PLoS ONE: Expression Profiliranje matičnih stanica-srodnih gena u neoadjuvant liječenih želučani Rak: NOTCH2, GSK3B i β-katenina Gene Potpis predviđa opstanak

Sažetak pregled

Cancer matična stanica (CSC) na temelju ekspresije gena potpisa povezane s prognozom u različitim vrstama tumora i eksplozivnim dizanjem utega se sugerira da su naročito otporni na lijekove. Cilj našeg istraživanja bio je prvi, utvrditi prognostički značaj CSC-vezanih gena u preostalim tumorskih stanica karcinoma želuca (GC) bolesnika neoadjuvant tretirani. Drugo, željeli smo ispitati, da li postoji izraz promjene rezultata uzoraka prije i nakon terapijskih tumora, u skladu s obogaćivanjem rezistentnih tumorskih stanica. Ekspresija 44 gena je analizirana u 63 formalinom fiksna, uklopljeno u parafin tumorskih uzoraka djelomičnu regresiju tumora (10-50% rezidualni tumor) nakon neoadjuvant kemoterapije kvantitativnom PCR u realnom vremenu polja niske gustoće. Potpis kombiniranog GSK3B
^{visoka, P-katenina (CTNNB1) pregled visoka i NOTCH2 pregled niska ekspresija je snažno povezana s boljim preživljavanja pacijenta (p < 0,001). Prognostički značaj tih gena Također je utvrđeno analizom javno dostupnih podataka ekspresije gena. Ekspresija gena 9 je u odnosu između pre-terapijskih biopsije i post-terapijske reseciranih primjeraka. Značajan post-terapeutska povećanje usjek pregled 2, LGR5 pregled i POU5F1 pregled, izraz je pronađen u tumorima s različitim regresije tumora razreda. Nema značajne promjene uočene su za GSK3B Netlogu i CTNNB1 pregled. Imunohistokemijska analiza pokazala povećanje kemoterapijom povezan intenziteta NOTCH2 bojenje, ali ne u postotku NOTCH2. Uzeti zajedno, GSK3B, CTNNB1 pregled i NOTCH2 pregled izraz potpis je novi, obećavajući prognostički parametar za GC. Rezultati analize diferencijalne ekspresije pokazuju istaknutu ulogu NOTCH2 i kemoterapije otpora u GC, koji izgleda kao da se odnose na učinak lijekova na NOTCH2 izražavanja, a ne na obogaćivanje NOTCH2 izražavanja tumorske stanice. Pregled}

navod: Bauer L, Langer R, Becker K, Hapfelmeier A, Ott K, Novotny A, et al. (2012) Ekspresija profiliranje matičnih stanica-srodnih gena u neoadjuvant tretiranu rak želuca: NOTCH2 pregled, GSK3B pregled i β-katenina pregled Gene Potpis predviđa opstanak. PLoS ONE 7 (9): e44566. doi: 10,1371 /journal.pone.0044566 pregled

Urednik: Ju-Seog Lee, University of Texas MD Anderson Cancer Center, Sjedinjene Američke Države Netlogu

Primljeno: 16. svibnja 2012; Prihvaćeno: 8. kolovoz 2012; Objavljeno: 10. rujna 2012 pregled

Copyright: © Bauer i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Studija je podržan od strane Deutsche Krebshilfe Mildred Scheel Stiftung, daj broj 108524 za GK i KB. Davatelj financijskih sredstava nije imao ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Advanced želučanih karcinomi (GC) često tretiraju platina /5-fluorouracil (5FU), - na bazi neoadjuvansima kemoterapija [1]. Cilj ove terapije je, između ostalog, kako bi se smanjio tumor prije operacije kako bi se povećala vjerojatnost potpune resekcije i na taj način poboljšati preživljavanje pacijenata. Međutim, odgovor stope su niske, a potpuna ili subtotalna regresiju tumora je promatrana samo u 20-40% bolesnika [1], [2]. Dakle, otpornost na kemoterapiju je glavna prepreka za uspješno liječenje pregled

Prema rak matičnih stanica hipoteze, tumorske stanice su heterogena, te povećana otpornost na lijek je posebno fenotip manjine tumorskih stanica -. The avanja nazivaju rak-pokretanje stanice ili rak matične stanice (eksplozivnim dizanjem utega) [3] - [5]. Povećanje CSC populaciji nakon kemoterapije je pokazano [6], [7], i matičnih stanica na temelju genske ekspresije potpisa povezana s lošom prognozom u različitih tumora, uključujući želučanog karcinoma [8] - [11]. CSC hipoteza je još uvijek kontroverzno raspravlja, ali postoje dokazi za postojanje eksplozivnim dizanjem utega u nekoliko tipova tumora i molekularnih markera su identificirani, koji su prvenstveno nalaze na tim stanicama [4], [5]. Aktivacija embrionalnih signalnih putova, kao što je Wnt, usjek i ježa putova, sugerirano je kao pokretačku snagu za formiranje eksplozivnim dizanjem utega [4], [12]. Podaci se odnose na izvor i postojanje želučanog eksplozivnim dizanjem utega ostaju nejasne [13] - [17]. U miševa, koštane srži izvedene stanice ili specifična populacija stanica u antrumu izražava Wnt ciljanih molekula LGR5, povezani su s eksplozivnim dizanjem utega u želucu [17], [18]. Osim toga, CD44 i CD24 predloženi su kao specifične stanične površine markera, ali podaci nisu u skladu [19], [20]. Pregled

neoadjuvant tretman protokol za GC pruža izvrsnu priliku da istraži tumorske stanice prije i nakon kemoterapije kod pacijenata. U ovoj studiji željeli smo razjasniti prvo, da li je izraz narodni CSC-vezanih gena u post-terapijskog ostatnog tumora predviđa preživljavanje pacijenata i drugo, da li pojedini geni različito izraženi između pre-terapijskih biopsije i post-terapijske tumorskih uzoraka , u skladu s obogaćivanjem kemoterapije otporan na tumorske stanice kao što to predviđa koncept CSC. Skupina bolesnika koji su pokazali značajan smanjenje tumora nakon neoadjuvant kemoterapije, ali još uvijek je imao dovoljno preostale tumorske stanice na raspolaganju za analizu (10-50% rezidualni tumor) su uzeti u obzir kao najpogodniji skupine početi s analizom probira za prognostičke relevantnih gena i onda utvrditi relevantne razlike u ekspresiji gena između uzoraka prije i nakon terapijskih tumora. Analizirajući ove preostale tumorske stanice smo identificirali genske ekspresije uzorak koji obuhvaća GSK3B, CTNNB1
i NOTCH2 pregled, koji snažno predviđa prognozu bolesnika. Pokazali smo da je utjecaj GSK3B pregled i CTNNB1 pregled kako bi taj potpis ne ovisi o kemoterapiji i vjerojatno odražava svojstvo primarnog tumora i naši podaci nadalje ukazuju da posebno NOTCH2 pregled može igrati ulogu za otpor kemoterapije u GC. pregled

materijali i metode

pacijenti

u ukupno 480 bolesnika s lokalno uznapredovalim GC (cT3 /4 ) bili tretirani od strane neoadjuvant, platinom /5FU kemoterapijom na bazi na Odjelu za kirurgiju na Technische Universität München između 1991. i 2007. godine, a procijenjeni su na odgovor temelji se na standardiziranom patohistološku protokola [2] - [22]. Tumora regresije podijeliti u 3 razreda: regresija tumora razred (TRG) 1, koji se sastoji od TRG1a (ukupno regresije tumora) i TRG1b (Subtotal regresije tumora: < 10% rezidualni tumor stanica /tumor na razvlačenje), TRG2 (djelomično povlačenje tumora: 10-50% preostalog tumorske stanice /tumor ležaj) i TRG3 (minimalna ili nikakva regresija tumora: > 50% rezidualni tumor /tumora ležaj). Od 480 bolesnika, 121 pacijenata pokazalo TRG2 i 63 od njih su analizirani u ovoj studiji. Kriterij uključivanje bila je dostupnost dovoljne tumorskog tkiva za analizu bolesnika liječenih s najmanje 50% projiciranog doze kemoterapije. Pacijent karakteristike i protokoli liječenja prikazani su u tablici 1. Za potvrdu reprezentativnog prirodu od 63 analiziranih bolesnika, distribucija njihovih kliničkopatološkim parametara u odnosu na skupinu s 121 pacijenata i otkrili da nema statistički značajne razlike. Pregled

Slijedite -up je od prvog dana tretmana do datuma posljednjeg kontakta s pacijentima. Medijan praćenja bio je 77.1 mjeseci (raspon: 28,5 do 108,5). Klinički krajnji cilj ove studije bio je ukupno preživljenje (OS), koji je definiran kao vrijeme između prvog dana kemoterapije i smrt od bilo kojeg uzroka. Medijan OS je 50,9 mjeseci (raspon: 4,5 - 108,5, 95% CI: 25,6-76,3), a 37 od 63 pacijenata je umrlo tijekom praćenja. Ova veličina uzorka i broj događaja su dovoljno velike za dosljedan procjenu svih veličina učinka ispitivanih u ovom istraživački studiji [23], [24]. Pregled

Usporedba ekspresije gena između odgovara prije i nakon terapijskog uzorci tumora je izvršena za pacijente s TRG2 i TRG3 (svaki n = 22). pregled

za imunohistokemijske analize, prije i nakon terapijskih uzorcima tumora iz 21 bolesnika s TRG1b, 21 bolesnika s TRG2, 22 bolesnika s TRG3 i 16 bolesnika liječenih samo operacije su uključeni. Kriterij odabira za ove analize bila je dostupnost odgovarajućih pre-terapeutske biopsije i post-terapijske tumora. Pregled

Etika Izjava pregled

Istraživanje i korištenje ljudskih tkiva je odobren od strane lokalne Institutional Review Uprava na Technische Universität München (vidi: 2158/08) i informirani pristanak dobiven prema institucionalnim pravilima pregled

RNA ekstrakcija i reverznom transkripcijom pregled

Ukupna RNA se ekstrahira iz formalinom fiksiranih,. prevučeni parafinom (FFPE) tkiva nakon ručnog mikrodisekcijom tumorskih područja sastoje od najmanje 50% tumorskih stanica. RNA se očisti pomoću fenola i ekstrakcijom kloroformom te je obrnuti prepisana kao što je opisano [25]. Pregled

Gene Expression Analiza pregled

44 gena koji su odabrani za analizu na temelju njihove potencijalne uloge u CSC biologije uključene su u tablici 2. ekspresije gena je analizirana kvantitativno u realnom vremenu PCR (QRT-PCR) na po mjeri TaqMan® polja niske gustoće (Applied Biosystems Inc., Foster City, USA). Odgovarajući referentni geni su određena analizom deset kandidata referentnih gena u 8 želučanog karcinoma koriste geNorm-algoritam [26]. IPO8 pregled, POLR2A pregled i UBC pregled Određeno je da su najprikladnije referentni gena i normalizacija na temelju geometrijske sredine tih triju gena je izvedeno kao što je opisano u [26] , Reagensi, biciklističke uvjeti i softver su uključeni u prateće informacije. Relativna ekspresija gena se kvantificira korištenjem komparativnu metodu ΔΔCt [27]. Pregled

Imunohistokem pregled

monoklonsko antitijelo NOTCH2 (C651.6DbHN) dobiven je iz Razvojne studije hibridoma banke (DSHB, Sveučilište u Iowa, Odjel za biologiju, Iowa City, SAD). Postupak bojenja i ispitivanje specifičnosti antitijela pomoću Western blot opisani su u prateće informacije i slici S1A. Pregled

Imunohistokemijsko bojanje je zabio na slijepi način od strane dva neovisna istraživača (L.B. i R.L). Citoplazmatski i nuklearne bojenje u radu. Negativni, slabe, srednje ili jake bojanja intenziteti su označeni kao 0, 1, 2 i 3, respektivno. Postotak tumorskih stanica obojenoj citoplazmi /jezgra je ocijenjen od 0 ° C (negativan), 1, (< 10%), 2 (10 < 50%), 3 (50 < 80%) i 4 (≥80 %). pregled

Statistička analiza pregled

Uvjetna Izvedbeni testovi su korišteni za određivanje optimalnih cut-off-vrijednosti ekspresije gena za povezanost s preživljavanje pacijenta, a kako bi se utvrdilo je p-vrijednosti prikladne za maksimalno odabrane statistika [28]. Gene Expression vrijednosti iznad ili jednak optimalna vrijednost je definirana kao vrijednost visoke ekspresije i ekspresije gena ispod cut-off vrijednosti definirane su niske ekspresije. Stope preživljavanja su procijenjene prema Kaplan-Meier krivulje i uspoređene su log-rank testa. Relativni rizici su procijenjeni određivanjem omjera opasnosti (HRS) iz Cox proporcionalni modeli rizika. U multivarijatne analize, korak po korak naprijed varijabla Izbor je proveden na temelju omjera vjerojatnosti testovima. Omjer broja varijabli u modelu na broj događaja bio je ograničen na 1:10 [24]. Pregled

Usporedbe kliničkopatološkim varijabli među skupinama su obavljali Mann-Whitney-U testovima. Χ ^{2-test i Fisherov egzaktni test su korišteni za usporedbu relativnih frekvencija ako je potrebno. Statističke razlike genskih izraza između uparenih uzoraka analizirani su pomoću Wilcoxon Signed Rank testa. Pregled}

nekontrolirano hijerarhijske klaster analiza je provedena pomoću klastera 3.0 software [29] i Java TreeView softvera (verzija 1.1.5r2) [30]. Relativna izraz podaci mRNA su logaritamski transformiranih, medijan i koji su normalizirani prije nanošenja kompletan poluge klastera s matricom udaljenosti na temelju Pearsonov koeficijent korelacije (uncentred). Pregled

A rezultat rizika se izračunava zbrajanjem proizvode od umnožavanja Cox regresijska koeficijent svakog gena u model s normalizirane vrijednosti ekspresije gena za svakog pacijenta u osnovi kao što je opisano u [31] (detalji u materijal i metode S1 i tablice S4 i S6). pregled

Svi statistički testovi su dva -sided i održava se u istraživački način sa stupnjem pouzdanosti od 0,05 pomoću softvera SPSS 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL 11,5) i R (R zaklada za statistiku računarstva, Beč, Austrija). pregled

studija je u skladu s preporukama izvješćivanja tumorskih biljega prognostičke studije (kriteriji opaska) [32]. pregled

Analiza podataka javnih Microarray pregled

javno dostupan genske ekspresije array podaci želučanog karcinoma s opisima kliničke karakteristike i preživljavanje bolesnika [33] dobiveni su iz BRB-Array Alati arhive podataka (http://linus.nci.nih.gov/~brb/DataArchive_New.html) i analizirani pomoću BRB-niz alata [34] (prateće informacije) , Samo napredne želučani karcinomi (T3 /4) (n = 58) su uključene u analizu. Optimalna cut-off vrijednosti GSK3B pregled, CTNNB1 pregled i NOTCH2 pregled izraz određene su za povezanost s preživljavanje pacijenta od strane uvjetnim zaključak testova za maksimalno odabranih statističkih podataka kao što je gore opisano. pregled

Rezultati

Gene Expression i Uputu opstanak pregled

ekspresije gena za profiliranje 63 tumora u bolesnika s TRG2 pokazala su da visoke razine ekspresije GSK3B pregled, DNMT1 pregled i CTNNB1 pregled značajno su povezane s boljim opstanak (uvjetno zaključak test: p = 0.006, 0.041 i 0.043, respektivno). Umjerena povezanost s boljim preživljavanja zabilježena je za visoku ekspresiju ABCG2 Netlogu i OLFM4 pregled (p = 0,051, p = 0,055), a za niske ekspresije NOTCH2
(p = 0,071) (Tablica 3). Jednosmjerna Cox-regresijska analiza pokazala je približno podudarno rezultata (Tablica 4). Pregled

multivarijatna Cox regresijska analiza uključujući i GSK3B pregled, CTNNB1 pregled, DNMT1 pregled i standardne prognostičke varijable u GC, naime YPT, YPN, ypM i resekcija kategoriji otkrila GSK3B pregled kao drugi najvažniji nezavisni prognostički faktor (HR: 0,128, 95% CI: 0,033-0,492, p = 0,003), nakon udaljene metastaze (Tablica S1). pregled

klaster analiza obuhvaća sve analiziranih gena nisu otkrivene skupine bolesnika koji su pokazali povezanost s OS-om. Klaster analiza Wnt- i signaliziranje Notch povezane genima proizveden najznačajniji povezanost s OS kada je GSK3B pregled, CTNNB1 pregled i NOTCH2 pregled su uključene (p = 0,002) (Slika 1A i B). Prema rezultatima analize klastera, grupirani smo bolesnike u tri skupine s različitim kombinacijama visoke ili niske ekspresije GSK3B
, CTNNB1
i NOTCH2 Netlogu koji je definirana optimalna-vrijednosti za genske ekspresije u suradnji s preživljavanje pacijenta. Skupina s GSK3B pregled ^{visoka, CTNNB1 pregled visoka i NOTCH2 pregled niska ekspresija pokazala najbolje opstanak, dok skupini s GSK3B pregled niska, CTNNB1 pregled niska i NOTCH2 pregled visoka ekspresija je najgore ukupni ishod (p < 0,001, Slika 1C).}

Proračun rezultatom rizika temelji se na multivarijatnoj Cox proporcionalni regresije opasnost modela tih triju gena i dichotomisation pacijenata prema optimalnom cut-off vrijednosti za OS na high (n = 37) i niskog (n = 26) rizična skupina pokazala je statistički značajnu razliku za OS (medijan preživljenja bolesnika niskog i visokog rizika: ne dostigne i 37 mjeseci, odnosno p 0,001). Osim toga, razlika u odgovarajućim postotkom preživljavanja na 1, 2, 3 i 5 godina između niske i visoke rizične skupine bile statistički značajne (Tablica S5). Pregled

Diferencijalni Gene Expression Analiza između Odgovarajući prije i poslije -therapeutic Tumorski Uzorci

Nakon toga smo utvrditi, da li je razina ekspresije gena koji pokazuju značajnu ili umjerenu povezanost s operativnim sustavom (p < 0,1, tablica 3 i 4) razlikuju između pre-terapijskih biopsije i njihove odgovarajuće radno mjesto -therapeutic tumora primjerak. Osim toga, POU5F1 pregled, LGR5 pregled i su proučavali CCND1 pregled analizirani su i tumorskih uzoraka bolesnika s TRG2 ili TRG3 (svaka n = 22). Pregled

U bolesnika s TRG2, izraz NOTCH2 pregled, POU5F1 pregled i LGR5 pregled značajno povećao između prije i post-terapijske uzoraka (p = 0,002, 0,028 i 0,017) i izraz DNMT1 pregled smanjena (p = 0,009). U skupini s TRG3, POU5F1 pregled pokazao je značajan porast (p = 0,002), dok je DNMT1 pregled i CCND1 pregled značajno smanjila (p = 0,002 i 0,007, respektivno) . pregled

Što se tiče ekspresije prognostičke relevantnih gena GSK3B pregled i CTNNB1, pregled, uočene su statistički značajne razlike između prije i post-terapijske uzoraka tumora ( Tablica 5. i Tablice S2 i S3). pregled

Analiza javno dostupan Array Podaci pregled

Da bi se procijenila opće prognostičku vrijednost GSK3B pregled ^{visoka, CTNNB1 pregled visoka i NOTCH2 pregled niska ekspresije, koristili smo javno dostupne podatke izraz array postavljene želučanog karcinoma [33]. Skup podataka uključuje gene od interesa i relevantne kliničke podatke (OS, tumor faza) potrebno je izvršiti analognog analizu. Određivanje optimalne vrijednosti cut-off ekspresije gena za korelaciju s opstanak i ocjenjivanje u kombinaciji izražavanja potpisom GSK3B
visoka, CTNNB1 pregled visoka i NOTCH2 pregled niska identificirati grupa od 10 bolesnika koji su imali znatno duže OS (p = 0,017, medijan OS: nije postignut) u usporedbi sa 47 preostalih pacijenata (medijan OS: 14,0 mj, 95% CI: 8,7 -19,4) (Slika 1D). pregled}

Proračun rezultat rizika za tu skupinu bolesnika i dichotomisation pacijenata prema optimalnom cut-off vrijednosti za OS pokazao znatno duži OS za niske rizičnoj skupini (n = 27) u odnosu na skupinu visokog rizika (n = 30), premda razlika nije bila statistički značajna (medijan preživljenja 21 u odnosu na 13 mjeseci, p = 0,110). S obzirom na razlike u pojedinim preživljavanja na 1, 2 i 3 godine pokazala je analogni rezultati s najviše očitih razlika u 2 godine sa stopom preživljavanja od 45% bolesnika niskog rizika i 21% pacijenata visokog rizika (p = 0,071 ) (Tablica S7). pregled

imunohistokemijska analiza NOTCH2 Netlogu

Da bi se procijenile razlike u ekspresiji gena između uparenih prije i nakon terapijskih tumora na razini proteina, proveli smo imunohistokemije i usmjerena na NOTCH2 (Slika S1B i C). Analizirali smo iste skupine bolesnika koji su proučavane na razini mRNA. Osim toga, bilo je uključeno 21 pacijenata s TRG1b i kontrolne skupine od 16 pacijenata operiranoj. Pregled

Usporedba citoplazmatske bojanja intenziteta između prethodno terapijske biopsijama i njihovih odgovarajućih post-terapijske tumora pokazala je statistički značajno povećanje u bojenje intenziteta u post-terapijskim uzoraka bolesnika s TRG1b, 2 i 3 (p = 0,016, 0,001 i 0,017). Nasuprot tome, nije bilo razlika su kod bolesnika koji su liječeni samo operacije (p = 0,438) (slika 2). Postotak obojenih stanica nije značajno promijenila. Što se tiče nuklearnog mrlja, značajan pad bojenje intenziteta u post-terapijske tumorskih uzoraka pronađen je u skupini s TRG2 (p = 0,007), TRG3 (p = 0,015) te u kontrolnoj skupini koja nije liječena kemoterapijom (p = 0,016) , Značajno smanjenje u određenom postotku stanica s obojanih jezgri je opažene u skupini s TRG1b (p = 0,005), TRG2 (p < 0.001), TRG3 (p = 0.003), kao i kod kontrolne grupe (p = 0,001). pregled

Rasprava pregled

Naša studija analizira ekspresiju CSC vezanih gena u preostalim stanicama raka želuca nakon neoadjuvant kemoterapija identificirati potpis gena s visokim prognostički utjecaj sastavljenom od GSK3B Netlogu je β-katenina pregled gen CTNNB1 i NOTCH2 pregled. Zanimljivo je da je visoka razina ekspresije CTNNB1 pregled i GSK3B pregled su povezane s povećanim opstanak. Β-katenina je ključna molekula u prijenosu Wnt signaliziranja u jezgru i vozi više stanični procesi [35]. Aberantna Wnt signaliziranja je pokazano u do 46% GCS, a oba Wnt / β-katenina pregled i proliferacija /matičnih stanica ekspresije potpisa koji pokazuju odgovarajuću aktivaciju slijeda, su povezane sa smanjenim preživljavanje pacijenata [36]. CTNNB1 pregled razine mRNA može modulirati Wnt signalnog puta [37], a Wnt aktivnost je povezana s stemness raka u debelom crijevu [38]. S obzirom na ove podatke, negativna povezanost što bi se očekivalo CTNNB1 pregled ekspresija u preostalim tumorskih stanica nakon kemoterapije i preživljavanje pacijenata. Međutim, β pregled katenina je također dio E-kadherina-katenina kompleksa i promjenama u ovom stanične adhezije kompleksa bili su povezani s lošijim prognozama u različitim tumorima [39]. U GC, proturječne rezultate u pogledu povezanosti β pregled katenina izraz i prognozu bolesnika postoje [40], [41]. Pregled

To je važno imati na umu, da GSK3B je multifunkcionalni protein uključen u razne signalizacije mrežama i antagonises Wnt signaliziranja posreduje degradacije β pregled katenina, iako Wnt aktiviranja funkcije također je opisano u [42] - [44]. Povećana ekspresija GSK3B pregled je bio povezan s povoljnom prognozom u našem istraživanju, što je u skladu s izvještajem o viša GSK3B pregled mRNA povezana s boljim opstanak u jajnika visoko kvalitetni serozna karcinoma [45 ]. pregled

Visoko NOTCH2 pregled razine ekspresije korelira s lošijim opstanak u našim GC pacijenata. Obitelj Notch receptora obuhvaća četiri člana, a NOTCH1 i NOTCH2 su uključeni kako bi se poboljšala raka želuca progresija [46], [47]. Osim toga, udruga NOTCH1 izražavanja s lošom prognozom je prijavljen [48], što nije u skladu s našim nalazima; Međutim, zbog razlika u studiju populacije, ovi rezultati nisu izravno usporedivi. pregled

S obzirom na vrlo značajna povezanost potpisa gena koji obuhvaća CTNNB1 pregled, GSK3B pregled i NOTCH2 pregled sa preživljavanje bolesnika i značajan rizik ocjena se temelji razvrstavanje pacijenata u visokoj i niskoj rizičnoj skupini, bili smo posebno zainteresirani, ako se to odnosilo na kemoterapiju. Usporedba GSK3B pregled i CTNNB1 pregled razine ekspresije između prije i poslije terapijskih uzoraka tumora otkrivaju kako nema jasne razlike, dok je značajan porast u ekspresiji NOTCH2 pregled je pronađeno. Ovo otkriće sugerira da je CTNNB1 pregled i GSK3B pregled, ekspresija može odražavati svojstvo primarnog tumora koji ne mijenja kemoterapije i da NOTCH2 pregled izraz u zaostalih tumorskih stanica barem djelomično odnose na ovaj tretman. pregled

analiza prognostičkog značenja od tri gena u javno dostupnim genoma širom izraz podataka napredne GC pokazala značajnu povezanost za određenu ekspresiju gena uzorak GSK3B pregled ^{visoka, CTNNB1 pregled visoka i NOTCH2 pregled niska ekspresija i povećao preživljenje bolesnika i slične tendencije obzirom rizik ocjena se temelji klasifikacija.}

Ova otkrića podržavaju tumačenje da je prognostički učinak zabilježen je u našem istraživanju uglavnom odražava svojstvo primarnog želučane tumora, što upućuje na presudnu ulogu tih gena u biologiji tih tumora. Osim toga, prognostički učinak opažen može se povećati povećanjem ekspresije NOTCH2
u ostatnog tumora nakon kemoterapije. Dakle, ako je ovjeren u istraživačkoj studiji, ova tri gena potpis bi moglo biti korisno određivanju rizika u GC pacijenata i dodatno može voditi postoperativni tretman nakon neoadjuvant kemoterapije. Pregled

Naši rezultati podsjećaju na nedavnoj studiji analizira CSC- izveden gen potpis koji predviđa recidiva tumora u debelom crijevu i pokazuje da pojačana ekspresija Wnt ciljanih gena ukazuje na povoljan prognozu [48]. Autori pružaju dokaz da je ova udruga više vjerojatno odražava stanje diferencijaciju malignih tkiva, a ne broj eksplozivnim dizanjem utega [49]. Pregled

U razmatranju izmjena od NOTCH2 pregled izraz između odgovarajućeg pre i post-terapijske tumora, važno je imati na umu da se uspoređuju ekspresiju gena u mRNA razini, ne može razlikovati da li te promjene odražavaju relativnu obogaćivanje stanica koje eksprimiraju taj gen, da li su zbog kemoterapijskih agenasa koji utječu na transkripciju gena u stanice per pregled, ili da li su promjene odražavaju puke razlike uzorkovanja. Da pojasnimo ovo pitanje analizirali smo ekspresiju NOTCH2 proteina imunohistokemijski i uključeni tumora od pacijenata liječenih samo operacijom. Na temelju citoplazmatski bojenja, naši rezultati potvrđuju porast NOTCH2 izražavanja na razini proteina u post-terapijske tumora i oni pokazuju da se uočene razlike su vjerojatno da će biti ograničena na bolesnike liječene kemoterapijom. Napomenuti, povećanje NOTCH2 ekspresije odnosi na povećanje intenziteta citoplazmatski bojenje nego na povećanje broja stanica koje eksprimiraju NOTCH2. Ovaj rezultat tvrdi protiv obogaćivanje subpopulacija stanica tumora koje eksprimiraju NOTCH2 i vjerojatno pokazuje povećanje kemoterapijom uzrokovanu na ekspresiju gena u tumorskim stanicama, koje mogu biti povezane s tumorom biološke značajke nakon neoadjuvansima tretmana. Ipak, jasna razlika između ove mogućnosti može biti ograničena od strane Semikvantitativna evaluacija imunokemijska ispitivanja. Kao slične promjene u nuklearnoj bojenja zabilježene su kod svih tumora skupinama, uključujući kontrole, uputit ćemo se smatra ove promjene su povezana s kemoterapijom. Pregled

Bez obzira na mehanizam i istinske prirode zaostala tumorskih stanica koje izražavaju NOTCH2
, naši rezultati mogu imati terapijske implikacije. Signaliziranje Notch je nastao kao potencijalnog novog terapijskog cilja, a gama-sekretaze inhibitori, koji inhibiraju procesiranje Notch receptora, trenutačno se procjenjuje u kliničkim ispitivanjima [50]. Naša studija pokazuje da ciljaju Notch signaling također može predstavljati novu strategiju liječenja pacijenata GC. Kao nepovoljan prognostički učinak je povezana samo s NOTCH2 pregled, a ne NOTCH1 pregled, naši podaci također pokazuju da detaljna karakterizacija pojedinih Notch receptore i temeljita funkcionalna istraživanja su obvezni i dalje snažno podržavaju razvoj sredstva koja inhibiraju Notch paralog specifičan. pregled

značajan porast u POU5F1 pregled ekspresija je uočena nakon kemoterapije u reseciranog primjeraka u našem istraživanju. Faktor POU5F1 transkripcija je neophodno za održavanje vlastite obnove, a njegova visoka ekspresija u preostalim stanicama raka, nakon radiochemotherapy je u korelaciji s lošom prognozom u raka debelog crijeva [51]. Zanimljivo je također primijetio povećanu ekspresiju LGR5 Netlogu, obećavajući crijevnih marker CSC, nakon kemoterapije u tumorima s TRG2 [18]. Ovi rezultati su u skladu s potencijalnim obogaćivanje tumorskih stanica rezistentnih eksprimira POU5F1 pregled ili LGR5 pregled, ali je temeljni mehanizam za te promjene i posebnih svojstava stanica koje izražavaju te gene ostaju odrediti pregled

u našoj studiji, nema veza sa preživljavanje su promatrani na površini stanica molekule CD44 ili CD133, oba od kojih su naširoko koristi za identifikaciju navodne eksplozivnim dizanjem utega u različitim tumorima [4] -. [11]. Ovaj rezultat podržava nedavnih otkrića pokazujući da su ove površine stanice molekule ne identificiraju eksplozivnim dizanjem utega u osnovnim želučanih tumora [20]. Pregled

Sve u svemu, naši rezultati pokazuju da je ekspresija potpis GSK3B pregled ^{visoka, CTNNB1 pregled visoka i NOTCH2 pregled niska u preostala GC stanicama tumora kemoterapijom otporan je snažan prediktor za povoljnu prognozu bolesnika. Ovaj prognostički značaj također je pokazao za GC pacijenata koji koriste javno dostupnih podataka ekspresije gena. Rezultati analize diferencijal izraz prije i nakon terapijskih tumorskih uzoraka također upućuje na to da je utjecaj GSK3B Netlogu i CTNNB1 pregled kako bi taj potpis ne ovisi o kemoterapiji, već se odnose na svojstvo primarnog tumora. Oni nadalje pokazuju istaknutu ulogu NOTCH2 i kemoterapije otpora u GC, koji je vjerojatno u vezi s učinkom od kemoterapijskih agenasa na NOTCH2 pregled izraz, a ne na obogaćivanju NOTCH2 pregled izražava tumor stanice. pregled}

popratne podatke
Slika S1. pregled Western blot i imunohistokemiju sa anti-NOTCH2 antitijela. A) protutijelo usmjereno protiv NOTCH2 intracelularne domene specifično otkriva punu dužinu NOTCH2 proteina iznad 250 marker kDa, kao i cijepanog oblike usjek izvanstani odrezan (NEXT), a Notch unutarstanične domene (NICD) na približno 110 kDa. B) prikazana je slab citoplazmatski imunohistokemijski bojenje u pre-terapijskog uzorka za biopsiju i C) jakim citoplazmatski bojenja u istom post-terapijskog tumora s TRG2. Mjerila ukazuju 50 um pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0044566.s001 pregled (TIF) pregled Tablica S1. pregled, Multivarijatna Cox regresijska analiza. Genska ekspresija GSK3B, CTNNB1, DNMT1 pregled i standardni prognostički varijable u GC, YPT, YPN, ypM i resekcija kategoriju su uključene u model pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0044566.s002 pregled (DOC) pregled Tablica S2. pregled Genska ekspresija podaci prije i odgovarajući post-terapijske uzoraka tumora bolesnika s TRG2 pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0044566.s003 pregled (DOC) pregled Tablica S3.

• PLoS ONE: Prognostička vrijednost ubranih limfnih čvorova i metastaze u limfnim Node Omjer za rak želuca bolesnika: rezultati istraživanja o 1.101 Patients
• PLoS ONE: N-myc nizvodno regulirani Gene 1 (NDRG1) promiče metastazu ljudskih Scirrhous želudac stanica raka kroz epitelne mczcnhimnog Transition