PLOS ONE: Expresión de la familia de EGF en el cáncer gástrico: regulación a la baja de HER4 y su cáncer gástrico Activación ligando NRG4

Extracto

es una causa importante de muertes relacionadas con cáncer en los hombres y las mujeres. Los receptores del factor de crecimiento epidérmico son EGFR, HER2, HER3 y HER4. De los cuatro receptores del factor de crecimiento epidérmico, EGFR y HER2 son oncogenes conocidos implicados en el cáncer gástrico. Sin embargo, poco se sabe sobre el papel desempeñado por HER3 y HER4 en esta enfermedad. Se obtuvieron muestras pareadas del tumor y el tejido normal adyacente del mismo paciente sometido a cirugía para el cáncer gástrico. El uso de RT-qPCR, se cuantificó la expresión de mRNA de los cuatro receptores, incluyendo las isoformas de empalme HER4 y todos los ligandos activadores estos receptores. El uso de inmunohistoquímica, la expresión de la proteína de HER4 también se cuantificó. Hemos encontrado que la expresión de HER2 mRNA se upregulated en el tejido tumoral en comparación con el tejido normal correspondiente (p = 0,0520). Todos los ligandos con afinidad por EGFR se upregulated, mientras que la expresión de EGFR se mantuvo sin cambios. Curiosamente, encontramos la expresión de ARNm de HER4 (p = 0,0002) y su ligando NRG4 (p = 0,0009) para ser regulados a la baja en el tejido tumoral en comparación con el tejido normal correspondiente. HER4 regulación a la baja se demostró para todas las isoformas de corte y empalme alternativo de este receptor. Estos resultados apoyan la participación de EGFR y HER2 en cáncer gástrico y sugieren una asociación interesante de la expresión de HER4 reducida con el desarrollo de cáncer gástrico

Visto:. A Nielsen, Friis-Hansen L, Poulsen SS, Federspiel B, Sorensen BS (2014) Expresión de la familia de EGF en el cáncer gástrico: regulación a la baja de HER4 y activación de su ligando NRG4. PLoS ONE 9 (4): e94606. doi: 10.1371 /journal.pone.0094606

Editor: Rupesh Chaturvedi, Escuela de Medicina de la Universidad de Vanderbilt, Estados Unidos de América

Recibido: 8 de Julio, 2013; Aceptado: March 19, 2014; Publicado: 11 Abril 2014

Derechos de Autor © 2014 Nielsen et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Danesa del Cáncer sociedad # R2-A247-09-S2, danés MRC #FSS 09072153. los donantes no participó en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:. la autores han declarado que no existen intereses en competencia.

Introducción

el cáncer gástrico es la tercera causa principal de muerte por cáncer en hombres y la quinta causa en las mujeres. El cáncer gástrico representó aproximadamente 990.000 nuevos casos registrados y 738.000 muertes en todo el mundo en el año 2008 [1]. La infección por Helicobacter pylori
, la dieta, el tabaquismo y el consumo de alcohol son factores determinantes que influyen en el riesgo de contraer cáncer gástrico [2], [3].

El factor de crecimiento epidérmico (EGF) es la familia una compleja red de receptores de tirosina quinasa y ligandos que interactúan para inducir diferentes cascadas de señalización. La familia incluye los cuatro receptores EGFR (HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (ErbB3), y HER4 (ErbB4) [4]. Por splicing alternativo, HER4 se expresa en un número de isoformas. En el área de juxtamembraneous HER4, la inclusión de cualquiera de exón 15b o el exón 16 resultados en las isoformas JMA o JMB, respectivamente [5] - [7]. La isoforma JMA y no a la isoforma JMB pueden procesarse para liberar un dominio soluble HER4 intracelular (ICD) que se localiza en el citoplasma, núcleo, mitocondrias y [8], [9]. El empalme alternativo en la región citoplásmica de HER4 da lugar a las isoformas CYT1 y CYT2. Omisión del exón 26 resultados en un receptor (CYT2) que carece de 16 de los aminoácidos del receptor de longitud completa (CYT1) [10].

Los ligandos de la familia del EGF son factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento transformante-α (TGF-α) y anfirregulina (AR) que son específicos para EGFR; heparina vinculante del factor de crecimiento similar a EGF (HB-EGF), betacelulina (BTC), y epirregulina (EPR) que se unen a los receptores EGFR y HER4; neoregulina 1 (NRG1) y NRG2 que se unen tanto HER3 y HER4; y finalmente NRG3 y NRG4 que son específicos para HER4 [11]. Cuando la unión de un ligando de activación, los receptores hacen homo y hetero-dímeros. La composición de los socios de dimerización y ligandos activadores determina la señal a ser transducido dentro de la célula [12], [13]. La familia EGFR desempeña diversos papeles en el crecimiento y mantenimiento de numerosos tejidos, entre otros mediante el control de la división celular, la apoptosis, la diferenciación, y la migración. La desregulación de la señalización de este sistema está conectado con el desarrollo y el crecimiento del cáncer [14] - [17]

EGFR y HER2 son oncogenes conocidos en el cáncer gástrico [18], [19].. La inhibición de anticuerpo trastuzumab HER2 mejora el pronóstico con éxito cuando se añade al régimen de quimioterapia en pacientes con cáncer gástrico avanzado HER2-positivo [20]. Un número de ensayos clínicos también han llevado a cabo para poner a prueba la capacidad de uso de los inhibidores de EGFR en el cáncer gástrico [21], [22]. HER3 y HER4 podrían potencialmente también ser importante en la etiología del cáncer gástrico; Sin embargo, la información sobre su papel en esta enfermedad es escasa. De hecho, se sabe poco sobre el patrón de expresión del sistema EGF completa. Debido a la naturaleza interactiva de los receptores y ligandos de EGF, la clarificación de los mecanismos de regulación de los miembros de la familia EGF demandas considerando todos los receptores y sus ligandos juntos.

Para investigar el patrón de expresión de los receptores de EGF y ligandos en el cáncer gástrico, se obtuvo tejido del tumor y el tejido normal adyacente de la misma cirugía paciente que se somete para el cáncer gástrico. Se utilizaron muestras de tejido emparejado para asegurar contra la variación interindividual que existe en la expresión basal del sistema de EGF. El uso de RT-qPCR, se cuantificó la expresión del ARNm de los receptores EGF cuatro incluyendo las isoformas de empalme HER4 y los ligandos activadores estos receptores.

Materiales y Métodos

selección y recogida de biopsias

En este estudio de cohorte, 38 pacientes sometidos a cirugía para el adenocarcinoma de estómago, esófago o unión gastroesofágica se incluyó de manera consecutiva a partir de julio de 2008 a noviembre de 2009. Todos los individuos presentó una consentimiento informado por escrito. Colección de las biopsias fue aprobado por los comités de ética científicas regionales de Zelanda, Dinamarca (número de la revista H-B-2008-049), y el establecimiento de un banco biológico fue aprobado por la Agencia de Protección de Datos de Dinamarca (número de diario 2008-41-2138). Se tomaron biopsias de tanto tejido tumoral y el tejido normal adyacente. Todas las muestras de biopsia fueron revisados ​​por un patólogo con experiencia para validar el diagnóstico. datos clínicos predefinidos se extrajeron de las historias clínicas y los informes de patología. Las características clínicas de los pacientes se presentan en la Tabla 1.

extracción de RNA

Las biopsias se colocaron en el ARN después
(Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.) inmediatamente después de eliminación. ARN después
se retiró antes del aislamiento de ARN, y se añadió Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.). Las muestras de tejido se homogeneizaron en un TissueLyser (Qiagen, Chatsworth, CA, EE.UU.). ARN de tejido se aisló de acuerdo con el protocolo del fabricante para el ARN Trizol aislamiento (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.). las concentraciones de ARN se midieron en un NanoDrop ND-1000 espectrofotómetro. ARN de calidad fue probado en un 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante.

Invertir reacción de transcripción de la polimerasa cuantitativa en cadena (RT-Q-PCR)

cDNA fue sintetizado a partir de 1 ug de ARN total usando alta capacidad de cDNA transcripción reversa kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.). La reacción final se diluyó a un volumen total de 200 uL

Se usó 1 l de cDNA para qPCR utilizando SYBR mezcla Maestro verde (Roche, Basilea, Suiza) en un LightCycler Roche 480 en:. 95 ° C, 10 minutos; 50 ciclos de 95 ° C durante 10 s, temperatura de hibridación específica para 10 seg, 72 ° C durante 5 s; 99 ° C durante 1 segundo; 59 ° C durante 15 s; 95 ° C durante 1 segundo; enfriamiento a 40 ° C. secuencias y temperaturas de hibridación de cebadores se dan en la Tabla 2.

El gen más adecuado para la normalización se determinó aplicando el algoritmo NormFinder [23] para las concentraciones cuantificadas de GAPDH, β-actina, YWHAZ, SDHA y HMBS . SDHA resultó ser el mejor de los cinco. Dos muestras fueron excluidos del análisis debido a la no detección de ARNm a partir de cualquiera de los genes de referencia.

> incluido en parafina tejidos fijados en paraformaldehído al 4% tamponado de 13 pacientes representativos fueron investigados por inmunohistoquímica utilizando c-erbB-4 /HER-4, anticuerpo policlonal de conejo diluido 1/50 como el anticuerpo primario (RB-9045-P1, Thermo Scientific, Wilmington, DE, EE.UU.). Para las secciones de recuperación de antígeno se hirvieron en el horno microondas en tampón de citrato 10 mM, pH 6,0. La inmunorreacción se visualizó por el anticuerpo anti-conejo de cabra biotinilado diluido 1/200 (BA-1000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.), seguido de una avidina preformado y peroxidasa de rábano picante biotinilado complejo macromolecular (ABC) diluido 1/100 (Código nr. PK-4000, vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.). La reacción se desarrolló mediante el uso de 3,3 -diaminobenzidine y contratinción se realizó con hemalum de Mayer. Como control negativo, el mismo procedimiento se llevó a cabo sin ningún anticuerpo primario.

Uso de Image Pro Plus (MediaCybernetics) la intensidad de la tinción de imágenes representativas del tumor frente se estimó el tejido de la mucosa circundante. Dos imágenes de muestra de tumor y dos imágenes de la mucosa circundante se obtuvieron de cada muestra de tejido y el promedio de los dos valores se calculó y se utilizaron para el análisis estadístico y el trazado. Para algunas muestras, sólo el tejido tumoral, o sólo la mucosa normal estaba presente y no hay comparación de la expresión de HER4 fue posible para estos tejidos. se utilizó la prueba t pareada para determinar si la intensidad de los tejidos tumorales era diferente de la intensidad de los tejidos de la mucosa.

Resultados

expresión del ARNm de los receptores de EGF en el cáncer gástrico

ARN extraído de 38 tumores y emparejado muestras de tejido normal adyacente de pacientes que se sometieron a cirugía para el cáncer gástrico se utilizó para la cuantificación RT-qPCR. La expresión de mRNA de la familia EGF de cuatro receptores EGFR, HER2, HER3, y HER4 se representa en la Figura 1. Curiosamente, el receptor HER4 se sometió a regulación a la baja en el tejido canceroso en comparación con el tejido normal (p = 0,0004). Para HER2, vimos una regulación al alza de este receptor en el tejido canceroso que estaba muy cerca de ser significativa (p = 0,0520). EGFR y expresión HER3 mRNA era-un cambiado en los tumores en comparación con el tejido normal.

HER4 existe como diferentes isoformas empalmados alternativamente. La región juxtamembranous puede constar de cualquiera de JMA o JMB, y la región citoplásmica puede consistir en cualquiera de los dos o CYT1 CYT2. La regulación a la baja observada para la expresión total de HER4 mRNA en tejido canceroso aplica a las cuatro variantes del receptor (Figura 2)

. Para ilustrar mejor la magnitud de HER4 regulación a la baja en el tejido tumoral, que trazan la HER4 hacia abajo o upregulation para cada paciente individual. La expresión HER4 ARNm en el tejido tumoral menos la expresión HER4 ARNm en el tejido normal correspondiente (ΔHER4) se representa en la figura 3. Un valor por debajo de 0 representa una regulación a la baja. Esta figura ilustra claramente que HER4 regulación a la baja es un mecanismo muy general que tiene lugar en la mayoría de los pacientes y con independencia de la localización del tumor.

expresión de ARNm de los ligandos de la familia de EGF en el cáncer gástrico

TGF -α, anfirregulina, y EGF se unen específicamente EGFR. Se detectó un nivel de expresión de ARNm de EGF insignificante tanto en tumor y el tejido normal, y por lo tanto este ligando no se ha considerado para su posterior análisis. TGF-α y anfirregulina fueron ambos upregulated en el tejido canceroso en comparación con el tejido normal (Figuras 4a y b). HB-EGF, betacelulina, epirregulina y tiene afinidad tanto para EGFR y HER4, y todos estos ligandos también se upregulated en el tejido canceroso (Figuras 4 c, d, y e). Tomados en conjunto, esto demuestra que todos los ligandos de EGFR-activación están regulados por incremento en los tumores.

De los neurregulinas, NRG1 y NRG2 obligan a ambas HER3 y HER4. Hemos observado ningún cambio en la expresión de cualquiera de los α o las variantes de beta NRG1 y NRG2 (Figuras 4f, G, H e I). NRG3 y NRG4 sólo se unen a HER4. NRG3 no sufre ningún cambio en la expresión de normal a los tejidos cancerosos (Figura 4j). Sin embargo, NRG4 se downregulated en el tejido canceroso en comparación con el tejido normal (p = 0,0009) (Figura 4K). Esto demuestra que tanto HER4 y su ligando específico NRG4 se redujeron regulado en el cáncer gástrico.

Para ilustrar mejor la magnitud de regulación a la baja NRG4 en el tejido tumoral, que trazan la regulación hacia arriba o abajo NRG4 para cada paciente individual. La expresión NRG4 ARNm en el tejido tumoral menos la expresión NRG4 ARNm en el tejido normal correspondiente (ΔNRG4) se representa en la figura 5.

Considerando todos los pacientes que muestran regulación a la baja del total HER4 en su tejido tumoral, en el 82% de estos NRG4 fue también regulación a la baja y en el 86% de uno o más de los ligandos de EGFR-compartida (HB-EGF, epiregulina, betacelulina) se upregulated. En el 36% de los pacientes con regulación a la baja total de HER4, los tres de los ligandos de EGFR fueron upregulated compartida.

expresión de la proteína de HER por inmunohistoquímica

Debido a las regulaciones post-transcripcional, los patrones de expresión de ARNm determinada por RT-qPCR puede no representar el patrón de expresión de la proteína. Para asegurar que la disminución observada en la expresión de HER4 ARNm en el tejido canceroso de pacientes con cáncer gástrico también se refleja en el nivel de proteína, se realizó la tinción inmunohistoquímica de tejido incluido en parafina fijado con formalina de todos los pacientes incluidos en el estudio.

Por una cuantificación de la intensidad de la tinción HER4 en áreas representativas de la tumor- y el tejido circundante, encontramos el tejido tumoral de tener significativamente menos intensidad de la tinción HER4 en comparación con la mucosa normal circundante (p = 0,0029) (Figura 6) .

fotomicrografías representativas de las tinciones se presentan en la Figura 7. en la mucosa gástrica normal había una fuerte inmunoreacción HER4 (Figura 7 a). Especialmente la parte basal del citoplasma y la membrana celular lateral de las células epiteliales superficiales fueron fuertemente inmunorreactivas para HER4 (Figura 5 b). También las células parietales mostraron muy fuerte inmunorreactividad HER4 (Figura 7 c y d). Las capas de submucosa y muscular fueron negativos. En las estructuras glandulares especialmente las células parietales mostraron muy fuerte inmunorreactividad HER4 (Figuras 7 c y d). Los controles negativos se realizan sin ningún anticuerpo primario dieron como resultado ninguna tinción
.

En los cánceres gástricos sólo en las zonas de menor importancia con células tumorales tenían una inmunorreacción positiva a HER4, y el tejido tumoral negativo contrasta fuertemente con la mucosa normal adyacente al manchado tumor (Figura 7). En las partes centrales del tejido tumoral casi todas las células eran completamente negativas, aparte de pequeños grupos de células que podrían haber tenido una tinción de membrana distinta.

Discusión

La familia EGF se compone de un interactuante la red de receptores y ligandos que deben ser considerados en su conjunto para comprender la regulación de la señalización de la familia EGF. Se determinó el patrón de regulación de la familia EGF en el tejido tumoral de pacientes con cáncer gástrico, así como el tejido normal adyacente emparejado de los mismos pacientes.

Nos pareció que el potencial de señalización del EGFR que se upregulated en el tejido tumoral a través de la regulación positiva de todos los ligandos que activan el EGFR, y también encontramos la regulación positiva de HER2 en el tejido tumoral que estaba muy cerca de ser significativa (p = 0,0520). Esto está en buen acuerdo con los datos existentes que muestran que los receptores EGFR y HER2 se asocian con mal pronóstico en cáncer gástrico [19]. La importancia de HER2 en cáncer gástrico se demuestra por el hecho de que el anticuerpo inhibidor de HER2 Herceptin es el único agente aprobado para el tratamiento específico de cáncer gástrico [24].

Para HER3, no se observó ninguna regulación en expressional el ARNm. Sin embargo, algunos estudios sobre HER3 en el cáncer gástrico han atribuido un papel para HER3 en el cáncer gástrico. HER3 se ha asociado con la supervivencia pobre, y expresión de la proteína HER3 positiva fue detectada por inmunohistoquímica en 18,6% de las muestras de cáncer gástrico en comparación con sólo 2,0% de las muestras no tumorosas [25] - [27]. No hemos encontrado una expresión HER3 mayor en el cáncer gástrico en comparación con el tejido normal en nuestro estudio. Sin embargo, una diferencia en los métodos utilizados en los estudios (inmunohistoquímica vs RT-qPCR) podría explicar algunas de las discrepancias en los resultados. Además, hemos sido capaces de describir el patrón de regulación en cada paciente en lugar de en un grupo de pacientes con cáncer y un grupo de personas de control, y esto también podría dar cuenta de la diferencia en los resultados obtenidos en los dos estudios.

Hemos encontrado una regulación a la baja marcada de ambos HER4 y su NRG4 ligando activador en el tejido tumoral. Nuestros resultados se ven reforzados por el hecho de que también encontramos una regulación a la baja cuando utilizamos ensayos adicionales para cuantificar las isoformas específicas de HER4. El uso de inmunohistoquímica, se confirmó que el tejido gástrica normal es positivo para HER4, mientras que el tejido canceroso tiene muy baja o ninguna tinción HER4.

La disminución de la expresión de la expresión de HER4 ARNm en el tejido tumoral puede atribuirse a una disminución de la número de células que expresan HER4 o a una disminución en la expresión de HER4 en todas las células que expresan HER4. A partir de nuestros coloraciones de inmunohistoquímica, se observa que en los cánceres gástricos sólo grupos menores con células tumorales tenían una inmunorreacción positiva a HER4, mientras que la gran mayoría de las células tumorales eran completamente negativas. Esto indica que es el número de células que expresa HER4 que se disminuyó en los tumores. En contraste con el tejido tumoral, el tejido normal tuvo muy fuertes inmunorreacciones a HER4. Curiosamente, es especialmente células productoras de moco y células parietales productoras de ácido clorhídrico que expresan la proteína HER4.

El papel de HER4 en la enfermedad cancerosa es objeto de controversia. En el cáncer de vejiga, RT-qPCR cuantificación de HER4 y sus ligandos muestran que HER4 se asocia con una mejor supervivencia. En particular, la co-expresión de HER4 junto con su ligando específico, NRG4, está altamente correlacionado con una mejor supervivencia [28]. Del mismo modo, HER4 se asocia con una mejor supervivencia global y libre de enfermedad en el cáncer de cuello uterino [29]. En el carcinoma de células escamosas de laringe, HER4 se pierde en los tumores de etapa tardía [30], y HER4 se encuentra principalmente en bajo etapa y no metastásicos tumores de xenoinjertos en cáncer de páncreas [31].

Por otro lado, expresión de la proteína HER4 como se determinó por inmunohistoquímica se ha asociado con metástasis distal y una tasa de disminución de la supervivencia en los carcinomas orales de células escamosas [32]. En un estudio de cáncer colorrectal en el que el patrón de expresión de la proteína también se determinó por inmunohistoquímica, los pacientes en etapa temprana tenían un porcentaje más bajo de HER4 sobreexpresión de pacientes en etapa tardía [33]. En los tumores malignos del sistema nervioso central, HER4 también posee un papel promotor de tumores [34], [35].

No se sabe mucho sobre el papel de HER4 en el cáncer gástrico mucho. No expresión HER4 mRNA se detectó en dos líneas celulares de cáncer gástrico [36]. HER4 expresión de la proteína detectada por inmunohistoquímica se ha encontrado correlación con la etapa temprana, menor grado, y la ausencia de metástasis en los ganglios linfáticos en el cáncer gástrico [25]. Esta se encuentra en muy buen acuerdo con otro estudio que investigó los perfiles de expresión de genes en los supervivientes a largo plazo del cáncer gástrico metastásico tratados con quimioterapia en el que los autores indican un posible papel de la regulación positiva HER4 en estos pacientes [37]. Junto con nuestros resultados actuales, estos datos indican además que la señalización de HER4 tiene una función protectora contra la carcinogénesis en la región gástrica. Un estudio encontró el gen HER4 que se amplifica con frecuencia en el cáncer gástrico [38]. Sin embargo, los resultados de nuestros estudios indican que esto no se traduce al nivel de expresión de HER4 ya que encontramos una regulación a la baja de HER4 ARNm y la expresión de proteínas en lugar de una regulación al alza.

A pesar de que no hemos encontrado la expresión de EGFR ser regulado, el potencial de señalización a través de este receptor se incrementa por la regulación positiva de todos sus ligandos. Esto incluye los ligandos compartidos con HER4: HB-EGF, betacelulina y epiregulina. Además de la activación de EGFR autocrino, la regulación positiva de estos ligandos es posible en teoría aumento de la actividad de HER4. La activación de la vía del EGFR es de hecho una forma de que las células se vuelvan cada vez más cancerígenos. Sin embargo, teniendo en cuenta que HER4 tiene funciones anti-cancerígenos, una activación concomitante de este receptor podría detener la ventaja proliferativa de la activación del EGFR. Uno podría especular que este potencial de activación de HER4 se evita por la regulación a la baja concomitante del receptor y su ligando específico NRG4.

En pacientes con cáncer de vejiga, el combinado HER4 /unidad de señalización NRG4 puede ser inhibidor del crecimiento, y la co-expresión de HER4 junto con NRG4 es altamente correlacionada con una mejor supervivencia si las dos proteínas actúan juntas en lugar de individualmente [28].

también hemos realizado un análisis para comparar la expresión de HER4 la supervivencia del paciente. Sí observamos una tendencia a la alta expresión de HER4 se correlaciona con una mejor supervivencia (resultados no mostrados), sin embargo, debido a una limitación en el número de pacientes incluidos en el estudio, no se encontró este resultado es significativo y que más estudios tendrá para dilucidar si una correlación entre la expresión de HER4 y la supervivencia se puede encontrar en el cáncer gástrico. Una correlación del nivel de expresión de los receptores de EGF a la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos y la invasión tumoral mostró sólo HER2 que se correlaciona inversamente con estos parámetros mientras que no se encontró correlación para la familia EGF restante (resultados no mostrados).

en conclusión, nuestros resultados sugieren un nuevo papel para HER4 en el cáncer gástrico. Curiosamente, encontramos tanto HER4 y su NRG4 ligando específico para ser regulados a la baja en el tejido canceroso. Esto va acompañado de un aumento del potencial de señalización de EGFR a través de la regulación positiva de todos sus ligandos y una regulación al alza de HER2.

• PLOS ONE: microARN-338 inhibe el crecimiento, invasión y metástasis de cáncer gástrico por la expresión de orientación NRP1
• PLOS ONE: Co-administración de doxorrubicina y SATB1 shRNA por termosensitiva magnética catiónicos Los liposomas para la terapia del cáncer gástrico