PLoS One: mikroRNS 135a elnyomja nyirokcsomómetastasis keresztül, leszabályozza ROCK1 kora Gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

A mikroRNS (miRNS) rendkívül fontos szerepet játszanak a gyomorrák progresszió és metasztázis. Ebben a vizsgálatban a szerepe miRNS-135a korai gyomorrák (EGC), beleértve a nyirokcsomó (LN) áttétet. Megvizsgáltuk az összefüggést a miRNS-135a expressziója és klinikai eredmények 59 átesett betegek műtét EGC. A gyomor rákos sejtvonalak, végeztünk funkcionális és célgén elemzéseket. miRNS-135a expressziója alulszabályozott a 33,9% -ánál. Ezek a betegek szignifikánsan több előrehaladott állapotban (TNM stage≥IB, 35,0% vs. 12,8%, p = 0,045), és magasabb LN metasztázis (30,0% vs. 5,1%, p = 0,014), mint az up-szabályozás miRNS-135a kifejezést. A többváltozós elemzés, down-regulációja miRNS-135a független kockázati tényezője LN áttét (korrigált esélyhányados 8,04, 95% konfidencia intervallum, 1,08-59,81; p = 0,042). Funkcionális elemzések segítségével gyomor rákos sejtvonalak azt mutatta, hogy a miRNS-135a elnyomott a sejtek életképességét, epithelialis-mesenchymalis átalakulás sejtek invázióját, és a migráció. ROCK1 volt a cél, miRNS-135a és expressziója fordítottan arányos, hogy a miRNS-135a. ROCK1 expresszió szignifikánsan emelkedett EGC betegek LN áttétek, mint azoknál, akik nem LN áttét. Eredményeink megerősítik a tumor-gátló szerepe miRNS-135a, és bizonyítja szerepet LN metasztázisok EGC. miRNS-135a és a megcélzott gén ROCK1 katalógusa lehet új terápiás és prognosztikai célokat EGC. katalógusa

Citation: Shin JY, Kim Yi, Cho SJ, Lee MK, Kook MC Lee JH, et al. (2014) a mikro-RNS 135a elnyomja nyirokcsomómetastasis keresztül, leszabályozza ROCK1 a Korai gyomorrák. PLoS ONE 9 (1): e85205. doi: 10,1371 /journal.pone.0085205 katalógusa

Szerkesztő: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japán katalógusa

Beérkezett: október 28, 2013; Elfogadva: november 23, 2013; Megjelent: január 21, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Shin et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány által finanszírozott támogatási 1110532-3 a National Cancer Center, Korea. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: HA egy PLoS One szerkesztőbizottságának tagja, és ez nem változtatja meg a szerzők tapadás minden PLoS One politikák adatok megosztása és anyagok. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák továbbra is a második leggyakoribb daganatos halálok világszerte, annak ellenére, hogy csökkenő előfordulási és halálozási aránya a fejlett országokban [1 ].

olyan területeken, beleértve a Koreában és Japánban, ahol szűrés gyomorrák végezzük körben, a korai felismerés gyakran lehetséges. Mivel a megnövekedett mértékű korai felismerése gyomorrák vezethet javított prognózis érdekek javítása a betegek életminőségét, és kihasználva a minimálisan invazív kezelések növelték. Azoknál a betegeknél, gyomorrák, nyirokcsomó (LN) metasztázis egyike a legfontosabb prognosztikai tényezők, valamint a teljes előfordulási gyakorisága egy LN metasztázis korai gyomorrák (EGC) tartományban 5-20% [2] - [4].

gastrectomián LN boncolás tekintik, mint a standard kezelés gyomorrák; Azonban 80-95% -ánál EGC nem igényelnek LN boncolás, ha a gyomorrák teljesen kivágtuk kevésbé invazív kezelések, mint a endoszkópos reszekció [5] - [7] vagy minimálisan invazív sebészeti beavatkozás ( pl katalógusa egyszerű ék reszekció vagy sentinel LN navigációs sebészet) [8] - [10]. Bár a vizsgálatok biológiai prognosztikai és prediktív markerek LN áttét EGC végeztek, nem prediktív eszköz létezik nyirokcsomó áttét a EGC valójában. Katalógusa

Számos tanulmány arról számolt be, hogy a mélysége invázió, a tumor mérete és nyirokér invázió van társított LN metasztázis EGC [4], [11]. Azonban a legtöbb ezek a tényezők határozták meg, miután a végső patológiai vizsgálata eltávolított szövetekben, ami nem hasznos kezelési stratégiájának meghatározására.

A mikroRNS (miRNS-ek) kis nem-fehérjét kódoló RNS-ek. Vizsgálatok bizonyították, hogy a változtatások az expressziója miRNS hozzájárul a patogenezisében rákok, beleértve azokat a gastrointestinalis eredetű [12] - [15].

miRNS már szintén kimutatták, hogy hasznos lehet differenciáló rákos és normál szövetekben [ ,,,0],16], [17]. Ezen túlmenően, miRNS vannak kifejezve differenciálisán minden szakaszában a gyomorrák carcinogenesis [18]. miRNS-27 [19] és a ZEB1 szabályozott miRNS-200 család [20] kimutatták, hogy kapcsolatban áll a szakaszban az epithelialis-mesenchymalis tranzíció (EMT) a gyomorrák. Ezért miRNS összefüggésben lehet a folyamat LN metasztázis EGC. Közül miRNS, miRNS-135a kimutatták, hogy egy tumor elnyomó miRNS, és expresszióját alulszabályozott több rákok, beleértve a vesesejtes karcinóma [21] és a limfóma [22]. Az viszont, túlzott expressziója vagy helyreállítása miRNS-135a elősegíti az apoptózist és elnyomja a tumorsejtek szaporodásához keresztül célgének a c-Myc [21] és a JAK2 [22], ill. Az in vitro katalógusa vizsgálatban miRNS-135a elnyomott migrációs és invazív tevékenysége gyomorrák sejtek [23]. Ugyanakkor a tumor elnyomó szerepe miRNS-135a gyomorrákban nem tisztázott. Katalógusa

A cél az volt, hogy vizsgálja meg az összefüggést a miRNS-135a expressziója és klinikai eredmények EGC betegekben, beleértve LN áttét. Katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

az emberi szövetminták és klinikai adatok katalógusa

ötvenkilenc felnőtt betegnél diagnosztizáltak EGC a National Cancer Center, Korea, 2011 januárjától április 2013 prospektív szerepelnek ez a tanulmány. Ezeket a betegeket egy nyitott vagy a laparoszkópiát-assisted gastrectomián D1 + vagy több LN boncolás. A mértéke LN boncolás követték a japán gyomorkarcinóma Association [24]. A színpad a műtét után értékeltük szerint 7 ^{th kiadása American Joint Committee on Cancer TNM stádium rendszerben [25]. Emberi szövetek, beleértve mind a gyomorrák és kiegyenlített normális szövetek egyes beteg azonnal lefagyasztottuk folyékony nitrogénben, és -80 ° C-on. A felülvizsgálati orvosi diagramok, klinikopatológiai jellemzők, beleértve a kor, a nem, Helicobacter pylori katalógusa állapot tumorjellemzők, színpad, és állapota LN metasztázis kapunk, és elemezték. Tájékozott írásos beleegyezésüket adták az összes beteg és a vizsgálat által jóváhagyott intézményi Review Board of National Cancer Center, Korea (NCCNCS-11-445). Katalógusa}

Sejttenyésztés és transzfekció katalógusa

A a normál humán gyomornyálkahártya sejtvonal HFE145 [26], [27] ajándéka volt Dr. Hassan Ashktorab és Duane T. Smoot (Howard Egyetem, Washington, USA) és a kereskedelemben kapható gyomor rákos sejtvonalak AGS, YCC2, MKN28, KATOIII, SNU1 , SNU5, SNU16, SNU216, SNU601, SNU638, SNU668 és SNU719 kaptuk a Korea sejtvonal Bank (KCLB, Szöul, Korea). Az összes sejtvonalat RPMI 1640 közegben, amely 10% magzati borjúszérumot (FBS) és 1% antibiotikumot (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Között a gyomor rákos sejtvonalban, a MKN28 és SNU668 sejtvonalat választottunk ki, mert ritkán kifejezni miRNS-135a, és YCC és KATOIII sejtvonalat választottunk ki, mert van egy jelentős kiindulási expresszióját miRNS-135a (1a ábra). A transzfekciókat a miRNS-135a utánzók (Mirvana ™ miRNS-utánzatok, Ambion, Austin, TX, USA), egy miRNS-135a-inhibitor (Mirvana ™ miRNS-inhibitor, Ambion, Austin, TX, USA), és ROCK1 siRNS (5'-UGAUGCAAAGAUUGUACUC- 3 '; UGBioneer, Szöul, Korea) a SNU668, YCC2, MKN28, és KATOIII sejtvonalak alkalmazásával végeztük Lipofectamine RNAiMAX és Lipofectamine 2000 reagensek (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. MKN28, SNU668, YCC2, és KATOIII sejtvonalakat összegyűjtöttük transzfekció után két nappal, és a különböző analíziseket.

RNS extrakció és miRNS számszerűsítése

Teljes RNS-t izoláltunk 13 sejtvonalakon és 59 gyomorrákos betegek szöveteiben, illetve a TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), mint egy a gyártó utasításai szerint. A TaqMan univerzális PCR Master Mix reagensek kit (Applied Biosystems, Tokió, Japán) alkalmaztunk. Amplifikációs és detekciós végeztük egy 7900HT Sequence Detection System (Applied Biosystems, Tokió, Japán) 40 ciklus követett denaturálással 95 ° C-on (15 másodpercig) és lágyítás /kiterjesztés 60 ° C (60 másodperc). Ezt előzte reverz transzkripció 50 ° C-on 30 percig, és denaturáció 95 ° C-on 10 percig. Kvantitatív érett miRNS, TaqMan mikroRNS esszék készletek (Applied Biosystems, Tokió, Japán) kimutatására használt miRNS-135a és a kontroll miRNS (RNU6B). Katalógusa

Western blot analízis katalógusa

Protein volt kivont 13 sejtvonalat és 59 EGC betegek szöveti mintákat használva RIPA-pufferben (Biosesang, Szöul, Korea), beleértve egy proteáz inhibitor koktél (Sigma, St. Louis, MO, USA), a gyártó protokollja szerint. Ezután Western-blot alkalmazásával végeztük az anti-ROCK1 és anti-β-aktin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) antitesteket. Jelek detektálására egy ECL elsődleges készlettel (GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA), mint egy a gyártó utasításai alapján.

sejtproliferációs vizsgálatokban

A sejtproliferációt MTT-vizsgálat alkalmazásával. A sejteket 96 lyukú szövettenyésztő lemezeken (3 × 10 ^{3 sejt per lyuk), és transzfektáltuk miRNS-135a utánozza két nap után az inkubálás. Ezt követően 200 ul MTT-t (0,5 mg /ml, Sigma, St. Louis, MO, USA) adunk az egyes lyukakhoz. Négy óra elteltével további inkubálás MTT oldatokat elöntjük, 200 ul DMSO-t (Amresco, Solon, OH, USA) adunk az egyes lyukakhoz, és a lemezt óvatosan ráztuk. Az abszorbanciát mérjük egy ELISA leolvasóval (Moecular Devices, Sunnyvale, CA, USA), ha a vizsgáló 570 nm hullámhosszon.}

cell cycle analysis

A sejteket 60π kultúra lemezek és transzfektált miRNS -135a utánozza, vagy a miRNS utánozza negatív kontroll (utánozza-NC). Ezeket a sejteket tripszinezéssel és a rögzített 70% -os etanolban, legalább két órán át -20 ° C hőmérsékleten. A sejtüledéket hideg foszfáttal pufferolt sóoldattal és 30 percig inkubáljuk szobahőmérsékleten, PI /RNáz Staining Buffer (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). A festés után a mintákat elemeztük egy FACScan áramlási citométer (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) és 10.000 események gyűjtöttünk össze mintánként. Az adatok a áramlási citometriával analizáltuk Cell Quest szoftver (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).

Trans-szűrő migrációs és behatolás vizsgálatokban

A sejteket transzfektáltuk miRNS-135a utánozza , miRNS-135a-inhibitorok, ROCK1 siRNS, és ROCK1 siRNS negatív kontroll (scRNA) egy napra, majd át a felső kamrába a transwell bevont lemez 0,5 mg /ml I. típusú kollagén (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) és 1:15 hígítását Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA). RPMI 1640, 10% FBS-t és 1% antibiotikumot (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA) adunk hozzá, az alsó kamrába, és a lemezt inkubáljuk 20 órán át. Átállítása és betörő sejtek mennyiségét haematoxylin és eozin festéssel. Katalógusa

A luciferáz riporter plazmid konstrukciók katalógusa

A vad típusú 3 'UTR ROCK1 tartalmazó kötőhelyek miRNS-135a amplifikáltuk gDNS származó SNU668 sejteket templátként. A korrelált mutáns konstrukciókat létre mutációjával a mag régióiban a miRNS-135 kötőhelyek. Mind a vad típusú és mutáns 3 'UTR-klónoztuk downstream a luciferáz gén egy pGL3 kontroll vektorral. A konstrukciókat szekvenálással ellenőriztünk.

Luciferáz assay

A luciferáz vizsgálatokat végeztünk SNU668 és YCC2 sejteket. SNU668 és YCC2 sejteket transzfektáltunk az egyes plazmidok (üres vektor [MOCK], ROCK1 3 'UTR vad típusú [WT] és ROCK1 3' UTR-mutáns [MUT], mint egy miRNS-135a kötőhelyet) együtt miRNA- 135a utánozza, miRNS-135a-inhibitorok, és a negatív kontroll RNS 24-lyukú lemezeken. Két nappal a transzfekció után a sejteket összegyűjtöttük, és lizáltuk. A luciferáz vizsgálatokat végeztünk a lizátumokat használva Luciferase Assay kit (Promega, Madison, WI, USA). A luciferáz aktivitást normalizáltuk P-galaktozidázt.

Az immunhisztokémiai

immunhisztokémiai (IHC) festést végeztünk a reprezentatív 20 esetek ROCK1 alacsony és magas expressziós csoportok. Antigén feltárást végeztük hőkezeléssel 30 percig pH = 8,0 Tris-EDTA-pufferben (CC1, Ventana Medical System, Tucson, AZ, USA) 95 ° C-on. Tissue metszeteket 42 ° C-on 30 percig anti-ROCK1 mAb (ab134181, klón EPR638Y, nyúl monoklonális, 1:5,000; ABCAM, Cambridge, MA, USA). Negatív kontrollként használt azonosan immunizált nyúl IgG-vel. Az eredmények értelmezése szerint egy tapasztalt patológus (MC Kook). Katalógusa

A statisztikai elemzés katalógusa

Scale adatokat átlag ± szórás (SD). Chi-négyzet vagy Fisher-tesztet és a Mann-Whitney U-tesztet alkalmaztuk összehasonlítani kategorikus változók és folytonos változók esetében. A Pearson-féle korrelációs együttható használták összehasonlítjuk a génexpressziós mintázat között miRNS-135a és ROCK1. A többváltozós logisztikus regressziós modellt alkalmaztunk, hogy meghatározzák a független kapcsolatos tényezők LN áttétek. Egyéb tényezők, amelyek jelentős a chi-négyzet vagy Fisher-tesztet ( P katalógusa < 0,05) kerültek be a logisztikus regressziós modellben. Az összes adatot elemeztük STATA 12.1 (Stata Corp, College Station, TX, USA). A P katalógusa értéke kisebb, mint 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

miRNS-135a expressziós szintje összefüggésbe hozható progresszió és LN áttét EGC

Egy korábbi tanulmány kimutatta, hogy a miRNS-135a expressziója alulszabályozott a gyomor rákos sejtvonalakban [23]. Segítségével QRT-PCR, azt is megállapította, hogy a miRNS-135a expressziója alulszabályozott különböző gyomor rákos sejtvonalakban képest, hogy egy normál gyomornyálkahártya sejtvonalat (1a ábra).

Azonban a korreláció miRNS-135a expressziója és klinikai eredmények gyomorrákban nem vizsgálták. Ezért mértük a miRNS-135a expressziós szinteket primer gyomorrák és a hozzájuk tartozó szintek a normál szövetekben a 59 beteg EGC. Fel- és lefelé gének szabályozásában a tumor szövetekben tekintetében normális szöveteket arányaként definiáljuk a daganat a normális szöveti gén expressziós szintjét < 1,0 és > 1,0, ill.

Ezzel az eredményhez a in vitro katalógusa kísérletben csupán 20 (33,9%) a 59 betegnél EGC kiállított down-regulációja miRNS-135a kifejezést. Azonban ezek a betegek szignifikánsan előrébb (TNM stage≥IB, 35,0% vs. 12,8%, p = 0,045; nyers furcsa arány [OR] 2,11; 95% -os megbízhatósági tartomány [CI] 1,08-4,10), és a magasabb LN áttét (30,0% vs. 5,1%, p = 0,014; nyers vagy 2,73; 95% CI, 1,50-4,98), mint az up-szabályozás miRNS-135a kifejezés (táblázat S1). Érzékenysége és specificitása miRNS-135a expressziós státus előrejelzésére LN metasztázis volt 75,0% és 72,5% volt. Ezen túlmenően, a betegek több, előrehaladott stádiumú (1B ábra), vagy LN metasztázis (1C), szignifikánsan alacsonyabb arányban tumor normál miRNS-135a expressziós szintje, mint azok, IA stádiumú vagy anélkül LN metasztázis. A többváltozós logisztikus regressziós analízis is kimutatta, hogy a miRNS-135a leszabályozza független kapcsolatban áll a LN metasztázis (korrigált OR: 8,04; 95% CI, 1,08-59,81; p = 0,042; 1. táblázat). Összességében ezek az eredmények arra utalnak, hogy a down-regulációja miRNS-135a expressziója összefüggésben lehet a gyomorrák progresszió beleértve LN áttét. Katalógusa

miRNS-135a elnyomja gyomorrák sejtek életképességére, EMT, a migráció, és invázió katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálják a szövetség között miRNS-135a és klinikai eredmények végeztünk funkcionális próbák sejt életképessége, a sejtciklus, EMT, a migráció, és invázió a gyomor rákos sejtvonalak. Túlexpressziója miRNS-135a által miRNS-135a utánozza jelentősen elnyomja a sejtek életképességét (2A ábra) és növelte a subdiploid frakció SNU668 sejtek egy olyan sejtvonalat, amely ritkán kifejezi miRNS-135a (2b ábra), ami arra utal, a fokozott apoptózist a gyomor rákos sejteket. Azonban elnyomása miRNS-135a által miRNS-135a-inhibitorok által kiváltott sem növelés, a sejtek életképességét, és nem is egy subdiploid frakció csökkenése YCC2 sejtek egy olyan sejtvonalat, amely kifejezi jelentős miRNS-135a (ábra a 2A és 2B). Azt is megvizsgáltuk, milyen kapcsolatban miRNS-135a expressziója és EMT gyomorrák sejtek, mert miRNS-135a leszabályozza független kockázati tényezője LN áttétek EGC beteg (1. táblázat). Fokozott expressziója miRNS-135a társult elnyomása EMT és növekedést mutatott a kifejezés a E-cadherin és a elnyomása mind az N-kadherin és meztelen csiga SNU688 sejtekben. Ezzel szemben, a gátlás miRNS-135a expressziós eredményezett aktiválása EMT, beleértve a elnyomása az E-cadherin expresszió és a fel-regulációja mind az N-kadherin és meztelencsiga expresszió YCC2 sejtekben (2C ábra). Az értékelés során a funkcionális következményeit, túltermelése miRNS-135a által miRNS-135a utánozza szignifikánsan csökkentette a migrációs és behatolás képességeit SNU668 gyomorrák sejtek (2D ábra). Ezzel szemben, blokád miRNS-135a által miRNS-135a-gátlók jelentősen megnövekedett migráció és invázió YCC2 gyomorrák sejtek (ábra 2E). Összességében, az eredmények azt javasolta, hogy a miRNS-135a egy tumor elnyomó szabályozó gyomorrák elterjedése, valamint az áttétek. Katalógusa

ROCK1 egy cél gén miRNS-135a gyomorrákban katalógusa

Hogy világosabb mechanizmusáról hatásainak miRNS-135a a klinikai kimenetelre kerestünk vélt célok segítségével TargetScan 6,2 adatbázisban. 718 konzervált célokat, akkor a kijelölt célok legmagasabb pontszámot, amelynek leszabályozza vezethet fokozott a rákos sejtek szaporodásának, migrációs és behatolás. Azt találtuk, hogy ROCK1 lehet egy célgént miRNS-135a mert gátlása vagy elnyomása ROCK1 leírták, hogy elősegítik az apoptózist, és hogy gátolja a migrációt, invázió, és proliferációját rákos sejtek, beleértve azokat a gyomorrák [28] - [30]. TargetScan analízis kimutatta, hogy a 3'UTR szekvenciája ROCK1 van egy lehetséges kötőhelyét miRNS-135a (3A ábra). Annak igazolására, hogy ROCK1 célpontját miRNS-135a, egy iuciferázvizsgáió végeztünk. A luciferáz 3'UTR konstrukciókat leírt módszerek részben voltak kotranszfektáljuk SNU688 sejtek miRNS-135a utánozza, be YCC2 sejtek miRNS-135a-inhibitorok. Azt is épített ROCK1 3'UTR MUT által pontmutáció C → G a lehető kötőhely (3A). A relatív luciferáz aktivitást a ROCK1 3'UTR WT szignifikánsan emelkedett jelenlétében miRNS-135a-inhibitorok (3B ábra). Megfordítva, ez az aktivitás szignifikánsan csökkent jelenlétében miRNS-135a utánzók (3C, ábra). A gyomor rákos sejtvonalban, a miRNS-135a és ROCK1 mutatott szembenálló expressziós mintázat. Western-blot analízis azt mutatta, hogy ROCK1 expresszió alulszabályozott jelenlétében miRNS-135a-utánzatok, valamint felülszabályozott jelenlétében miRNS-135a-inhibitorok (ábra 3D és a 3E). Összefoglalva, ezek az eredmények azt jelzik, hogy a miRNS-135a gátolja ROCK1 expresszió által közvetlenül megcélzó a 3'UTR.

expressziója ROCK1 fordítottan arányos az adott miRNS-135a betegeknél EGC

Elemzés a 59 betegnél EGC azt mutatták, hogy expressziós szintje ROCK1 jelentősen negatív korreláció érdekében miRNS-135a (r = -0,697, p < 0,001; 4A). Ezen túlmenően a betegek, akiknek up-regulációját miRNS-135a expressziója szignifikánsan alacsonyabb ROCK1 fehérje expresszió, mint azok a down-regulációja miRNS-135a (átlagos tumor a normális arány, 0,81 vs. 1,55, p 0,001; 4B, ábra) .

ROCK1 társul LN áttét EGC és részt vesz a gyomorrák sejtek migrációját és invázióját elnyomható miRNS-135a katalógusa

tovább értékeljük a szövetség között ROCK1 expresszió és a klinikai eredményeket EGC, elemeztük a mintákat ROCK1 kifejezés, utalva a LN metasztázis állapotát olyan betegeket. Betegek LN metasztázis szignifikánsan magasabb volt a kifejezése ROCK1 fehérjét, mint azoknál, akik nem LN metasztázis (átlagos tumor a normális arány, 1,86 vs. 0,93, p = 0,007; 5A ábra). Továbbá szintek ROCK1 IHC festést hasonlóak voltak a ROCK1 expresszió Western-blot-analízis ( azaz katalógusa, a betegek anélkül, LN metasztázis volt gyenge IHC festődési minták [5B ábra], de azok a LN metasztázis volt erős pozitív IHC festést [5C]). katalógusa

Végül annak vizsgálatára, hogy az elnyomott migrációs és behatolás képességek által biztosított miRNS-135a up-reguláció megfigyelhető gyomorrák sejtvonalakon eredménye volt ROCK1 up-reguláció végeztünk migráció és inváziós vizsgálati eljárást használva gyomor rákos sejtvonalak transzfektált specifikus ROCK1 siRNS. ROCK1 siRNS elnyomott migrációs és invazív tevékenységek SNU668 sejtek (5D ábra). A YCC2 sejteket kotranszfektáltuk miRNS-135a-gátlók és ROCK1 siRNS (5E ábra), migrációs és behatolás vizsgálatok azt mutatták, hogy gátlása ROCK1 siRNS szignifikánsan csökkentette a hatásfokozó vándorló és invazív hatásait miRNS-135a leszabályozása által miRNS-135a-inhibitorok (ábra 5F).

Együttesen ezek az eredmények azt sugallják, hogy ROCK1 társított LN metastasis EGC betegek, és hogy ez a megnövekedett ROCK1 expresszió összefüggésben miRNS-135a down-regulációja. Ezért ROCK1 lehet vonni miRNS-135a-elnyomott gyomorrák áttét. Katalógusa

Vita katalógusa

A jelen tanulmányban azt találták, hogy a miRNS-135a volt tumor elnyomó szerepet gyomorrák. Azoknál a betegeknél, EGC, down-regulációja miRNS-135a független kockázati tényezője LN áttét. A gyomor rákos sejteket, akár szabályozott miRNS-135a elnyomott gyomor carcinogenesis elnyomásával sejtburjánzást, EMT, valamint az áttétek. Továbbá, azt is azonosítottak egy új célgént miRNS-135a, ROCK1, ami együtt járt LN metasztázis gyomorrákban.

betegeknél EGC, értékelése LN metasztázis a kezelés előtt egy fontos lépés a meghatározás a kezelési stratégiák. Kevésbé invazív kezelések, mint a endoszkópos reszekció [5] - [7] vagy sentinel LN navigációs sebészet [9], [10] lehetővé válhat EGC nélküli betegek LN áttétek. Ezek kezelési módszerek javult a betegek életminősége tekintetében a késői szövődmények társított standard sebészi kezelések, beleértve dömping-szindróma, a fogyás és reflux-szal kapcsolatos tünetek [31]. Ezért több specifikus és érzékeny biomarkerek van szükség megjósolni állapotát LN metasztázis betegeknél EGC. A jelen vizsgálatban, miRNS-135a down-regulációja volt független faktor LN metasztázis, és predikciós értéke miRNS-135a expressziós státus viszonylag magas volt az érzékenysége 75%, specificitása 73%. Azonban további érvényesítési vizsgálatok szükségesek, ezek az eredmények azt mutatták, hogy a mérés a miRNS-135a szintek meghatározása előtt kezelési tervet EGC beteg lehet hasznos teszt előrejelzésére LN állapotát. Katalógusa

Érdekes, miRNS-135a számoltak hogy tumor elnyomó és onkogén. Túlexpressziója miRNS-135a összefüggésbe hozták a elnyomása tumor proliferációját és növekedését vesesejtes karcinóma [21], és fokozott apoptózist és jobb betegségmentes túlélés limfóma [22]. Ezzel szemben a miRNS-135a részt kolorektális rák progressziója [32], valamint a megnövekedett mell sejt migrációs és behatolás [33]. A jelen vizsgálatban, miRNS-135a Kimutatták, hogy a tumor elnyomó miRNS, ami összhangban van azzal az eredménye egy korábbi tanulmány [23]. Speciálisan, a magasabb kifejezése miRNS-135a elfojtott több lépésben a gyomor carcinogenesis, beleértve a szaporodást, a migrációt és inváziót. Továbbá azt is megállapította, hogy a miRNS-135a lehet elnyomni EMT, amely arról számolt be, hogy vonják be a kezdeményezését a többlépéses karcinogenezis és előmozdítása metasztázis [34], [35]. Megelőzően a jelen tanulmány, a szövetség között miRNS-135a és EMT nem vizsgálták, de a korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a miRNS-ek, mint a miRNS-27 [19], a miRNS-200 család [20], miRNS-7 [36] és miRNS-1228 [37] elnyomja EMT a saját célgének gyomorrák. Mindent összevetve, a miRNS-135a egy tumor elnyomó miRNS gyomorrákban. Katalógusa

Egy korábbi tanulmány elemzésével 353 humán gyomorrák szövetek azt mutatta, hogy a miRNS-ek expressziós mintázata igen sokfélék, és hogy egyes miRNS jártak progresszió és a prognózis a gyomor rák [14]. A tanulmányban miRNS-135a-t minősíteni onkogén miRNS gyomorrákban eredményei alapján a DNS microarray analízis. Azonban a közelmúltban [23] és a tanulmányi, miRNS-135a járt tumorszuppresszorként ellenére magas aránya betegek miRNS-135a up-szabályozás. Bár sok beteg (66%) volt up-regulációja miRNS-135a hasonló az eredménye egy korábbi tanulmány [14], ezek a betegek szignifikánsan kevésbé előrehaladott szakaszában, és kisebb arányú LN áttét. Ezenkívül további in vitro katalógusa vizsgálatok azt is kimutatták, hogy a magasabb kifejezése miRNS-135a társult elnyomását gyomorsav kialakulásában. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a miRNS-ek expressziós mintázata eltérhet a klinikai kimenetelt, és ezért meg kell erősítenie a pontos szerepét specifikus miRNS, további vizsgálatokra van szükség. Katalógusa

ROCK1 tagja a Rho-asszociált szerin /treonin kináz család, amely úgy működik, mint egy központi szabályozója aktin citoszkeleton szervezet és dinamikája [23], [38]. ROCK1 van sokféle funkciót a tumorok, beleértve a migráció, invázió, és metasztázis [28]. ROCK1 célpontját több miRNS különböző rákos beleértve miRNS-584 vesesejtes karcinóma [39], miRNS-335 neuroblasztóma [40], és a miRNS-146a prosztatarák [41]. A gyomorrák, ROCK1 már pozitívan korrelál a LN metasztázis és TNM [42], és részt vesz a miRNS-148a-indukált elnyomását gyomorrák sejtek migrációját és invázióját [30]. Továbbá, ROCK1 inhibitor mozdítani apoptózist gyomorrák-sejtek [29]. A jelen tanulmányban azt találták, hogy ROCK1 célpontját miRNS-135a a gyomorrák és expresszióját pozitívan függ össze a LN metasztázisok EGC betegeknél. Az in vitro kísérletekben katalógusa is kimutatta, hogy ROCK1 részt vesz a gyomorrák sejtek mozgékonyságát és inváziót. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy ROCK1 lehet egy új terápiás célpont a képességét, hogy gátolja a gyomor rák metasztázist.

Összefoglalva, az általunk azonosított miRNS-135a, mint egy új prognosztikai biomarker LN metasztázis betegeknél EGC és kimutatták, hogy a miRNS-135a elnyomott gyomor karcinogenezis ( pl katalógusa, proliferáció, EMT, valamint az áttétek gyomorrákban sejtvonalak) célzási ROCK1. Bár ezek az eredmények szükségessé érvényesítés más független betegcsoportokban, azt sugallják, hogy a miRNS-135a és a megcélzott gén ROCK1 lehet egy új biomarker és terápiás célpont gyomorrák LN áttét. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa táblázat S1 .
klinikai és jellemzői betegek korai gyomorrák szerint miRNS-135a expressziós státust. katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0085205.s001 katalógusa (DOC) hotelben

• PLoS One: egyrészről polimorfizmusok gyakorisága XRCC1 Gene és a kezelés kimenetelét a betegek előrehaladott gyomorrák: módszeres áttekintése és meta-analízis
• PLoS One: célzás Cadherint-17 inaktiválja Ras /Raf /MEK /ERK-jelzés és gátolja a sejtek proliferációs gyomorrákban