Plos ONE: Fas signalnega Spodbuja Rak želodca metastaze skozi stat3 odvisni uravnavanjem Fascin

Povzetek

Ozadje

Fas-signalne aktivira signalni pretvorniki in aktivatorji prepisu 3 (stat3), ki je potrebna za Fascin Povecanje. Kot beljakovin-aktina združevanje, lahko Fascin posreduje raka želodca (GC) celične migracije.

Načini

raka želodca AGS celice so zdravili z anti-Fas (5 mg /ml) 2 h , da bi spodbudili aktiviranje Fas signalizacijo. in vitro
migracija FAS-signalnih aktivira AGS celic je bila ocenjena s pomočjo Transwell komore. Ravni Fascin in fosforiliranega stat3 so odkrile metodo Western blot analiz. Nude mišim injiciramo intravensko AGS celicah, obdelanih z anti-Fas ali zdravljenih z zaviralcem stat3 brez anti-Fas; tumor na pljučih metastaze so bile izmerjene. Fascin protein izraz v tumorskih tkivih, je bila odkrita s imunohistokemijo. Ravni Fas in Fascin mRNA v tumorskih tkivih pri bolnikih z GC so bile izmerjene z realnem času smo analizirali PCR in njihove korelacije.

Rezultati

Aktivacija Fas signalizacije spodbujati migracije celic, kar je povzročilo stat3 odvisna od Fascin Povecanje v AGS celicah. Stat3 okrepljeno ravni Fascin in vivo
. Fascin bil posrednik Fas-signalne inducirane migracije AGS celic in vitro
in in vivo
. Poleg tega je bila pozitivna korelacija med ravnmi FAS in Fascin mRNA v tumorskih tkiv pri bolnikih GC.

Sklepi

Fas signalizacijo spodbuja GC metastaze skozi stat3 /Fascin poti, ki lahko zagotovi nov primerna za zdravljenje GC

Navedba. Yang Y, Zhao Q, Cai Z, Cheng G, Chen M, Wang J, et al. (2015) Fas signalnega Spodbuja želodca metastaza raka skozi stat3 odvisni uravnavanjem Fascin. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10,1371 /journal.pone.0125132

Akademska Urednik: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, UNITED STATES

Prejeto: 6. januar 2015; Sprejeto: 11. marec 2015; Objavljeno: 18. maj 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v prispevku

Financiranje:. To delo je podprl Nacionalni Natural Science Foundation of China št 81200014 do JLW (http://www.nsfc.gov.cn/~~HEAD=pobj); Natural Science Foundation iz province Zhejiang št LY14H160011 do YSY; Ne LY12C08002 za ZJC in št LY12H13003 za MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) je četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka po vsem svetu. Kot večina raka, metastaze je najpogostejši vzrok neuspešno kliničnem zdravljenju GC s. Diagnosticirali v zgodnji fazi brez metastaz, lahko GC je treba izkoreniniti z operacijo. Ko pride do metastaz, prognoza GC je bistveno slabši. Pri bolnikih z obsežno metastaze, izid kirurgije v kombinaciji s kemoterapijo in imunoterapijo je daleč od optimalnega, s splošno 5-letno preživetje pa le 24% [1,2]. Zato je nujno potrebno za boljše razumevanje mehanizma GC metastaze, da bi razvili boljšo terapevtsko strategijo.

Fas signalne poti eden od klasičnih mehanizmov za sprožitev apoptoze [3]. Po ligaciji z njenim naravnim ligandom, FasL, Fas receptorja tvori smrt inducira signalnih kompleks, ki povzroča aktivacije kaspaze-8, kar aktivira kaspaz nizvodne, ki izhajajo iz apoptoze [4]. Ugotovljeno je bilo, da je Fas-posredovano uničevanje celic odgovorna za delovanje proti raku Fas signalne poti pri raku prostate [5]. Vendar pa je v večini tumorjev, namesto induciranje apoptoze, Fas signalne aktivacija pospešuje napredovanje tumorja [6,7]. Tumorske celice pogosto odzivajo na Fas stimulacijo z izboljšano orožja [8,9]. Številne študije so tudi pokazale, da lahko Fas signalizacijo spodbujajo migracijo tumorskih celic in invazijo [10-12]. V nedavni študiji, je bila visoka Fas izraz v GC celic, je pokazala, da v korelaciji s pojavom zasevkov v regionalnih bezgavkah [13], kar kaže, da Fas signalizacijo spodbuja metastaze raka želodca.

Fascin, aktin -bundling beljakovin, je bila opredeljena kot ključni molekuli v tumorske metastaze [14]. Fascin igra pomembno vlogo pri prehodu tumorskih celic in izraz Fascin je v nekaterih vrstah raka poveča, vključno z GC [15,16]. Fascin je direktna stat3 ciljni gen v odzivu na IL-6 v obeh miši in raka dojke celicami [17]. Fas signalizacija so poročali, da sodeluje pri aktiviranju stat3 [18-20]. Zato domnevajo, da Fas signalizacijo spodbuja migracijo na GC celic in poznejše tumorskih metastaz skozi stat3 odvisnega uravnavanjem Fascin.

Ta študija je bila zasnovana, da se dokaže sodelovanje Fas pri regulaciji Fascin izražanja prek aktivacije stat3 v AGS celicah. Poskusili smo povezati okrepljeno Fascin raven s celično gibljivost in metastaze na AGS celic in vivo
. Analizirali smo tudi korelacijo med stopnjami FAS in Fascin mRNA v tumorskih tkiv pri pacientih z GC. Upali so, da bi naše ugotovitve kažejo na nov mehanizem za GC metastaze, ki je podlaga za nadaljnji razvoj temelji Fas terapevtske strategije za napredno GC.

Materiali in metode

primerke človeškega tkiva

osebki Human GC tkiva so bili zbrani od 23 bolnikov (14 z metastazami in 9 brez metastaz), ki so bili operirani pred kemoterapijo v bolnišnici Zhejiang raka (Hangzhou, Kitajska) med 2012 in 2014. kliničnih značilnosti bolnikov z GC so povzeti v tabeli 1. študijskega izpolnjene s predpisi Ministrstva za zdravje Kitajske in mednarodnimi smernicami Svetovne zdravstvene organizacije odborov Pregled Research Ethics za raziskave, ki vključujejo ljudi predmete in Helsinško deklaracijo o etičnih načelih za zdravstvene raziskave, ki vključujejo ljudi. Protokol študije je ogledal in revizijski odbor institucionalne Zhejiang Cancer Hospital odobril. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsake od pacientov pred študij začetek.

Reagenti

Mouse anti-človeški Fas (2R2) monoklonsko protitelo, je bila kupljena od eBioscience (San Diego, CA, ZDA) . anti-človeški Fas (CH11) monoklonsko protitelo in stat3 inhibitor Mouse S3I-201 so bile kupljene od Merck Millipore (Billerici, MA, ZDA). Zajec anti-humana stat3 (79D7) in fosforilirata stat3 anti-humana (D3A7) monoklonska protitelesa so bile kupljene od signalizacijo med celicami tehnologijo (Danvers, MA, ZDA). Miška anti-humana Fascin (D-10) monoklonsko protitelo, človeško Fascin siRNA, stat3 siRNA, negativna kontrola siRNA (NC siRNA) in stat3 inhibitor, Stattic, so bile kupljene od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, ZDA). Komplet širjenje CCK8 celica je bila kupljena od Dojindo Molecular Technologies (Kumamoto, Japonska). Komplet za zaznavanje apoptoze aneksin V-FITC smo kupili pri Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ZDA). Zbornice Transwell (8-um velikost por) so bile kupljene od Costar (Cambridge, MA, ZDA).

Živali

Šest tednov stare gole miši so bili pridobljeni iz SIPPR-BK poskusne Animal Co (Shanghai, Kitajska). Miši so bile nameščene v objektu brez patogenov. Eksperimentalne protokoli so bili pregledani in odobril odbor za živali oskrbe in uporabe Zhejiang Cancer Hospital.

celice in celične kulture

Črte AGS človekovih GC celic in MNK-45 so bili pridobljeni iz Amerike Type Culture Collection (Manassas, VA, ZDA) in jo vzdržujemo pri 1640 gojišče, ki vsebuje 10% fetalnega govejega seruma (FBS), pri 37 ° C s 5% CO _2.

Western blot analizo

skupno 20 mikrogramov surovih proteinov, ekstrahiranih iz celičnih lizatov smo ločili s 10% natrijev dodecil sulfat poliakrilamidnem gelu in prenesli na poliviniliden ditluoridne membrane (Millipore, Billerica, MA). Membrane smo blokirali s 5% BSA v Tris-pufrom plus 0,05% Tween-20 in nato inkubirali z ustreznimi primarnih protiteles pri 4 ° C preko noči. Po spiranju s tris-pufrom plus 0,05% Tween-20, smo membrane inkubirali s HRP-ustreza konjugirane sekundarnih protiteles. Proteine ​​smo vizualizirali s pomočjo SuperSignal West Femto Največja (Thermo, IL, ZDA).

Zaznavanje celične apoptoze

AGS celice (2 x 10 ^{5 /ml) so bili zdravljeni z 1 ali 5 ug /ml anti-Fas monoklonskih protiteles (anti-Fas) ali izotipna protitelesa (ISO) za 24 ur, so apoptotske celice obarvamo z aneksinom v-FITC in propidijevim jodidom 5 minut pri 4 ° C v temi in nato analizirajo s pretočno citometrijo z FACSCalibur pretoka citometrom (Becton Dickinson, San Jose, CA, ZDA).}

Rak celične migracije test in vitro

AGS celice (1 x 10 ^{6 /ml) smo obdelali s 5 ug /ml anti-Fas ali ISO 2 uri pri 37 ° C. Nato 2 x 10 5 AGS tumorske celice prenesemo v 100 ul medija brez seruma in zasejemo na zgornjo komoro Transwell komor (8-im velikost por). Spodnja komora smo napolnili z 800 ul od 1640 gojitvenem mediju, ki vsebuje 20% FBS. Po 48-h inkubacije pri 37 ° C, smo celice fiksirajo z metanolom za 20 minut in speremo s PBS trikrat, vsakič 20 min. Osnovna Celice smo obarvali z 10 mg /ml DAPI 30 minut in speremo s PBS. Obarvane celice smo pregledali pod florescence mikroskopom. Za določitev učinkov stat3 na celični migraciji bila 10 uM za Stattic dodamo k gojišča. Za določitev vloge Fascin v celični migraciji, pred-Fas anti stimulacijo, je bilo skupno 40 nM Fascin siRNA dupleksov transfektirali v AGS celic (2 x 10 5 /vdolbinico) z uporabo 3 xl INTERFERin siRNA transfekciji reagenta ( Polyplus, NY, CA, USA) na 24-vdolbinami. Učinkovitost Fascin prehodne utišanje je bil potrjen z Western blotting-om.}

Cell proliferacijo vsebnosti

AGS Celice smo obdelali s 5 ug /ml anti-Fas ali ISO za 24, 48 ali 72 ur, in 20 xl CCK8 dodamo v vsako jamico in celice inkubiramo dodatne 4 ure. Absorbanco vsake vdolbine smo prebrali pri 450 nm. Proliferacija celic smo izračunali tako, da ODS iz obdelanih celic z ODS krmilnih celic.

Real-time PCR

Total RNA je bila vzeta s TRIzola reagentom in cDNA smo sintetizirali z uporabo PrimeScript RT reagent kit (Takara Bio, Inc. Otsu, Shiga, Japonska). Uporabljeni so bili naslednji PCR pogoji: 1 cikel pri 95 ° C za 30 sekund, nato 40 ciklov 5 sekund pri 95 ° C in 34 s pri 60 ° C. PCR v realnem času smo izvedli na Applied Biosystems 7500 realnem času PCR sistem (Foster mesta, CA, ZDA). Rezultate smo normalizirali glede P-aktina RNA. Sekvence PCR primerji, ki se uporabljajo, so bili naslednji: občutek, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'in anti-sense, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3 "za p-aktin; občutek, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'in anti-sense, 5'AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3 "za Fas; občutek, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'in anti-sense, 5'-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3 "za Fascin.

Pljučni metastaze Test vivo

AGS celice ( 5 × 10 ^{6 na miš) predhodno zdravljeni z anti-Fas ali ISO za bilo 2 h vbrizga v 6-teden starih golih miših preko repne vene. Za določitev učinkov stat3 na tumorske metastaze in Fascin izražanja in vivo
, AGS tumorske celice (5 × 10 6 na miš) intravenozno vbrizga v 6-teden starih golih miših in 24 ur pozneje je miši intravensko injekcijo S3I-201 (5 mg /kg vsake 2 dni skupaj 3-krat). Tri tedne po injiciranju celic, so bile miši anestezirali zaradi vdihavanja Kloralhidrat in žrtvovali, in so bile odstranjene pljuča in številke pljučnih tumorskih žarišč so bili prešteti po seciranje mikroskopom.}

Imunohistokemija

tumorske žarišča iz pljuč so bile določene v 10% formalinu, dehidrirali v etanolu in vdelali v parafin. Tkiva odseki smo razrezali na 4 um, nameščen na stekelca in sušimo pri 60 ° C 4 ure. Po kratkem proteolitičnim prebavo in peroksidaze bloka diapozitive tkiva z uporabo 2,5% vodikovega peroksida v metanolu za 30 minut pri sobni temperaturi, je bilo drsi inkubiramo z anti-Fascin protitelesa preko noči pri 4 ° C. Po izpiranju smo drsi inkubirali s-peroksidaze označene polimera in substrata kromogena. Končno so osebki inkubirali v fosfatno pufrani fiziološki raztopini, ki vsebuje diaminobenzidine 5 minut. Olympus mikroskop je bil zaposlen za vizualizacijo barvanje tumorskih tkivih.

Statistična analiza

Rezultate smo primerjali z uporabo enosmerno ANOVA. Test korelacije rang da Spearman je bil uporabljen preučiti korelacijo med stopnjami Fas in Fascin mRNA v tumorskih tkiv bolnikov GC. Vrednost p < 0,05 štelo, da je statistično značilno

Rezultati

Aktivacija Fas signalizacijo spodbuja selitev AGS celic

Najprej smo potrdili izražanje. Fas receptorja v letnem pregledu rasti in MNK-45 celice s PCR v realnem času in metodo Western blot analizo in ugotovili, MNK-45 celice izraženo višjo Fas receptorja kot AGS celice storil (slika 1A). Oba celičnih linij je tudi pokazala visoko stopnjo FasL izražanja (podatki niso prikazani). Mi Naslednja preučiti, ali bi lahko ligacija Fas receptorja inducira apoptozo v letnem pregledu rasti in MNK-45 celic. Po stimulaciji z anti-Fas ali ISO pri koncentraciji 1 ug /ml ali 5 ug /ml, je bila MNK-45, vendar ne AGS celice so pokazale koncentracije odvisno povečanje apoptoze (slika 1B). Zato smo raziskovali, ali bi aktivacija Fas signalizacijo povzroči druge učinke na AGS celice namesto apoptoze indukcije v naslednjih poskusih. Letni pregled rasti celične migracije test smo izvedli vitro
in smo ugotovili migracije AGS celic signifikantno povečala po stimulaciji s 5 ug /ml anti-Fas (slika 1C). Da bi izključili možnost, da bi povečala migracija AGS celic je posledica dvignjenem širjenje po stimulaciji anti-Fas, smo pregledali širjenje ACS celic in našli nobene očitne razlike med celicami, zdravljenih z ali brez anti-Fas (slika 1D), kar kaže, da povečanje migracijo celic ni bilo posledica proliferacije lastnosti po anti-Fas stimulacijo. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da lahko Fas signalizacijo poveča gibljivost GC celic in vitro
.

Aktivacija Fas signalizacijo molekul Fascin izraz v AGS celic z aktivacijo stat3

je bilo, poročali, da je Fas signalizacijo vključen v aktivacijo stat3 [18-20]. V tej študiji smo preučili, ali bi aktivacija Fas signalizacijo povzroči aktivacijo stat3 v AGS celicah. Kot je prikazano na sliki 2A, po stimulaciji z anti-Fas za kratek čas, fosforiliran stat3 bila znatno AGS celicah povečana. Prav tako je bilo dokumentirano, da lahko Fascin povečati gibljivost tumorskih celic in je neposredna tarča gen stat3 [17]. Tako smo odkrili izražanje Fascin v AGS celic po stimulaciji z anti-Fas. Kot je prikazano na sliki 2B, so nivoji mRNA iz Fascin v odvisnosti od časa način povečala in dosegla vrhunec po 12 urah anti-Fas stimulacijo v AGS celicah. Da bi še dodatno potrjujejo uravnavanjem Fascin, smo zaznali raven beljakovin Fascin in ugotovila povečanje Fascin raven beljakovin v anti-Fas vendar ne ISO zdraviti AGS celice (slika 2c). Za prikaz odnosa med stat3 in Fascin v AGS celic po Fas signalizacijo aktivacijo smo obdelan AGS celice Stattic, specifični zaviralec za stat3 pred anti-Fas stimulacijo in ugotovila, da je anti-Fas-povzroča povečanje Fascin beljakovin popolnoma odpravljeno v prisotnosti Stattic (slika 2D). Smo zaznali tudi aktiviranje stat3 v AGS celicah po anti-Fas stimulacijo za 24 ur, vendar pa aktivira obseg nekoliko nižja od tiste, prejete 2h anti-Fas stimulacije (slika 2C in 2D). Da bi še dodatno potrditev, da je bila stat3 sodeloval pri urejanju Fascin izražanja po stimulaciji anti-Fas, smo podrli izraz stat3 z stat3 posebne siRNA pred stimulacijo anti-Fas in zaznana učinkovitost stat3-rasklapanje jih Western blot analiz. Kot je prikazano na sliki 2E, stat3 siRNA vendar ne NC siRNA transfekciji občutno inhibiral ekspresijo stat3 v AGS celicah. Pričakovano je Fascin protein ni bila povzročena v-stat3 rasklapanje AGS celic po anti-Fascin stimulacije (slika 2F). Ti rezultati kažejo, da je potrebno aktivirati stat3 za uravnavanjem Fascin izražanja Fas signalizacije aktivacijo povzročeno AGS celicah.

Fas migracije signalizacija napredoval celic je odvisna od stat3 /Fascin poti

To je bil pokazale, da Fascin posreduje tumorske celice in migracije [17]. V tej študiji smo preučili, ali bi rasklapanje od Fascin zavira Fas migracijo celic signalno-inducirane in vitro
. Ugotovili smo, da bi se zmanjšalo Fascin proteina zazna AGS celic, transfektiranih s Fascin siRNA, vendar ne NC siRNA (slika 3A). Nato smo izvedli tumorske celične migracije teste za odkrivanje gibljivost Fascin-rasklapanje AGS celic, po stimulaciji anti-Fas. Kot je prikazano na sliki 3B, ko je anti-Fas stimulacija izrazito spodbuja migracijo AGS celic, ta učinek je očitno zaviral celicah obdelanih z Fascin siRNA, vendar ne NC siRNA. Ker je stat3 potreben za Fas signalizacijo inducirane Fascin izraza v AGS celicah, smo poleg analizirali učinke stat3 na Fas signalizacijo posredovano migracijo celic v AGS celicah. Kot je prikazano na sliki 3C, potem obdelamo z Stattic je Fas signalizacijo izboljšano celične migracije povsem odpravljen. V skladu s tem rezultatom, stat3 siRNA tudi bistveno zaviral Fas migracije AGS celične signalizacije izboljšano (slika 3D). Ti rezultati kažejo, da Fas signalizacijo spodbujati migracije celic in je odvisna od aktivacije stat3 /Fascin poti.

Fas signalizacijo spodbuja celično metastaze in vivo z aktiviranjem stat3 /Fascin pot

Da bi še dodatno dokazujejo razmerje med Fas signalizacijo in GC metastaz, smo prenesli anti-Fas-stimulirane AGS celice intravensko v golih miših odkrili žarišča tumorjev v pljučih. Našli smo povečanje tumorja žarišč v pljučih miši, prenesenih s celicami predhodno zdravljeni z anti-Fas, vendar ne ISO (slika 4A). Za pojasnitev odnosa med Fascin in Fas-signalne posredovano tumorske metastaze, smo izvedli detekcijo imunohistokemija za Fascin v tumorskih tkivih. Opazili smo večjo Fascin izraz v tumorskih tkivih od miši, ki so prejemali anti-Fas-stimulirane AGS celice, kot da je od miši, ki so prejemali ISO ali un-stimulirane AGS celice (slika 4b). Ker je potrebno stat3 za anti-Fas-inducirane uravnavanjem Fascin in povečana gibljivost v AGS celicah, smo raziskovali učinke stat3 na AGS celice metastaz in vivo
. Po obdelavi z S3I-201, inhibitor kemijska sonda stat3 aktivnosti [21], tumor žarišča v pljučih znatno zmanjšala (slika 4C). Poleg tega je bil Fascin izraz v tumorskih tkivih od S3I-201 obdelanega miših zavrl tudi (slika 4D), kar kaže, da nadzor nad Fascin s stat3 in vivo
. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da lahko Fas signalizacijo spodbujajo celično metastaze in vivo
, odvisno od aktiviranja stat3 /Fascin poti.

Fascin izraz je v korelaciji s Fas izražanja tumorskih tkiv bolniki z GC

Ker Fas signalizacijo spodbuja Fascin izraz, smo ugotovili, ali obstaja korelacija med Fas in Fascin izražanja v tumorskih tkiv bolnikov GC. Analizirali smo raven mRNA za Fas in Fascin v tumorskih tkiv bolnikov GC. Kot je prikazano na sliki 5, so nivoji mRNA iz Fas in Fascin pokazali pozitivni korelaciji. Ta rezultat predloži dokaze za idejo, da Fas signalizacijo spodbuja Fascin izraz v GC.

Pogovor

Na splošno, po trimerizaciji Fas po vezavo s FasL, se sproži apoptozo. Fas grozd zaposluje adapter protein FADD in tvori-smrtno indukcijo signalizacije kompleks, ki povzroča aktivacijo kaspaze-8. Kaspaze-8, v zameno, aktivira kaspazi nižji stopnji, kot je kaspaze-3, ki se zaključi v apoptoze [4]. Poleg tega, da povzroči celično smrt, Fas tudi prenaša orožja in krmilnih signalov v tumorskih celic [22]. Ugotovljeno je bilo, da Fas posredovanjem proliferacijo astric sluznični celic je ERK odvisna [23], vendar aktivacija ERK signalne poti ne inducira proliferacije B16 murinih melanomskih celic [24]. Zato lahko Fas povzroči širjenje nekaterih, vendar ne v vseh tumorskih celic in ustrezni mehanizem je še vedno v veliki meri neznan. Tukaj, smo ugotovili, Fas bil veljaven v inducira proliferacijo AGS celic. Fas signalizacija je bila dokazana tudi za sprožanje gibljivost apoptoze odporna na tumorskih celicah preko urokinaza aktivator plazminogena [10]. V tej študiji smo razkrili nov mehanizem Fas-posredniško tumorskih celic gibljivost, ki je bila odvisna od uravnavanjem Fascin preko aktivacije stat3.

Na splošno velja prepričanje, da je za pobeg apoptoze s FasL-pozitivnih T povzročil celice so tumorske celice razvile več načinov, da se uprejo-FasL povzroča celično ubijanja učinke. Tumorske celice so dokazali, da upocasnjujejo ali celo izgubijo ekspresijo receptorjev Fas [25] ali razveljavi znotrajcelično Fas signalno pot skozi mutacije v Fas [26]. Tumorske celice lahko tudi upregulate celične FADD podobno IL-1β pretvorbo encima zavira protein ali fosforilacije kaspaze-8 zavira aktivacijo kaspaze-8 in blokirajo po toku navzdol signalno pot v Fas [27,28]. V tej študiji smo ugotovili aktivacijo stat3 v AGS celic po stimulaciji anti-Fas. Aktivacija stat3 Dokazano je, da zaščitijo rakave celice pred apoptotskih dražljaje, ki izvirajo iz receptorja Fas [29]. Predobdelava zaviralca stat3 ni mogoče sprožiti AGS celično apoptozo po Fas signalnih aktivacijske (podatki niso prikazani), kar kaže, da je aktivacija stat3 ne sodeluje pri preprečevanju AGS celice Fas-inducirane apoptoze.

Že poročajo, da so Lewis pljučnega karcinoma celice konstitutivno odporne na Fas posredovano apoptoze, vendar pa prekomerno izmed Fas na teh celicah omogoča Fas posredovanega apoptoze po zamreženja z agonist anti-Fas protitelesa [30], kar kaže, da je kakovostna razlika v aktiviranih signalnih celic prejeli, ki določa njihovo usodo po Fas signalizacija vezavo. Stopnja Fas izražanja zmerni AGS celicah ter stimulirali z visoko dozo anti-Fas (20 ug /ml); Nismo ugotovili, da AGS celice so pokazale nekoliko povečano apoptozo (podatki niso prikazani). To pomeni, da lahko apoptoze indukcijo in napredovanja migracije signalizacijo oba aktivira po receptorja vezavo Fas, ki je lahko povezan s stopnjo anti-Fas uporabljajo v takih poskusih. Če visoke vrednosti Fas-signalne dostavo ni mogoče doseči v fizioloških razmerah, bo promocija migracija signalizacijo prevzel po receptorsko vezavo Fas in povzroči povečano GC metastaze.

Za izvajanje oddaljene metastaze, je potrebna močna gibljivost pri tumorskih celicah . Fascin, kot proteina-aktina vezane prodaje, je pomembna za vzdrževanje in stabilnost filamentnega svežnjev aktinskih in zato vključeni v celično motiliteto [31]. V tej študiji, smo razkrili, da je Fas signalizacijo vpleten v uravnavanjem Fascin izražanja. IL-6 je poročalo, da upregulate Fascin izražanje GC celic [32]. Sistem kmetijskega svetovanja signalizacija je bila dokazana tudi za spodbujanje IL-6, izločanje v tumorskih celic [33]. Ti dokazi kažejo, da Fas signalizacijo verjetno ojača učinek Fascin uravnavanjem z IL-6. nadalje smo pokazali, da so bili FAS in Fascin izrazi tesno povezana pri bolnikih, GC, okrepiti pomen Fas-Fascin osi v procesu GC metastaz.

V skladu s prejšnjimi raziskavami smo dokazali, da Fas-povzroča aktiviranje stat3 je potrebna za uravnavanjem Fascin. Pri golih miših pljuč modelu metastaziranje, inhibitor stat3, S3I-201, lahko zavirajo Fascin ekspresijo v tumorskih tkivih. Murine rekombinantni FasL ni mogel aktivirati aktivacijo stat3 (podatki niso prikazani), kar kaže, da je aktivirana signalizacija sproži FasL na AGS celice same zadostuje za posredovanje aktivacije stat3 in dolvodno Fascin uravnavanjem. Poleg urejanja Fascin izraz, se stat3 sodeluje tudi v celično proliferacijo in preživetje, onkogenezo in raka metastaze v GC [34-36]. Oralno biološko inhibitor majhna molekula stat3 bila odkrita in bi lahko potencialno terapevtsko sredstvo za raka človeškega [37]. Predvidevamo, da je inhibitor stat3 obetavno sredstvo, ki se lahko uporabljajo v klinični GC terapiji v bližnji prihodnosti.

Na koncu smo dokazati, da je Fas signalizacijo vključen v GC metastaz skozi stat3 odvisen od uravnavanjem Fascin. Naši rezultati tudi predlagamo Fas /stat3 /Fascin pot lahko molekularno primerna za zdravljenje GC.

Priznanja

cenijo dr Hua Wang za zagotavljanje cDNA izpisanih iz tumorskih tkiv bolnikov GC . Prav tako cenijo urednik Medjaden za spremembo tega rokopisa.

• Plos ONE: Zdravje vedenje korejskih želodčnega raka preživele s hipertenzijo: nagnjenost Analiza KNHANES III-V (2005-2012)
• Plos ONE: ATOH1 regulira tumorogenosti želodčnega raka celic s indukcijo diferenciacije rakavih matičnih celic