. 2C). katalógusa}

β, β-dimethylacrylshikonin indukál mitokondriális kapcsolatos rendezvények apoptózist SGC-7901 sejtek katalógusa

Bcl-2 család fehérjéi közé pro-apoptotikus fehérjék (Bax, Bak és Bid) és anti-apoptotikus fehérjék (Bcl-2, Bcl-xL, cIAP-2, XIAP és survivin). Ezek aktiválják vagy gátolják a kibocsátás a downstream tényezők vezetnek a kaszpáz-3 és PARP végrehajtása során az apoptózis [20]. Annak érdekében, hogy érzékeli a apoptózis kapcsolódó fehérjék, a pro-apoptotikus proteinek (Bax, Bak) és anti-apoptotikus proteinek (XIAP, cIAP-2, Bcl-2, Bcl-xL, survivin) mutattuk ki Western blot után SGC-7901 sejteket kezeltünk különböző koncentrációjú β, β-dimethylacrylshikonin (0, 2,5, 5, 7,5 és 10 jimol /l) 24 órán át. Az eredmények azt mutatták, hogy a β, β-dimethylacrylshikonin csökkentik a XIAP expressziója, cIAP-2, a Bcl-2 (ábra. 3A). Azonban a down-regulációja XIAP és Bcl-2 kevésbé volt hangsúlyozott, míg a down-regulációja cIAP-2 volt, egészen drámai és a dózis-függő. Nem volt szignifikáns változás a Bcl-x L és survivn az SGC-7901 sejteket. Akár β, β-dimethylacrylshikonin képesek módosítani a kifejezés pro-apoptotikus fehérjék (Bax, Bak) is vizsgálták. Azt találtuk, hogy β, β-dimethylacrylshikonin fokozott expresszióját Bak dózis-függő módon, de kis hatással volt a Bax (ábra. 3B).

Caspase család fehérjék kritikus enzimek végrehajtani apoptózis. Közül kaszpáz családtagok, a kaszpáz-3 egy kulcsfontosságú hóhér apoptózis emlőssejtekben [21]. Meg lehet aktiválni a halál receptor által közvetített extrinsic kaszpáz-8-útvonal és a mitokondrium-függő-kaszpáz-9 intrinsic útvonal [22], [23]. Annak érdekében, hogy jobban megértsük a molekuláris mechanizmusa a apoptózis, SGC-7901 sejteket kezeltünk β, β-dimethylacrylshikonin és detektáltuk Western-blot elemzéssel a kifejezés változás a kaszpáz-3, kaszpáz-8 és a kaszpáz-9 eredmények azt mutatták, dózisfüggő emelkedést a hasított kaszpáz-3, hasított kaszpáz-8 és a hasított kaszpáz-9 β, β-dimethylacrylshikonin kezelt sejtekben. PARP hasítás, egy másik jól ismert jellemzője az apoptózis, szintén megtalálható a β, β-dimethylacrylshikonin kezelt sejtek (3C.). Mitokondriális diszfunkció indukált apoptózist, amely gyakran a következménye, a csökkenés a mitokondriális membrán potenciál. Bebizonyosodott, hogy a központi az apoptotikus jeltovábbítási útvonal. Az SGC-7901 sejteket kezeltünk vagy anélkül β, β-dimethylacrylshikonin (10 nmol /l) 24 órán, az eredmények azt mutatták, mitokondriumok membránpotenciál csökkent -tól 98,6% -ról 56,9% után β, β-dimethylacrylshikonin kezeltünk a SGC- 7901-sejtek (ábra. 3D). Mi következő megvizsgálta a forgalmazási és szubcelluláris lokalizációját a citokróm c, hogy megtalálja, hogy a mitokondriumok-útvonal részt vesz a β, β-dimethylacrylshikonin indukált apoptózist. Miután SGC-7901 sejteket kezeltünk β, β-dimethylacrylshikonin (10 nmol /L) 24 óra, az elosztó a citokróm C tettük láthatóvá konfokális lézer mikroszkóp, a β, β-dimethylacrylshikonin kezelt sejtek esetében homályos morfológiájú (ábra. 3E) szemben a nyilvánvalóan egyértelmű megjelenése a kontroll sejtek, jelezve a transzlokáció citokróm c a mitokondriumok a citoplazmában β, β-dimethylacrylshikonin kezelt sejtekben.

további meghatározása a szerepe a kaszpáz aktiváció β, β-dimethylacrylshikonin- által indukált apoptózis, kezeltünk SGC-7901 sejtek pán-kaszpáz inhibitor Z-VAD-FMK (10 nmol /liter), mielőtt β, β-dimethylacrylshikonin kezelést. A pan-kaszpáz inhibitor Z-VAD-FMK előkezelés csökkentette a kifejezés a hasított kaszpáz-3, hasított PARP és csökkentett β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis (ábra. 3F &G). Ezek az adatok azt mutatták, hogy a mitokondriális-mediált kaszpáz kaszkád útvonal játszik nagyon fontos szerepet β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis.

β, β-Dimethylacrylshikonin indukálja tartós ERK aktiváció SGC-7901 sejtek

kimutatták, hogy a MAPK jelátvitel részt vesz számos események celluláris feszültségek és ingerek által indukált apoptózis [24], [25]. Ezért vizsgáltuk aktiválását az ERK, JNK és p38 után β, β-dimethylacrylshikonin kezelést. Ábrán látható. 4A & B, a foszforiláció szintje ERK és JNK voltak látszólag növelte válaszul a β, β-dimethylacrylshikonin kezelés 2 órán át, és a foszforiláció szinteket mutatott dózis-függő módon. Különben is, a foszforilációs szintje ERK elmúlt huszonnégy órában. Azonban nincs jelentős változás a foszforiláció szintje p38 volt megfigyelhető, miután a β, β-dimethylacrylshikonin kezelés (ábra. 4C). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a tartós aktiválása az ERK részt vesz β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózist SGC-7901 sejtekhez.

az ERK jelátviteli útvonal részt vesz a β, β-dimethylacrylshikonin indukált apoptózist SGC-7901 sejtek

majd megvizsgálták, hogy a β, β-dimethylacrylshikonin által indukált tartós aktiválása az ERK jelátviteli szerepet játszik az apoptózis. Ábrán látható. 5A & B, Western-blot assay során kiderült, hogy U0126 (specifikus MEK-inhibitor) gátolható tartós ERK aktiváció és hasítását a kaszpáz-3, PARP β, β-dimethylacrylshikonin kezelés, míg a pán-kaszpáz inhibitor Z-VAD-FMK nem volt hatása a β, β-dimethylacrylshikonin-indukált aktiválását ERK (ábra. 5D). Ezen túlmenően, U0126 csökkentett β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózist SGC-7901 sejtek (ábra. 5C). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózist SGC-7901 sejtek által közvetített tartós aktiválása az ERK jelátviteli.

Discussion

sikonint származékokat az aktív komponenseket izolált a kínai gyógynövény Lithospermum erythrorhizon [5]. Ezek a vegyületek ígéretes gyógyszer jelöltek, mivel azok már jelentették, hogy több rákellenes hatását in vivo és in vitro [5], [26]. Között a komponensek a Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin fontos tumorellenes hatást, összehasonlítva más aktív összetevők [27]. Ami a rákellenes aktivitást, sikonint-kiolvasztott sejt apoptózis révén kaszpáz-függő útvonalat találtak számos rosszindulatú daganatok. Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, hatását β, β-dimethylacrylshikonin humán gyomorrák SGC-7901 sejtek. Eredményeink azt mutatták, hogy a kezelés az SGC-7901 sejtek β, β-dimethylacrylshikonin szignifikáns citotoxikus hatást ellen SGC-7901 sejtek egy adagot, és időfüggő módon, és β, β-dimethylacrylshikonin indukált apoptózist SGC-7901 sejtek bizonyítékul fokozott korai apoptotikus sejtek (annexin V ^{+ /PI -) és késői apoptotikus sejtek (annexin V + /PI +). katalógusa}

Az arány anti- és pro-apoptotikus fehérje expresszióját, mint amilyen a Bcl-2 /Bax, kulcsfontosságú az apoptózis indukálása, és úgy dönt, a sejtek érzékenységét, hogy apoptózist [28]. A mitokondriumok fontos szerepet játszanak a jelátvitelben az apoptózis [29]. A translocalization apoptotikus fehérjék a citoszolban a mitokondriumba felszabadulásához vezet a citokróm C és második mitokondrium-eredetű aktivátor kaszpázok csökkenése a mitokondriális membrán potenciál [30], [31]. Sikonint leírták, hogy apoptózist indukál keresztül mitokondriumok útvonal HepG2 sejtekben [32]. A jelen vizsgálatban kimutattuk, hogy β, β-dimethylacrylshikonin alulszabályozott a XIAP expressziója, cIAP-2 és Bcl-2 és felülszabályozott expresszióját Bak és Bax, és a kárt a mitokondriális membrán potenciál és felszabadulását citokróm c SGC-7901 sejtek, összhangban a mitokondrium-függő apoptózis. A megfigyelés a β, β-dimethylacrylshikonin közvetített aktiválását a kaszpáz-9, kaszpáz-3, és az azt követő PARP-hasítást indukálni, valamint az eredménye, hogy a pán-kaszpáz inhibitor Z-VAD-FMK csökkentett β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis in SGC-7901 sejteket, ami arra utal, hogy a mitokondriális-mediált kaszpáz kaszkád útvonal kulcsfontosságú szerepet játszik a β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis. Összefoglalva, eredményeink azt mutatták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin szabályozza expressziós szintje az apoptózis-kapcsolatos fehérjék, okozza a citokróm c felszabadulását és trigs kaszpáz-függő sejt apoptotikus halált.

mitogén aktivált protein kinázok (MAPK) szabályozzák változatos celluláris programok, beleértve embriogenezis, proliferáció, differenciálódás és az apoptózis [33]. A MAPK család fehérjék áll három protein kinázok: ERK1 /2 (extracelluláris szignál-szabályozott kináz 1 és 2), a JNK (c-Jun N-terminális kináz) és a p38 [34], [35]. Általában átmeneti ERK aktiváció vezet, a sejtproliferációt, de tartós aktiválása ERK assoctiated differenciálódás [36]. Emerging bizonyíték azt sugallja, hogy az aktiválás ERK hozzájárul apoptózis. Jeong és munkatársai. azt mutatták, hogy kempferol- okozott rákos sejt apoptózist keresztül ERK-függő útvonal [21], [37], [38]. Újabban arról számoltak be, hogy a icaritin indukálja a növekedés gátlás és apoptózis humán PSMCs keresztül ERK jelátviteli [39]. Li és mtsai. kimutatták, hogy az aktiválási RAF /MEK /ERK jelátviteli kritikus szerepet játszik a kalcium-indukálta apoptózisa lencse epiteliális sejtek [40]. Itt azt is megállapította, hogy a tartós aktiválása ERK részt vesz β, β-dimethylacrylshikonin-indukált növekedési gátlás és apoptózis SGC-7901 sejteket. U0126, specifikus inhibitora MEK (a MAPK /ERK kináz), hatékonyan blokkolja β, β-dimethylacrylshikonin-indukálta ERK aktiváció és legyengített β, β-dimethylacrylshikonin által indukált apoptózis, ami arra utal, a pro-apoptotikus hatását β, β-dimethylacrylshikonin in SGC-7901 sejtek által közvetített tartós aktiválása a ERK1 /2 jelátviteli.

Összefoglalva, azt találtuk, hogy β, β-dimethylacrylshikonin gátolta a sejtek növekedését és indukált apoptózist SGC-7901 sejteket. Azt is vizsgáltuk az alapul szolgáló mechanizmusokat részt β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis. Eredményeink azt mutatták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis során a redukciós a XIAP, cIAP-2 és Bcl-2 protein expresszió és indukciós Bak és Bax fehérje expresszióját, és a kárt a mitokondriális membrán potenciál és felszabadulását a citokróm c az SGC-7901 sejtek. Eredményeink azt is igazolták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin indukálta apoptózis aktiválását foglalja magában a kaszpáz-3, kaszpáz-8 és a kaszpáz-9, és a PARP-hasítást indukálni. Emellett, az ERK jelátviteli útvonal is részt vettek a β, β-dimethylacrylshikonin-indukált apoptózis. Eredményeink azt mutatták, hogy β, β-dimethylacrylshikonin lehetne fejleszteni, mint potenciális rákellenes szer az emberi gyomorrák. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Ezúton köszönjük H-BW azok technikai segítséget, és mi is köszönjük X -QM és J-HC számára hasznos észrevételeket ezt a cikket. katalógusa

• PLoS One: Plazma mikroRNS, a miR-223, miR-21 és miR-218, a Novel potenciális biomarkerek gyomorrák érzékelés
• PLoS One: Az Egyesület az egyes SNP vagy haplotípusok mátrix metalloproteináz 1 és a gyomorrák hajlamosság, Progression és kórjóslat