PLOS ONE: Fas Signaling Favorise cancer gastrique Métastase par STAT3-dépendante de régulation positive Fascin

Résumé

Contexte

Fas transducteurs et activateurs de la transcription 3 (STAT3) signaux de signalisation activé est requis pour surexpression Fascin. Comme une protéine actine-regroupement, Fascin peut arbitrer le cancer gastrique (GC) la migration cellulaire.

cancer gastrique cellules AGS de

Méthodes ont été traités avec anti-Fas (5 ug /ml) pendant 2 h , afin de stimuler l'activation de la signalisation de Fas. Le in vitro
migration des cellules AGS de signalisation activées par Fas a été évaluée en utilisant des chambres Transwell. Les niveaux de Fascin et STAT3 phosphorylé ont été détectés par des analyses Western blot. Les souris nues ont été injectées par voie intraveineuse avec des cellules AGS traités par anti-Fas ou traités avec un inhibiteur de STAT3 sans anti-Fas; métastases tumorales pulmonaires ont été mesurées. Fascin expression de la protéine dans les tissus tumoraux a été détectée par immunohistochimie. Les niveaux d'ARNm de Fas et Fascin dans les tissus tumoraux de patients atteints de GC ont été mesurés par PCR en temps réel et leur corrélation a été analysée.

Résultats

L'activation de la signalisation de Fas favorisé la migration cellulaire et a donné lieu à STAT3 dépendant de la régulation positive Fascin dans les cellules AGS. STAT3 amélioré les niveaux Fascin in vivo
. Fascin était le médiateur de Fas AGS migration cellulaire induite par la signalisation- in vitro
et in vivo
. En outre, il y avait une corrélation positive entre les niveaux Fas et Fascin ARNm dans les tissus tumoraux provenant de patients du GC.

Conclusions

signalisation Fas favorise GC métastases à travers le STAT3 /voie Fascin, qui peut fournir une nouvelle cible pour la thérapie de GC

Citation:. Yang Y, Zhao Q, Cai Z, Cheng G, Chen M, Wang J, et al. (2015) Fas Signaling Favorise cancer gastrique Métastase par STAT3-dépendante de régulation positive Fascin. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10.1371 /journal.pone.0125132

Academic Editor: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Institut de recherche, ÉTATS-UNIS

Reçu: Janvier 6, 2015; Accepté le 11 Mars 2015; Publié: 18 mai 2015

Droit d'auteur: © 2015 Yang et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le papier

financement:. Ce travail a été soutenu par la national science Foundation naturel de la Chine n ° 81200014 à JLW (http://www.nsfc.gov.cn/); la Fondation des sciences naturelles de la province du Zhejiang n ° LY14H160011 à YSY; N LY12C08002 à ZJC et n LY12H13003 à MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique (GC) est le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause de décès liés au cancer dans le monde entier. Comme la plupart des cancers, la métastase est la principale cause de l'échec du traitement clinique de GC. Diagnostiqué à un stade précoce sans métastases, GC peut être éradiquée par la chirurgie. Une fois que les métastases se produit, le pronostic de GC est bien pire. Chez les patients ayant une vaste métastase, le résultat de la chirurgie associée à la chimiothérapie et l'immunothérapie est loin d'être optimale, avec un taux global de survie à 5 ans étant seulement 24% [1,2]. Par conséquent, il existe un besoin urgent pour une meilleure compréhension du mécanisme de la GC métastase afin de développer une meilleure stratégie thérapeutique.

Fas voie de signalisation est l'un des mécanismes classiques pour induire l'apoptose [3]. Après ligature avec son ligand naturel, le FasL, le récepteur Fas forme le complexe induisant la mort de signalisation, ce qui provoque l'activation de la caspase-8, qui à son tour active les caspases en aval, conduisant à l'apoptose [4]. Il a été rapporté que la destruction cellulaire à médiation par Fas est responsable de la fonction anti-cancéreuse de la voie de signalisation de Fas dans le cancer de la prostate [5]. Cependant, dans la plupart des tumeurs, au lieu d'induire l'apoptose, l'activation de Fas signalisation favorise la progression de la tumeur [6,7]. Les cellules tumorales répondent souvent à Fas stimulation avec la prolifération accrue [8,9]. Plusieurs études ont également montré que la signalisation de Fas peut favoriser la migration des cellules tumorales et à l'invasion [10-12]. Dans une étude récente, l'expression élevée Fas dans les cellules du GC a été démontré en corrélation avec l'apparition de métastases aux ganglions lymphatiques régionaux [13], ce qui suggère que la signalisation Fas favorise la métastase du cancer gastrique.

Fascin, une actine -bundling protéine a été identifiée comme étant une molécule clé dans les métastases tumorales [14]. Fascin joue un rôle important dans la migration des cellules tumorales et l'expression de Fascin est augmentée dans plusieurs types de cancers, y compris GC [15,16]. Fascin est un gène cible de STAT3 directe en réponse à IL-6 chez la souris et des cellules de cancer du sein humain [17]. la signalisation Fas a été signalé à être impliquée dans l'activation de STAT3 [18-20]. Par conséquent, nous pensons que la signalisation Fas favorise la migration des cellules de GC et les métastases de la tumeur ultérieure par la surexpression de STAT3 dépendant de Fascin.

La présente étude a été conçue pour démontrer l'implication de Fas dans la régulation de l'expression Fascin par l'activation de STAT3 dans les cellules AGS. Nous avons tenté de lier le niveau Fascin amélioré avec la motilité cellulaire et la métastase des cellules AGS in vivo
. Nous avons également analysé la corrélation entre les niveaux d'ARNm de Fas et Fascin dans les tissus tumoraux de patients atteints de GC. On espérait que nos résultats révéleraient un nouveau mécanisme pour GC métastase, fournissant une base pour le développement futur de la stratégie thérapeutique basée-Fas pour GC avancé.

Matériels et méthodes

échantillons de tissus humains

GC Human échantillons de tissus ont été prélevés sur 23 patients (14 avec métastases et 9 sans métastases) subissant une intervention chirurgicale avant la chimiothérapie à l'hôpital du cancer du Zhejiang (Hangzhou, Chine) entre 2012 et 2014. les caractéristiques cliniques des patients atteints de GC sont résumées dans le tableau 1. l'étude était conforme aux règlements du ministère de la Santé de la Chine et les directives internationales du comité d'examen éthique de la recherche Organisation mondiale de la santé pour la recherche impliquant des sujets humains et la Déclaration d'Helsinki sur les principes éthiques applicables aux recherches médicales sur des sujets humains. Le protocole d'étude a été examiné et approuvé par le conseil de l'Hôpital du Zhejiang Cancer Institutional Review. Le consentement éclairé écrit a été obtenu à partir de chacun des patients avant d'étudier le début.

Réactifs

Souris anti-Fas humain (2R2) anticorps monoclonal a été acheté chez eBioscience (San Diego, CA, USA) . inhibiteur de l'anticorps et STAT3 souris anti-Fas humain (CH11) monoclonal S3I-201 ont été achetés chez Merck Millipore (Billerica, MA, USA). Le STAT3 de lapin anti-humain (79D7) et STAT3 phosphorylé anti-humain (D3A7) des anticorps monoclonaux ont été achetés auprès de Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). La souris Fascin (D-10) anticorps monoclonal anti-humain, Fascin humaine siRNA, STAT3 siRNA, siRNA contrôle négatif (NC siRNA), et un inhibiteur de STAT3, Stattic, ont été achetés auprès de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Le kit de prolifération des cellules a été acheté auprès CCK8 DOJINDO Technologies moléculaires (Kumamoto, Japon). Le kit de détection de l'apoptose annexine V-FITC a été acheté auprès de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Les chambres Transwell (taille des pores de 8 pm) ont été achetés auprès de Costar (Cambridge, MA, USA).

Animaux

Six semaines vieilles souris nues athymiques ont été obtenues à partir de SIPPR-BK Experimental Co. animale (Shanghai, Chine). Les souris ont été logées dans un établissement exempt d'agents pathogènes. Les protocoles expérimentaux ont été examinés et approuvés par le soin et l'utilisation des animaux Comité de l'Hôpital du Zhejiang Cancer.

Cellules et

Les droits de cellules GC lignes AGS de cellules de culture et MNK-45 ont été obtenues auprès de l'American Type culture Collection (Manassas, VA, USA) et maintenus en 1640 milieu de culture contenant 10% de sérum de veau fœtal (FBS) à 37 ° C avec 5% de CO _2.

analyse par Western blot

Un total de 20 pg de protéines brutes extraites à partir des lysats cellulaires a été séparé par électrophorèse sur gel de polyacrylamide dodécylsulfate de sodium à 10% et transférées sur des membranes de difluorure de polyvinylidène (Millipore, Billerica, MA). Les membranes ont été bloquées avec 5% de BSA dans une solution saline tamponnée au Tris plus 0,05% de Tween-20 et ensuite incubées avec des anticorps primaires correspondant à 4 ° C pendant une nuit. Après lavage avec du tampon Tris salin plus 0,05% de Tween-20, les membranes ont été incubées avec des anticorps secondaires conjugués à HRP correspondants. Les protéines ont été visualisées en utilisant SuperSignal Ouest Femto Maximum (Thermo, IL, USA).

Détection de l'apoptose des cellules

cellules AGS (2 × 10 ^{5 /ml) ont été traités avec 1 ou 5 pg /ml d'anticorps anti-Fas, un anticorps monoclonal (anti-Fas) ou de l'anticorps d'isotype (ISO) pendant 24 h, les cellules apoptotiques ont été colorées avec de l'iodure annexine V-FITC et de propidium pendant 5 min à 4 ° C dans l'obscurité, puis analysés par cytométrie en flux avec un cytomètre de flux FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).}

Cancer test de migration cellulaire in vitro

cellules AGS (1 × 10 ^{6 /ml) ont été traités avec 5 ug /ml d'anti-Fas ou ISO pendant 2 h à 37 ° C. Ensuite, 2 × 10 cellules tumorales 5 AGS ont été transférés dans 100 ul de milieu sans sérum et ensemencées à la chambre supérieure des chambres Transwell (8 um taille des pores). Le fond de chambre a été remplie avec 800 pi de milieu de culture 1640 contenant 20% de FBS. Après une incubation de 48 heures à 37 ° C, les cellules ont été fixées avec du methanol pendant 20 minutes, et on les lave avec du PBS trois fois, 20 minutes à chaque fois. Les cellules fixées ont été colorées avec 10 mg /ml de DAPI pendant 30 minutes et on les lave avec du PBS. Les cellules colorées ont été examinées sous un microscope à fluorescence. Afin de déterminer les effets de STAT3 sur la migration cellulaire, 10 pM de Stattic a été ajouté au milieu de culture. Pour déterminer le rôle de Fascin dans la migration des cellules, avant la stimulation anti-Fas, un total de 40 duplex nM Fascin siARN ont été transfectées dans des cellules AGS (2 × 10 5 /puits) en utilisant 3 ul de INTERFERin siRNA réactif de transfection ( Polyplus, NY, CA, USA) sur une plaque de 24 puits. L'efficacité de l'inactivation transitoire Fascin a été confirmée par Western blot.}

La prolifération cellulaire test

cellules AGS ont été traités avec 5 ug /ml anti-Fas ou ISO 24, 48, ou 72 h, et 20 ul de la CCK8 ont été ajoutés à chaque puits et les cellules ont été incubées pendant 4 h supplémentaires. L'absorbance de chaque puits a été lue à 450 nm. La prolifération cellulaire a été calculée en divisant la DO des cellules traitées avec les DO des cellules témoins.

PCR en temps réel

ARN total a été extrait avec le réactif Trizol et l'ADNc a été synthétisé à l'aide d'un PrimeScript RT kit de réactifs (Takara Bio, Inc. Otsu, Shiga, Japon). Les conditions de PCR suivantes ont été utilisées: 1 cycle à 95 ° C pendant 30 s, puis 40 cycles de 5 s à 95 ° C et 34 s à 60 ° C. PCR en temps réel a été réalisée sur un 7500 système en temps réel PCR Applied Biosystems (Foster City, CA, USA). Les résultats ont été normalisés contre l'ARN β-actine. Les séquences des amorces de PCR utilisées étaient les suivantes: sens, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'et anti-sens, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3' pour la β-actine; sens, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'et anti-sens, 5'AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3' pour Fas; sens

Lung essai de métastases, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'et anti-sens, 5'-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3' pour Fascin. vivo

cellules AGS à ( 5 × 10 ^{6 par souris) pré-traités avec anti-Fas ou ISO pendant 2 h ont été injectées dans des souris nude 6-wk-vieux via une veine de la queue. Afin de déterminer les effets de STAT3 sur les métastases de la tumeur et l'expression Fascin in vivo
, les cellules tumorales AGS (5 x 10 6 par souris) ont été injectés par voie intraveineuse dans des souris nude 6 semaines âgés et 24 h plus tard , les souris ont reçu une injection intraveineuse de S3I-201 (5 mg /kg tous les 2 jours pour un total de 3 fois). Trois semaines après l'injection des cellules, les souris ont été anesthésiées par inhalation de l'hydrate de chloral et sacrifiés, et les poumons ont été retirés et le nombre de foyers de tumeurs pulmonaires ont été comptées sous un microscope à dissection.}

immunohistochimie

des foyers de tumeurs dans les poumons ont été fixés dans du formol à 10%, déshydratés dans de l'éthanol, et inclus dans de la paraffine. Les coupes de tissus ont été coupées à 4 um, montées sur des lames et on le sèche à 60 ° C pendant 4 h. À la suite de courte digestion protéolytique et un bloc de peroxydase des lames de tissu à l'aide de 2,5% de peroxyde d'hydrogène dans du methanol pendant 30 minutes à la température ambiante, les lames ont été incubées avec l'anticorps anti-Fascin pendant une nuit à 4 ° C. Après lavage, les lames ont été incubées avec un polymère marqué à la peroxydase et le substrat chromogène. Enfin, les échantillons ont été incubés dans du tampon phosphate salin contenant de la diaminobenzidine pendant 5 min. Un microscope Olympus a été utilisé pour visualiser la coloration des tissus tumoraux.

L'analyse statistique

Les résultats ont été comparés à l'aide d'une analyse de variance. L'ordre de classement test de corrélation de Spearman a été utilisé pour examiner les corrélations entre les niveaux de Fas et Fascin ARNm dans les tissus tumoraux de patients du GC. Une valeur de p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative

Résultats

Activation de la signalisation Fas favorise la migration des cellules AGS

Tout d'abord, nous avons confirmé l'expression de. récepteur Fas dans AGS et MNK-45 cellules par PCR en temps réel et Western blot analyses et trouvé MNK-45 cellules ont exprimé plus récepteur Fas que les cellules AGS fait (figure 1A). Les deux lignées cellulaires ont également montré un niveau élevé d'expression de FasL (données non présentées). Nous avons ensuite examiné si la ligature du récepteur Fas pourrait induire l'apoptose dans AGS et MNK-45 cellules. Après stimulation avec des anticorps anti-Fas ou ISO à une concentration de 1 ug /ml ou 5 ug /ml, il a été MNK-45, mais pas les cellules AGS a montré l'amélioration dépendant de la concentration de l'apoptose (figure 1B). Par conséquent, nous avons cherché à savoir si l'activation de la signalisation de Fas pourrait provoquer d'autres effets sur les cellules AGS à la place de l'induction de l'apoptose dans les expériences suivantes. L'essai de migration des cellules AGS a été réalisée in vitro hôtels et nous avons trouvé que la migration des cellules AGS a été significativement augmentée après stimulation avec 5 pg /ml d'anticorps anti-Fas (figure 1C). Pour exclure la possibilité que l'augmentation de la migration des cellules AGS a été causée par leur prolifération élevée après anti-Fas stimulation, nous avons examiné la prolifération des cellules ACS et trouvé aucune différence évidente entre les cellules traitées avec ou sans anti-Fas (figure 1D), ce qui suggère que l'augmentation de la migration cellulaire ne résulte pas des propriétés prolifératives après stimulation anti-Fas. Pris ensemble, ces résultats indiquent que la signalisation Fas peut augmenter la motilité des cellules GC in vitro
.

Activation de la signalisation Fas upregulated expression Fascin dans les cellules AGS par l'activation de STAT3

Il a été rapporté que la signalisation de Fas est impliqué dans l'activation de STAT3 [18-20]. Dans la présente étude, nous avons examiné si l'activation de la signalisation Fas entraînerait l'activation de STAT3 dans les cellules AGS. Comme on le voit sur la figure 2A, après stimulation par anti-Fas pendant une courte période, le STAT3 phosphoryle était significativement augmentée dans les cellules AGS. Il a également été démontré que Fascin peut augmenter la motilité des cellules tumorales et est un gène cible directe de STAT3 [17]. Ainsi, nous avons détecté l'expression de Fascin dans les cellules AGS après stimulation par anti-Fas. Comme on le voit sur la figure 2B, les taux d'ARNm de Fascin ont augmenté d'une manière dépendante du temps et ont abouti au bout de 12 h de stimulation anti-Fas dans les cellules AGS. Pour confirmer davantage la régulation positive de Fascin, nous avons détecté le niveau de Fascin protéique et a constaté l'augmentation des niveaux de protéines Fascin anti-Fas, mais pas ISO traités cellules AGS (figure 2C). Pour démontrer la relation entre STAT3 et Fascin dans les cellules AGS après Fas activation de signalisation, nous avons traité les cellules AGS avec Stattic, un inhibiteur spécifique de STAT3, avant anti-Fas stimulation et a constaté que l'augmentation anti-Fas-induite en protéines Fascin a été totalement abrogée en présence d'Stattic (figure 2D). On pourrait aussi détecter l'activation de STAT3 dans les cellules AGS après stimulation anti-Fas pendant 24 h, mais la mesure activée était légèrement inférieure à celle reçue 2h de l'anti-Fas stimulation (figure 2C et 2D). Pour confirmer en outre que STAT3 a été impliqué dans la régulation de l'expression Fascin après stimulation anti-Fas, nous avons frappé vers le bas l'expression de STAT3 en utilisant STAT3 siRNA spécifique avant anti-Fas stimulation et détecté l'efficacité de STAT3-knockdown par analyse Western blot. Comme cela est représenté sur la figure 2E, mais pas le siRNA STAT3 NC transfection de siRNA nettement inhibé l'expression STAT3 dans les cellules AGS. Expectedly, la protéine Fascin n'a pas été induite dans les cellules AGS STAT3-knockdown après stimulation anti-Fascin (Fig 2F). Ces résultats suggèrent que STAT3 activée est nécessaire pour la régulation positive de l'expression Fascin causée par Fas activation de signalisation dans les cellules AGS.

Fas la migration des cellules de signalisation promu dépend de STAT3 /voie Fascin

Il a été montré que Fascin médiatise cellule tumorale migration [17]. Dans la présente étude, nous avons examiné si knockdown de Fascin inhiberait Fas la migration cellulaire induite par la signalisation- in vitro
. Nous avons constaté qu'une diminution de la protéine Fascin n'a pu être détectée dans les cellules AGS transfectées avec l'ARNsi Fascin, mais pas le siRNA NC (figure 3A). Ensuite, nous avons effectué des analyses de migration tumeur de cellules pour détecter la motilité des cellules AGS Fascin-knockdown après stimulation anti-Fas. Comme on le voit sur la figure 3B, lorsque la stimulation anti-Fas nettement favorisé la migration des cellules AGS, cet effet était manifestement inhibée dans les cellules traitées avec l'ARNsi Fascin, mais pas NC ARNsi. Etant donné que STAT3 est nécessaire pour l'expression de Fas dans les cellules AGS Fascin induites par la signalisation, nous avons ensuite analysé les effets de STAT3 sur la signalisation à médiation par Fas, la migration cellulaire dans les cellules AGS. Comme le montre la figure 3C, après traitement avec Stattic, la migration cellulaire Fas signalisation améliorée a été complètement aboli. En accord avec ce résultat, l'ARNsi STAT3 a également inhibé de manière significative Fas AGS migration des cellules de signalisation améliorée (figure 3D). Ces résultats montrent que la signalisation de Fas favorisé la migration cellulaire et elle dépend de l'activation de STAT3 /voie Fascin.

signalisation de Fas favorise la métastase des cellules in vivo par l'activation de STAT3 /Fascin voie

Pour démontrer davantage la relation entre la signalisation de Fas et GC métastases, on a transféré les cellules AGS anti-Fas stimulées par voie intraveineuse dans des souris nude et détecte les foyers de tumeurs dans les poumons. Nous avons trouvé une augmentation de foyers tumoraux dans les poumons de souris avec des cellules transférées prétraitées avec un anticorps anti-Fas, mais non ISO (figure 4A). Afin de clarifier la relation entre Fascin et Fas métastases tumorales signalisation médiée, nous avons effectué la détection immunohistochimique de Fascin dans les tissus tumoraux. Nous avons observé une expression élevée Fascin dans les tissus tumoraux de souris recevant des cellules AGS anti-Fas stimulées que celle de souris recevant ISO ou des cellules stimulées par l'ONU AGS (figure 4B). Etant donné que STAT3 est nécessaire pour la régulation positive anti-Fas induite par Fascin et une augmentation de la motilité dans les cellules AGS, nous avons étudié les effets de STAT3 sur AGS métastase cellulaire
in vivo. Après traitement avec S3I-201, un inhibiteur de la sonde chimique de l'activité de STAT3 [21], les foyers de tumeurs dans les poumons a diminué de manière significative (figure 4C). En outre, l'expression Fascin dans les tissus tumoraux de S3I-201 des souris traitées a également été inhibée (figure 4D), ce qui suggère le contrôle de Fascin par STAT3
in vivo. Pris ensemble, ces résultats indiquent que la signalisation Fas peut favoriser la métastase des cellules in vivo
, dépendant de l'activation de STAT3 /voie Fascin.

expression Fascin est corrélée avec l'expression de Fas dans les tissus tumoraux de patients avec GC

Depuis la signalisation Fas favorise l'expression Fascin, nous avons déterminé qu'il y avait une corrélation entre Fas et d'expression Fascin dans les tissus tumoraux de patients du GC. Nous avons analysé les taux d'ARNm de Fas et Fascin dans les tissus tumoraux de patients du GC. Comme on le voit sur la figure 5, les niveaux d'ARNm de Fas et Fascin ont montré une corrélation positive. Ce résultat fournit la preuve pour la notion que la signalisation Fas favorise l'expression Fascin en GC.

Discussion

En général, après trimérisation de Fas après ligature avec FasL, l'apoptose est déclenchée. fas groupe recrute la protéine adaptatrice FADD et forme le complexe de signalisation induisant la mort, ce qui provoque l'activation de la caspase-8. Caspase-8, à son tour, active les caspases en aval, tels que la caspase-3, aboutissant à l'apoptose [4]. En plus d'induire la mort cellulaire par Fas transmet également des signaux de prolifération et d'activation dans les cellules tumorales [22]. Il a été rapporté que la médiation Fas Astric la prolifération des cellules de la muqueuse est dépendante de ERK [23], mais l'activation de la voie ERK ne peut pas induire la prolifération de cellules de mélanome B16 de souris [24]. Par conséquent, Fas peut induire la prolifération de certaines cellules, mais pas toutes les tumeurs et le mécanisme pertinent est encore largement inconnu. Ici, nous avons trouvé Fas est invalide dans l'induction de la prolifération des cellules AGS. la signalisation de Fas a également été démontrée pour induire la motilité des cellules tumorales résistantes à l'apoptose par l'intermédiaire de l'activateur du plasminogène urokinase [10]. Dans la présente étude, nous avons démêlé un nouveau mécanisme de Fas-médiation de la motilité des cellules tumorales, qui dépendait de la régulation positive de Fascin via l'activation de STAT3.

Il est généralement admis que pour échapper à l'apoptose provoquée par FasL positif T les cellules, les cellules tumorales ont développé plusieurs méthodes pour résister aux effets de la destruction cellulaire induite par FasL. Les cellules tumorales ont été mises en évidence à réguler négativement ou même perdre l'expression du récepteur Fas [25] ou abroger la voie de signalisation intracellulaire par l'intermédiaire de Fas Fas mutation dans [26]. Les cellules tumorales peuvent également upregulate protéine enzymatique inhibant FADD comme l'IL-1β conversion cellulaire ou phosphoryler la caspase-8 à inhiber l'activation de la caspase-8 et de bloquer la voie de signalisation en aval de Fas [27,28]. Dans la présente étude, nous avons trouvé l'activation de STAT3 dans les cellules AGS après anti-Fas stimulation. L'activation de STAT3 a été montré pour protéger les cellules cancéreuses de stimuli apoptotiques issus du récepteur Fas [29]. Pré-traitement de l'inhibiteur de STAT3 ne pouvait pas initier l'apoptose des cellules AGS après Fas signalisation activation (données non présentées), ce qui suggère que l'activation de STAT3 est pas impliqué dans la prévention des cellules AGS de l'apoptose induite par Fas.

Il a été ont rapporté que des cellules de carcinome du poumon de Lewis ont été constitutivement résistants à l'apoptose à médiation par Fas, mais la surexpression de Fas sur ces cellules permet l'apoptose à médiation par Fas après reticulation avec un agoniste anticorps anti-Fas [30], ce qui suggère qu'il y a une différence qualitative dans les cellules de signalisation activées recevoir, qui détermine leur sort après ligature Fas de signalisation. Le niveau d'expression de Fas est modérée dans les cellules AGS et stimulées avec des doses élevées d'anticorps anti-Fas (20 ng /ml); Nous avons trouvé que les cellules AGS a montré légèrement augmenté l'apoptose (données non présentées). Ceci indique que l'induction de l'apoptose et de la signalisation de promotion de la migration peuvent tous deux être activés après la ligature du récepteur Fas, qui peut être lié au niveau d'anticorps anti-Fas utilisé dans ces expériences. Si des niveaux élevés de Fas-signalisation livraison ne peut être réalisée dans des conditions physiologiques, la signalisation de la promotion de la migration prendra le relais après récepteur Fas ligature et entraîner une augmentation de la métastase de GC.

Pour mettre en œuvre des métastases à distance, la motilité puissante est nécessaire pour les cellules tumorales . Fascin, en tant que protéine actine bottelages, est importante pour le maintien et la stabilité des faisceaux d'actine filamenteuse et, par conséquent impliquées dans la motilité cellulaire [31]. Dans la présente étude, nous avons révélé que la signalisation Fas a été impliqué dans la régulation positive de l'expression Fascin. IL-6 est rapporté à la régulation positive d'expression Fascin des cellules GC [32]. La signalisation de Fas a également été démontrée pour promouvoir la sécrétion d'IL-6 dans les cellules tumorales [33]. Ces preuves indiquent que la signalisation de Fas amplifie probablement l'effet de la régulation à la hausse Fascin par l'IL-6. Nous avons aussi démontré que les expressions Fas et Fascin étaient étroitement liés chez les patients du GC, le renforcement de l'importance de l'axe Fas-Fascin dans le processus de GC métastase.

Conformément aux études précédentes, nous avons démontré que l'activation de Fas-induite STAT3 a été nécessaire pour la régulation positive de Fascin. Dans le modèle nu de métastases pulmonaires de souris, l'inhibiteur de STAT3 S3I-201 peut inhiber l'expression Fascin dans les tissus tumoraux. FasL murine recombinante a été incapable d'activer l'activation de STAT3 (données non présentées), suggérant que le charbon de signalisation initiée par FasL sur les cellules AGS eux-mêmes est suffisante pour médier l'activation de STAT3 et une régulation positive Fascin en aval. Outre la régulation de l'expression Fascin, STAT3 est également impliqué dans la prolifération cellulaire et la survie, l'oncogenèse, et les métastases du cancer dans GC [34-36]. Un inhibiteur de petite molécule biodisponible oralement STAT3 a été découvert et pourrait être un agent thérapeutique potentiel pour le cancer humain [37]. Nous pensons que l'inhibiteur de STAT3 est un agent prometteur qui peut être utilisé dans le traitement du GC clinique dans un avenir proche.

En conclusion, nous démontrons que la signalisation Fas est impliqué dans la métastase GC par STAT3 dépendant surexpression de Fascin. Nos résultats suggèrent également la Fas /STAT3 /voie Fascin peut être une cible moléculaire pour le traitement du GC.

Remerciements

Nous avons apprécié le Dr Hua Wang pour fournir l'ADNc extrait de tissus tumoraux de patients du GC . Nous avons également apprécié l'éditeur de Medjaden pour la modification de ce manuscrit.

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