Gastric Kriibs selwer ënnert engem hypoxic Ëmwelt. HIF-1α ass bekannt an kontroléieren d'Produktioun vun reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) an der Mitochondrie ënner hypoxic Konditiounen eng wichteg Roll ze spillen. Mir virdrun HIF-1α knockdown (Beien zB stéiert) Zellen etabléierten a Kontroll (SC) Zellen am 58As9 gastric Kriibs Zell Linn. An dëser Etude, datt mir dat Beien zB stéiert Zellen, mä net SC Zellen entschlof apoptosis ënner Konditiounen vun hypoxia (1% O 2) wéinst exzessiv Produktioun vun Ros. Eng grouss RT-Hinnen alleguer Analyse bewisen, dass d'Ausstralung vun zéng Genen, déi vun der Kontroll Mechanisme vun Ros (dorënner de Warburg Effekt, mitophagy, Elektronen Transport Kette [ETC] Ännerungen an Ros scavenging), regulariséiert goufen duerch HIF-1α Équipe ginn. Desweideren, verstäerkt der Promotioun vun Zocker Notzong vun Zocker plus Insulin (gi) Behandlung der apoptotic Effekt, deen duerch weider Ros Produktioun vun hypoxic Beien zB stéiert Zellen begleet war. A Western blot Analyse gewisen, datt d'membranous Ausdrock vun GLUT1 zu Beien zB stéiert Zellen vun Zocker an /oder Insulin Behandlungen gefördert gouf, beweist dass der gi-entschlof Zocker Notzong vun der fräi br vun GLUT1 op der Zell Membran mediated ass. Endlech, d'Anti-entholl Effet vun HIF-1α knockdown (Beien zB stéiert) plus gi war, mat engem entholl xenograft Modell bewäert, wou e hypoxic Ëmwelt gëtt natierlech. Als Resultat, inhibited der gi Behandlung betraff de Wuesstem vun de Beien zB stéiert erhéijen woubäi Zell apoptosis héich am Verglach zu der Kontroll Behandlung entschlof war. Am Géigesaz, huet de Wuesstem vun der SC erhéijen ausdrécken HIF-1α net vun der gi Behandlung betraff. Geholl zesummen, proposéiere de Resultater datt HIF-1α inhibition plus gi vläicht eng ideal gema gin, well de apoptosis wéinst der Zerstéierung vun Ros homeostasis speziell zu gastric Kriibs entschlof ass, datt ënner enger hypoxic Ëmwelt wiisst, mä net an der normal Otemschwieregkeeten ënnert der aerobic Konditiounen VerfÜgung Fro:. Tanaka T, Kitajima Y, Miyake S, Yanagihara K, Hara H, Nishijima-Matsunobu A, et al. (2015) De Apoptotic Effekt vun HIF-1α Inhibition kombinéiert mat Glukose plus Insulin Prefabrizéierten op Gastric Cancer ënner Hypoxic Bedéngungen. PLoS NËMMEN 10 (9): e0137257. Doi: 10.1371 /journal.pone.0137257 VerfÜgung Redakter: Ester Hammond, Universitéit vun Oxford, England VerfÜgung Arnaque: 30. Abrëll 2015; Akzeptéiert: 13 August 2015; Publizéiert: September 4, 2015 VerfÜgung Copyright: © 2015 Tanaka et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt si vum original Auteur an d'Quell Kaiser VerfÜgung Data Disponibilitéit: All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung funding:.. d'Auteuren keng Ënnerstëtzung oder Finanzéierung muss Rapport VerfÜgung Wettsträit Interessen:. d'Auteuren, datt keng Competitioun Interessen existéieren deklaréiert hunn VerfÜgung D'hypoxic Ëmwelt zu staark erhéijen substantiell ass, wou et hir malignant Verhaalen gut iwwerstan [1-4]. Wéi aner staark erhéijen, ass gastric carcinoma bekannt ze extensiv Beräicher vun hypoxia bannent de entholl abannen [5-7]. Hypoxic Konditiounen puer biologescher Evenementer induce wéi angiogenesis, lokal Invasioun, metastatic verbreet, audiovisuell oder chemoresistance a verännert Energie ukuerbelt an vill carcinomas, an Patienten op aarmséileg hätt Virwaat [2-4]. VerfÜgung D'Transkriptiouns Faktor hypoxia-inducible Faktor 1 (HIF-1) ass den Haaptuert Vermëttler vun der bewosst Upassung un hypoxia [8-10]. HIF-1 ass e heterodimeric FAQ aus engem constitutively ausgedréckt β-subunit (HIF-1β) an engem hypoxia-inducible α (HIF-1α) subunit [8-10]. D'HIF-1α subunit ass duerch d'ubiquitin-proteasome Passerelle ënner normoxia deforméiert. Am Géigesaz, ass ënner hypoxia, HIF-1α stabiliséiert an dimerizes mat HIF-1β mat CBP /p300 proposéiert, déi zu der hypoxia Äntwert Element (Hypo) op de Promoteur Regioun vun honnerte vun Zil- Genen Photo'en dann [11-16]. Dës virdrun Rapporten mussen d'Unerkennung vun HIF-1α wéi eng zentral regulator an der pathogenesis vun zolidd Kriibs gefouert VerfÜgung reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros), wéi superoxide anion (O 2 HIF-1α gemellt gouf Ros Produktioun ënnert hypoxic Konditiounen duerch verschidde Mechanismen ze kontrolléieren dorënner d'Konversioun vun Energie ukuerbelt aus OXPHOS zu glycolysis, déi zu den Warburg Effekt Éieren ass [19-23], de Aféierungs- vun Kënschtlech selektiv autophagy (als mitophagy designéierte) [24, 25], ETC Modifikatioun vun engem subunit Wiesselt vun cytochrome c oxidase (COX) [26] an Ros scavengers [27]. An der metabolic Passerelle vun der Warburg Effekt, HIF-1α activéiert éischt d'Reunioun vun GLUT1 VerfÜgung den Zockerspigel Notzong vun Zellen ze erhéijen. Glukose gëtt dann duerch d'Aktiounen vun glycolytic Aktivitéit Memberen zu pyruvate metabolized, déi Ziler fir HIF-1α bekannt ginn [28, 29]. Ënner aerobic Konditiounen, ass pyruvate vun pyruvate dehydrogenase (PDH) fir Element an der tricarboxylic Seier (TCA) Zyklus ze acetyl-Coa (AcCoA) witzeg. Ëmgedréit, Zellen an Kriibs ze hypoxia ausgesat, ass pyruvate shunted ewech vun der Mitochondrie, woubäi HIF-1α den Ausdrock vun PDK1 upregulates zu der PDH Aktivitéit inhibit. Duerno, konvertéiert LDHA alternativ pyruvate zu lactate an MCT4 Verkéiersmëttelen der lactate aus der Zell. Dës Genen sinn och vun HIF-1α reegelen [16, 30, 31]. Hypoxia induces mitophagy exzessiv Ros Produktioun ze vermeiden, déi d'beschiedegt Mitochondrie via Dëst unzereegen éliminéiert ginn [24, 25]. Rezent Studien hu bewisen, datt HIF-1α der Transkriptioune vun den Genen Zeechesaatz BNIP3 an BNIP3L, wesentleche Punkte vun der mitophagy Prozess activéiert [32]. Aner Etude confirméiert datt HIF-1α der COX4 subunit wiessele reguléieren vun der Reunioun vun der ETC-Zesummenhang Genen COX4-2 an Lon activating, engem Kënschtlech protease datt fir COX4-1 ofgeschnidden ënner hypoxia néideg ass [26]. D'COX4 subunit Säitewiessel gouf als e wichtege Schrëtt an Ros homeostasis, wéinst hirer Roll Rapport d'Effizienz vun sin ënner hypoxia zu optimizing [26]. D'Ros Ralley MnSOD ass bekannt fir superoxide Radikaler zu Waasserstoff Hem geflunn. A leschter Etude huet confirméiert, dass MnSOD ënner hypoxia upregulated ass, obwuel ob dës upregulation vun HIF-1α mediated ass ass nach net gewise ginn [27]. Kuerzem, hien huet aner Rapport d'interessant fannen dass d'embryonal Här iwert mech selwer (MEFs) vun hypoxic HIF-1α-automatesch Mais wéinst iwwerschësseg Ros Produktioun gestuerwen, iwwerdeems de MEFs vun Behandlung mat der neier Étude N acetyl-L-cysteine (NAC) gerett huet [ ,,,0],33]. Geholl zesummen, weg dëse Rapporten datt HIF-1α eng zentral Roll spillt de Kënschtlech Ros Produktioun vun der Organisatioun Zellen ënner hypoxia an wunnen. VerfÜgung An dëser Etude, fir mir dat hypoxia-entschlof apoptosis eng therapeutesch Modell ze etabléieren Musiktherapie- via der overproduction vun Ros kënnen ze HIF-1α erhéijen gastric Kriibs Zellen agefouert ginn. Mir Ufank alles ob hypoxia induces vun der Verhënnerung Ros Produktioun vun der HIF-1α knockdown (Beien zB stéiert) Zellen Zell Doud. Sou gouf, sot mir d'Hypothes, datt d'Aféierung vun héich Bluttzockerwärter vun der Behandlung vun Beien zB stéiert Zellen mat Insulin der apoptotic Effekt verbesseren kann. Endlech, entholl xenograft Modell mat, mir proposéiert datt HIF-1α inhibition kombinéiert mat Zocker plus Insulin (gi) Behandlung e Potential Therapie fir gastric Kriibs kann. VerfÜgung Zell Kultur Konditiounen a reagents VerfÜgung d'gastric Kriibs Zell Linn 58As9 Audit vum Dr. K. Yanagihara (National Cancer Center Hospital Osten, Chiba, Japan) op Dezember zu 2009. d'58As9 Zell Linn ursprénglech aus der scirrhous gegrënnt gouf gëtt war gastric carcinoma-ofgeleet Zell Linn HSC-58 [34]. Dëst Zell Linn war duerno weider op 24 Februar versoen Zell Nuetsvolen assay VerfÜgung D'Zell Nuetsvolen ënner normoxia oder hypoxia vun trypan blo Hoerfaarw Exklusioun assays évaluéieren war. Fir d'Evaluatioun vun Drogenofhängeger Behandlung Effekter, dorënner NAC, héich Zocker an /oder Insulin op der Zell Nuetsvolen, 1 × 10 Western blot Analyse VerfÜgung Lait Zell lysates aus cultured Zellen an der xenograft erhéijen an Mais benotzt lysis gefiermt bereet komponéiert vun 150 mmol /L NaCl, 50 mmol /L Tris-HCl (pH 7.6), 0,5% Triton X-100, an engem protease inhibitor Cocktail Mëschung (Roche, Mannheim, Däitschland). Zell lysates aus der cytosolic Ëmwandlung a Zell Membran Ëmwandlung sech mat engem Cytochrome c Thorunn Apoptosis Assay Kit virbereet an engem Plasma Membran Protein Extraktioun Kit (BioVision Galaxy Milpitas, CA, USA) laut den Hiersteller d'Uweisungen. De Western blot Analyse Leeschtung war wéi virdru beschriwwen [7]. Aliquots 30 μg vun FAQ mat sech electrophoretically vun 4-12% Bis-Tris gelies (Invitrogen) an op eng Amersham Hybond-ECL Membran (GE Gesondheetswiesen, Buckinghamshire, UK) an engem Transfert gefiermt transferéiert getrennt. No mat 5% Haut Mëllech Outil fir 30 min, war d'Membran mat Primärschoul antibodies Nuecht op 4 ° C incubated. Déi folgend Primärschoul antibodies sech benotzt: Anti-HIF-1α (1: 1000 dilution, Abcam, Cambridge, UK), anti-eenalecn caspase 3 (1: 1000, Zell sécher Technology, Danvers, MA), anti-cytochrome c (1 : 500 dilution, BioVision), anti-GLUT1 (1: 100.000 dilution, Abcam), an anti-β-actin (1: 10.000 dilution; Fläch-Aldrich Galaxy). No incubation mat den entspriechende Secondaire antibodies, goufen d'Signaler mat engem Amersham ECL Plus Western Blotting Detektioun System (GE Gesondheetswiesen) entwéckelt. VerfÜgung Detektioun vun intracellular Ros duerch onkontrolléiert cytometry VerfÜgung Intracellular Ros Wäerter évaluéiert huet mat engem total Ros Detektioun Kit (Enzo Life Sciences, Inc., Farmingdale, NY, USA) no der Taktik vum Produzent. An dowéinst, Beien zB stéiert dat, SC, goufen Zellen cultured ënner Konditiounen vun entweder normoxia oder hypoxia mat oder ouni Drogenofhängeger Behandlungen (i.e., NAC, héich Zocker an /oder Insulin) fir 24 h, 48 h an 72 h. 74-Beien zB stéiert dat a 74-SC goufen och ënner Konditioune vun entweder cultured normoxia oder hypoxia fir 24, 48, an 72 Stonnen ouni Drogenofhängeger Behandlung. D'Zellen sech gewäsch an an der Ros erkennen Léisung du-gespaart. Ros fluorescence war vun der FACS Calibur Flux cytometer (Becton-Dickinson, San Jose, CA) an analyséiert vun der Zell Quest Software Programm fonnt. All Experiment an triplicate gesuergt. Déi heeschen fluorescence vun Ros Produktioun gouf automatesch alles an den Geo virgestallt heeschen. VerfÜgung Total RNS erauszéien a grouss RT-Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS aus Zell Linnen ofgebaut gouf mat enger Isogen RNS Extraktioun Kit ( Nippon Gene, Rekorder, Japan). One μg vun RNS war an cDNA ëmgerechent mat engem ReverTra Ace (Toyobo) ëmgedréint Transkriptiouns Reaktioun Kit. D'cDNA war wéi e Skelett fir d'Hinnen alleguer benotzt. A real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer (RT-qPCR) huet mat Hëllef vun der Light LS Instrument System (Roche kinnt GmbH, Mannheim, Däitschland) mat enger Light-LS-FastStart DNA Master SYBR Green ech Kit (Roche) gesuergt. Déi zéng Genen, datt duerch d'RT-qPCR analyséiert huet sech wéi follegt zesummen: Zocker Fernsehn 1 ( GLUT1 VerfÜgung), aldolase C ( ALDOC VerfÜgung), pyruvate dehydrogenase kinase 1 ( PDK1 Glukose Notzong assay VerfÜgung Den Zockerspigel Notzong vun cultured Zellen war mat engem 2-Deoxyglucose (2DG) Notzong Kilometréierung Kit alles (COSMO BIO Co. Ltd., Tokyo, Japan). Kuerz, goufen d'Zellen fir 6 h ënnert engem serum-gehongert Conditioun cultured, déi weider ubauen duerno fir 18 h am normale mëttelfristeg mat 10% FBS ergänzt. D'Zellen sech fir 24 h ënnert normoxia oder hypoxia incubated. Doropshin huet sech d'Zellen fir 18 min mat oder ouni 500 Dummeldéng /ml Insulin behandelt. Endlech, goufen d'Zellen fir 20 min mat 2DG behandelt a fir d'Miessung vun der Notzong 2DG ënnerworf no der Taktik vum Produzent. All Experiment an triplicate an der heeschen Wäerter waren berechent gesuergt. VerfÜgung Déieren Studien VerfÜgung D'Déier Ëmwelt- vun de Finanzpolitiker Déieren Care an Benotzt Aarbecht vun Letzebuerger University (Protokoll 24-008-0 guttgeheescht huet ) an conformed fir de Gebrauch vun Déieren an Fuerschung op der ukommen Richtlinnen. Weiblech 4-Woch-al athymic BALB /CA JCL Mais (Nu /Nu) sech aus Nihon CREA Co. (Rekorder, Japan) kritt. Déieren goufe ënner bestëmmten-pathogen-gratis Konditiounen. Si waren steril Liewensmëttel a autoclaved Waasser mat engem 12-h Liicht-donkel Zyklus entscheet. Mais waren ier d'Experiment fir 7 Deeg op d'Ëmwelt acclimated. Beien zB stéiert oder SC Zellen (3 × 10 eenalecn caspase 3 immunohistochemistry an der Beurteelung vun apoptosis zu VIVO D' gefruer erhéijen sech mat Ray-Tek okt Ënnerbewosstsinn Massa. Dës Bléck goufen ouni Géigewier an 4-μm-décke Sektiounen. Fir antigen retrieval, waren der drënner an Tris-héich ass (pH 9.0) an engem Schleck erëm (500 Watt) fir 5 min gehëtzt. (: 200, Zell sécher Technology 1) fir 2 h bei Raumtemperatur, an der DAKO Stellt + System (Dako Cytomation, Glostrup, Dänemark) war als sekondär antibody benotzt de Rubriken sech dann mat anti-eenalecn caspase 3 incubated. D'Signaler sech mat diaminobenzidine tetrahydrochloride (0.02%) visualized. Fir d'Bewäertung vun apoptosis, eenalecn caspase 3-positiv Zellen mat brong Faarwen Käre sech zu fënnef Felder bei 400x Vergréisserung an der heeschen war berechent gezielt. D'immunohistochemical Ausdrock vun eenalecn caspase 3 war blann duerch eng zertifizéiert pathologist (Dr. EN) iwwerschafft an évaluéieren. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung D'Daten vun engem ANOVA analyséiert goufen d'Prism 5 Software Package benotzt ( GraphPad Software, La Jolla, CA). Fir de Verglach tëscht zwou Gruppen, waren d'Differenzen an der heeschen Wäerter vun de Student bewäert heeschen Chinchilla VerfÜgung Test an de Mann-Whitney U VerfÜgung Test. Fir de Verglach tëscht dräi oder méi Gruppen, Bonferroni Post hoc Tester goufen fir e eent-Manéier ANOVA gesuergt. A Wäert vun p &Si besteet; 0,05 war als statistesch relevant ze ginn. All Donnéeën ginn als Mëttel ± Sem ausgedréckt. VerfÜgung HIF-1α knockdown apoptotic Zell Doud ënner hypoxia zu 58As9 gastric Kriibs Zellen VerfÜgung D'HIF-1α Ausdrock entschlof war am Stall HIF-1α knockdown (Beien zB stéiert) Zellen an SC (wéi d'Kontroll Zell Linn) Zellen évaluéieren. A Western blot Analyse gewisen, datt d'HIF-1α Ausdrock komplett war an der Beien zB stéiert Zellen no 8 Stonnen ënner hypoxia Uewerschenkel Verglach mat den SC Zellen (Lalumi 1A). D'Zell Doud Taux war no 24 h zu 96 Stonnen ënner normoxia an hypoxia geschat. Den Doud Taux war héich an d'Beien zB stéiert Zellen wéi an der SC Zellen ënner normoxia fir 24 op 96 Stonnen, awer d'Differenzen net statistesch relevant (Lalumi 1B) waren. Am Géigesaz, war d'Zell Doud Tarif am Beien zB stéiert Zellen staark ënner hypoxia fräi a vill méi héich wéi déi vun den SC Zellen observéiert um 72 an 96 Stonnen (Lalumi 1c). De Western blot Analyse bewisen, dass eenalecn caspase 3 souwéi cytosolic cytochrome c an de Beien zB stéiert Zellen nik waren, mä net an der SC Zellen ënner hypoxia fir 8 Stonnen (Lalumi 1D an 1E). Hypoxia entschlof Zell Doud war och an anere HIF-1α knockdown gastric Kriibs Zellen 74-Beien zB stéiert (S1 Lalumi) confirméiert. Dës Resultater uginn dass hypoxia staark apoptosis an der HIF-1α knockdown Zell Linn Beien zB stéiert entschlof. VerfÜgung Scavenging Ros réckgängeg der apoptotic phenotype zu HIF-1α knockdown Zellen observéiert VerfÜgung D'intracellular Ros Niveau war geschat a Verglach tëscht de Beien zB stéiert an SC Zellen. D'Ros Niveau zu enger Zäit-ofhängeg Manéier an d'Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxia fräi, iwwerdeems den Niveau liichtschwaach an der SC Zellen (Lalumi 2A) gefördert gouf. D'Ros Niveau vun de Beien zB stéiert Zellen war wiesentlech méi héich ënner hypoxia fir 24 op 72 Stonnen, wéi dat an der SC Zellen (Lalumi 2A). D'Ros Niveauen sech och an der 74-SC Zellen a 74-Beien zB stéiert Zellen (S2 Lalumi) évaluéieren. D'Ros Niveauen hutt ënnerscheeden net tëscht den 74-SC a 74-Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia (S2A Lalumi). Mä ënner hypoxia, goufen d'Ros Niveau bedeitend méi héich an de 74-Beien zB stéiert Zellen wéi an der 74-SC Zellen op 48 bis 72 Stonnen (S2B Lalumi). NAC, enger neier Étude no, ofgeholl bedeitend der Ros Niveau vun de Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxia fir 48 bis 72 Stonnen (Lalumi 2B). Fir ze evaluéieren, ob Ros Produktioun hypoxia-entschlof Zell Doud Beien zB stéiert Zellen, d'Zell Doud Taux mat oder ouni NAC induces war an Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia an hypoxia bewäert. NAC Behandlung gemaach Afloss nët den Taux vun Zell Doud an d'Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia (Lalumi 2C). Am Géigesaz, NAC Behandlung reduzéiert bedeitend der Zell Doud am Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxia fir 48 bis 96 Stonnen (Lalumi 2D). VerfÜgung HIF-1α knockdown reduzéiert der hypoxic Aféierungs- vu verschiddene Genen an der Kontroll vun Ros Produktioun Équipe VerfÜgung der hypoxia-entschlof Ros Heefung an der HIF-1α knockdown Zellen ze ermëttelen, déi mRNA Ausdrock vun zéng Genen, déi an der Ros Kontrollorgan bäisëtzt Équipe ginn ( GLUT1 VerfÜgung, ALDOC VerfÜgung, PDK1 VerfÜgung, LDHA VerfÜgung, MCT4 VerfÜgung, BNIP3 VerfÜgung, BNIP3L VerfÜgung, Lon Glukose an Insulin Behandlungen verstäerkte der apoptotic Zell Doud Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxia VerfÜgung Mir propagéieren nächst ob d'Promotioun vun den Zockerspigel Notzong der hypoxia-entschlof apoptosis zu Beien zB stéiert Zellen betreffen. D'Zell Nuetsvolen war an der Beien zB stéiert an SC Zellen folgenden Traitementer mat Kontroll (PBS), héich Zocker, Insulin oder héijen Zocker plus Insulin (gi) évaluéieren. Hypoxia-entschlof Zell Doud war vun der FI geschat. D'Zell Doud Taux ënnert hypoxia war tëscht der Kontroll Behandlung an déi aner Behandlungen am souwuel Zell Linnen (Lalumi 4) am Verglach. An der SC Zellen, sech keng grouss Ënnerscheeder an de FI an Zell Doud Taux ënnert hypoxia ënnert all vun den Traitementer (Lalumi 4A) observéiert. An d'Beien zB stéiert Zellen, war de FI vill vun hypoxia an all keiers fräi. Besonnesch, Kriseperiod gi Behandlung der héchster FI ënnert all keiers (Lalumi 4B). D'Zell Doud Taux ënnert hypoxia war wiesentlech méi héich am gi-behandelt Zellen wéi an der Kontroll-behandelt Zellen (Lalumi 4B). Ze ermëttelen, ob d'Behandlungen der Ros Produktioun betraff, war d'Ros Niveau vun de Beien zB stéiert Zellen analyséiert. Am Verglach zu normoxic Konditiounen, war d'Ros Niveau bedeitend an d'Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxic Konditiounen (Lalumi 4C) erhuewen. Ënner hypoxia, war d'Ros Niveau an Beien zB stéiert Zellen duerch héich Zocker, Insulin a gi behandelt am Verglach vill fräi Behandlung ze kontrolléieren. Den héchste Ros Niveau war am gi-behandelt Beien zB stéiert Zellen (Lalumi 4C). VerfÜgung Assessment vum Zocker Notzong der Insulin behandelt VerfÜgung D'Zocker Notzong Fähegkeet analyséiert gouf an engem 2DG Aktivitéiten Etude positiv observéiert . An der SC an Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia, war d'2DG Aktivitéiten vun der 2DG Behandlung am Verglach zu onbehandelt Zellen vill erhuewen. D'2DG Aktivitéiten gouf weider vun den zousätzleche Insulin Behandlung an zwou Zellen (Lalumi 5A) fräi. Am Verglach zu normoxia, stimuléiert hypoxia méi staark der 2DG Notzong an der SC Zellen, mat oder ouni Insulin (Lalumi 5B). Ähnlech bruet huet an de Beien zB stéiert Zellen ënner hypoxia (Lalumi 5B) observéiert. Mä ënner hypoxia, manner 2DG war an der Beien zB stéiert Zellen wéi an der SC Zellen Uerden, mat oder ouni zousätzlech Insulin behandelt (Lalumi 5B). Fir de Mechanismus vun Insulin-ofhängeg Zocker Notzong, déi membranous Ausdrock vun GLUT1 bewäerten war an der Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia an hypoxia analyséiert. Ënner normoxia, war d'membranous GLUT1 Ausdrock mat héijen Zocker an /oder Insulin behandelt am Verglach zu deem mat kee Behandlung (Lalumi 5C) erhuewen. Am Verglach zu där ënner normoxia observéiert, ënner hypoxia, war d'membranous GLUT1 Ausdrock an all keiers erhuewen. Doriwwer eraus, war den Ausdrock vun héijen Zocker an /oder Insulin behandelt fräi, am Verglach mat deem vun kee Behandlung (Lalumi 5C). Besonnesch war de membranous GLUT1 Ausdrock stäerkste betraff vun héich Zocker an Insulin (gi) Behandlung an der hypoxic Beien zB stéiert Zellen (Lalumi 5C) fräi. Wéinst dem, den Ausdrock vun engem anere GLUT Famill, GLUT3, liichtschwaach an d'Beien zB stéiert Zellen observéiert gouf, an dat fannen war net ënnert dës verschidde Behandlunge verännert (Donnéeën net gewisen). An dëser Etude, goufen net an de Beien zB stéiert Zellen ausgedréckt GLUT2 an GLUT4. VerfÜgung HIF-1α knockdown plus gi Behandlung betraff de Wuesstem vun entholl xenografts an Sauna Mais VerfÜgung Trupen Endlech hu mir alles am zu VIVO VerfÜgung Effet vun der gi Behandlung op Beien zB stéiert an SC entholl xenografts. Figebam 6A Sarkasmus der experimentell Design vun der xenograft murine Modell. Zéng Deeg no der subcutaneous inoculation vun SC oder Beien zB stéiert Zellen, xenografts sech op der Positioun vun Sauna Mais ugebaut. Op dësem Punkt, bestätegt engem Western blot Analyse der HIF-1α Ausdrock an der SC erhéijen, mä net an d'Beien zB stéiert erhéijen (Lalumi 6B). Doropshin huet dräi Drogen, aus PBS, Zocker oder gi, sech intraperitoneally an Sauna Mais heijen en SC oder Beien zB stéiert entholl (Dag vum Dag 1 Dag 11) dotéiert. D'Vertrieder Biller vun der entholl-Träger Mais dat mat PBS (SC-PBS an Beien zB stéiert-PBS), Zocker (SC-Glukose an Beien zB stéiert-Glukose) oder gi (SC-gi an Beien zB stéiert-gi) behandelt goufen an Lalumi 6C gewise ginn . D'Beien zB stéiert-Glukose an Beien zB stéiert-gi erhéijen wossten wéi déi aner erhéijen méi kleng ze ginn. Figebam 6D zougedréckt a dem Wuesstem Linn vun de 6 erhéijen. D'Taille vun de Beien zB stéiert-Glukose an Beien zB stéiert-gi erhéijen sech vill méi kleng wéi d'Beien zB stéiert-PBS entholl op wëssen 12. D'Beien zB stéiert-gi entholl war de klengsten. Op der aner Hand, an der SC Mais, huet et keen groussen Ënnerscheed zu Gréisst vun der SC-PBS, SC-Glukose an SC-gi erhéijen (Lalumi 6D). An immunohistochemical Analyse vun eenalecn caspase 3 war standing der apoptosis vun Zocker oder gi Behandlung entschlof ze bewäerten. De positiven Ausdrock vun eenalecn caspase3 war an der Beien zB stéiert-Glukose an Beien zB stéiert-gi erhéijen (Lalumi 6E) dacks observéiert. Allerdéngs, Schatzkummer all vun de Beien zB stéiert erhéijen puer Zorte vun eenalecn caspase 3 (Lalumi 6F). Am Géigesaz, gouf et keen groussen Ënnerscheed zu Ausdrock vun der eenalecn caspase 3 ënnert den SC-PBS, SC-Glukose an SC-gi erhéijen. An d'Beien zB stéiert erhéijen, war de positiven Ausdrock vun eenalecn caspase3 bedeitend méi héich an d'Beien zB stéiert-PBS entholl wéi an der SC-PBS entholl. Ausserdem, huet den Ausdrock vun eenalecn caspase3 bedeitend méi héich an d'Beien zB stéiert-Glukose oder Beien zB stéiert-gi erhéijen wéi an de Beien zB stéiert-PBS entholl. Den héchste Ausdrock war an der Beien zB stéiert-gi entholl observéiert. VerfÜgung Am Moment studéieren, HIF-1α sech knockdown Zellen benotzt ze ermëttelen, ob spektakulärer Ros Produktioun ënnert hypoxia entschlof ginn. D'Resultater weisen, dass den apoptotic Zell Doud war an Beien zB stéiert Zellen entschlof, mä net an der Kontroll SC Zellen ënner hypoxia. Parallel alldeeglech Ros an der knockdown Zell Linn no der Dauer vun hypoxia. Hypoxia- entschlof Zell Doud an Ros Heefung sech och an de verschiddene HIF-1α knockdown 74-Beien zB stéiert Zellen observéiert, mä net an der Kontroll 74-SC Zellen. Desweideren, reduzéiert d'NAC Behandlung d'Quote vun hypoxia-entschlof Zell Doud an d'Beien zB stéiert Zellen. Dës Resultater unzeginn Optriede vun hypoxia-entschlof apoptosis wéinst exzessiv Ros Heefung an Beien zB stéiert Zellen an ënnerstëtzt enger viregter Etude dass HIF-1α Knockout MEFs gestuerwen wéinst exzessiv Ros Produktioun [33]. VerfÜgung Ros sinn haaptsächlech generéiert an der Mitochondrie vun der ETC [17, 19]. Et ass confirméiert datt d'Kënschtlech Ros ënner hypoxic Konditiounen fräi sinn [17, 19]. Wann hypoxia bestoe bliwwen, féiert d'Aféierungs- vun HIF-1α Mechanismen fir de Lycée Ros ze reduzéieren an redox homeostasis via de upregulation vun relevant Genen [19] hierstellen. Mir also propagéieren ob HIF-1α knockdown der mRNA Ausdrock vun zéng Genen betraff vun der Kontroll vun Ros Produktioun ënnert hypoxia Équipe ( GLUT1 VerfÜgung, ALDOC VerfÜgung, PDK1 VerfÜgung, LDHA VerfÜgung a MCT4 VerfÜgung zu der Warburg Effekt Liewewiesen; BNIP3 VerfÜgung a BNIP3L VerfÜgung Liewewiesen ze mitophagy; Lon VerfÜgung a COX4-2 VerfÜgung zu der ETC Liewewiesen; an MnSOD VerfÜgung, engem Ros Ralley). Déi integréiert Analysë vun der RT-qPCR Serie bewisen, dass d'hypoxia-entschlof Ausdrock vun all zéng Genen vill am Beien zB stéiert Zellen opgeléist gouf, hierkommen, ënnert normoxia, war d'mRNA Ausdrock vun Lon an COX4-2 bedeitend méi héich an d'Beien zB stéiert Zellen wéi an der SC Zellen. Dës Resultater uginn, datt de spektakulärer Heefung vun Ros ënner hypoxia an der HIF-1α knockdown Zellen vläicht op verschidde Pann vun der Ros Kontrollorgan bäisëtzt wéinst ginn. Dofir, kann an der hypoxic Regioun gastric Kriibs Otemschwieregkeeten effikass ginn Kriibs Therapie HIF-1α gezielt. De Mechanismus der upregulated mRNA Ausdrock vun Lon an COX4-2 am Beien zB stéiert Zellen ënner normoxia Basisdaten konnt net Souzesoen ginn. VerfÜgung Laut dem uewe Conclusiounen, Hypothes mir, datt d'Promotioun vun der Zocker Notzong hypoxia-entschlof Boost vläicht apoptosis duerch weider Ros Produktioun vun HIF-1α knockdown Beien zB stéiert Zellen. Wéi erwaart, verstäerkt d'gi Behandlung der Zell Doud hypoxic Beien zB stéiert Zellen, déi fräi Ros Produktioun begleet war. An der Zocker Notzong studéieren, méi Insulin der 2DG Notzong Souwuel den SC an Beien zB stéiert Zellen. Am Verglach zu där ënner normoxia observéiert, fräi hypoxia der 2DG Notzong an der SC an Beien zB stéiert dat mat oder ouni Insulin behandelt Zellen. D'Notzong war méi staark an der SC fräi wéi Beien zB stéiert Zellen, eng Differenz wéinst der attenuated GLUT1 Aféierungs- am hypoxic Beien zB stéiert Zellen suggeréiert. Wéinst dem zougedréckt engem Western blot Analyse datt d'membranous GLUT1 Ausdrock mat héijen Zocker an /oder Insulin Behandlungen, am Verglach mat Kontroll Behandlung vun der normoxic an hypoxic Beien zB stéiert Zellen fräi war. Besonnesch, déi gi Behandlung méi staark der membranous GLUT1 Ausdrock vun hypoxic Beien zB stéiert Zellen. A leschter Etude confirméiert dass den Insulin stimuléiert de br vun GLUT4 aus intracellular Stockage vesicles fir de Plasma Membran vun Vullen Muskel Zellen oder adipocytes Zocker Transport ënnerstëtzt [36, 37].
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
), lactate dehydrogenase a ( LDHA VerfÜgung) an monocarboxylate Fernsehn 4 ( MCT4 VerfÜgung), BCL-2 /adenovirus EIB 19-kDa proposéiert FAQ 3 ( BNIP3 VerfÜgung ), BINP3 wëll ( BNIP3L VerfÜgung), Kënschtlech Mangan superoxide dismutase ( MnSOD VerfÜgung), engem Kënschtlech protease Lon VerfÜgung an cytochrome oxidase subunit 4-2 ( Cox4 - 2 VerfÜgung). D'primers sech no der Untersuchungshaft cDNA Message (GenBank, Bethesda, MD) (Table 1) entworf. bei 60 ° C an 10 s vun Extensioun bei 72 ° C an der leeschtungsfäeg bei 95 ° C, enger denaturation Schrëtt bei 95 ° C fir 3 min, Hinnen alleguer amplification war 5 s vun annealing mat 50 Zykle vun 15 Spiller vun denaturation gehaal. Déi grouss Wäerter sech un de β-actin normalized ( ACTB VerfÜgung) Ausdrock (Table 1). All Experiment an triplicate standing an onofhängeg mannst dräi Mol widderholl. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
, COX4-2 VerfÜgung a MnSOD VerfÜgung) sech mat engem RT-qPCR analyséiert. D'hypoxic Aféierungs- vun der Gentherapie Ausdrock war déi fantastesch Aféierungs- (FI) évaluéieren. D'FIS am ten Genen sech wesentlech méi an de Beien zB stéiert Zellen wéi an der SC Zellen (Lalumi 3). Ausserdeem, fir hypoxic Konditiounen limitéiert wann, goufen d'Ausdrock Niveau vun all zéng Genen vill manner an d'Beien zB stéiert Zellen wéi den SC Zellen. Dës Resultater weisen, datt HIF-1α knockdown rofgaang ass mat Ofstand déi hypoxia-entschlof Ausdrock vun der ten Genen. Op der aner Hand, ënnert normoxia, war den Ausdrock vun PDK1 an BNIP3L vill manner an d'Beien zB stéiert Zellen wéi an der SC Zellen. Ëmgedréit, huet den Ausdrock Niveau vun Lon an COX4-2 bedeitend méi héich an d'Beien zB stéiert Zellen am Verglach zu den SC Zellen. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung
Infliximab kann d'Effektivitéit vun e puer COVID-19 Impfungen behënneren
Moossnamen fir d'SARS-CoV-2 Iwwerdroung duerch Ofwaasser an aarme Regiounen ze vermeiden
Fuerschung weist wéi Darmmikroben d'Maugripp beaflossen
Rotavirus spillt eng Roll bei der Entwécklung vum Typ 1 Diabetis
Darmmikroben a Wasps hëllefen Pestiziden ze iwwerwannen
RNA Sequencing bitt nei Abléck an de Mikrobiom
Fecal Transplantatioun vu bestëmmte Spender besser wéi anerer
Fecal Mikrobiota Transplantatioun oder Hocker Transplantatioun vun engem Spender ass nëtzlech fir Patienten infizéiert mat dem déidleche Widderhuelung Clostridium difficile dat féiert zu schwéieren
Fëschschlamm kéint eng potenziell Quell vun Antibiotike fënnt Studie
Mam Opkommen vu multidrogenresistente Bakterien a Mangel un neien Antibiotike, Fuerscher sinn op der Sich no neie Molekülle gewiescht, déi géint dës Pathogenen kämpfe kënnen. En Team vu Fuerscher hunn
Wasserstoff Otem ass net vum Bikini Atoll
An dësen Deeg mat all den dommen Diskussiounen iwwer Atomkrich, wann Dir dWuert Waasserstoff gesitt, denkt Dir direkt un déi aarm kleng Insel am Pazifik, Bikini Atoll, wou se all dës Atombommen getest