PLoS ONE: Fas Signalizacijos Skatina skrandžio vėžio metastazių per stat3 priklausomas ląstelę Fascin

Anotacija

Fonas

Fas signalizacijos aktyvuota signalo keitikliai ir aktyvatoriai transkripcijos 3 (stat3) reikalingas Fascin ląstelę. Kaip aktino-susiejimas baltymų, Fascin gali tarpininkauti skrandžio vėžys (GC) ląstelių migraciją.

metodų

Skrandžio vėžio AGS ląstelės buvo elgiamasi su anti-Fas (5 mikrogramai /ml) 2 val , siekiant skatinti ŪKS signalizacijos aktyvavimas. in vitro
migracija FAS signalizacijos aktyvuota AGS ląstelių buvo įvertintas naudojant Transwell kameras. Į Fascin ir fosforilinto STAT3 koncentracija buvo aptikta Imunoblotingo analizės. Nude pelėms buvo švirkščiamas į veną kartu su AGS ląstelių gydomiems anti-Fas arba gydomiems stat3 inhibitoriumi be anti-Fas; naviko plaučių metastazių buvo matuojamas. Fascin baltymų ekspresija navikų audiniuose buvo aptiktas imunohistocheminiu. ŪKS ir Fascin iRNR lygiai navikų audiniuose, iš pacientų, sergančių GC buvo matuojamas PGR ir jų koreliacija buvo analizuojami realiuoju laiku.

Rezultatai

iš Fas signalizacijos aktyvavimas skatina ląstelių migraciją ir lėmė STAT3 priklausoma Fascin ląstelę į AGS ląsteles. Stat3 sustiprintas Fascin lygiai in vivo
. Fascin buvo Fas signalizacijos sukelto AGS ląstelių migracijos tarpininkas in vitro parsisiųsti ir vivo
. Be to, ten buvo teigiama koreliacija tarp FAS ir Fascin mRNR lygių navikų audiniuose, iš GC pacientams.

Išvados

Fas signalizacijos skatina GC metastazių per stat3 /Fascin keliu, kuris gali pateikti naują tikslas GC terapijos

nurodomoji dalis:. Jonas Y Zhao Klausimas Cai Z Cheng G Chen, M, Wang J et al., (2015) Fas Signalizacijos Skatina skrandžio vėžio Metastazė per stat3 priklausomas ląstelę Fascin. PLoS ONE 10 (5): e0125132. Doi: 10,1371 /journal.pone.0125132

Akademinė redaktorius: Jin K. Cheng H.Lee Moffitt Vėžys centras "& Tyrimų institutas, JAV

Įstojo: sausio 6 2015; Priėmė: Kovo 11, 2015 m Paskelbta: Gegužės 18, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Yang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus

finansavimas:. Šis darbas buvo remiamas nacionalinio Gamtos mokslo fondo Kinijos kodas 81200014 į JLW (http://www.nsfc.gov.cn/~~HEAD=pobj); Gamtos mokslo fondas Zhejiang Province Nr LY14H160011 į YSY; Ne LY12C08002 į ZJC ir Nr LY12H13003 į MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra ketvirtoji dažniausia vėžio ir antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirčių visame pasaulyje. Kaip ir dauguma vėžio, metastazių yra pagrindinė priežastis nesėkme klinikinės terapijos GC. Diagnozuota ankstyvoje stadijoje be metastazių, GC, gali būti sunaikinti, chirurgija. Kai metastazės atsiranda, GC prognozė yra gerokai prastesni. Pacientams, sergantiems platų metastazių, kad operacijos rezultatas kartu su chemoterapija ir imunoterapija yra toli gražu ne optimaliai, o bendras 5 metų išgyvenamumas yra tik 24% [1,2]. Todėl yra būtina skubiai geriau suprasti GC metastazių mechanizmo siekiant sukurti geriau gydymo strategiją.

Fas signalizacijos būdas yra vienas iš klasikinių mechanizmų sukelti apoptozę [3]. Po perrišimas su savo gamtos ligando, FasL, FPĮ receptorių sudaro mirties skatinančius signalizacijos kompleksas, sukelia kaspazės-8 aktyvavimo, kuri, savo ruožtu, aktyvuoja pasroviui kaspazių, todėl apoptozės [4]. , Buvo pastebėta, kad Fas-tarpininkaujant ląstelių žūties yra atsakinga už priešvėžiniais funkcija Fas signalinio kelio į prostatos vėžio [5]. Tačiau, daugeliu navikų, vietoj apoptozės sužadinimui, Fas signalizacijos aktyvavimo skatina naviko progresavimas [6,7]. Naviko ląstelės dažnai reaguoti į Fas stimuliacijos glaudesnio platinimu [8,9]. Keletas tyrimų parodė, kad Fas signalizacijos gali skatinti vėžinių ląstelių migraciją ir invazija [10-12]. Naujausioje studijoje, aukštos Fas išraiška GC ląstelių buvo įrodyta, kad jie koreliuoja su metastazėmis atsiradimo regioninių limfmazgių [13], o tai rodo, kad Fas signalizacijos skatina skrandžio vėžio metastazių.

Fascin, aktino -bundling baltymų, buvo nustatyta kaip pagrindinė molekulės naviko metastazių [14]. Fascin vaidina svarbų vaidmenį navikų ląstelių migracijos ir Fascin išraiška padidėjo kelių tipų vėžio, įskaitant GC [15,16]. Fascin yra tiesioginis STAT3 tikslinio geno reaguojant į IL-6 tiek pelės ir žmogaus krūties vėžio ląstelių [17]. Fas signalizacijos buvo pranešta, kad dalyvauja STAT3 [18-20] aktyvacijos. Todėl mes spėlioti, kad Fas signalizacijos skatina GC ląstelių migraciją ir po naviko metastazių per stat3 priklausoma ląstelę Fascin.

Šis tyrimas buvo skirtas pademonstruoti Fas dalyvavimą reguliuojant Fascin išraiška per stat3 aktyvavimo į AGS ląsteles. Mes bandėme susieti sustiprintą Fascin lygį su ląstelių judrumui ir metastazes AGS ląstelės in vivo
. Mes taip pat analizavo tarp FAS ir Fascin mRNR lygio koreliaciją naviko audiniuose iš pacientų su GC. Buvo tikimasi, kad mūsų išvados būtų atskleisti romano mechanizmą GC metastazių, suteikiant pagrindą būsimai plėtrai Fas įsikūrusio terapinės strategijos Išplėstinė GC.

Medžiagos ir metodai

Žmogaus audinių pavyzdžius

žmogaus GC audinio mėginiai buvo surinkti iš 23 pacientų (14 metastazių ir 9 be metastazių) atliekama operacija prieš chemoterapiją Zhejiang vėžio ligoninėje (Hangzhou, Kinija) tarp 2012 ir 2014 m klinikinių charakteristikų pacientams, sergantiems GC yra apibendrinti 1 lentelėje studijų atitiko sveikatos apsaugos ministerijos Kinijos ir Pasaulio sveikatos organizacija tyrimų etikos komitetas nagrinėti tarptautinių gairių tyrimų su žmogaus dalykus ir Helsinkio deklaracija dėl etinių principų medicinos tyrimų su žmonėmis susijusių taisyklių. Tyrimo protokolas buvo peržiūrėtas ir institucinių ekspertizės valdyba, Zhejiang vėžio ligoninėje patvirtintas. Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno pacientų prieš Tyrimo pradžioje.

Reagentai

Pelės anti-žmogaus Fas (2R2) monokloninis antikūnas buvo įsigytas iš eBioscience (San Diegas, CA, JAV) , Pelės anti-žmogaus Fas (CH11) monokloninis antikūnas ir STAT3 inhibitorius S3I-201 buvo įsigytas iš Merck Millipore (Billerica, MA, JAV). Triušis anti-žmogaus STAT3 (79D7) ir anti-žmogaus fosforilinarai STAT3 (D3A7) monokloniniai antikūnai buvo įsigytas iš ląstelių Signalizacijos technologijos (Danvers, MA, JAV). Pelė anti-žmogaus Fascin (D-10) monokloninis antikūnas, žmogaus Fascin siRNR, STAT3 siRNR, neigiama kontrolė siRNR (NC siRNR) ir STAT3 inhibitorius, Stattic, buvo įsigytas iš Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, JAV). CCK8 ląstelių proliferacija rinkinys buvo įsigytas iš Dojindo Molecular technologijų (Kumamoto, Japonija). Aneksino V FITC apoptozė aptikimo rinkinys buvo įsigytas iš Sigma-Aldrich (St Louis, MO, JAV). Į Transwell kameros (8-mkm akučių dydis) buvo nupirkta iš costar (Cambridge, MA, JAV).

Gyvūnai

šešių savaičių senumo athymic nude pelėms buvo gauta iš SIPPR-BK Eksperimentinės gyvūnų Co (Šanchajus, Kinija). Pelėms buvo įsikūręs patogeno nemokama galimybe. Eksperimentiniai protokolai buvo peržiūrėtas ir patvirtintas gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto Zhejiang vėžio ligoninėje.

Ląstelės ir ląstelių kultūros

žmogaus GC ląstelių linijos "AGS ir MNK-45 buvo gauta iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijoje (Manasasas, VA, JAV) ir išlaikyta 1640 kultūra terpėje, turinčioje 10% vaisiaus jaučio serumo (FBS) 37 ° C temperatūroje su 5% CO _2.

Western blot analizė

20 mikrogramų žalios baltymų, išgautų iš ląstelių fragmentai iš viso buvo atskirtas nuo 10% natrio laurilsulfatas poliakrilamido gelyje ir perkeliamas ant polivinilideno difluoridą membranų (Millipore, BILLERICA, MA). Membranos buvo blokuotos 5% BSA Tris-buferio druskų tirpalu, pridėjus 0,05% Tween-20, ir inkubuojami su atitinkamomis pirminius antikūnus, esant 4 ° C temperatūroje per naktį. Po plovimo su tri-buferio druskų tirpalu, pridėjus 0,05% Tween-20, membranos buvo inkubuojamos su atitinkamomis HRP-konjuguotus antriniai antikūnai. Baltymai buvo ryškinamos naudojant SuperSignal Vakarų Femto maksimalios (Thermo, IL, JAV).

aptikimas ląstelių apoptozė

AGS ląstelės (2 × 10 ^{5 /ml) buvo gydyti yra 1 arba 5 mikrogramai /ml anti-Fas monokloninis antikūnas (anti-Fas) arba izotipo antikūno (ISO), skirtos 24 h, apoptozės ląstelės buvo tamsintas su ir prie aneksino V-FITC ir propidiumo jodido 5 min, esant 4 ° C tamsiai ir tada analizuojami tėkmės citometrijos su FACSCalibur tekėti citometre (Becton Dickinson, San Chosė, CA, JAV).}

vėžio ląstelių migracija tyrimas in vitro

AGS ląstelės (1 × 10 ^{6 /ml) buvo gydomi anti-Fas arba ISO 5 mikrogramai /ml 2 h, esant 37 ° C temperatūroje. Tada 2 × 10 5 AGS naviko ląstelės buvo perkelti į 100 įxL žiniasklaidos be serumo ir pasėjamos į viršų kameroje Transwell rūmų (8-mkm porų dydžio). Apatinė kamera prisipildė 800 įxL 1640 mitybinės terpės, kurių sudėtyje yra 20% FBS. Po to, kai 48-h inkubacijos 37 ° C temperatūroje, ląstelės buvo fiksuojami metanoliu 20 min, ir plaunamas PBS tris kartus, 20 min kiekvieną. Fiksuotos ląstelės buvo tamsintas su nuo DAPI 10 mg /ml 30 min ir plaunamas PBS. Tamsintas ląstelės buvo tiriamas žydėjimas mikroskopu. , Pagal kuriuos nustatomos STAT3 poveikį ląstelių migracija, 10 mkm iš Stattic buvo įtraukta į mitybinės terpės. Norėdami nustatyti Fascin vaidmenį ląstelių migracija, prieš anti-Fas stimuliacijos, iš 40 nM Fascin siRNA per du aukštus viso buvo pernešta į AGS ląstelių (2 × 10 5 /gerai), naudojant 3 įxL INTERFERin siRNA transfekcijos reagento ( Polyplus, NY, CA, USA) dėl 24-šulinėlių plokštelės. Iš Fascin trumpalaikis triukšmo slopinimo efektyvumas buvo patvirtintas imunoblotingo.}

ląstelių proliferacija tyrimas

AGS ląstelės buvo gydomi 5 mikrogramai /ml anti-Fas arba ISO 24, 48, ar 72 h, ir 20 pL CCK8 buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir ląstelės buvo inkubuojami už papildomą 4 h. Kiekvieno šulinio absorbcija buvo skaityti esant 450 nm bangos ilgiui. Ląstelių proliferacija buvo apskaičiuojamas dalijant apdorotų ląstelių OAM su kontrolės ląstelių OAM.

Realaus laiko PGR

Viso RNR buvo išskirta su TRIzol reagento ir kDNR buvo susintetintas naudojant PrimeScript RT reagentas komplektas (Takara Biografija, Inc Otsu, Shiga, Japonija). buvo naudojami šie PGR sąlygos: 1 ciklas, esant 95 ° C temperatūroje 30 s ir tada 40 ciklų 5 s ne mažesnis nei 95 ° C ir 34 s esant 60 ° C temperatūroje. Realaus laiko PGR buvo atliekama ant Applied Biosystems 7500 realiojo laiko PGR sistema (Foster City, Kalifornija, JAV). Rezultatai buvo normalizuotas prieš beta-aktino RNR. Į PGR pradmenų sekas, buvo taip: prasmė, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 "ir anti-jausmas, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3" už beta-aktino; jausmas, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 "ir anti-jausmas, 5'-AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3" už Fas; jausmas, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 "ir anti-jausmas, 5'-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3" už Fascin.

Plaučių metastazės analizes vivo

AGS ląstelių ( 5 × 10 ^{6 pelei) iš anksto apdorotas su anti-Fas arba ISO 2 h buvo suleistas į 6-sav amžiaus nuogas pelių per uodegos veną. Siekdamos nustatyti STAT3 poveikį naviko metastazių ir Fascin išraiškos in vivo
, AGS naviko ląstelės (5 × 10 6 vienam pele) buvo į veną švirkščiamas į 6-WK-senais nuogas pelėmis ir 24 val vėliau , pelių gavo injekciją S3I-201 į veną (nuo 5 mg /kg kūno svorio, kas 2 dienas nuo 3 kartus iš viso). Trys savaitės po ląstelių injekcijos, pelėms buvo anestezuojama įkvėpus chlorelio hidrato ir paaukojo, ir plaučiai buvo pašalinta ir plaučių naviko židinių numeriai buvo skaičiuojami pagal Sekcijiniai mikroskopu.}

imunohistocheminis

naviko židinių iš plaučių buvo fiksuoti 10% formalinu, dehidratuotas etanolis, ir įterptais parafinu. Audinio dalys buvo supjaustyti 4 pm, montuojamas ant skaidrių ir džiovinami 60 ° C temperatūroje iki 4 h. Tokią trumpą proteolitinio virškinimą ir peroksidazės bloko audinių skaidres naudojant 2,5% vandenilio peroksido tirpalą metanolyje 30 min kambario temperatūroje, skaidres buvo inkubuojamos su anti-Fascin antikūno per naktį 4 ° C temperatūroje. Po plovimo, skaidres buvo inkubuojamos su peroksidazės žymėto polimero ir substrato chromogeną. Pagaliau, bandiniai buvo inkubuojamos fosfatinio buferio druskų tirpalu, kurio sudėtyje yra diaminobenzidinas 5 min. Olympus mikroskopas dirbo vizualizuoti naviko audinių dėmių.

Statistinė analizė

rezultatai buvo lyginami naudojant ANOVA. Ietininkas rangas kad koreliacija testas buvo nagrinėjama koreliacijas tarp įvairių Fas ir Fascin mRNR lygių navikų audiniuose, iš GC pacientams. buvo laikoma 0,05 statistiškai reikšmingas

Rezultatai

Aktyvinimas Fas signalizacijos skatina AGS ląstelių migracija

Pirmiausia, mes patvirtino išraišką; p reikšmė ir <. fas receptoriaus AGS ir MNK-45 ląstelių realaus laiko PGR ir imunoblotingo analizuoja ir rasti MNK-45 ląstelių išreiškė didesnį Fas receptorių nei AGS ląstelės padariau (pav 1A). Abi ląstelių linijų taip pat parodė, aukšto lygio FasL išraiškos (duomenys neparodyta). Mes šalia išnagrinėjo, ar Fas receptorius perrišimas gali sukelti apoptozę AGS ir MNK-45 ląstelių. Po stimuliacijos su anti-Fas arba ISO, esant 1 g /ml arba 5 mikrogramai /ml koncentracijos, ji buvo MNK-45, bet ne AGS ląstelės parodė, priklauso nuo koncentracijos: stiprinimą apoptozės (pav 1B). Taigi, mes ištirti, ar Fas signalizacijos aktyvavimas gali sukelti kitų poveikį AGS ląstelių vietoj apoptozės indukcija šių eksperimentų. AGS ląstelių migracija tyrimas buvo atliktas in vitro parsisiųsti ir mes nustatėme, kad AGS ląstelių migracija buvo žymiai padidėjo po stimuliacijos su anti-Fas (pav 1c) 5 mikrogramai /ml. Norėdami atmesti galimybės, kad padidėjusi migracija AGS ląstelių sukėlė jų padidėjusiu platinimu po kovos su Fas stimuliacijos, mes išnagrinėjo ACS ląstelių proliferaciją ir nerado akivaizdų skirtumą tarp ląstelių, gydytų arba be anti-Fas (pav 1d), o tai rodo, kad į ląstelių migracija padidėjo nėra proliferacijos savybių po kovos su Fas stimuliacijos rezultatas. Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad Fas signalizacijos gali padidinti GC ląstelių judrumą in vitro
.

Aktyvinimas Fas signalizacijos aktyvinama Fascin išraišką AGS ląstelių per aktyvavimo STAT3

buvo pranešta, kad Fas signalizacijos yra dalyvauja STAT3 [18-20] aktyvacijos. Šiame tyrime mes išnagrinėti, ar aktyvavimo Fas signalizacijos sukeltų stat3 aktyvinimo AGS ląsteles. Kaip parodyta pav 2A, po stimuliacijos su anti-Fas trumpam laikotarpiui, fosforilinarai STAT3 buvo gerokai padidėjo AGS ląsteles. Jis taip pat buvo dokumentais, kad Fascin gali padidinti vėžinių ląstelių judrumą ir yra tiesioginė tikslinė genas STAT3 [17]. Taigi, mes nustatėme, kad Fascin išraišką AGS ląstelių po stimuliacijos su anti-Fas. Kaip parodyta Fig 2B, mRNR lygiai Fascin buvo padidinti laiko priklausomu būdu ir baigėsi po 12 valandų, anti--Fas stimuliacija AGS ląstelių. Siekiant dar labiau patvirtina Fascin ląstelę, mes nustatėme, baltymų lygį Fascin ir nustatė, didinant Fascin baltymų kiekį anti-Fas bet ne ISO elgiamasi AGS ląstelių (pav 2c). Siekiant įrodyti, tarp STAT3 ir Fascin santykius AGS ląstelių po Fas signalizacijos aktyvavimo, mes traktuojami AGS ląsteles Stattic, konkretaus inhibitorius STAT3 prieš anti-Fas stimuliacijos ir nustatė, kad anti-Fas sukeltas padidėjimas Fascin baltymų buvo visiškai panaikinta atsižvelgiant į Stattic (pav 2d) buvimą. Mes taip pat galėtų aptikti STAT3 aktyvaciją AGS ląstelių po anti-Fas stimuliacija 24 h, bet aktyvintas mastu buvo šiek tiek mažesnis nei, kad gauta 2h anti-Fas stimuliacijos (pav 2c ir 2d). Siekiant dar labiau patvirtina, kad STAT3 buvo dalyvauja Fascin raiškos reguliavimas po kovos su Fas stimuliacijos, mes nuvertė stat3 išraišką naudojant stat3 konkretų siRNA prieš anti-Fas stimuliacijos ir aptiko stat3-nokdaunas efektyvumą iki imunoblotingu analizes. Kaip parodyta Fig 2E, stat3 siRNA, bet ne NC siRNR transfekcija žymiai slopina stat3 ekspresiją AGS ląstelių. Expectedly, The Fascin baltymų nebuvo sukeltas stat3-triuškinantis AGS ląstelių po kovos su Fascin stimuliacijos (pav 2F). Šie rezultatai rodo, kad aktyvuota STAT3 yra reikalingas Fascin išraiška sukelia Fas signalizacijos aktyvacijos AGS ląstelių ląstelę.

Fas signalizacijos skatinamas ląstelių migracija priklauso nuo stat3 /Fascin keliu

Jis buvo parodė, kad Fascin tarpininkauja naviko ląstelių migraciją [17]. Šiame tyrime mes išnagrinėti, ar triuškinantis iš Fascin slopina Fas signalizacijos sukelto ląstelių migraciją in vitro
. Mes nustatėme, kad po Fascin baltymų sumažėjimas gali būti nustatytas AGS ląstelių transfektuotose Fascin siRNA bet ne NC siRNA (pav 3a). Tada mes atliekame auglio ląstelių migracijos tyrimus, atliekamus aptikti Fascin-triuškinantis AGS ląstelių judrumą po kovos su Fas stimuliacijos. Kaip parodyta pav 3B, kai anti-Fas stimuliacija pastebimai skatino AGS ląstelių migraciją, šis poveikis buvo akivaizdžiai slopinamas ląstelių gydomiems Fascin siRNA, bet ne NC siRNA. Nuo STAT3 reikalingas Fas signalizacijos sukelto Fascin išraišką AGS ląsteles, kitą kartą analizavo STAT3 dėl Fas poveikį signalizacijos tarpininkaujant ląstelių migraciją į AGS ląsteles. Kaip parodyta pav 3C, po gydomi Stattic, FPĮ signalizacijos padidinto ląstelių migracija buvo visiškai panaikinta. Laikantis šio rezultato, STAT3 siRNR taip pat smarkiai slopino Fas signalizacijos padidinto AGS ląstelių migracija (pav 3D). Šie rezultatai rodo, kad Fas signalizacijos skatinamas ląstelių migraciją ir tai priklauso nuo stat3 /Fascin keliu aktyvacijos.

Fas signalizacijos skatina ląstelių metastazes in vivo per aktyvuoti STAT3 /Fascin kelias

Jei dar pademonstruoti santykiai tarp Fas signalizacijos ir GC metastazių, mums perdavė prieš Fas-stimuliuojami AGS ląsteles į veną nuogas pelėmis ir nustatė naviko židiniai plaučiuose. Mes radome auglio židinių padidėjo perduodamų su ląstelėmis pelių plaučiuose paruošiamasis apdorojimas su anti-Fas, bet ne ISO (pav 4A). Išaiškinti ryšį tarp Fascin ir Fas signalizacijos tarpininkaujant naviko metastazių santykius, mes atliekame imunohistocheminis aptikti Fascin naviko audiniuose. Mes nustatėme didesnį Fascin išraišką navikų audiniuose, iš pelių, vartojusių prieš Fas-stimuliuojami AGS ląsteles nei kad nuo pelių, vartojusių ISO arba JT paskatino AGS ląstelių (pav 4b). Nuo STAT3 reikia anti-Fas sukeltos ląstelę Fascin ir padidino judrumą AGS ląstelių, mes ištyrė STAT3 poveikį AGS ląstelių metastazės vivo
. Po gydymo S3I-201, cheminės zondo inhibitorius stat3 veiklos [21], navikas židiniai plaučiuose ženkliai sumažėjo (pav 4C). Be to, Fascin išraiška navikų audiniuose, iš S3I-201 gydytų pelių taip pat buvo slopinamas (pav 4D), o tai rodo, kad Fascin kontrolę STAT3 vivo
. Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad Fas signalizacijos gali skatinti ląstelių metastazes vivo
, priklauso nuo stat3 /Fascin keliu aktyvacijos.

Fascin išraiška koreliuoja su Fas išraiška navikų audiniuose, iš pacientams, sergantiems GC

nuo Fas signalizacijos skatina Fascin išraiška, mes nustatyti, ar buvo ryšys tarp Fas ir Fascin išraiška navikų audiniuose, iš GC pacientams. Mes išanalizavome iRNR lygius Fas ir Fascin į navikų audiniuose, iš GC pacientams. Kaip parodyta Fig 5, mRNR lygiai Fas ir Fascin rodė teigiamą koreliaciją. Šis rezultatas suteikia įrodymų sąvoką, kad Fas signalizacijos skatina Fascin išraišką GC.

Diskusijos

Apskritai, po trimerization iš Fas po perrišimas su FasL, apoptozė yra pradėtas. Fas klasteris Naujokams FADD adapterio baltymų ir sudaro mirties skatinančius signalizacijos kompleksas, sukelia kaspazės-8 aktyvacijos. Kaspazės-8, savo ruožtu, aktyvina pasroviui kaspazių, pavyzdžiui, kaspazės-3, baigiant apoptozės [4]. Be to sukelia ląstelės žūtį, FPĮ taip pat perduoda platinimo ir aktyvacijos signalus naviko ląstelėse [22]. Buvo pranešta, kad Fas tarpininkauti astric gleivinės ląstelių proliferaciją yra ERK priklauso [23], tačiau aktyvavimo ERK signalinio kelio negali indukuoti B16 pelių melanomos ląstelių [24] platinimu. Todėl, FPĮ gali sukelti kai kurių, bet ne visų vėžinių ląstelių proliferaciją ir atitinkama mechanizmas vis dar yra plačiai žinomas. Čia, mes nustatėme, Fas buvo negaliojantis skatinančius AGS ląstelių proliferaciją. FAS signalizacijos taip pat buvo įrodyta, kad sukelti peristaltiką apoptozės-atsparus vėžinių ląstelių per urokinazė plazminogeno aktyvatoriaus [10]. Šiame tyrime mes išardyti romaną mechanizmą Fas-tarpininkės naviko ląstelių judrumas, kuris priklausė nuo Fascin ląstelę per aktyvavimo STAT3.

paprastai manoma, kad pabėgti apoptozę sukelia FasL teigiamas T ląstelės, vėžinių ląstelių sukūrė keletą būdų, kaip atsispirti FasL sukelta ląstelių žūties poveikį. buvo įrodytas vėžinių ląstelių downregulate ar net prarasti Fas receptorių ekspresiją [25] arba panaikinti ląstelėje Fas signalizacijos kelią per mutacijos Fas [26]. Naviko ląstelės taip pat gali upregulate ląstelių FADD-kaip IL-1β konvertuojančio fermento slopinantis baltymas arba fosforilinti kaspaze 8 slopina kaspaze 8 aktyvacija ir blokuoti žemyn srautas signalizacijos kelią į Fas [27,28]. Šioje studijoje, mes nustatėme, kad STAT3 aktyvinimo AGS ląstelių po kovos su Fas stimuliacijos. Iš STAT3 aktyvacijos buvo įrodyta, kad apsaugo nuo vėžio ląsteles nuo apoptozinių dirgiklius sklindančius iš Fas receptorius [29]. Paruošiamasis stat3 inhibitorių negalėjo inicijuoti AGS ląstelių apoptozę po Fas signalizacijos įjungimo (duomenys neparodyti), o tai rodo, kad STAT3 aktyvacijos nedalyvauja prevencijos AGS ląsteles nuo Fas sukeltos apoptozės.

Jis buvo pranešama, kad Lewis plaučių karcinomos ląstelės buvo constitutively atsparus Fas sąlygojamą apoptozės, bet Fas raiška šių ląstelių leidžia Fas-tarpininkaujant apoptozę po skersiniams su agonisto anti-Fas antikūnų [30], o tai rodo, kad yra kokybinis skirtumas per aktyvintosios signalizacijos ląstelės gauna, kuris lemia jų likimą po Fas signalizacijos perrišimas. Iš Fas išraiškos lygis yra vidutinio AGS ląsteles ir skatina su didele doze anti-Fas (20 mikrogramų /ml); mes rasti, kad AGS ląstelės parodė šiek tiek padidėjusią apoptozę (duomenys neparodyti). Tai rodo, kad apoptozė indukcija ir migracijos skatinimo signalizacijos gali tiek būti aktyvuota po Fas receptorių perrišimas, kuris gali būti susijęs su anti-Fas lygio naudojamas tokių eksperimentų. Jei didelis Fas-signalizavimo pristatymas negali būti pasiekti pagal fiziologinių sąlygų, migracijos skatinimas signalizacijos perims po Fas receptorių perrišimas ir sukelti padidėjusį GC metastazes.

Jei įgyvendinti nuotolinio metastazių, galingas judrumas yra reikalingas naviko ląstelių , Fascin, kaip aktino-susiejimas baltymų, yra svarbu išlaikyti ir stabilumo siūlinių aktino ryšulius, todėl dalyvauja ląstelių judrumui [31]. Šioje studijoje, mes parodė, kad Fas signalizacijos buvo dalyvauja Fascin išraiškos ląstelę. IL-6 Pranešama, kad upregulate Fascin išraišką GC ląstelių [32]. FAS signalizacijos taip pat buvo įrodyta, kad skatinti IL-6 sekreciją naviko ląstelių [33]. Šie įrodymai rodo, kad Fas signalizacijos tikriausiai sustiprina iš Fascin ląstelę poveikis per IL-6. Mes taip pat parodė, kad ŪKS ir Fascin išsireiškimai buvo glaudžiai susijusi su GC pacientams, stiprinant Fas-Fascin ašies reikšmę GC metastazių procese.

Nuoseklus su ankstesniais tyrimais, mes parodė, kad Fas sukeltos aktyvavimą STAT3 buvo reikalingas Fascin ląstelę. Nuogas pelės plaučių metastazių modeliu, STAT3 inhibitorius, S3I-201, gali slopinti Fascin išraišką navikų audiniuose. Pelių rekombinantinis FasL nesugebėjo suaktyvinti stat3 aktyvinimas (duomenys neparodyti), o tai rodo, kad įsijungia signalizacijos inicijavo FasL apie AGS ląstelių patys pakanka tarpininkauti stat3 aktyvinimą ir pasroviui Fascin ląstelę. Be to reguliuojant Fascin išraišką, STAT3 taip pat dalyvauja ląstelių proliferaciją ir išlikimo, onkogenezėje ir vėžio metastazių GC [34-36]. Per burną biologiškai mažas-molekulė STAT3 inhibitorius buvo atrasta, ir gali būti potencialus terapinis agentas, skirtas žmogaus vėžio [37]. Mes spėlioti, kad STAT3 inhibitorius yra perspektyvi medžiaga, kuri gali būti naudojama klinikinėje GC terapija artimiausioje ateityje.

Taigi, mes įrodyti, kad Fas signalizacijos dalyvauja GC metastazių per stat3 priklausoma ląstelę Fascin. Mūsų rezultatai taip pat rodo, FAS /STAT3 /Fascin kelias gali būti molekulinis taikinys GC terapija.

Padėka

įvertino Dr. Hua Wang už kDNR, gautą iš vėžinių audinių GC pacientų , Mes taip pat įvertino Medjaden redaktorius šio rankraščio modifikacijos.

• PLoS ONE: Sveikata elgesį Korėjos skrandžio vėžio maitintojo netekimo su hipertenzija: polinkį analizė KNHANES III-V (2005-2012)
• PLoS ONE: ATOH1 gali reguliuoti skrandžio vėžio ląstelių tumorogeniš- sukeliant vėžio diferenciacijos Kamieninių Cells