PLoS ONE: Fas Signaling Edistää mahasyövän etäpesäke kautta STST3 riippuva lisääntymisen merkkejä Fascin

tiivistelmä

Background

Fas signalointi-aktivoitu signaalimuunta- ja aktivaattoreita transkription 3 (STST3) tarvitaan Fascin ylössäätely. Koska aktiini-niputtaminen proteiinia, Fascin voi välittää mahalaukun syöpä (GC) solumigraation.

Methods

Mahasyöpää AGS soluja käsiteltiin anti-Fas (5 ug /ml), 2 tuntia , jotta voidaan edistää aktivoinnista Fas signalointi. in vitro
migraatio Fas signalointi-aktivoitua AGS soluissa arvioitiin käyttämällä Transwell kammiot. Tasot Fascin ja fosforyloidun STAT3 havaittiin Western-blottauksella analyysejä. Nude-hiiriin injektoitiin suonensisäisesti AGS soluissa, joita käsiteltiin anti-Fas tai käsitelty STAT3-estäjällä ilman anti-Fas; kasvaimen keuhkometastaasien mitattiin. Fascin proteiinin ilmentyminen kasvainkudoksissa havaittiin immunohistokemialla. Fas- ja Fascin mRNA-tasot kasvainkudoksissa potilailta GC mitattiin reaaliaikaisella PCR: llä ja niiden korrelaatio analysoitiin.

Tulokset

aktivoituminen Fas signalointi edistää solujen vaeltamiseen ja johti STAT3 riippuvaiset Fascin säätelyyn ylöspäin AGS soluissa. STAT3 parannettu Fascin tasot in vivo
. Fascin oli välimiehen Fas signalointi aiheuttaman AGS solumigraatio in vitro
ja in vivo
. Lisäksi oli positiivinen korrelaatio Fas ja Fascin mRNA-tasot kasvainkudoksissa GC potilaista.

Johtopäätökset

Fas signalointi edistää GC etäpesäke kautta STAT3 /Fascin reitin, joka voi tarjota uuden kohde GC terapia.

Citation: Yang Y, Zhao Q, Cai Z, Cheng G, Chen M, Wang J, et al. (2015) Fas Signaling Edistää mahasyövän etäpesäke kautta STST3 riippuva lisääntymisen merkkejä Fascin. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10,1371 /journal.pone.0125132

Academic Editor: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 06 tammikuu 2015; Hyväksytty: 11 maaliskuu 2015; Julkaistu: toukokuu 18, 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tätä työtä tuki National Natural Science Foundation of China nro 81200014 on JLW (http://www.nsfc.gov.cn/); Natural Science Foundation of Zhejiang nro LY14H160011 kohteeseen YSY; Ei LY12C08002 on ZJC ja nro LY12H13003 MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) on neljänneksi yleisin syöpä ja toiseksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti. Kuten useimmat syövät, etäpesäke on johtava syy epäonnistumiseen kliinisen hoidon GC. Diagnosoitu varhaisessa vaiheessa ilman etäpesäkkeitä, GC voidaan hävittää leikkauksella. Kun etäpesäke tapahtuu, ennuste GC on huomattavasti heikompi. Potilailla, joilla on laaja etäpesäkkeitä, tulos leikkauksen yhdistettynä kemoterapiaa ja immunoterapia on kaukana ihanteellisesta, joiden kokonaispituus 5 vuoden pysyvyys oli vain 24% [1,2]. Siksi on kiireellinen tarve ymmärtää paremmin mekanismin GC etäpesäke kehittämiseksi parempi terapeuttinen strategia.

Fas signalointireitin on yksi klassisen mekanismeja apoptoosin [3]. Ligaation jälkeen sen luonnollisen ligandin, FasL, Fas-reseptori muodostaa syöttämällä indusoivan signalointikompleksiin, jolloin kaspaasi-8, joka puolestaan ​​aktivoi alavirran kaspaasit, jolloin apoptoosin [4]. On raportoitu, että Fas-välitteistä solun tappaminen on vastuussa syövän toiminto Fas-signalointireitin eturauhassyövän [5]. Useimmissa kasvaimia, sen sijaan, että apoptoosin indusoimiseksi, Fas aktivaatiota edistää kasvaimen etenemistä [6,7]. Kasvainsolut usein vastaamaan Fas stimulaation tiiviimmän leviämisen [8,9]. Useat tutkimukset ovat myös osoittaneet, että Fas signalointi voi edistää kasvainsolun muuttoliike ja invaasiota [10-12]. Eräässä tuoreessa tutkimuksessa, korkea Fas ilmentyminen GC-soluissa on osoitettu korreloivan esiintyminen etäpesäkkeitä alueellisiin imusolmukkeisiin [13], mikä viittaa siihen, että Fas signalointi edistää etäpesäkkeiden mahasyövän.

Fascin, aktiinia -bundling proteiinia, on todettu olevan keskeinen molekyyli tuumorimetastaasissa [14]. Fascin on tärkeä rooli tuumorin solujen vaeltamiseen ja ilmentymistä Fascin lisääntyy useita erilaisia ​​syöpiä, mukaan lukien GC [15,16]. Fascin on suora STAT3 kohdegeenin vasteena IL-6 sekä hiiren että ihmisen rintasyövän soluissa [17]. Fas signalointi on raportoitu olevan mukana aktivointiin STAT3 [18-20]. Siksi me spekuloida, että Fas signalointi edistää GC solujen vaeltamiseen ja myöhemmät tuumorietäpesäke kautta STAT3 riippuvaista säätelyä Fascin.

Tässä tutkimuksessa suunniteltiin osoittamaan osallistumista Fas säätelyyn Fascin ilmaisun STAT3 aktivaation in AGS soluissa. Yritimme yhdistää parannetun Fascin tasolla soluliikkuvuus ja etäpesäkkeiden AGS solujen in vivo
. Olemme myös analysoineet korrelaatio Fas ja Fascin mRNA-tasot kasvainkudoksissa potilailta GC. Toivottiin, että havainnot paljastaisi uudella mekanismilla GC etäpesäke, joka muodostaa pohjan tulevaa kehitystä Fas-pohjainen terapeuttinen edistyneeseen GC.

Materiaalit ja menetelmät

Human kudosnäytteet

Ihmisen GC kudosnäytteiden kerättiin 23 potilasta (14 metastasiaa ja 9 ilman etäpesäkkeitä) leikkaukseen ennen kemoterapiaa Zhejiang Cancer Hospital (Hangzhou, Kiina) välillä 2012 ja 2014. Clinical potilaiden ominaisuuksiin GC ovat yhteenveto taulukossa 1. tutkimuksessa noudattanut asetusten terveysministeriön Kiinan ja Maailman terveysjärjestön tutkimus eettinen tarkistuskomitea kansainvälisiä ohjeita tutkimuksen ihmiseen kohdistuvan ja Helsingin julistuksen eettisiä periaatteita lääketieteellisen tutkimustyön ihmiseen kohdistuvan. Tutkimuksen protokolla tarkasteli ja hyväksynyt Institutional Review Board Zhejiangin Cancer sairaalan. Kirjallinen tietoinen suostumus saatiin kustakin potilaille ennen tutkimuksen aloittamista.

Reagenssit

Hiiren anti-humaani-Fas (2R2) monoklonaalinen vasta-aine hankittiin eBioscience (San Diego, CA, USA) . Hiiren anti-humaani-Fas (CH11) monoklonaalinen vasta-aine ja STAT3 estäjä S3I-201 ostettiin Merck Millipore (Bedford, MA, USA). Kanin anti-ihmisen STAT3 (79D7) ja anti-humaani-fosforyloitua STAT3 (D3A7) monoklonaalisia vasta-aineita ostettiin Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Hiiren anti-ihmisen Fascin (D-10) monoklonaalinen vasta-aine, ihmisen Fascin siRNA, STAT3 siRNA, negatiivinen kontrolli-siRNA (NC siRNA), ja STAT3 estäjä, Stattic, ostettiin Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). CCK8 soluproliferaatiota pakki ostettiin Dojindo Molecular Technologies (Kumamoto, Japani). Anneksiini V-FITC apoptoosin detektioreagenssipakkaus ostettiin Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Transwell kammiot (8 um huokoskoko) ostettiin Costar (Cambridge, MA, USA).

Eläimet

Kuuden viikon ikäisiä kateenkorvattomia nude-hiiriä hankittiin SIPPR-BK Experimental animal Co (Shanghai, Kiina). Hiiret sijaitsevat patogeenittomassa laitokseen. Kokeelliset protokollat ​​tarkistettiin ja hyväksyttiin Animal Care ja käyttö komitean Zhejiangin Cancer sairaalan.

Solut ja soluviljelmä

Ihmisen GC solulinjat AGS ja MNK-45 saatiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) ja pidettiin 1640 viljelyalustaan, joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia (FBS) 37 ° C: ssa, 5% CO _2.

Western blot-analyysi

yhteensä 20 ug raakaa uutetut proteiinit solulysaateista erotettiin 10% natriumdodekyylisulfaattia polyakryyliamidigeelielektroforeesilla ja siirrettiin polyvinylideenidifluoridi kalvoja (Millipore, Billerica, MA). Membraanit blokattiin 5% BSA: lla Tris-puskuroitua suolaliuosta plus 0,05% Tween-20, ja inkuboitiin sitten vastaavan ensisijaisen vasta-aineita, 4 ° C: ssa yön yli. Kun oli pesty Tris-puskuroidulla suolaliuoksella plus 0,05% Tween-20, kalvoja inkuboitiin vastaavan HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineita. Proteiinit saatiin näkyviin käyttäen SuperSignal West Femto Maximum (Thermo, IL, USA).

havaitseminen apoptoosin

AGS-soluja (2 x 10 ^{5 /ml), käsiteltiin 1 tai 5 ug /ml anti-Fas monoklonaalista vasta-ainetta (anti-Fas) tai isotyypin vasta-aine (ISO) 24 tunnin ajan, apoptoottiset solut värjättiin anneksiini V-FITC: llä ja propidiumjodidilla 5 minuutin ajan 4 ° C: ssa pimeässä ja analysoitiin sitten virtaussytometrialla FACSCalibur -virtaussytometrissä (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).}

syöpäsolun migraatiokokeessa in vitro

AGS soluja (1 x 10 ^{6 /ml), käsiteltiin 5 ug /ml anti-Fas tai ISO 2 tuntia 37 ° C: ssa. Sitten 2 x 10 5 AGS kasvaimen solut siirrettiin 100 ui seerumitonta median ja ympätään huipulle kammioon Transwell kammioiden (8 um huokoskoko). Pohja kammio täytettiin 800 ui 1640 viljelyväliaineeseen, joka sisälsi 20% FBS. Sen jälkeen, kun 48-tunnin inkuboinnin 37 ° C: ssa, solut kiinnitettiin metanolilla 20 minuutin ajan, ja pestiin PBS: llä kolme kertaa, 20 minuuttia kukin. Kiinnitetyt solut värjättiin 10 mg /ml DAPI 30 minuutin ajan ja pestiin PBS: llä. Värjätyt solut tutkitaan fluoresenssi mikroskoopilla. Määrittämään vaikutukset STAT3 on solujen vaeltaminen, 10 uM Stattic lisättiin elatusaineeseen. Määrittää roolin Fascin että solujen vaeltaminen, ennen anti-Fas-stimulaation, yhteensä 40 nM Fascin siRNA-dupleksit transfektoitiin AGS-soluja (2 x 10 5 /kuoppa) käyttäen 3 ui INTERFERin siRNA transfektioreagenssia ( Polyplus, NY, CA, USA) 24-kuoppalevylle. Tehokkuutta Fascin ohimenevää hiljentäminen vahvistettiin Western-blottauksella.}

Soluproliferaatiomääritys

AGS soluja käsiteltiin 5 ug /ml anti-Fas tai ISO 24, 48 tai 72 h, ja 20 ui CCK8 lisättiin kuhunkin kuoppaan ja soluja inkuboitiin vielä 4 h. Absorbanssi jokaisen luettiin 450 nm: ssä. Soluproliferaatiota laskettiin jakamalla OD käsiteltyjen solujen OD valvonnan soluja.

Reaaliaikainen PCR

Kokonais-RNA uutettiin Trizol-reagenssilla, ja cDNA syntetisoitiin käyttämällä PrimeScript RT reagenssipakkauksen (Takara Bio Inc. Otsu, Shiga, Japani). Seuraavat PCR-olosuhteita käytettiin: 1 sykli 95 ° C: ssa 30 s ja sitten 40 sykliä 5 s 95 ° C: ssa ja 34 s 60 ° C: ssa. Reaaliaikainen PCR suoritettiin Applied Biosystems 7500 reaaliaikainen PCR-järjestelmä (Foster City, CA, USA). Tulokset normalisoitiin vastaan ​​β-aktiini RNA: ta. Sekvenssit PCR-alukkeet olivat seuraavat: sense, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'ja anti-sense, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3' ja β-aktiini; sense, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'ja anti-sense, 5'AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3' Fas; sense, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'ja anti-sense, 5'-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3' varten Fascin.

keuhkometastaasitestissä in vivo

AGS soluja ( 5 x 10 ^{6 per hiiri) esikäsitelty anti-Fas tai ISO 2 h injektoitiin 6-wK-old nude-hiiriin häntälaskimon kautta. Määrittämään vaikutukset STAT3 kasvainten etäpesäkkeitä ja Fascin ilmaisun in vivo
, AGS kasvainsoluja (5 x 10 6 per hiiri) injektoitiin suonensisäisesti 6-WK-vuotias nude-hiirissä ja 24 tuntia myöhemmin hiiret saivat suonensisäisen injektion S3I-201 (5 mg /kg, joka 2 päivä yhteensä 3 kertaa). Kolmen viikon kuluttua solujen injektion jälkeen hiiret nukutettiin hengittämisen kloraalihydraatti ja lopetettiin ja keuhkot poistettiin ja numerot keuhkojen kasvainpesäkkeet laskettiin preparointimikroskooppia.}

immunohistokemia

kasvainkeskusten keuhkoista kiinnitettiin 10% formaliinilla, vesi etanolissa, ja upotettiin parafiiniin. Tissue leikattiin 4 um, on asennettu dioja ja kuivattiin 60 ° C: ssa 4 h. Seuraavat lyhyt proteolyyttisen digestion ja peroksidaasin estää kudoksen dioja käyttämällä 2,5% vetyperoksidia metanolissa 30 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, levyt inkuboitiin anti-Fascin-vasta-ainetta yli yön 4 ° C: ssa. Pesun jälkeen laseja inkuboitiin peroksidaasileimatulla polymeerin ja alustan kromogeenilla. Lopuksi näytteet inkuboitiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, joka sisälsi diaminobentsidiini 5 min. Olympus mikroskooppi käytettiin visualisoimaan värjäys kasvainkudoksessa.

Tilastollinen analyysi

Tuloksia verrattiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVA. Spearman arvojärjestys korrelaatio testiä käytettiin tutkimaan korrelaatioita välisiä Fas ja Fascin mRNA kasvainkudoksissa GC potilaista. P-arvo on < 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

aktivointi Fas signalointi edistää muuttoa AGS solujen

Ensinnäkin varmistimme ilmaus Fas-reseptorin AGS ja MNK-45-solujen reaaliaikaisella PCR ja Western blotting-analyysit ja löysi MNK-45 solut ilmensivät korkeampia Fas-reseptorin kuin AGS soluja teki (kuvio 1A). Molemmat solulinjat osoittivat myös korkean FasL ilmentymisen (tuloksia ei ole esitetty). Olemme ensi tutkinut, ligaatio Fas-reseptorin voivat aiheuttaa apoptoosin AGS ja MNK-45 soluihin. Stimulaation jälkeen anti-Fas tai ISO pitoisuutena 1 ug /ml tai 5 ug /ml, se oli MNK-45, mutta ei AGS-solut osoittivat pitoisuudesta riippuvaa parantamiseksi apoptoosia (kuvio 1B). Näin ollen, olemme tutkineet, onko aktivointi Fas signalointi voi aiheuttaa muita vaikutuksia AGS solujen sijasta apoptoosin seuraavissa kokeissa. AGS solumigraation määritys suoritettiin in vitro
ja löysimme kulkeutumista AGS solujen huomattavasti stimulaation jälkeen 5 ug /ml anti-Fas (kuvio 1 C). Sen mahdollisuuden poissulkemiseksi, että lisääntynyt migraatio AGS solujen aiheuttama kohonnutta leviämisen jälkeen anti-Fas stimulaatio, tutkimme leviämisen ACS-solujen ja löytänyt selvää eroa solujen käsitelty tai ilman anti-Fas (kuvio 1 D), mikä viittaa siihen, että lisäys solujen vaeltaminen ei ollut seurausta proliferatiivisen ominaisuudet sen jälkeen, kun anti-Fas-stimulaation. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että Fas signalointi voi lisätä liikkuvuutta GC solujen in vitro
.

aktivointi Fas signalointi yliaktiivista Fascin ilmentymistä AGS soluissa aktivoimalla STAT3

on raportoitu, että Fas signalointi on osallisena aktivointiin STAT3 [18-20]. Esillä olevassa tutkimuksessa tutkimme onko aktivointi Fas signaloinnin aiheuttaisi STST3 aktivaatio AGS soluissa. Kuten on esitetty kuviossa 2A, stimuloinnin jälkeen anti-Fas lyhyen ajan, fosforyloitu STAT3 oli merkittävästi lisääntynyt AGS-soluissa. On myös dokumentoitu, että Fascin voi lisätä liikkuvuutta kasvainsolujen ja on suora kohdegeeni STAT3 [17]. Niinpä havaitsimme ilmaus Fascin vuonna AGS soluissa stimulaation jälkeen anti-Fas. Kuten on esitetty kuviossa 2B, mRNA tasot Fascin nostettiin ajasta riippuvalla tavalla, ja huipentui jälkeen 12 h anti-Fas-stimulaation AGS-soluissa. Edelleen vahvistaa säätelyä Fascin, olemme havainneet proteiinin taso Fascin ja löysi lisäämällä Fascin proteiinin tasot anti-Fas, mutta ei ISO käsitelty AGS-soluissa (kuvio 2C). Osoittaa suhdetta STAT3 ja Fascin in AGS-soluissa sen jälkeen, kun Fas-signaloinnin aktivointi, käsittelimme AGS solut Stattic, spesifinen inhibiittori STAT3, ennen anti-Fas-stimulaation ja totesi, että anti-Fas-indusoitua kasvua Fascin proteiini oli täysin kumottu kun läsnä on Stattic (kuvio 2D). Olemme voisi myös havaita aktivointia STAT3 on AGS-soluissa sen jälkeen, kun anti-Fas-stimulaation 24 tuntia, mutta aktivoituu määrin oli hieman alempi kuin vastaanotetun 2h anti-Fas-stimulaation (kuvio 2C ja 2D). Edelleen vahvistaa, että STST3 oli mukana säätelyyn Fascin ilmaisun jälkeen anti-Fas stimulaatio, me kaatanut STAT3 ilmaisua käyttäen STST3 erityisiä siRNA ennen anti-Fas stimulaatiota ja havainnut STAT3-knockdown tehon Western-blottauksella analyysejä. Kuten kuviossa 2E, STST3 siRNA mutta ei NC siRNA transfektio merkittävästi esti STST3 ilmentymistä AGS soluissa. Odotetusti, The Fascin proteiinia ei todettu STST3-pudotus AGS solujen jälkeen anti-Fascin stimulaatio (kuvio 2F). Nämä tulokset viittaavat siihen, että aktivoitu STAT3 tarvitaan ylössäätelyyn Fascin ilmentymisen aiheuttaman Fas signaloinnin aktivaatiota AGS-soluissa.

Fas signalointi-edistää solumigraation riippuu STAT3 /Fascin reitin

Se on ollut osoittaneet, että Fascin välittää kasvainsolujen muuttoliike [17]. Esillä olevassa tutkimuksessa tutkimme onko knockdovvn Fascin estäisivät Fas signalointi aiheuttaman solumigraatio in vitro
. Olemme havainneet, että lasku Fascin proteiinia voitiin havaita AGS transfektoiduissa soluissa Fascin siRNA mutta ei NC siRNA (kuvio 3A). Sitten suoritimme kasvainsolu muuttoliike määrityksissä havaitsemaan motiliteettia Fascin-pudotus AGS solujen jälkeen anti-Fas stimulaatiota. Kuten on esitetty kuviossa 3B, kun anti-Fas-stimulaation merkittävästi edistänyt migraation AGS soluja, tämä vaikutus oli ilmeisesti inhiboi käsitellyissä soluissa Fascin siRNA, mutta ei NC siRNA. Koska STAT3 tarvitaan Fas signaloinnin aiheuttama Fascin ilmentymisen AGS-soluissa, olemme seuraavassa analysoitiin vaikutuksia STAT3 Fas signalointi-välitteistä solumigraatiota in AGS-soluissa. Kuten kuviossa 3C, kun käsitelty Stattic, Fas signalointi-tehostettu solujen siirto on poistettu kokonaan. Tämän mukaisesti tulos, STST3 siRNA myös merkittävästi esti Fas- signalointi-tehostettu AGS solumigraation (kuvio 3D). Nämä tulokset osoittavat, että Fas signalointi edistää solujen vaeltamiseen ja se riippuu aktivointi STAT3 /Fascin reitin.

Fas signalointi edistää solujen etäpesäke in vivo aktivoimalla STST3 /Fascin reitin

edelleen osoittamiseksi suhde Fas signalointi ja GC etäpesäke, siirsimme anti-Fas-stimuloitujen AGS solujen suonensisäisesti nude-hiiriin, ja havaitaan kasvainpesäkkeet keuhkoihin. Olemme löytäneet kasvaimen pesäkkeitä keuhkoissa hiirten siirretään soluja esikäsiteltiin anti-Fas, mutta ei ISO (kuvio 4A). Täsmennetään suhdetta Fascin ja Fas signalointia välittämä kasvaimen etäpesäke, suoritimme immunohistokemia havaitseminen Fascin kasvainkudoksissa. Havaitsimme korkeampi Fascin ilmaus kasvainkudoksissa hiiristä sai anti-Fas-stimuloitujen AGS soluja kuin hiiriltä sai ISO tai un stimuloimaa AGS-soluissa (kuvio 4B). Koska STAT3 tarvitaan anti-Fas aiheuttama säätelyä Fascin ja lisääntynyt potevilla AGS soluissa, tutkimme vaikutuksia STAT3 on AGS solun etäpesäkkeitä in vivo
. Käsittelyn jälkeen S3I-201, kemiallinen anturi estäjä STAT3 toimintaa [21], kasvainpesäkkeet keuhkoissa vähensi merkittävästi (kuvio 4C). Lisäksi Fascin ilmentyminen kasvaimen kudoksissa S3I-201 käsitellyillä hiirillä oli myös esti (kuvio 4D), mikä viittaa valvonta Fascin mukaan STAT3 in vivo
. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että Fas signalointi voi edistää solujen etäpesäke in vivo
, riippuu aktivointi STAT3 /Fascin reitin.

Fascin ilmentyminen korreloi Fas ilme kasvaimen kudoksissa potilaalla on GC

Koska Fas signalointi edistää Fascin ilme, päätimme oliko korrelaatio Fas ja Fascin ilmentyminen kasvainkudoksessa GC potilaista. Analysoimme mRNA-tasoja Fas- ja Fascin kasvainkudoksessa GC potilaista. Kuten kuviossa 5 on esitetty, mRNA: n tasot Fas- ja Fascin oli positiivinen korrelaatio. Tämä tulos antaa näyttöä käsitystä, että Fas signalointi edistää Fascin ilmaisun GC.

Keskustelu

yleensä seuraavat trimeroituminen Fas- jälkeen ligaatio FasL, apoptoosin aloitetaan. Fas klusterin rekrytoi FADD sovitin proteiinia ja muodostaa kuoleman aiheuttavia signaalikompleksin aiheuttaen kaspaasi-8. Kaspaasi 8 puolestaan ​​aktivoi alavirran kaspaasit, kuten kaspaasi-3, joka huipentui apoptoosin [4]. Sen lisäksi aiheuttaa solukuoleman Fas myös lähettää lisääntymistä ja aktivaatiosignaaleille kasvainsoluissa [22]. On raportoitu, että Fas välittämisessä astric limakalvon solujen proliferaatio on ERK riippuvainen [23], mutta aktivaatio ERK-signalointireitin voi indusoida proliferaatiota B16 hiiren melanoomasoluja [24]. Siksi Fas voi aiheuttaa leviämisen osa, mutta eivät kaikki kasvainsoluja ja asiaa mekanismi on edelleen suurelta osin tuntemattomia. Tässä löysimme Fas oli pätemätön asiakkuutta AGS solujen lisääntymisen. Fas signalointi on myös osoitettu indusoivan liikkuvuutta apoptoosin-resistenttien kasvainsolujen kautta urokinaasi plasminogeeniaktivaattori [10]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme unraveled uuden mekanismin Fas välittävän kasvaimen solun liikkuvuus, joka riippui säätelyä Fascin aktivoimalla STAT3.

Uskotaan yleisesti, että paeta aiheuttamaa apoptoosia FasL-positiivisten T solut, kasvainsolut ovat kehittäneet useita tapoja vastustaa FasL-indusoitua solun tappamisen vaikutuksia. Kasvainsolujen on osoitettu säätelevät vaimentaen tai jopa menettää Fas-reseptorin ilmentymisen [25], tai kumota solunsisäisen Fas signalointireitin mutaation kautta Fas [26]. Tuumorisolut voidaan myös sää- dellä solujen FADD-, kuten IL-1β-konvertoivan entsyymin inhiboivaa proteiinia tai fosfory- kaspaasin 8 estää kaspaasi-8 ja estää alas-stream-signalointireitin Fas [27,28]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme löytäneet aktivointi STAT3 on AGS-soluissa sen jälkeen, kun anti-Fas-stimulaation. Aktivointi STAT3 on osoitettu suojaavan syöpäsolujen apoptoottisen ärsykkeen peräisin Fas-reseptorin [29]. Esikäsittely STAT3 estäjä ei aloittaa AGS solujen apoptoosia Fas aktivaatiota (tuloksia ei ole esitetty), mikä viittaa siihen, että aktivaatio STAT3 ei ole mukana estämään AGS solujen Fas-indusoitua apoptoosia.

Se on ollut raportoitu, että Lewisin keuhkokarsinooma soluja konstitutiivisesti resistenttejä Fas-välitteisen apoptoosin, mutta yliekspressio Fas näiden solujen avulla Fas-välitteistä apoptoosia, kun ristisilloitukseen agonistin anti-Fas-vasta-ainetta [30], mikä viittaa siihen, että on olemassa laadullinen ero aktivoidussa signalointisoluille vastaanottaa, joka määrittää kohtalo jälkeen Fas signalointi ligaation. Taso Fas ilmentymisen on kohtuullinen AGS soluissa ja stimuloidaan suuri annos anti-Fas (20 ug /ml); löysimme että AGS solut osoittivat hieman lisääntynyt apoptoosi (tuloksia ei ole esitetty). Tämä osoittaa, että apoptoosin induktio ja muuttoliikkeen edistäminen signalointi voi molemmat aktivoitua jälkeen Fas-reseptorin ligaatio, jotka voivat liittyä tasolle anti-Fas käytetään tällaisissa kokeissa. Jos korkea Fas-signaloinnin toimitusta ei voida saavuttaa fysiologisissa olosuhteissa, muuttoliikkeen edistäminen signalointi valtaavat jälkeen Fas-reseptorin ligaatio ja aiheuttaa lisääntynyt GC etäpesäke.

toteuttamiseksi kauko etäpesäkkeitä, voimakas liikkuvuus vaaditaan kasvainsolujen . Fascin, kuin aktiini-niputtaminen proteiini, on tärkeää, että ylläpito ja vakautta rihmamaisia ​​aktiini nippuja, ja siten osallistuvat solun liikkuvuus [31]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme paljasti, että Fas signalointi oli mukana ylössäätelyyn Fascin ilmaisun. IL-6 on raportoitu upregulate Fascin ilmentymisen GC-solujen [32]. Fas-signaloinnin on myös osoitettu edistämään IL-6 eritystä kasvainsoluissa [33]. Nämä todisteet osoittavat, että Fas signalointi todennäköisesti vahvistaa vaikutus Fascin ylösajon kautta IL-6. Olemme lisäksi osoittaneet, että Fas- ja Fascin ilmaisuja olivat läheistä sukua GC potilailla, vahvistaa, kuinka tärkeää on Fas-Fascin akselin prosessissa GC etäpesäkkeiden.

Yhdenmukaisesti aiempien tutkimusten kanssa, olemme osoittaneet, että Fas-indusoitua aktivaatiota STAT3 oli tarvitaan säätelyä Fascin. Nude-hiirimallissa keuhkometastaasitestissä malli, STAT3-inhibiittori, S3I-201, voi estää Fascin ilmentymistä tuumorikudoksessa. Hiiren rekombinantti FasL kyennyt aktivoimaan STAT3 aktivoinnin (tietoja ei esitetä), viittaa siihen, että aktivoitu signalointi aloitetaan FasL on AGS itse soluja on riittävä välittämään STAT3 aktivointi ja alavirtaan Fascin säätelyä. Lisäksi säätelevät Fascin ilmaisua, STST3 on myös mukana solujen lisääntymisen ja eloonjäämisen, onkogeneesiin, ja syövän etäpesäkkeiden GC [34-36]. Suun kautta otettava pienimolekyylisiä STAT3 estäjä on keksitty, ja se voisi olla mahdollinen terapeuttinen aine ihmisen syövän [37]. Spekuloida, että STAT3 estäjä on lupaava aine, jota voidaan käyttää kliinisissä GC terapiassa lähitulevaisuudessa.

Yhteenvetona, me osoitamme, että Fas signalointi on osallisena GC etäpesäkkeiden kautta STAT3-riippuvaista säätelyä Fascin. Tuloksemme osoittavat myös Fas /STAT3 /Fascin reitin voi olla molekyylikohteena GC terapia.

Kiitokset

Arvostamme tohtori Hua Wang tarjota cDNA uutettu kasvain kudoksista GC potilaiden . Olemme myös arvostettu päätoimittaja Medjaden muuttamiseksi tämän käsikirjoituksen.

• PLoS ONE: terveyskäyttäytymistä Korean Mahalaukun Cancer Survivors kanssa Hypertensio: taipumus analyysi KNHANES III-V (2005-2012)
• PLoS ONE: ATOH1 voi säädellä tuumorigeenisyyteen mahasyövän indusoi- malla erilaistumiseen Cancer Stem Cells