PLoS ONE: mikrornk 135A potiskuje limfnog čvora Metastaza putem dolje reguliranje ROCK1 u ranom raka želuca

Sažetak pregled

mikroRNA (miRNAs) igraju ključnu ulogu u želučanom progresije raka i metastaza. Ova studija istražuje ulogu Mirne-135A u ranom stadiju raka želuca (EGC), uključujući limfne čvorove (LN) metastaza. Ispitali smo korelaciju između ekspresije Mirna-135A i kliničkih ishoda u 59 bolesnika podvrgnutih operaciji za IOB. Korištenje želučanog raka stanične linije, proveli smo funkcionalan i analizira ciljani gen. Mirna-135A izražavanje dolje regulirana u 33,9% bolesnika. Ovi pacijenti pokazali su znatno višem stupnju (TNM stage≥IB, 35,0% vs 12,8%, p = 0,045) i višu stopu LN metastaza (30,0% vs 5,1%, p = 0,014) od onih s regulaciji izraz Mirna-135A. U multivarijatne analize, down-regulacije Mirna-135A je neovisni čimbenik rizika za LN metastaza (omjer podešene izgleda, 8,04; 95% interval pouzdanosti, 1,08-59,81; p = 0,042). Funkcionalna analiza pomoću želučane stanične linije raka pokazala je da Mirna-135A potisnut preživljavanja stanice, prijelaz epitela-mezenhimalne, staničnu invaziju i migraciju. ROCK1 bio meta Mirne-135A i njegova ekspresija bila je obrnuto proporcionalno povezana s onom Mirna-135A. ROCK1 izražavanje bilo značajno povećana u EGC bolesnika s LN metastaza nego u onih bez LN metastaza. Naši rezultati potvrđuju tumora potiskuju ulogu Mirne-135A, te pokazati svoju ulogu u LN metastaza u IOB. Mirna-135A i njen ciljni gen ROCK1 pregled mogu biti nove terapijske i prognostičke mete za EGC pregled

Izvor:. Shin JY, Kim Yi, Cho SJ, Lee MK, Kook MC, Lee JH, et al. (2014) mikrornk 135A potiskuje limfnog čvora Metastaza putem dolje reguliranje ROCK1 u ranom raka želuca. PLoS ONE 9 (1): e85205. doi: 10,1371 /journal.pone.0085205 pregled

Urednik: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan pregled

Primljeno: 28. listopada 2013. godine; Prihvaćeno: 23. studeni 2013; Objavljeno: 21 siječanj 2014 pregled

Copyright: © 2014 Shin i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je financiran od strane grant 1110532-3 iz National Cancer Center, Koreja. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

suprotstavljenih interesa. HA je PLoS ONE članovi uredništva i to ne mijenja pridržavanje autorovih svim PLoS ONE politika na razmjenu podataka i materijala. pregled

Uvod pregled

rak želuca i dalje ostaje drugi najčešći uzrok smrtnosti od raka u svijetu, unatoč smanjenju incidencije i mortaliteta u razvijenim zemljama [1 ]. pregled

U područjima, uključujući Koreje i Japana, gdje se obavlja probir za rak želuca široko, rano otkrivanje je često moguće. Zbog povećane stope ranog otkrivanja raka želuca može dovesti do poboljšane prognoze, udjeli u poboljšanju kvalitete života bolesnika i korištenje minimalno invazivne tretmane su se povećale. U bolesnika s karcinomom želuca, limfni čvor (LN) metastaze je jedan od najvažnijih prognostičkih čimbenika, a ukupna incidencija u LN metastaza u ranim raka želuca (EGC) u rasponu od 5 do 20% [2] - [4]. pregled

gastrektomija s LN seciranje slovi kao standardni tretman za rak želuca; Međutim, 80 do 95% bolesnika s EGC ne zahtijevaju LN seciranje ako se rak želuca potpuno izrezan manje invazivne tretmane kao što su endoskopske resekcije [5] - [7] ili minimalno invazivna kirurgija ( npr pregled , jednostavna klin resekcija ili sentinel LN navigacija operacija) [8] - [10]. Iako su provedena istraživanja bioloških prognostičkih i prediktivnih markera za LN metastaza u EGC, nema prediktivni alati postoje metastazama u limfnim čvorovima u EGC zapravo. Pregled

Nekoliko studija pokazalo da dubina invazije, veličini tumora, i limfna invazija su povezane sa LN metastaza u EGC [4], [11]. Međutim, većina od tih faktora su određena nakon završnog patološkog pregleda reseciranog tkiva, što nije korisna u određivanju strategije liječenja. Pregled

mikroRNA (miRNAs) su male ne-proteinski RNA kodiranje. Studije su pokazale da se promjene u ekspresiji miRNAs doprinosi patogenezi raka, uključujući one gastrorezistentnog porijekla [12] -. [15] pregled

miRNAs je također pokazano da je koristan u razlikovanju raka i normalna tkiva [ ,,,0],16], [17]. Osim toga, miRNAs izraženi različito u svakoj fazi rak želuca karcinogeneze [18]. Mirna-27 [19] i ZEB1 regulirano Mirna-200 obitelji [20] su pokazali da se odnose na fazu tranzicije epitelnih-mezenhimalne (EMT) u raka želuca. Stoga miRNAs može biti povezana s procesom LN metastaze u EGC. Među miRNAs, Mirna-135A je pokazala da se tumor supresivnu Mirne, a njegov je izraz dolje regulirana u nekoliko vrsta raka, uključujući karcinom bubrežnih stanica [21] i limfoma [22]. S druge strane, prekomjerna ekspresija ili obnovi Mirna-135A potiče apoptozu i potiskuje proliferaciju tumorskih stanica preko svojih ciljnih gena c-myc [21] i JAK2 [22], respektivno. U in vitro
studiji, Mirna-135A potisnut selica i invazivne aktivnosti želučanih stanica raka [23]. Međutim, tumor supresivnom uloga Mirne-135A kod raka želuca je nejasno. Pregled

Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi povezanost između ekspresije Mirna-135A i kliničkih ishoda u EGC pacijenata, uključujući LN metastaza. Pregled

Materijali i metode pregled

uzorci ljudskog tkiva i klinički podaci pregled

Pedeset i devet odraslih bolesnika s EGC na National Cancer Center, Koreje, dijagnosticirana od siječnja 2011. do travnja 2013. godine su prospektivno uključeno u ova studija. Ovi bolesnici su liječeni s otvorenim ili laparoskopija potpomognuto gastrektomije s D1 + ili više LN seciranje. Opseg LN seciranje slijedi preporuke japanskom rak želuca Association [24]. Pozornica nakon operacije procijenjena je u skladu sa 7 ^{th izdanju američkog Zajedničkog povjerenstva za rak TNM sustava [25]. Ljudska tkiva, uključujući oba želučani rak i podudarne normalna tkiva iz svakog pacijenta odmah su zamrznuti u tekućem dušiku i pohranjeni na -80 ° C. Iz pregleda medicinske ljestvice, s kliničko karakteristike, uključujući dob, spol, Helicobacter pylori pregled, status, karakteristike tumora, stadiju, a status LN metastaze su dobivene i analizirane. Informirani pisani pristanak koji je dobiven od svih bolesnika, a ispitivanje je odobren od strane Institutional Review Board of National Cancer Center, Koreja (NCCNCS-11-445). Pregled}

kultura stanica i transfekcija pregled

ljudski normalni želuca linija stanica epitela HFE145 [26], [27] bio je to poklon od Dr. Hassan Ashktorab i Duane T. Smoot (Howard University, Washington, SAD) i komercijalno dostupnih želučanih staničnim linijama karcinoma AGS, YCC2, MKN28, KATOIII, SNU1 , SNU5, SNU16, SNU216, SNU601, SNU638, SNU668 i SNU719 dobiveni su iz Koreje stanične linije banke (KCLB, Seoul, Koreja). Sve stanične linije su održavane u RPMI 1640 mediju koji sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 1% antibiotici (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Među staničnim linijama karcinoma želuca, MKN28 i SNU668 stanične linije su odabrane jer su rijetko izražavaju Mirna-135A, a odabrani su YCC i KATOIII stanične linije jer imaju znatnu osnovni izraz Mirna-135A (Slika 1A). Transfekcija sa Mirna-135A oponaša (mirVana ™ Mirna oponaša, Ambion, Austin, TX, USA), inhibitora Mirna-135A (mirVana ™ Mirna inhibitor, Ambion, Austin, TX, USA), a ROCK1 siRNA (5'-UGAUGCAAAGAUUGUACUC- 3 '; UGBioneer, Seoul, Korea) u SNU668, YCC2, MKN28 i stanične linije KATOIII su provedena pomoću Lipofektamin RNAiMAX i Lipofektaminje 2000 reagensa (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) u skladu s uputama proizvođača. MKN28, SNU668, YCC2 i KATOIII stanične linije su sakupljene, dva dana nakon transfekcije, te su izvedena razne analize. Pregled

ekstrakcija RNA i miRNAs kvantifikacija pregled

Ukupna RNA izolirana je iz 13 staničnih linija i 59 pacijenata s rakom želuca 'tkiva, odnosno, pomoću TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) kao i po uputama proizvođača. korištena je TaqMan univerzalni PCR master mix reagensi kita (Applied Biosystems, Tokyo, Japan). Pojačavanje i detekcija se provode korištenjem sustava 7900HT Sequence Detection (Applied Biosystems, Tokyo, Japan) s 40 ciklusa denaturacije na 95 ° C (15 sekundi) i kaljenju /produženje na 60 ° C (60 sekundi). To je prethodio reverznom transkripcijom na 50 ° C tijekom 30 minuta i denaturacije na 95 ° C tijekom 10 minuta. Kako bi se odredila zrele miRNAs, TaqMan mikrornk Testovi setove (Applied Biosystems, Tokyo, Japan) korišteni su za detekciju Mirne-135A i kontrole Mirna (RNU6B). Pregled

Western blot analiza pregled

Protein je izvađen iz 13 staničnih linija i 59 uzoraka tkiva EGC pacijenata pomoću Ripa pufera (Biosesang, Seoul, Korea) uključujući i koktel inhibitora proteaze (Sigma, St. Louis, MO, USA) u skladu s uputama proizvođača. Dalje, Western blot provedena je pomoću anti-ROCK1 i anti-β-aktin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) antitijela. Signali su detektirane s ECL početni kit (GE Healthcare, Piscataway, NJ, SAD), prema uputama proizvođača. Pregled

stanici proliferacije analize pregled

Stanična proliferacija izmjerena je pomoću MTT testa. Stanice su nasađene na ploče za uzgoj kulture s 96 jažica (3 × 10 ^{3 stanica po jažici) i transfecirane Mirni-135A oponaša nakon dva dana inkubacije. Nakon toga, 200 ul MTT-a (0.5 mg /ml, Sigma, St. Louis, MO, SAD) dodano je u svaku jažicu. Nakon četiri sata dodatne inkubacije, MTT otopine su odbačeni, 200 ul DMSO (Amresco, Solon, OH, USA) dodano je u svaku jažicu, a ploča se blago tresla. Apsorbancija je mjerena na ELISA čitaču (Moecular Devices, Sunnyvale CA, USA) pri testnoj valnoj duljini od 570 nm.}

staničnog ciklusa analiza pregled

Stanice su nasađene u 60π kultivacijskih ploča, te transfektirane s Mirni -135a oponaša ili A Mirna oponaša negativna kontrola (oponaša-NC). Stanice su sakupljene tripsinizacijom i fiksirane u 70% etanolu na najmanje dva sata na -20 ° C. Stanične pelete se isperu s hladnom, fosfatno puferiranom fiziološkom otopinom i inkubiraju 30 minuta na sobnoj temperaturi u PI /RNaza pufera za bojenje (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). Nakon bojenja, uzorci su analizirani s FACScan protočnom citometru (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) i 10.000 događaja su prikupljeni po uzorku. Podaci iz protočne citometrije analizirani su pomoću mobitela Quest softver (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). Pregled

Trans-filter migraciju i invaziju testovi pregled

Stanice su transfecirane Mirna-135A oponaša inhibitori Mirna-135A, ROCK1 siRNA i ROCK1 siRNA negativna kontrola (scRNA) za jedan dan, a zatim prenese u gornju komoru transjažice ploči obloženoj s 0,5 mg /ml kolagena tipa i (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) i 1:15 razrjeđivanje Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA). RPMI 1640 s 10% FBS i 1% antibiotika (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), doda se u donje komore i ploča je inkubacija 20 sati. Migracije i invazivnih stanica su utvrđene pomoću hematoksilinom i eozinom bojenje. Pregled

U reporter plazmida luciferaze konstrukcije

divljeg tipa 3 'UTR ROCK1 sadrži vezna mjesta za Mirne-135A pojačava se gDNA od SNU668 stanice kao predložak. Usporednu mutanta konstrukti nastali su mutacijom regije sjeme veznih mjesta Mirna-135. I divljeg tipa i mutirane 3 'UTR klonirani su u niže od luciferaza gena u kontrolnoj pGL3 vektorom. Konstrukti potvrđene su sekvencioniranjem. Pregled

luciferaza analitički pregled

Luciferaze testovi su izvedeni u SNU668 i YCC2 stanica. SNU668 i YCC2 stanice su transfektirane sa svakim od plazmida (prazan vektor [MOCK] ROCK1 3 'UTR divljeg tipa [WT] i ROCK1 3' UTR mutant [MUT] kao mjesto vezanja Mirni-135A) zajedno s miRNA- 135A oponaša, inhibitori Mirni-135A, a negativna kontrolna RNA u 24-jamica. Dva dana nakon transfekcije, stanice su sakupljene i lizirane. Luciferaze testovi provedeni su na lizati pomoću kompleta za mjerenje luciferaze (Promega, Madison, WI, USA). Aktivnost luciferaze je normalizirana na P-galaktosidaze. Pregled

Imunohistokemijsko bojanje pregled

Imunohistokemijska (IHH) bojenja provedena je za reprezentativne 20 predmeta iz ROCK1 niske i visoke ekspresije skupine. Antigen dohvat je učinjeno s toplinske obrade za 30 minuta u pH 8,0 Tris-EDTA puferu (CC1, Ventana Medical System Tucson, AZ, USA) na 95 ° C. Tkiva inkubira na 42 ° C tijekom 30 min s anti-ROCK1 mAb (ab134181, klon EPR638Y, zeca monoklonalna, 1:5,000; Abcam, Cambridge, MA, USA). Negativne kontrole su identično koristiti s nonimmunized IgG kunića. Rezultati su interpretirani od strane iskusnog patologa (MC Kook). Pregled

Statistička analiza pregled

Scale podaci su dani kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Hi-kvadrat ili Fisherov egzaktni test i test sume rangova su korišteni za usporedbu kategoričke varijable i kontinuirane varijable, respektivno. Koeficijent korelacije Pearson je bio korišten za usporedbu ekspresije gena uzorak između Mirne-135A i ROCK1. Multivarijantna logistička regresija model je korišten za određivanje neovisne čimbenike povezane s LN metastaza. Kovarijable koji su bili značajni pomoću hi-kvadrat i Fisherov egzaktni test ( P izvoznici < 0,05) stupio je na modelu logističke regresije. Svi podaci su analizirani pomoću Stata 12,1 (Stata Corp, College Station, TX, USA). P pregled vrijednost manja od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled

Rezultati

razina Mirna-135A ekspresije povezane s progresijom i LN metastaza u EGC

prethodna studija pokazala je da Mirna-135A izraz dolje regulirano u želučanim staničnim linijama karcinoma [23]. Korištenjem QRT-PCR, također je utvrdio da izraz Mirna-135A je dolje regulirana u raznim želučanim staničnim linijama karcinoma u usporedbi s onom u normalnom želučane epitelnih stanica linije (Slika 1A). Pregled

Međutim, veza između nije istražen Mirna-135A izraz i kliničkih ishoda u raka želuca. Dakle, mjerili smo razinu Mirna-135A izražavanja u osnovnoj raka želuca i njihove odgovarajuće razine u normalnim tkivima od 59 bolesnika s IOB. Preuzet i up-regulaciji gena u tumorskim tkivima u odnosu na normalna tkiva su definirana kao odnos tumora na normalnu razinu ekspresije gena tkivu < 1,0 i >. 1,0, odnosno pregled

Isto tako na rezultat In vitro pregled eksperiment, samo 20 (33,9%) od 59 bolesnika s EGC izlagao dolje regulacija Mirna-135A izražavanja. Međutim, ovi bolesnici značajno je pokazao višem stupnju (TNM stage≥IB, 35,0% vs 12,8%, p = 0,045; sirove ak omjer [OR], 2.11; 95% interval pouzdanosti [CI], 1.08-4.10) i viša stopa LN metastaza (30,0% vs 5,1%, p = 0,014; sirovo ili, 2,73; 95% CI, 1,50-4,98) od onih s up-regulaciji Mirna-135A izraza (tablica S1). Osjetljivost i specifičnost Mirna-135A status izraz za predviđanje LN metastaze bile 75,0% i 72,5%, respektivno. Osim toga, bolesnici s više poodmakloj fazi (Slika 1B) ili LN metastaza (slika 1C) pokazala je značajno niži omjer tumor na normalnu razinu Mirna-135A ekspresije nego oni sa stupnjem IA ili bez LN metastaza. Multivarijantna logistička regresija je također pokazala da Mirna-135A Smanjivanje se nezavisno povezan s LN metastaza (korigirani OR, 8,04; 95% CI, 1,08 - 59,81; p = 0,042 Tablica 1). Zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da je down-regulacije Mirna-135A izražavanja može biti povezan s želučanim progresije raka uključujući metastaze LN. Pregled

Mirna-135A suzbija rak želuca stanica održivost, EMT, migracija i invazija pregled

Kako bi se dodatno istražiti povezanost između Mirne-135A i kliničkih ishoda, proveli smo funkcionalni testovi za preživljenje stanica, stanični ciklus, EMT, migracije i invazije želučanih staničnim linijama karcinoma. Prekomjerna ekspresija Mirna-135A Mirna-135A oponaša značajno je smanjen preživljavanja stanice (slika 2a) i povećao subdiploid dio SNU668 stanica, stanična linija koja se rijetko izražava Mirna-135A (slika 2B), što upućuje na povećanu apoptozu želučanih stanica raka. Međutim, potiskivanje Mirna-135A inhibitorima Mirna-135A izazvana niti povećanje stanica održivost ni subdiploid frakcija smanjenje YCC2 stanice, stanična linija koja izražava znatnu Mirna-135A (Slika 2a i 2b). Također smo istražili povezanost između ekspresije Mirna-135A i EMT u želučanim stanicama raka, jer je Mirna-135A-dolje reguliranje bio neovisan čimbenik rizika za LN metastaza u EGC bolesnika (Tablica 1). Povećana ekspresija Mirna-135A je bio povezan sa supresijom EMT i pokazao porast ekspresije E-kadherina i supresija N-kadherina i Slug u SNU688 stanica. Nasuprot tome, inhibicija Mirni-135A ekspresije rezultiraju aktiviranjem EMT, uključujući suzbijanje ekspresije E-kadherina i regulaciji oba N-kadherina i cjevčica ekspresije u YCC2 stanica (Slika 2C). U procjeni za funkcionalne posljedice, pojačanom ekspresijom Mirna-135A Mirna-135A oponaša bitno izostavio migraciju i invaziju sposobnosti SNU668 želučanih stanica raka (Slika 2D). S druge strane, blokada Mirna-135A inhibitorima Mirna-135A značajno povećao migraciju i invaziju YCC2 želučanih stanica raka (Slika 2e). Sve u svemu, naši rezultati sugeriraju da je Mirna-135A je regulator tumor supresivnu za širenje želuca rak i metastaze. Pregled

ROCK1 je ciljni gen Mirne-135A u rak želuca Netlogu

Kako bi se razjasnila mehanizme u podlozi učinci Mirna-135A o kliničkim ishodima, tražili smo navodne ciljeve pomoću TargetScan 6.2 baze podataka. Od 718 sačuvanih ciljeve, odabrali smo ciljeve s najvećim brojem bodova čija se regulacija može dovesti do povećane proliferacije stanica raka, migracije i invazije. Otkrili smo da ROCK1 mogao biti meta gen Mirne-135A, jer inhibicija ili potiskivanje ROCK1 je prijavljen za promicanje apoptoze i potisnuti migracija, invaziju i proliferaciju stanica raka, uključujući one rakom želuca [28] - [30]. TargetScan analiza pokazala je da 3'UTR slijed ROCK1 ima jedan mogući vezanja za MIRNA-135A (slika 3A). Za potvrdu je li ROCK1 je meta Mirne-135A, u udjelu luciferazu se izvodi. Luciferaze 3'UTR konstrukti je opisano u Metodama dijelu sutransficirana u SNU688 stanica s Mirna-135A oponaša iu YCC2 stanica s inhibitorima Mirna-135A. Također konstruiran ROCK1 3'UTR Mut točkastim mutacijama C → G u mogućem mjesto vezanja (Slika 3A). Relativna aktivnost luciferaze iz ROCK1 3'UTR WT značajno povećana u prisutnosti inhibitora Mirni-135A (slika 3b). S druge strane, ova aktivnost znatno smanjena u prisutnosti Mirni-135A oponaša (Slika 3C). U želučani staničnim linijama karcinoma, Mirna-135A i ROCK1 pokazala suprotno izraz uzorak. Western blot analiza pokazala je da ROCK1 izražavanje dolje regulirano u prisustvu Mirna-135A oponaša, i up-regulirana u prisustvu inhibitora Mirna-135A (Slika 3D i 3E). Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da Mirna-135A potiskuje ROCK1 izraz izravno usmjerava svoju 3'UTR. Pregled

Izražavanje ROCK1 je obrnuto proporcionalna onoj Mirna-135A u bolesnika s EGC Netlogu

Analiza od 59 bolesnika s EGC je pokazala da je razina ekspresije ROCK1 imali značajno negativno korelira s onima Mirna-135A (r = -0.697, p < 0,001 Slika 4A). Osim toga, bolesnici s up-regulaciji Mirna-135A izražavanja imali su značajno niže razine ROCK1 ekspresije proteina od onih s down-regulacije Mirna-135A (znači tumor na normalan odnos, 0,81 vs 1,55, p 0,001; slika 4b) . pregled

ROCK1 je povezana s LN metastaza u EGC i sudjeluje u želučanom migraciju stanica raka i invazijom potisnute Mirna-135A Netlogu

Kako bi se dodatno procijeniti povezanost između ROCK1 izražavanja i kliničkih ishoda u EGC, analizirali smo uzorke ROCK1 izražavanja u odnosu na metastaze status LN uključenih pacijenata. Bolesnici s LN metastaza imali su značajno veći izražaj ROCK1 proteina od onih bez LN metastazama (srednja tumor na normalan odnos, 1,86 vs 0,93, p = 0.007; Slika 5a). Nadalje, razina ROCK1 IHC bojenja bili su slični onima ROCK1 izražavanja u Western blot analizom ( odnosno pregled, pacijenti bez LN metastaza imala slabe IHC bojenje uzoraka [Slika 5b], ali i one s LN metastaza imala snažan pozitivan IHC bojenje [Slika 5C]). pregled

na kraju, da ispita da li su potisnute migraciju i invaziju sposobnosti stečena Mirne-135A up-regulaciji promatrana u želučanim staničnim linijama karcinoma su rezultat ROCK1 up-regulacije, proveli smo migraciju i pokusima invazije pomoću želučane raka stanične linije transfecirane specifičnim ROCK1 siRNA. ROCK1 siRNA potisnut selica i invazivne aktivnosti SNU668 stanicama (Slika 5D). U YCC2 stanice ko-transfektirane s inhibitorima Mirna-135A i ROCK1 siRNA (Slika 5E), migraciju i invaziju testovi su pokazali da inhibicija ROCK1 po siRNA značajno oslabljena na unapređuje selica i invazivne učinke Mirna-135A podregulaciji inhibitora Mirna-135A (Slika 5F). pregled

Zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da ROCK1 je povezana s LN metastaza u EGC pacijenata, i da je to posljedica povećane ekspresije ROCK1 u kontekstu Mirna-135A dolje-regulacije. Dakle, ROCK1 mogu biti uključeni u Mirna-135A-potisnute želučane metastaza raka. Pregled

Rasprava pregled

U ovom istraživanju, otkrili smo da je Mirna-135A je imao tumor supresivnu uloge u raka želuca. U bolesnika s EGC, down-regulacije Mirna-135A je neovisni čimbenik rizika za LN metastaza. U želučanih stanica raka, regulira prema gore Mirna-135A potisnut želučane karcinogeneze potiskivanjem staničnu proliferaciju, EMT, i metastaze. Osim toga, mi također identificirali novi ciljni gen Mirne-135A, ROCK1, koji je povezan s LN metastaza kod raka želuca. Pregled

U bolesnika s EGC, evaluacija LN metastaza prije tretmana je važan korak u određivanju strategije liječenja. Manje invazivne tretmane kao što su endoskopske resekcije [5] - [7] ili sentinel LN navigacija operacija [9], [10] moguće je u EGC pacijenata bez LN metastaza. Ovi pristupi liječenju poboljšali kvalitetu života bolesnika u odnosu na kasnih komplikacija povezanih sa standardnim kirurškim tretmanima, uključujući damping sindrom, gubitak težine, i refluks povezanih simptoma [31]. Dakle, više specifični i osjetljivi, biomarkeri su potrebni za predviđanje status LN metastaza u bolesnika s IOB. U ovom istraživanju, Mirna-135A-dolje reguliranje bio neovisni čimbenik za LN metastaza i predviđanje vrijednosti statusa ekspresije Mirna-135A je relativno visoka osjetljivost 75% i specifičnost 73%. Iako su potrebna daljnja istraživanja validacije, ovi rezultati su pokazali da je mjerenje razine Mirna-135A prije određivanja plan liječenja za EGC pacijenata može biti koristan test za predviđanje status LN. Pregled

Zanimljivo je da je Mirna-135A je prijavljen da se tumor supresijski i onkogeni. Pojačanom ekspresijom Mirni-135A je povezana sa supresijom proliferacije tumora i rasta karcinoma bubrega [21] i povećanog apoptoze i bolje preživljavanje bez bolesti u limfoma [22]. Za razliku od toga, Mirna-135A je bio uključen u rak debelog crijeva progresije [32] iu povećanom migracijom dojke stanice i invaziju [33]. U ovom istraživanju, Mirna-135A pokazalo se da je tumor supresivnu Mirna, što je u skladu s rezultatima prethodne studije [23]. Posebno, što je veći izraz Mirna-135A potisnuti nekoliko koraka od želučanog karcinogeneze, uključujući proliferaciju, migraciju i invaziju. Osim toga, mi također otkrili da Mirna-135A može potisnuti EMT, koja je izvijestila da je povezan s pokretanju više koraka procesa karcinogeneze i promociju metastaze [34], [35]. Prije ovog istraživanja, povezanost između Mirne-135A i EMT nisu istraženi, iako su ranije studije pokazale da miRNAs poput Mirna-27 [19], Mirna-200 obitelji [20], Mirna-7 [36] i Mirna-1228 [37] za suzbijanje EMT kroz vlastite ciljnih gena u raka želuca. Uzeti zajedno, Mirna-135A je tumor supresivnu Mirne raka želuca. Pregled

Prethodna studija analizira 353 ljudskih tkiva raka želuca su pokazali da izraz obrasci miRNAs su raznolike i da su neki miRNAs povezana s napredovanjem i prognoze u želučanom rak [14]. U studiji, Mirna-135A je klasificiran kao onkogena Mirne na rak želuca na temelju rezultata analize DNK mikropostrojima. Međutim, u nedavnom [23] i naše studije, Mirna-135A djelovao kao supresor tumora usprkos visokoj stopi bolesnika s Mirna-135A regulaciji. Iako su mnogi bolesnici (66%) imalo up-regulaciji Mirna-135A sličan rezultat prethodnog studija [14], ovi pacijenti pokazali su znatno manje naprednu fazu i nižu stopu LN metastaze. Osim toga, dodatni In vitro
studije također pokazuju da su veći izraz Mirna-135A je bio povezan s suzbijanje želučane karcinogeneze. Ovi rezultati ukazuju na to da izraz obrasci miRNAs može biti različita od kliničkih ishoda, te stoga, kako bi potvrdili sve uloge pojedinih miRNAs, daljnje studije su potrebne. Pregled

ROCK1 je član Rho-povezane serin /treonin kinaza, koji djeluje kao središnji regulator aktin organizacije citoskeleta i dinamike [23], [38]. ROCK1 ima raznoliku paletu funkcija u nastanku tumora, uključujući migracije, invazije i metastaziranja [28]. ROCK1 je meta nekoliko miRNAs u različitim oblicima raka, uključujući Mirna-584 u karcinomu bubrežnih stanica [39], Mirna-335 u neuroblastoma [40], i Mirna-146a kod raka prostate [41]. Kod karcinoma želuca, ROCK1 je pozitivno korelirana s LN metastazama i TNM stadiju [42], te je uključen u Mirna-148a-inducirane suzbijanje želučane migracije stanica raka i invazijom [30]. Nadalje, ROCK1 inhibitor promovira apoptoze u želučanim stanicama raka [29]. U ovom istraživanju, otkrili smo da ROCK1 je meta Mirne-135A u rak želuca i njegovo izražavanje pozitivno je povezana s LN metastaza u EGC pacijenata. In vitro
eksperimenti također pokazala da ROCK1 je uključen u rak želuca motilitet stanice i invaziju. Ovi rezultati ukazuju na to da ROCK1 može biti novi terapijski cilj sa sposobnosti da inhibiraju želučani metastaza raka. Pregled

Na kraju, identificirali smo Mirna-135A kao novi prognostički biomarkera za LN metastaza u bolesnika s EGC i pokazala da Mirna-135A potisnut želučane karcinogeneze ( odnosno pregled, proliferacija, EMT, i metastaza u želučanim tumorskih staničnih linija) ciljajući ROCK1. Iako su ovi rezultati zahtijevaju validacije drugih neovisnih bolesnika skupine, oni ukazuju na to da je Mirna-135A i njen ciljni gen ROCK1 može biti novi biomarker i terapeutski cilj za rak želuca s LN metastaza.

popratne podatke
Tablica S1 , pregled kliničko karakteristike bolesnika s ranim rakom želuca prema statusu izraz Mirna-135A pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0085205.s001 pregled (DOC) pregled

• PLoS ONE: povezanost između polimorfizama XRCC1 Gene i liječenje ishoda bolesnika s uznapredovalim rakom želuca: sustavni pregled i meta-Analysis
• PLoS ONE: Ciljanje kadherina-17 deaktivira Ras /Raf /MEK /ERK signalizaciju i inhibira proliferacija stanica u želučanoj Cancer