PLoS ONE: Expressie van de EGF Family bij maagkanker: negatieve regulatie van HER4 en haar activeren Ligand NRG4

Abstract

Maagkanker is een belangrijke oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen in zowel mannen als vrouwen. De epidermale groeifactor receptoren EGFR, HER2, HER3 en HER4. Van de vier epidermale groeifactorreceptoren, EGFR en HER2 zijn bekende oncogenen betrokken bij maagkanker. Weinig is echter bekend over de rol van HER3 en HER4 bij deze ziekte. We verkregen gepaarde monsters uit de tumor en het aangrenzende normale weefsel van dezelfde patiënt ondergaat operatie van maagkanker. Middels RT-qPCR, we gekwantificeerd de mRNA expressie van de vier receptoren zoals de HER4 isovormen splicing en alle liganden activeren van deze receptoren. Met behulp van immunohistochemie werd het eiwit expressie van HER4 ook gekwantificeerd. We vonden dat HER2 mRNA expressie in tumorweefsel werd opgereguleerd in vergelijking met de overeenkomende normaal weefsel (p = 0,0520). Alle liganden met affiniteit voor EGFR werden opgereguleerd, terwijl de expressie van EGFR onveranderd was. Interessant, vonden we de mRNA expressie van HER4 (p = 0,0002) en zijn ligand NRG4 (p = 0,0009) worden downgereguleerd in het tumorweefsel in vergelijking met de afgedekte normaal weefsel. HER4 downregulatie werd aangetoond voor alle alternatief gesplitste isovormen van deze receptor. Deze resultaten ondersteunen de betrokkenheid van de EGFR en HER2 bij maagkanker en suggereren een interessante vereniging van verminderde HER4 expressie met de ontwikkeling van maagkanker

Visum:. Nielsen, Friis-Hansen L, Poulsen SS, Federspiel B, Sorensen BS (2014) Expressie van de EGF Family bij maagkanker: negatieve regulatie van HER4 en haar activeren Ligand NRG4. PLoS ONE 9 (4): e94606. doi: 10.1371 /journal.pone.0094606

Editor: Rupesh Chaturvedi, Vanderbilt University School of Medicine, de Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 8 juli 2013; Aanvaard: 19 maart 2014; Gepubliceerd: 11 april 2014

Copyright: © 2014 Nielsen et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Danish Cancer Society # R2-A247-09-S2, Deense MRC #FSS 09072153. de financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan.

Introductie

Maagkanker is de derde belangrijke oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen bij mannen en de vijfde belangrijkste oorzaak bij vrouwen. Maagkanker goed voor ongeveer 990.000 nieuw geregistreerde gevallen en 738.000 doden wereldwijd in 2008 [1]. Infectie met Helicobacter pylori
, voeding, roken en alcoholgebruik zijn belangrijke factoren beïnvloeden het risico op het krijgen van maagkanker [2], [3].

De epidermale groeifactor (EGF) familie is een complex netwerk van tyrosine kinase receptoren en liganden interactie verschillende signaling cascades induceren. De familie omvat de vier receptoren EGFR (HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (ErbB3) en HER4 (ErbB4) [4]. Door alternatieve splicing, is HER4 uitgedrukt in een aantal isovormen. In het gebied van juxtamembraneous HER4, opneming van zowel exon 15b of exon 16 leidt tot het JMA of JMB isovormen respectievelijk [5] - [7]. De JMA isovorm en niet de JMB isovorm kan worden verwerkt tot een oplosbaar HER4 intracellulaire domein (ICD) dat lokaliseert in het cytoplasma, kern los en mitochondria [8], [9]. Alternatieve splicing in het cytoplasmatische gebied van HER4 ontstaat het CYT1 en CYT2 isovormen. Het overslaan van exon 26 leidt tot een receptor (CYT2) ontbreken 16 van de aminozuren van de volledige lengte receptor (CYT1) [10].

De liganden van de EGF-familie zijn epidermale groeifactor (EGF), transformerende groeifactor-α (TGF-α) en amfireguline (AR) die specifiek voor EGFR zijn; heparine-bindende EGF-achtige groeifactor (HB-EGF), betacelluline (BTC), en epireguline (EPR) die zowel EGFR en HER4 te binden; neureguline 1 (NRG1) en NRG2 dat zowel HER3 en HER4 binden; en tenslotte NRG3 en NRG4 die specifiek zijn voor HER4 [11]. Bij binding een activerende ligand, de receptoren maken homo- en hetero-dimeren. De samenstelling van dimerisatie partners en activerende liganden bepaalt het signaal worden getransduceerd in de cel [12], [13]. De familie EGFR speelt verschillende rollen in de groei en het onderhoud van talrijke weefsels, ondermeer door het regelen van celdeling, apoptose, differentiatie en migratie. Deregulering van signalering van dit systeem is verbonden met de ontwikkeling en groei van kanker [14] - [17]

EGFR en HER2 zijn bekende oncogenen bij maagkanker [18], [19].. De remmende HER2 antilichaam trastuzumab succes verbetert prognose na toevoeging chemotherapie bij patiënten met HER2-positieve gevorderde maagkanker [20]. Een aantal klinische studies zijn ook uitgevoerd om de bruikbaarheid van EGFR remmers getest bij maagkanker [21], [22]. HER3 en HER4 kan mogelijk ook van belang bij de etiologie van maagkanker is; echter informatie over hun rol bij deze ziekte is schaars. Sterker nog, er is weinig bekend over de expressie patroon van de complete EGF-systeem. Vanwege het interactieve karakter van de EGF-receptoren en liganden, verduidelijking van de mechanismen van de regulatie van de EGF familieleden eisen rekening houdend met alle receptoren en hun liganden samen.

Om de expressie patroon van de EGF-receptoren en liganden onderzoeken bij maagkanker, verkregen we weefsel van de tumor en aangrenzend normaal weefsel van dezelfde patiënt ondergaat operatie van maagkanker. We gebruikten gepaarde weefselmonsters te verzekeren tegen de inter-individuele variatie die in de basislijn expressie van de EGF-systeem bestaat. Met behulp van RT-qPCR, we gekwantificeerd de mRNA expressie van de vier EFG-receptoren waaronder de HER4 splicing isovormen en de liganden activeren van deze receptoren.

Materialen en methoden

Patient selectie en het verzamelen van biopten

In dit cohort studie, 38 patiënten die een chirurgische ingreep voor adenocarcinoom van de maag, slokdarm of gastro-oesofageale overgang werden achtereenvolgens opgenomen van juli 2008 tot november 2009. Alle personen ontvangen een geïnformeerde schriftelijke toestemming. Het verzamelen van biopten werd goedgekeurd door de regionale wetenschappelijke ethische commissies van Zeeland, Denemarken (dagboeknummer H-B-2008-049), en de oprichting van een biobank werd goedgekeurd door het Deense bureau voor gegevensbescherming (dagboeknummer 2008-41-2138). Biopsieën genomen van zowel tumorweefsel en aangrenzend normaal weefsel. Alle biopsie monsters werden beoordeeld door een ervaren patholoog om de diagnose te bevestigen. Voorgedefinieerde klinische gegevens werden geëxtraheerd uit de medische grafieken en pathologie rapporten. De klinische kenmerken van de patiënten worden gegeven in tabel 1.

RNA-extractie

Biopsieën werden RNA geplaatst later
(Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) onmiddellijk na verwijdering. RNA
later werd verwijderd voorafgaand aan RNA-isolatie en Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) werd toegevoegd. De weefselmonsters werden gehomogeniseerd op een Tissuelyser (Qiagen, Chatsworth, CA, USA). RNA uit weefsel werd geïsoleerd volgens het protocol van de fabrikant voor RNA-isolatie Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). RNA concentraties werden gemeten op een NanoDrop ND-1000 spectrofotometer. RNA kwaliteit werd getest op een 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) volgens het protocol van de fabrikant.

Reverse transcriptie kwantitatieve polymerasekettingreactie (RT-PCR-q)

cDNA werd gesynthetiseerd van 1 ug totaal RNA met behulp van High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Het uiteindelijke reactiemengsel werd verdund tot een totaal volume van 200 uL

1 pi cDNA werd gebruikt voor qPCR gebruikt SYBR groen master mix (Roche, Basel, Zwitserland) op een LightCycler Roche 480 op. 95 ° C, 10 minuten; 50 cycli van 95 ° C gedurende 10 sec, specifieke annealing temperatuur gedurende 10 sec, 72 ° C gedurende 5 seconden; 99 ° C gedurende 1 sec; 59 ° C gedurende 15 seconden; 95 ° C gedurende 1 sec; afkoelen tot 40 ° C. Primersequenties en annealing temperaturen zijn gegeven in tabel 2.

Het gen het meest geschikt voor normalisatie werd bepaald door het algoritme Normfinder [23] om de gekwantificeerde concentraties van GAPDH, β-actine, YWHAZ, SDHA en HMBS . SDHA bleek de beste van de vijf zijn. Twee monsters werden uitgesloten van de analyse vanwege geen detectie van mRNA van elk van de referentie-genen.

Immunokleuring

paraffine-ingebedde weefsels in 4% gebufferde paraformaldehyde van 13 representatieve patiënten werden onderzocht door immunohistochemie met behulp van c-erbB-4 /HER-4, konijn polyklonaal antilichaam verdund 1/50 als primair antilichaam (RB-9045-P1, Thermo Scientific, Wilmington, dE, USA). Voor antigen retrieval secties werden gekookt in microgolfoven in 10 mM citraatbuffer, pH 6,0. De immuunreactie werd zichtbaar gemaakt met gebiotinyleerd geiten anti-konijn antilichaam verdund 1/200 (BA-1000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), gevolgd door een voorgevormde avidine en gebiotinyleerd mierikswortelperoxidase macromoleculaire complex (ABC) verdund 1/100 (Code nr. PK-4000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). De reactie werd ontwikkeld door het gebruik van 3,3 -diaminobenzidine en tegenkleuring werd uitgevoerd met Mayer's Hemalum. Als negatieve controle werd dezelfde procedure uitgevoerd zonder enige primaire antilichaam.

Gebruik van Image Pro Plus (MediaCybernetics) de kleurintensiteit van representatieve beelden van de tumor ten opzichte van de omringende mucosa weefsel werd geschat. Twee beelden van tumormonster en twee beelden van de omringende mucosa werden van elk weefselmonster verzameld en het gemiddelde van beide waarden berekend en gebruikt voor statistische analyse en plotten. Voor een paar voorbeelden, alleen tumorweefsel of slechts normale slijmvlies was aanwezig en geen vergelijking van HER4 expressie mogelijk was voor deze weefsels. Gepaarde t-test werd gebruikt om te bepalen of de intensiteit van de tumorweefsels verschilt van de intensiteit van het slijmvlies weefsel was.

Resultaten

mRNA expressie van de EGF-receptoren bij maagkanker

RNA geëxtraheerd uit 38 tumoren en gematched monsters van aangrenzend normaal weefsel van patiënten die een operatie ondergaan voor maagkanker werd gebruikt voor RT-qPCR kwantificeringen. De mRNA-expressie van de EGF familie vier receptoren EGFR, HER2, HER3 en HER4 is in Figuur 1. Interessant is dat de HER4 receptor onderworpen aan downregulatie in het tumorweefsel in vergelijking met het normale weefsel (p = 0,0004). HER2, zagen wij een verhoogde expressie van deze receptor in het kankerweefsel die vlakbij zijn significant (p = 0,0520) was. EGFR en HER3 mRNA expressie was vn-veranderd in de tumoren ten opzichte van het normale weefsel.

HER4 bestaat als verschillende alternatief gesplitste isovormen. De juxtamembranous regio kan bestaan ​​uit JMA of JMB, en het cytoplasmatische regio kan bestaan ​​uit CYT1 of CYT2. De downregulatie waargenomen voor totale HER4 mRNA expressie in kankerweefsel toegepast op alle vier varianten van de receptor (Figuur 2).

De omvang van HER4 downregulatie beter te illustreren in het tumorweefsel, we uitgezet de HER4 of down- opregulatie voor elke individuele patiënt. De HER4 mRNA expressie in het tumorweefsel minus de HER4 mRNA expressie in de overeenkomende normaal weefsel (ΔHER4) is in Figuur 3. Een waarde onder 0 betekent een downregulatie. Deze figuur illustreert duidelijk dat HER4 downregulatie is een zeer algemene mechanisme dat plaatsvindt in het merendeel van de patiënten en ongeacht tumor lokalisatie.

mRNA expressie van de EGF-familie liganden bij maagkanker

TGF -α, amfireguline, EGF en specifiek binden EGFR. Een te verwaarlozen mRNA expressie werd waargenomen in zowel EGF tumor en normaal weefsel, en daarom is deze ligand werd niet beschouwd voor verdere analyse. TGF-α en amfireguline werden beide opgereguleerd in het tumorweefsel in vergelijking met het normale weefsel (Figuren 4a en b). HB-EGF, betacelluline en epireguline affiniteit voor zowel EGFR en HER4, en al deze liganden werden opgereguleerd in het kankerweefsel (figuren 4 c, d en e). Bij elkaar genomen, dit toont aan dat alle EGFR-activerende liganden worden opgereguleerd in de tumoren.

Van de neuregulinen, NRG1 en NRG2 binden zowel HER3 en HER4. Wij namen geen verandering in expressie van zowel de α of β varianten van NRG1 en NRG2 (figuur 4f, g, h en i). NRG3 en NRG4 binden HER4. NRG3 geen enkele verandering in de expressie van normaal tot kankerweefsel (Figuur 4j) ondergaan. Echter, NRG4 was downgereguleerd in het tumorweefsel in vergelijking met het normale weefsel (p = 0,0009) (Figuur 4k). Dit toont aan dat zowel HER4 en de specifieke ligand NRG4 worden down-gereguleerd bij maagkanker.

Om beter te illustreren de omvang van NRG4 downregulatie in het tumorweefsel, we uitgezet de NRG4 down- of regulatie voor elke individuele patiënt. De NRG4 mRNA expressie in het tumorweefsel minus de NRG4 mRNA expressie in de overeenkomende normaal weefsel (ΔNRG4) is in Figuur 5.

Gezien alle patiënten die downregulatie van totale HER4 in hun tumorweefsel in 82% deze NRG4 ook downregulatie en 86% één of meer van de EGFR liganden gedeeld (HB-EGF, epireguline, betacelluline) werd opgereguleerd. In 36% van de patiënten met totale HER4 downregulatie, alle drie de gedeelde EGFR liganden opgereguleerd.

Eiwit expressie van Her van immunohistochemie

Door post- transcriptionele regeling, het mRNA expressiepatronen bepaald door RT-qPCR kan het eiwitexpressie patroon niet vertegenwoordigen. Opdat de waargenomen daling van HER4 mRNA expressie in het kankerachtige weefsel van patiënten met maagkanker ondersteund wordt op het eiwitniveau, voerden wij immunohistochemische kleuring op met formaline gefixeerd paraffine-ingebed weefsel van alle patiënten in de studie opgenomen.

op een kwantificering van de HER4 kleurintensiteit in representatieve gebieden van de tumor en het omringende weefsel, vonden we het tumorweefsel significant minder HER4 kleurintensiteit hebben dan de omringende normale mucosa (p = 0,0029) (Figuur 6) .

Representatieve microfoto's van de kleuringen worden getoond in Figuur 7. in de normale maagslijmvlies er een sterke immuunreactie HER4 (figuur 7 a). Vooral het basale gedeelte van het cytoplasma en de laterale celmembraan van het oppervlak epitheelcellen waren sterk immuunreactief voor HER4 (figuur 5 b). Ook de pariëtale cellen vertoonden sterke immunoreactiviteit HER4 (Figuur 7 c en d). De submucosa en spierlagen waren negatief. In de glandulaire structuren toonde vooral de pariëtale cellen sterke immunoreactiviteit HER4 (figuren 7 c en d). Negatieve controles zonder primair antilichaam veroorzaakte geen kleuring.

De maagkanker enige kleine gebieden met tumorcellen een positieve immuunreactie te HER4, en de negatieve tumorweefsel sterk contrast met de gekleurde normale mucosa naast de tumor (Figuur 7). In de centrale delen van het tumorweefsel bijna alle cellen geheel negatieve onverminderd kleine clusters van cellen die een afzonderlijk membraan kleuring zou kunnen hebben.

Discussie

De EGF-familie bestaat uit een inwerkende netwerk van receptoren en liganden die als een geheel moet worden beschouwd als de regulering van de signalering in het gezin EGF begrijpen. We bepaalden de regulering patroon van de EGF-familie in tumorweefsel van patiënten met maagkanker en de afgedekte aangrenzend normaal weefsel van dezelfde patiënt.

We vonden de signalering potentieel van EGFR wordt opgereguleerd in het tumorweefsel tot opregulatie van de EGFR-activerende liganden, en we vonden ook opregulatie van HER2 in tumorweefsel die vlakbij zijn significant (p = 0,0520) was. Dit is in goede overeenstemming met de bestaande gegevens die aantonen dat zowel EGFR en HER2 is geassocieerd met een slechte prognose bij maagkanker [19]. Het belang van HER2 bij maagkanker wordt aangetoond door het feit dat de HER2 remmende antilichaam Herceptin is de enige goedgekeurde middel voor gerichte behandeling van maagkanker [24].

Voor HER3, hebben we geen expressional verordening inzake observeren het mRNA-niveau. Echter, enkele studies over HER3 bij maagkanker een rol voor HER3 bij maagkanker toegeschreven. HER3 is geassocieerd met slechte overleving en positieve HER3 eiwitexpressie werd gedetecteerd door immunohistochemie in 18,6% van maagkanker monsters in vergelijking met slechts 2,0% van nontumorous monsters [25] - [27]. We vonden het niet een hogere HER3 expressie bij maagkanker in vergelijking met normaal weefsel in onze studie. Echter, kan een verschil in de in het onderzoek gebruikte (immunohistochemie vs RT-qPCR) werkwijzen vertegenwoordigen een aantal van de uiteenlopende resultaten. Daarnaast konden wij de regulering patroon in elke patiënt beschrijven waarin in een pool van kankerpatiënten en een pool van controlepersonen, en dit kan ook verantwoordelijk zijn voor verschillen in de resultaten van de twee studies resultaten.

We vonden een duidelijke neerwaartse regulatie van zowel HER4 en de activerende ligand NRG4 in tumorweefsel. Onze resultaten worden versterkt door het feit dat we vonden ook een downregulatie toen we additionele assays gebruikt om de specifieke isovormen van HER4 kwantificeren. Middels immunohistochemie bevestigden we dat normaal maagweefsel positief voor HER4, terwijl kankerweefsel zeer lage of geen HER4 kleuring.

De verminderde expressie van HER4 mRNA expressie in het tumorweefsel kan worden toegeschreven aan een vermindering van de aantal cellen die HER4 of een afname van HER4-expressie in alle cellen tot expressie HER4. Aanbevolen immunohistochemische kleuringen, zien we dat de maagkanker enige kleine clusters met tumorcellen een positieve immuunreactie te HER4, terwijl de overgrote meerderheid van tumorcellen waren volledig negatief. Dit geeft aan dat het aantal cellen dat HER4 die afneemt in de tumoren tot expressie. In tegenstelling tot het tumorweefsel, het normale weefsel had zeer sterke immuunreacties te HER4. Interessant is vooral slijm producerende cellen en zoutzuur producerende pariëtale cel die HER4 eiwit tot expressie.

De rol van HER4 in kankerachtige ziekte controversieel. In blaaskanker, RT-qPCR kwantificering van HER4 en zijn liganden tonen dat HER4 wordt geassocieerd met een betere overleving. In het bijzonder wordt de co-expressie van HER4 samen met de specifieke ligand, NRG4, sterk gecorreleerd met betere overleving [28]. Evenzo HER4 wordt geassocieerd met een betere algehele en ziektevrije overleving bij baarmoederhalskanker [29]. Larynx plaveiselcelcarcinoom is HER4 verloren laat stadium tumoren [30] en HER4 komt voornamelijk in low-fase en niet-metastatische xenograft tumoren bij alvleesklierkanker [31].

Anderzijds, HER4 eiwitexpressie zoals bepaald door immunohistochemie is geassocieerd met distale metastase en een verminderde overlevingskans in orale plaveiselcelcarcinomen [32]. In een studie van darmkanker, waarbij de eiwitexpressie patroon ook bepaald door immunohistochemie, beginnende patiënten hadden een lager percentage HER4 overexpressie dan laat stadium patiënten [33]. In kwaadaardige tumoren van het centrale zenuwstelsel, HER4 bezit ook een tumor-bevorderende rol [34], [35].

Er is niet veel bekend over de rol van HER4 bij maagkanker. HER4 geen mRNA-expressie werd gedetecteerd in twee maagkanker cellijnen [36]. HER4 eiwitexpressie zoals gedetecteerd door immunohistochemie werd gevonden te correleren met een vroeg stadium, lagere rang, en afwezigheid van lymfkliermetastasen bij maagkanker [25]. Dit is in goede overeenstemming met een andere studie die genexpressieprofielen onderzocht bij langdurige overlevers uit uitgezaaide maagkanker behandeld met chemotherapie waarin de auteurs wezen op een mogelijke rol van HER4 opregulatie bij deze patiënten [37]. Samen met onze huidige resultaten, deze gegevens geven verder aan dat HER4 signalering heeft een beschermende functie tegen carcinogenese in de maagstreek. Een studie wees uit de HER4 gen vaak te worden versterkt bij maagkanker [38]. De resultaten van onze studies geven aan dat dit niet vertalen naar de HER4 expressieniveau omdat we een downregulatie van HER4 mRNA en eiwitexpressie in plaats van een opregulatie gevonden.

Hoewel we niet de expressie van EGFR vond te regelen, is de signalering via deze receptor potentiaal verhoogd met de opregulatie van alle liganden. Dit omvat de liganden gedeeld met HER4: HB-EGF, betacelluiine en epireguline. Naast autocriene EGFR activering, opregulatie van deze liganden mogelijk leidt tot verhoogde activiteit van HER4. Activatie van de EGFR pathway inderdaad een manier voor de cellen steeds carcinogeen worden. Echter, gezien HER4 anti-carcinogene functies, zou een gelijktijdige activering van deze receptor de proliferatieve voordeel van EGFR activering stoppen. Men zou kunnen speculeren dat dit potentieel activering van HER4 wordt vermeden door de gelijktijdige neerwaartse regulatie van de receptor en de specifieke ligand NRG4.

Bij patiënten met blaaskanker, kan de gecombineerde HER4 /NRG4 signaleringseenheid groeiremmende, en de co-expressie van HER4 met NRG4 sterk gecorreleerd beter overleven als de twee eiwitten samen te werken in plaats van individueel [28].

Wij hebben eveneens een analyse op de expressie HER4 patiënt overleving te vergelijken. We hebben een trend richting hoge HER4 expressie wordt gecorreleerd met een betere overleving (resultaten niet getoond), echter, door een beperking in het aantal patiënten in de studie, was dit resultaat niet significant bevonden en verdere studies zal duidelijker te als een correlatie tussen HER4 expressie en overleving vindt bij maagkanker. Een correlatie van het expressieniveau van de EGF receptoren aanwezigheid van lymfkliermetastasen en de tumor invasiviteit toonde slechts HER2 invers correleren van deze parameters terwijl geen correlatie gevonden voor de overige EGF familie (resultaten niet getoond).

tot slot, onze resultaten suggereren een nieuwe rol voor HER4 bij maagkanker. Interessant, vonden we zowel HER4 en zijn specifieke ligand NRG4 worden neerwaarts gereguleerd in kankerweefsel. Dit gaat gepaard met een verhoogde signalering potentiaal van EGFR tot opregulatie van alle liganden en opgereguleerd HER2.

• PLoS ONE: MicroRNA-338 remt groei, invasie en uitzaaiing van maagkanker door zich te richten Nrp1 Expression
• PLoS ONE: Co-Levering van doxorubicine en SATB1 shRNA door warmtegevoelige Magnetische kationische liposomen voor maagkanker Therapy