MicroRNAs (miRNAs) eng kritesch Roll an gastric Kriibs Werdegang an Metastasen Leeschtung. Dës Etude propagéieren d'Roll vun miRNA-135a zu fréi gastric Kriibs (EGC) dorënner lymph Node (Am) Metastasen. Mir iwwerpréift der Korrelatioun tëscht miRNA-135a Ausdrock a Krankheete Resultater vun 59 Patiente deen Agrëff fir EGC mécht. gastric Kriibs Zell Linnen benotzen, mir standing fonctionnell an Zil- Gentherapie analyséiert. miRNA-135a Ausdrock war an 33,9% vun de Patienten verwandelt-reegelen. Dës Patienten weisen eng wiesentlech méi fortgeschratt Etapp (TNM stage≥IB, 35,0% vs. 12.8%, p = 0.045) an héichen Taux vun Am Metastasen (30.0% vs. 5.1%, p = 0.014) wéi déi mat erop-Regulatioun vun miRNA-135a Ausdrock. An engem multivariate Analyse, verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a war eng onofhängeg Risk Faktor fir Am Metastasen (seng Chance Verhältnis, 8,04; 95% Vertraue nolauschterer, 1.08-59.81; p = 0.042). Funktionell Analysë gastric Kriibs Zell Linnen mat zougedréckt datt miRNA-135a Trupen Zell Nuetsvolen, epithelial-mesenchymal Transitioun, Zell Invasioun, a Migratioun. ROCK1 war eng Zilscheif vun miRNA-135a a sengem Ausdrock war inversely fir datt vun miRNA-135a soll. ROCK1 Ausdrock war zu EGC Patienten mat Am Metastasen vill méi wéi an deene ouni Metastasen Am. Eis Resultater confirméieren der entholl-suppressive Roll vun miRNA-135a, an hir Roll an EGC am Am Metastasen beweisen. miRNA-135a a seng Zil- Gentherapie ROCK1 VerfÜgung kann Roman therapeutesch an prognostic Ziler fir EGC ginn VerfÜgung Fro:. Shin JY, Kim Yi, Cho SJ, Lee MK, Kook MC, Lee JH, et al. (2014) MicroRNA 135a Hien Lymph Node Metastasen duerch Down-Veruerdnung vun ROCK1 zu Early Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 9 (1): e85205. Doi: 10.1371 /journal.pone.0085205 VerfÜgung Redakter: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan VerfÜgung Arnaque: 28. Oktober 2013; Akzeptéiert: 23. November 2013; Publizéiert: 21. Januar 2014 zu Copyright: © 2014 Shin et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Etude duerch Subventiounen war 1110532-3 aus der National Cancer Center, Korea finanzéiert. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:. Ophaalen ass eng PLOS NËMMEN redaktionnellen Comité an dëser Aart net de onvergläichleche 'Auteuren un all déi Politiken PLOS NËMMEN op sharing Daten a Material. VerfÜgung Gastric Kriibs bleift nach d'zweet Équipe gemeinsam Ursaach vum Kriibs veruerteelt weltwäit, trotz zu entwéckelt Länner Heefegkeet a veruerteelt Tariffer falender [1 ]. VerfÜgung an Beräicher, dorënner Korea a Japan, wou Duerchmusterung fir gastric Kriibs dicht opgeféiert ass, ass fréi ze erkennen oft méiglech. Well eng fräi Taux vun fréi ze erkennen gastric Kriibs fir eng verbessert hätt nodeems kann, Interessen vun deenen Kranken 'Liewensqualitéit verbesseren a schreiwen minimally invasiv Behandlungen bewonneren. An Patienten mat gastric Kriibs, lymph Node (Am) Metastasen ass eent vun de wichtegste prognostic Faktoren, a Punkto Heefegkeet vun engem Am Metastasen zu fréi gastric Kriibs (EGC) laut vu 5 bis 20% [2] - [4]. VerfÜgung Gastrectomy mat am dissection ass wéi de Standard Behandlung fir gastric Kriibs erauskoum; Ee, 80 bis 95% vun de Patienten mat EGC do net e Am dissection verlaangen, wann d'gastric Kriibs komplett duerch manner invasiv Behandlungen wéi Bild resection excised ass [5] - [7] oder minimally invasiv Chirurgie ( zB VerfÜgung , einfach gewellt resection oder Sentinelle Am Navigatioun rischteg) [8] - [10]. Obwuel Studie vun biologic prognostic an predictive lues fir de Am Metastasen zu EGC gehaal ginn, existéieren keng predictive Handwierksgeschir fir nodal Metastasen vun EGC tatsächlech. VerfÜgung Rei vu Studien, déi Déift vun Invasioun gemellt hunn, entholl Gréisst, an lymphatic Invasioun sinn verbonne mat am Metastasen zu EGC [4], [11]. Allerdéngs goufen der Finale agebousst Ënnersiche vun resected Stoffer sech meeschte vun dëse Facteuren, déi zu der Bestëmmung Behandlung Strategie net nëtzlech ass. VerfÜgung MicroRNAs (miRNAs) si kleng Net-FAQ coding RNAs. Etuden hu bewisen, dass hire Restaurant an Ausdrock vun miRNAs zu der pathogenesis vun Cancers dréit déi vun gastrointestinal Urspronk dorënner [12] -. [15] VerfÜgung miRNAs goufen och an aneren Kriibs an normal Stoffer zu nëtzlech gewise gi [ ,,,0],16], [17]. Zousätzlech, miRNAs sinn differentially vun all Etapp vun gastric Kriibs carcinogenesis ausgedréckt [18]. miRNA-27 [19] an der ZEB1-reegelen miRNA-200 Famill [20] weisen op Etapp vun epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT) zu gastric Kriibs Zesummenhang ze sinn. Dofir, kann miRNAs mat dem Prozess vum Am Metastasen zu EGC verbonne ginn. Dorënner miRNAs, gouf miRNA-135a dës entholl suppressive miRNA ze ginn, an hir Ausdrock ass erof-reglementéiert puer Cancers och keen Auto Zell carcinoma [21] an lymphoma [22]. Am Tour, iwwer-Ausdrock oder Restauratioun vun miRNA-135a ënnerstëtzt apoptosis an Hien Prolifératioun vu entholl Zellen duerch seng Zil- Genen c-Myc [21] an JAK2 [22], respektiv. An en kënschtlech VerfÜgung studéieren, Trupen miRNA-135a Opbau an invasiv Aktivitéite vun gastric Kriibs Zellen [23]. Allerdéngs ass de entholl suppressive Roll vun miRNA-135a zu gastric Kriibs onkloer. VerfÜgung D'Zil vun dëser Etude war d'Korrelatioun tëscht miRNA-135a Ausdrock a Krankheete Resultater am EGC Patienten dorënner Am Metastasen ze ermëttelen. VerfÜgung Mënscherechter Otemschwieregkeeten Echantillon a Krankheete Donnéeën VerfÜgung fofzeg-néng erwuesse Patienten mat EGC bei der National Cancer Center diagnostizéiert, Korea, vu Januar 2011 bis Abrëll 2013 goufen elo och zu dëser Etude. Dës Patienten goufen mat enger oppener oder laparoscopy-assisteiert gastrectomy mat D1 + oder méi Am dissection behandelt. D'Ausmooss vun Am dissection duerno d'Rekommandatioune vun der japanescher Gastric Cancer Association [24]. D'Etapp an der Chirurgie war no der 7 bewäert Zell Kultur an transfection VerfÜgung D' Mënsch normal gastric epithelial Zell Linn HFE145 [26], [27] war e Cadeau vu Dr Hassan Ashktorab an Duane T. Smoot (Howard University, Washington, USA) a kommerziell sinn AGS gastric Kriibs Zell Linnen, YCC2, MKN28, KATOIII, SNU1 , SNU5, SNU16, SNU216, SNU601, SNU638, SNU668, an SNU719 sech aus dem Korea Zell Linn Bank (KCLB, Seoul, Korea) kritt. All Zell Strecken an RPMI 1640 Medien mat 10% An et Bovine serum (FBS) an 1% Antibiotiken (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) haten. Ënnert der gastric Kriibs Zell Linnen, MKN28 an SNU668 sech Zell Linnen ausgewielt well se selten miRNA-135a auszedrécken, an YCC an KATOIII Zell Strecken ausgewielt well se eng substantiell baseline Ausdrock vun miRNA-135a (Dorënner 1A) hunn. Transfections mat miRNA-135a mimics (mirVana ™ miRNA mimics, Ambion, Austin, Suerge, USA), eng miRNA-135a inhibitor (mirVana ™ miRNA inhibitor, Ambion, Austin, Suerge, USA), a ROCK1 siRNA (5'-UGAUGCAAAGAUUGUACUC- 3 '; UGBioneer, Seoul, Korea) zu SNU668, YCC2, MKN28, an KATOIII Zell goufe benotzt Lipofectamine RNAiMAX an Lipofectamine 2000 reagents (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) laut den Hiersteller d'Instruktioune gesuergt. MKN28, SNU668, YCC2, an KATOIII Zell Linnen waren zwee Deeg no transfection recoltéiert, a verschidde analyséiert goufen gesuergt. VerfÜgung RNS erauszéien a miRNAs quantification VerfÜgung Total RNS war aus 13 Zell Linnen isoléiert an 59 gastric Kriibs Patienten Stoffer, respektiv, andems TRIzol (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) als pro Fabrikant d'Protokoll. D'TaqMan universal Hinnen alleguer Meeschtesch Mëschung reagents Kit (Obwuel Biosystems, Tokyo, Japan) benotzt gouf. Amplification an erkennen waren op 95 ° C (15 Sekonnen) an annealing /Extensioun bei 60 ° C (60 Sekonnen) mat enger 7900HT liichtkraaftarm Detektioun System (Obwuel Biosystems, Tokyo, Japan) mat 40 Zykle vun denaturation gesuergt. Dëst gouf fir 10 Minutten fir 30 Minutten an denaturation bei 95 ° C an 50 ° C vum Géigendeel Transkriptiouns vrun. Fir quantitate eeler miRNAs, TaqMan MicroRNA Assays Trikoten (Obwuel Biosystems, Tokyo, Japan) huet fir benotzt ze erkennen miRNA-135a an enger Kontroll miRNA (RNU6B). VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung Protein war "Otemschwieregkeeten Echantillon andems Ripa Prellbock (Biosesang, Seoul, Korea) dorënner eng protease inhibitor Cocktail (Fläch, St. Louis, MO, USA) laut den Hiersteller d'Protokoll vu 13 Zell Linnen an 59 EGC Patienten ofgebaut. Next, war Western blotting anti-ROCK1 an Anti-β-actin (Santa Cruz Déi, Santa Cruz, CA, USA) antibodies benotzt gesuergt. Signaler huet mat enger ECL Premier Kit (GE Gesondheetswiesen, Piscataway, NJ, USA) fonnt wéi pro Fabrikant d'Instruktioune. VerfÜgung Zell Prolifératioun assays VerfÜgung Zell Prolifératioun gemooss gouf en MTT assay benotzt. Zellen sech am 96-gutt Kultur Placke (3 × 10 Zell Zyklus Analyse VerfÜgung BTS sech zu 60π Kultur Placke plated an transfected mat miRNA -135a mimics oder eng negativ Kontroll miRNA mimics (Mimics-NC). Dës Zellen sech duerch trypsinization an fix zu 70% Ethanol fir op d'mannst zwou Stonnen bei -20 ° C recoltéiert. Zell Pellets sech mat kal phosphate-gefiermt Salins gewäsch a fir 30 Minutten bei Raumtemperatur zu PI /RNase Staining Respektiv (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) incubated. No staining, mat engem FACScan Flux Echantillon waren cytometer (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) analyséiert a 10.000 Evenementer pro Prouf gesammelt goufen. Daten aus Flux cytometry benotzt Zell Quest Software (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) analyséiert. VerfÜgung Trans-filter Wanderung an Invasioun assays VerfÜgung D'Zellen sech mat miRNA-135a mimics transfected , miRNA-135a inhibitors, ROCK1 siRNA, an ROCK1 siRNA negativ Kontroll (scRNA) fir een Dag an dann zu der ieweschter ëmkomm vun der transwell zappen transferéiert bedeckt mat 0,5 mg /ml collagen Typ ech (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) an engem 1:15 dilution vun Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA). RPMI 1640 mat 10% FBS an 1% Antibiotiken (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA) war fir d'Ënnescht Chamber kommen an der Schossel war incubation fir 20 Stonnen. Wanderen an hypothetesch Zellen sech mat hematoxylin an eosin staining laachen. VerfÜgung D'luciferase reporter plasmid Konstruktiounen VerfÜgung D'Wëllschwäin Typ 3 'UTR vun ROCK1 mat verbindlechen Siten fir miRNA-135a Implikatioune war mat gDNA aus SNU668 Zellen als Skelett. Déi soll Mann- gesond sech duerch mutating Som Regioune vun der miRNA-135 bindend Site geschafen. Béid wëll Typ an Mann- 3 'UTR sech zu afgerappt vun der luciferase Gentherapie zu engem pGL3 Kontroll Vecteure gekloonten. Déi gesond sech duerch sequencing ubelaangt. VerfÜgung Luciferase assay VerfÜgung Luciferase assays sech zu SNU668 an YCC2 Zellen gesuergt. SNU668 an YCC2 Zellen sech mat all eenzel vun de plasmids (eidel Vecteure [mierkt], ROCK1 3 'UTR wëll Zort [virstellen], an ROCK1 3' UTR Mann- [Mut], wéi eng miRNA-135a bindend Site) transfected zesumme mat miRNA- 135a mimics, miRNA-135a inhibitors, an negativ Kontroll RNS zu 24-gutt Placken. Zwee Deeg no transfection, goufen Zellen gesammelt an lysed. Luciferase assays waren op der lysates Leeschtung vun engem luciferase assay Kit benotzt (Promega, Madison, allem, USA). Luciferase Aktivitéit war normalized zu β-galactosidase. VerfÜgung Immunohistochemical staining VerfÜgung Immunohistochemical (IHC) staining fir Vertrieder 20 Fäll vum ROCK1 niddereg a héich Ausdrock Gruppen gesuergt huet. Antigen retrieval war fir 30 min an pH mat Hëtzt Behandlung gemaach 8.0 Tris-héich ass (CC1, Ventana Medical System, Tucson, AZ, USA) op 95 ° C. Ray drënner waren fir 30 min mat anti-ROCK1 MAB- (; Abcam, Cambridge, MA, USA ab134181, Klon EPR638Y, Kanéngchen monoclonal, 1:5,000) bei 42 ° C incubated. Negativ Kontrollen waren identically mat nonimmunized Kanéngchen IgG benotzt. Resultater goufen duerch en erfuerene pathologist (MC Kook) interpretéiert. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Skala Date sinn als mengen ± normale deviation (Fils). Chi-Feld oder genau Tester d'Fisher an de Mann-Whitney U Test sech benotzt Diskussioun Verännerlechen a kontinuéierlech Verännerlechen ze vergläichen, bzw.. D'Pearson Korrelatioun souguer gemaach gouf fir ze vergläichen der Gentherapie Ausdrock Muster tëscht miRNA-135a an ROCK1 benotzt. onofhängeg Faktore war A multivariate Logistikzenter Réckgang Modell benotzt mat Am Metastasen verbonne ze bestëmmen. Covariates déi bedeitendst benotzt Chi-Feld oder Fisher d'exakt Tester goufen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) waren an der Logistikzenter Réckgang Modell aginn. All Daten benotzt StataLanguage 12.1 (StataLanguage Verletzung, College Station, Suerge, USA) analyséieren. A P VerfÜgung Wäert vu manner wéi 0,05 war statistesch relevant considéréiert. miRNA-135a Ausdrock Niveauen mat Werdegang an Am Metastasen zu EGC verbonne sinn VerfÜgung a leschter Etude gewisen, datt miRNA-135a Ausdrock-reegelen Ugrëff ass an gastric Kriibs Zell Linnen [23]. Andeem Dir qRT-Hinnen alleguer, hunn mir och, datt miRNA-135a Ausdrock ass erof-reglementéiert verschidde Linnen gastric Kriibs Zell am Verglach mat deem vun engem normalen gastric epithelial Zell Linn (Dorënner 1A). VerfÜgung Allerdéngs, d'Korrelatioun tëschent miRNA-135a Ausdrock a Krankheete Resultater am gastric Kriibs huet propagéieren net ginn. Dofir, gemooss mir de miRNA-135a Ausdrock Niveauen am primäre gastric Kriibs an hire jeeweilegen Niveauen an normal Stoffer aus 59 Patiente mat EGC. Down- a weider-Regulatioun vun Genen vun entholl Stoffer mat Respekt ze normal Stoffer wéi d'Verhältnis vun entholl zu normal Otemschwieregkeeten Gentherapie Ausdrock Niveaue vu &Si besteet definéiert goufen; 1.0 a &plain. 1.0, bzw. VerfÜgung Ëmgedréit fir d'Resultat vun kënschtlech VerfÜgung Experimenter, nëmme 20 (33.9%) vun 59 Patiente mat EGC Schatzkummer verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a Ausdrock. Allerdéngs huet dës Patienten däitlech eng méi fortgeschratt Etapp (TNM stage≥IB, 35,0% vs. 12.8%, p = 0,045; Brutto gelungent Verhältnis [ODER], 2,11; 95% Vertraue nolauschterer [CI], 1.08-4.10) an engem héichen Taux vun am Metastasen (30.0% vs. 5.1%, p = 0,014; Brutto ODER, 2,73; 95% CI, 1.50-4.98) wéi déi mat erop-Regulatioun vun miRNA-135a Ausdrock (Table S1). Empfindlechkeet a Spezifizitéit vun Ausdrock Status miRNA-135a fir Cepheid vun Am Metastasen 75,0% an 72,5%, respektiv. Zousätzlech, Patienten mat méi fortgeschratt Etapp (Dorënner 1B) oder Am Metastasen (Dorënner 1c) huet eng bedeitend manner Verhältnis vun entholl zu normal miRNA-135a Ausdrock Niveau wéi déi mat Etapp IA oder ouni Am Metastasen. A multivariate Logistikzenter Réckgang Analyse weisen och, datt miRNA-135a verwandelt-Regulatioun onofhängeg mat Am Metastasen (seng ODER, 8,04; 95% CI, 1.08-59.81; p = 0,042; Table 1) assoziéiert gouf. Zesummen, proposéiere dëse Conclusiounen datt verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a Ausdrock kënnt mat gastric Kriibs Werdegang dorënner Am Metastasen verbonne ginn. VerfÜgung miRNA-135a gastric Kriibs Zell Nuetsvolen Hien, EMT, Migratioun, an Invasioun VerfÜgung fir weider d'Associatioun tëscht miRNA-135a a Krankheete Resultater ermëttelen, mir standing funktionell assays fir Zell Nuetsvolen, Zell Zyklus, EMT, Migratioun, an Invasioun an gastric Kriibs Zell Linnen. Overexpression vun miRNA-135a vun miRNA-135a mimics vill Trupen Zell Nuetsvolen (Dorënner 2A) a fräi subdiploid Ëmwandlung vun SNU668 Zellen, eng Zell Linn datt selen miRNA-135a (Dorënner 2B) dréckt, déi fräi apoptosis vun gastric Kriibs Zellen suggeréiert. Allerdéngs, Ennerdréckung vun miRNA-135a vun miRNA-135a inhibitors entschlof weder eng Erhéijung vun Zell Nuetsvolen nach eng subdiploid Ëmwandlung Ofsenkung YCC2 Zellen, eng Zell Linn dass substantiell miRNA-135a (Dorënner 2A an 2B) dréckt. Mir propagéieren och d'Associatioun tëscht miRNA-135a Ausdrock an EMT zu gastric Kriibs Zellen, well miRNA-135a verwandelt-Regulatioun eng onofhängeg Risk Faktor fir Am Metastasen zu EGC Patienten (Table 1) war. Fräi Meenungsäusserung vun miRNA-135a war mat Negatioun vun EMT verbonnen an huet eng Erhéijung vun den Ausdrock vun E-cadherin an dem Ophiewe vun béiden N-cadherin an Slug zu SNU688 Zellen. Am Géigesaz, inhibition vun Ausdrock miRNA-135a schéinen Aktivatioun vun EMT dorënner d'Ennerdréckung vun E-cadherin Ausdrock an der up-Regulatioun vun béiden N-cadherin an Slug Ausdrock vun YCC2 Zellen (Dorënner 2C). An der Beurteelung fir funktionell Konsequenzen, overexpression vun miRNA-135a vun miRNA-135a mimics Trupen bedeitend der Migratioun an Invasioun Fähegkeeten vun SNU668 gastric Kriibs Zellen (Dorënner 2D). Ëmgedréit, Blockade vun miRNA-135a vun miRNA-135a inhibitors Wanderung an Invasioun vun YCC2 gastric Kriibs Zellen (Dorënner 2E) däitlech geklommen. Am Allgemengen, proposéiert eise Resultater datt miRNA-135a entholl suppressive regulator fir gastric Kriibs Prolifératioun an Metastasen ass. VerfÜgung ROCK1 ass eng Zilscheif Gentherapie vun miRNA-135a zu gastric Kriibs VerfÜgung fir d 'Mechanisme Basisdaten d'Auswierkunge vun miRNA-135a op Medeziner Resultater, gesichte mir putative Ziler vun der TargetScan 6.2 Datebank benotzt. Vun 718 Ziler conserved, ausgewielt mir solle mat héchster hir verwandelt-Regulatioun kéint zu fräi Kriibs Zell Prolifératioun, Migratioun an Invasioun Resultat. Mir hu fonnt, datt ROCK1 kéint eng Zilscheif Gentherapie vun miRNA-135a gin well inhibition oder Ennerdréckung vun ROCK1 huet gemellt ginn apoptosis ze förderen a Migratioun, Invasioun eraus, a Verbreedung vu Kriibs Zellen inklusiv deenen vun gastric Kriibs [28] - [30]. TargetScan Analyse verroden, datt de 3'UTR Haaptrei vun ROCK1 huet eng méiglech bindend Site fir miRNA-135a (Dorënner 3A). Ze confirméieren ob ROCK1 eng Zilscheif vun miRNA-135a ass, war e luciferase assay gesuergt. D'luciferase 3'UTR gesond a Methoden Rubrik beschriwwe goufen Co-transfected an SNU688 Zellen mat miRNA-135a mimics an YCC2 Zellen mat miRNA-135a inhibitors. Mir gebaut och ROCK1 3'UTR Mut vum Punkt stattfannen C → G am méiglech bindend Site (Dorënner 3A). Der relativer luciferase Aktivitéit vun der ROCK1 3'UTR virstellen war an der Präsenz vun miRNA-135a inhibitors (Dorënner 3B) däitlech geklommen. Ëmgedréit, war dës Aktivitéit vill an der Präsenz vun miRNA-135a mimics (Dorënner 3C) ofgeholl. An gastric Kriibs Zell Linnen, miRNA-135a an ROCK1 huet en misst Ausdrock Muster. Western blot Analyse gewisen, datt ROCK1 Ausdrock war verwandelt-reglementéiert an d'Präsenz vun miRNA-135a mimics, an weider-reglementéiert an d'Präsenz vun miRNA-135a inhibitors (Dorënner 3D an 3). Geholl zesummen, weg dës Resultater datt miRNA-135a Hien ROCK1 Ausdrock vun direkt seng 3'UTR gezielt. VerfÜgung Expression vun ROCK1 ass inversely soll un déi vun miRNA-135a zu Patiente mat EGC VerfÜgung Analys vun 59 Patiente mat EGC zougedréckt datt Ausdrock Niveau vun ROCK1 mat deene vun miRNA-135a eng bedeitend negativ Korrelatioun haten (r = -0,697, p &Si besteet; 0,001; Dorënner 4A). Zousätzlech, mat Patienten weider-Regulatioun vun Ausdrock miRNA-135a hu vill manner Niveau vun ROCK1 FAQ Ausdrock wéi déi mat verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a (mengen entholl zu normalen Verhältnis, 0,81 vs. 1,55, p &Si besteet; 0,001; Dorënner 4B) . VerfÜgung ROCK1 ass mat am Metastasen zu EGC verbonnen an ass zu gastric Kriibs Zell Wanderung an Invasioun Trupen vun miRNA-135a VerfÜgung fir weider diskutéieren der Associatioun tëscht ROCK1 Ausdrock a Krankheete Resultater am EGC Équipe, mer analyséiert d'Musteren vun ROCK1 Ausdrock vun Referenz zu de am Metastasen Status vun abegraff Patienten. Patienten mat Am Metastasen hat eng däitlech méi héich Ausdrock vun ROCK1 FAQ wéi déi ouni Am Metastasen (mengen entholl zu normalen Verhältnis, 1,86 vs. 0,93, p = 0,007; Dorënner 5A). Ausserdeem, Niveaue vun ROCK1 IHC staining waren ähnlech wéi déi vun ROCK1 Ausdrock am Südweste blot Analyse ( dh VerfÜgung, Patienten ouni Am Metastasen haten schwaach staining Musteren IHC [Dorënner 5B] mä déi mat Am Metastasen haten staark positive IHC staining [Dorënner 5C]). VerfÜgung Endlech, z'ënnersichen, ob de Trupen Wanderung an Invasioun vun der miRNA-135a conferred Fähegkeeten an-Regulatioun vun gastric Kriibs Zell Linnen observéiert d'Resultat vun ROCK1 up-Regulatioun waren, mir Migratioun gesuergt an Invasioun assays gastric Kriibs Zell Linnen transfected mat spezifesche ROCK1 siRNA benotzt. ROCK1 siRNA Trupen Opbau an invasiv Aktivitéiten am SNU668 Zellen (Dorënner 5D). An YCC2 Zellen Co-transfected mat miRNA-135a inhibitors an ROCK1 siRNA (Dorënner 5E), Migratioun an Invasioun assays zougedréckt datt inhibition vun ROCK1 vun siRNA bedeitend d'Tempo Opbau an invasiv Auswierkunge vun miRNA-135a attenuated verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a inhibitors (Well 5F). VerfÜgung erginn des Resultater hindeit, datt ROCK1 mat am Metastasen zu EGC Patienten verbonnen ass, an datt dës Resultater aus fräi ROCK1 Ausdrock am Kontext vun miRNA-135a verwandelt-Regulatioun. Dofir, ROCK1 kann zu miRNA-135a-Trupen gastric Kriibs Metastasen Équipe ginn. VerfÜgung Am Moment studéieren, hunn mir dass miRNA-135a zu gastric Kriibs entholl suppressive Rollen hat. An Patienten mat EGC, verwandelt-Regulatioun vun miRNA-135a war eng onofhängeg Risk Faktor fir Am Metastasen. An gastric Kriibs Zellen, an-reegelen miRNA-135a Trupen gastric carcinogenesis vun suppressing Zell Prolifératioun, EMT, an Metastasen. Doriwwer hu mir och en neien Zil- Gentherapie vun miRNA-135a identifizéiert, ROCK1, déi mat Am Metastasen zu gastric Kriibs verbonne war. VerfÜgung An Patienten mat EGC, Evaluatioun Am Metastasen virun Behandlung ass e wichtege Schrëtt an d'Determinatioun vum Traitement Strategien. Manner invasiv Behandlungen wéi Bild resection [5] - [7] oder Sentinelle Am Navigatioun Agrëff [9], [10] ouni Am Metastasen zu EGC Patienten méiglech kann. Dës Behandlung Approche hunn Patienten Liewensqualitéit am Respekt ze spéit komplizéiert verbessert verbonne mat Norm chirurgesch Behandlungen dorënner Loun- Syndrom, Gewiichtsverloscht, an reflux-Zesummenhang Symptomer [31]. Dofir, sinn méi spezifesch a sensibel biomarkers verlaangt de Status vun Am Metastasen zu Patiente mat EGC virauszesoen. Am Moment studéieren, miRNA-135a verwandelt-Regulatioun war eng onofhängeg Faktor fir Am Metastasen, an Cepheid Wäert vun miRNA-135a Ausdrock Zoustand war relativ héich mat engem Empfindlechkeet 75% an engem Spezifizitéit 73%. Obwuel weider Confirmatioun Studien gebraucht ginn, awer dës Resultater datt Miessung vun miRNA-135a Niveau virun der Behandlung ëmm EGC Patienten Bestëmmung vun enger nëtzlech Test fir en Am Status ginn hätt. VerfÜgung Spannen, miRNA-135a gemellt gouf entholl suppressive an oncogenic gin. Overexpression vun miRNA-135a huet mat Negatioun vun entholl Verbreedung an de Wuesstem an keen Auto Zell carcinoma [21] a mat fräi apoptosis a besser Krankheet-gratis Iwwerliewe vun lymphoma [22] assoziéiert gouf. Am Géigesaz, war miRNA-135a zu colorectal Kriibs Werdegang Équipe [32] a fräi Broscht Zell Wanderung an Invasioun [33]. Am Moment studéieren, war miRNA-135a dës entholl suppressive miRNA ze ginn, wat mat de Resultat vun enger viregter Etude am Accord ass [23]. Speziell, Trupen dem héichen Ausdrock vun miRNA-135a puer Schrëtt vun gastric carcinogenesis dorënner Prolifératioun, Migratioun, an Invasioun. Doriwwer eraus, mir hunn och déi miRNA-135a EMT oofgesinn kéint, wat mat der Initiatioun vun der multistep Prozess vun carcinogenesis a Promotioun vun Metastasen [34], [35] gin verbonne gemellt huet. Virum presentéieren studéieren, d'Associatioun tëscht miRNA-135a an EMT huet propagéieren net ginn, obwuel virdrun Studien dass miRNAs gewisen hunn wéi miRNA-27 [19], de miRNA-200 Famill [20], miRNA-7 [36] , an miRNA-1228 [37] oofgesinn EMT duerch hir eege Zil- Genen vun gastric Kriibs. Geholl zesummen, miRNA-135a ass eng entholl suppressive miRNA zu gastric Kriibs. VerfÜgung A leschter Etude 353 mënschlech gastric Kriibs Stoffer analyséiert huet, datt Ausdrock Musteren vun miRNAs sinn Objeten an datt verschidde miRNAs sech mat Werdegang an hätt am gastric assoziéiert Kriibs [14]. An der Etude, war miRNA-135a als oncogenic miRNA zu gastric Kriibs op d'Resultater vun DNA microarray Analyse baséiert klassifizéiert. Allerdéngs, an engem leschte [23] an eiser Etude, miRNA-135a protokolléiert als entholl suppressor trotz dem héije Taux vu Patienten mat miRNA-135a up-Regulatioun. Obwuel vill Patienten (66%) déi an-Regulatioun vun miRNA-135a gläicht d'Resultat vun enger viregter Etude [14], huet dës Patienten eng bedeitend manner avancéiert Etapp an engem nidderegen Taux vun Am Metastasen. Ausserdeem, zousätzlech kënschtlech VerfÜgung Studie weisen och, datt e méi héich Ausdrock vun miRNA-135a mat Negatioun vun gastric carcinogenesis verbonne war. Dës Resultater hindeit, datt Ausdrock Musteren vun miRNAs kéint aus Medeziner Resultater anescht ginn, an duerfir, genau Rollen vun spezifesch miRNAs ze confirméieren, si weider Studien waren. VerfÜgung ROCK1 ass e Member vun der Rho-verbonne serine /threonine kinase Famill, déi als en zentrale regulator vun actin cytoskeleton Organisatioun Funktiounen an Dynamik [23], [38]. ROCK1 huet e verschiddenste Gamme vu Funktiounen am tumorigenesis dorënner Migratioun, Invasioun, an Metastasen [28]. ROCK1 ass eng Zilscheif vun e puer miRNAs zu verschiddenen Cancers dorënner miRNA-584 an keen Auto Zell carcinoma [39], miRNA-335 zu neuroblastoma [40], an miRNA-146a an Aarbecht Kriibs [41]. An gastric Kriibs, huet ROCK1 gouf mat Am Metastasen an TNM Etapp [42] positiv soll, an ass zu miRNA-148a-entschlof Ennerdréckung vun gastric Kriibs Zell Wanderung an Invasioun [30] Équipe. Weider, ROCK1 inhibitor apoptosis zu gastric Kriibs Zellen gefördert [29]. Am Moment studéieren, hunn mir dass ROCK1 eng Zilscheif vun miRNA-135a zu gastric Kriibs ass a sengem Ausdrock ass positiv mat Am Metastasen an EGC Patienten assoziéiert. An kënschtlech VerfÜgung Experimenter weisen och, datt ROCK1 zu gastric Kriibs Zell motility an Invasioun Équipe ass. Dës Resultater hindeit, datt ROCK1 eng nei therapeutesch Zil- mat der Fähegkeet kann gastric Kriibs Metastasen ze inhibit. VerfÜgung An Conclusioun, hu mir miRNA-135a als nei prognostic uweist fir Am Metastasen zu Patiente mat EGC identifizéiert a bewisen, dass miRNA-135a gastric carcinogenesis Trupen ( dh VerfÜgung, Prolifératioun, EMT, an Metastasen zu Linnen gastric Kriibs Zell) vun ROCK1 gezielt. Obwuel dëse Conclusiounen an aner onofhängeg Patienten Gruppen Confirmatioun verlaangen, proposéiere si dat miRNA-135a a seng Zil- Gentherapie ROCK1 eng nei uweist an therapeutesch Zil fir gastric Kriibs mat Am Metastasen kann. VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater
Diskussioun VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Table S1 . VerfÜgung Clinicopathologic Charakteristiken vun Patienten mat fréi gastric Kriibs laut miRNA-135a Ausdrock Status VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0085205.s001 VerfÜgung (Intrigue) VerfÜgung
Darmmikroben kéinte mat Depressioun verbonne sinn
Kuerzkette Fettsäure -Ergänzung verbessert den Erhuelung vum Schlag,
Fäert net d'Kolonoskopie
Fuerscher identifizéieren eng Bakterie mat Anti-SARS-CoV-2 Aktivitéit in vitro:Dolosigranulum pigrum
Patienten op Immuntherapie solle méi Faser konsuméieren,
Wat Dir ësst kann de Wee änneren wéi Antibiotike Ären Darm beaflossen
Staark Mikrobiom am fréie Liewen verbonne mat manner Atmungsinfektiounen
Et gi Kolonien vu mikroskopesche Bakterien a verschiddenen Deeler vum mënschleche Kierper inklusiv der Nues, Mond, Darm, a Longen. Zesummen, dës Bakterien si bekannt als de Mikrobiota vum Kierper. S
Studie mat Zwillingen weist datt COVID-19 Symptomer genetesch bäidroen
Eng nei Studie verëffentlecht um Pre -Print Server medRxiv vum Kings College, London, seet datt eng genetesch Make-up vun engem Individuum dozou bäidroe kann wéi vill eng Persoun méiglecherweis vum
Gutt Nouvelle fir IBS Leider wéi d'Fuerscher "Darm Jucken" identifizéieren
DFlinders Universitéit Fuerscher am South Australian Health and Medical Research Institute hunn eng wichteg Entdeckung iwwer de Péng gemaach, dee bei Fäll vum Reizdarmsyndrom (IBS) erlieft gouf.