PLoS ONE: Reverse välinen korrelaatio MicroRNA-145 ja FSCN1 vaikuttavat mahasyövän Migration and Invasion

tiivistelmä

MikroRNA (Mirs) tärkeitä rooleja muuntavan geenin ilmentymisen aikana prosesseja tumorigeneesin ja kasvainten kehittymiseen. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että miR 145 säätyy alas vatsassa kasvain ja liittyy kasvaimen muuttoliikettä ja invaasiota. Kuitenkin sekä molekyylitason mekanismi ja toiminta miR 145 mahasyövän jää epäselväksi. Tämä tutkimus on ensimmäinen osoitus merkittävästä alas-säätely miR 145 ilmentymistä infiltratiivinen mahasyövän verrattuna laajentamaan mahasyövän. Lisäksi korrelaatio analyysit paljastivat vahvan käänteinen korrelaatioita miR-145 ja FSCN1 ekspressiotasot infiltratiivinen mahasyövässä. Lisäksi osoitimme, että miR 145 suoraan tavoitteet FSCN1 ja tukahduttaa solumigraatio ja hyökkäyksen mahasyövässä. Kaatamalla ilmaus FSCN1 johti tukahduttaminen muuttoliikkeen ja invaasion mahalaukun syöpäsoluissa, ja uudelleen ilmentävien FSCN1 in miR-145-yli-ilmentävät solut päinvastaiseksi muuton ja hyökkäystä vikoja. Niinpä pääteltiin, että miR 145 säätelee solujen maahanmuuton ja invaasiota mahasyövän ensisijaisesti suoraan kohdentamalla FSCN1.

Citation: Chen Jj, Cai Wy, Liu Xw, Luo Qc, Chen G, Huang Wf, et al . (2015) Reverse Korrelaatio MicroRNA-145 ja FSCN1 vaikuttavat mahasyövän Migration ja Invasion. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10,1371 /journal.pone.0126890

Academic Editor: Chengfeng Yang, Michigan State University, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 14 tammikuu 2015; Hyväksytty: 08 huhtikuu 2015; Julkaistu: toukokuu 26, 2015

Copyright: © 2015 Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: 1. National Natural Science Foundation of China (Grant nro 81172283) valvontakomission (http://www.nsfc.gov.cn/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. 2. Natural Science Foundation of Fujian (Grant nro 2012D037) valvontakomission (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää on yksi korkeimmista kuolleisuus pahanlaatuisten kasvainten maailmanlaajuisesti [1]. Parannettu lääketieteellisen teknologian saattaa parantaa tulosten mahasyövän. Kuitenkin, mahasyöpä edelleen toiseksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien [2], joka johtuu kasvaimen invaasion ja metastaasin. Yhdessä invaasio ja etäpesäkkeiden muodostavat prosessi, jossa pahanlaatuisten syöpäsolujen siirtää ensisijainen sivuston muille alueille ja sitten muodostaa kasvaimia kaukana olevan sivuston kautta imusuonten kanavan, verisuonia tai ruumiinonteloon [3]. Siten selvennetään molekyylitason mekanismeja mukana kehittämässä ja invasiivisuus mahasyövän on tarpeen.

Vuonna 1977 Ming luokiteltu mahakarsinoomat kasvattamiseen ja infiltratiivinen tyyppejä perustuu niiden kasvuun ja invasiivisuus kuviot [4]. Nämä tyypit ovat helposti tunnistettavissa histologisesti. Laajentaminen karsinoomat kasvaa massoittain ja laajeneminen tuloksena muodostuu erillisten kasvaimen kyhmyjä, kun taas infiltroiva karsinoomat on syöpäsolujen hyökätä erikseen [5]. Näiden kahden mahalaukun syövän, infiltroiva mahalaukun syöpä on invasiivinen kuin laajeneva mahasyövässä. Tällainen luokittelu tarjoaa siis viittaus erottaa mahasyövässä näytteitä kliinisesti ja helpottaa yksityiskohtaisia ​​tutkimuksia koskien molekyylimekanismeihin mahasyövän.

MikroRNA (Mirs) kriittisiä rooleja monissa biologisissa prosesseissa, mukaan lukien syövän prosesseja, suoraan estämällä ilmentymistä kohde- mRNA: iden kautta eri molekyylitason mekanismeja [6, 7]. Lisäksi Mirs tehdään poikkeava sääntely aikana syövän synnyn ja voivat toimia joko onkogeenien tai tuumorisuppressoreilla [7]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että monet MIRS vaikuttavat leviämisen ja invaasion mahasyövän. miR-21 on säädelty mahasyövän ja edistää kasvaimen leviämisen ja invaasion mahasyövän kohdentamalla PTEN [8]. Sen sijaan miR 145 säätyy alas ihmisen mahasyövän [9]. Lisäksi tutkimus on osoittanut, että miR 145 voi estää solujen vaeltamiseen ja invaasiota estämällä N-kadheriinin valkuaisaineiden translaation mahasyövässä soluissa [10]. Kuitenkin Kamikihara et al [11] havaitsivat ekspressiotasot N-kadheriinin 146 potilailla, joilla on mahalaukun syövän immunohistokemiallisesti, ja tulokset osoittivat, että vain 31 potilasta (21%) oli N-kadheriinin-positiivinen ilmaisu. Näin ollen, jotkut muut molekyylitason mekanismeja miR 145 voi säädellä solujen vaeltamiseen ja hyökkäyksen mahasyövässä.

FSCN1 on 55-kDa: n aktiini-sitovaa proteiinia, joka liittyy filopodia ja aktiini-pohjainen ulokkeen muodostumisen, ja se edistää solun liikkuvuus, muuttoliike ja invaasio [12, 13]. FSCN1 ilme on poissa tai alhainen normaalissa epiteeli, mutta FSCN1 yliekspressoituu monissa karsinoomat, kuten peräsuolen adenoomia, epiteelin munasarjasyöpä ja ruokatorven okasolusyöpä [14-16]. Lisäksi useissa tutkimuksissa on osoitettu, että täytäntöön FSCN1 ilmentyminen lisää proliferaatiota ja hyökkäyksen munasarjojen ja mahasyövän solujen [17, 18].

Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että miR 145 toimii tuumorisuppressorina ja että miR 145 yli-ilmentymisen tukahduttaa muuttoliikettä ja hyökkäyksen eturauhassyövän ja virtsarakon syövän kohdentamalla FSCN1 [19, 20]. Lisäksi miR 145 tukahduttaa mahasyövässä solumigraation ja invaasiota kohdistamalla N-kadheriinin. Kuitenkin positiivinen ilmaus määrä N-kadheriinin mahasyövän kudoksissa on vain 21% [10, 11]. Siksi määritettäessä keskeinen tavoite geenin miR 145 säätelyssä mahasyövässä invaasio on tarpeen.

Tässä tutkimuksessa, ensin havaitsi, että miR 145 ilmentyminen merkittävästi säädellä vähentävästi infiltratiivinen mahasyövän verrattuna laajentamisessa mahasyövän. Lisäksi olemme esittänyt todisteita siitä, että miR 145 tukahdutetaan solumigraatio ja invaasiota mahasyövän ensisijaisesti suoraan kohdentamalla FSCN1, joka korostettiin miR-145 ja FSCN1 säätelyssä mahasyövän pahanlaatuinen fenotyyppejä.

Materiaalit ja menetelmät

kliiniset näytteet

Kaikki kliiniset näytteet kerättiin tietoinen suostumus potilasta joille tehtiin gastrectomy Zhongshanin sairaalan Xiamen yliopiston Xiamen (Fujian, Kiina) kesäkuusta 2012 lokakuu 2013 . Kaikkiaan 160 paria kerättyjä kliinisissä näytteissä mukana 80 luokkiin mahasyövässä näytteitä, 40 infiltroiva mahasyövän näytteitä ja 40 laajentamalla mahasyövän näytteitä. Kasvain patologinen tyyppi vahvistettiin patologian tutkimus, ja vastaaviin normaaleihin mahalaukun limakalvon kerättiin yli 5 cm: n päässä kasvaimia.

Ethics selvitys

Tutkimus protokollat ​​olivat mukaisesti eettiset ohjeet julistuksen Helsingin (1975) ja hyväksyi lääketieteellisen eettisen komitean (nro 20081012) Zhongshan sairaalan Xiamen yliopiston Xiamen (Fujian, Kiina). Saimme kirjallinen suostumus lausunnot kaikkien osapuolten mukana tässä tutkimuksessa.

Solulinjat

MGC-803 ja SGC-7901 ihmisen mahasyövän solulinjoja ostettiin Institute of Cell Biology (Shanghai , Kiina, http://www.cellbank.org.cn). 293T ihmisalkion munuais- solulinja saatiin the American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). MGC-803 ja SGC-7901-soluja ylläpidettiin RPMI-1640-alustassa, kun taas 293T-solut ylläpidettiin DMEM: ssä. Kaikki väliaine sisälsi 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

lusiferaasireporttiterilla määritys

Soluja transfektoitu lusiferaasireportteri- geenejä, β-galaktosidaasi (β-gal) ja miR-145 jäljittelee tai miR-145-estäjän (Guangzhou RiboBio) käyttäen Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Invitrogen). Lusiferaasiaktiivisuus mitattiin 48 tuntia transfektion jälkeen, ja transfektion tehokkuutta normalisoitiin sisäisen β-gal-aktiivisuuden.

RNA ja RT-qPCR

Kokonais-RNA uutettiin käyttäen TRIzol-reagenssia (Invitrogen ) ja käänteistranskriptoidaan M-MuLV käänteistranskriptaasia (Qiagen) tuottamaan cDNA mukaan valmistajan protokollaa. Reaaliaikainen PCR suoritettiin käyttäen SYBR Green perustuva tunnistus on Roottorin Gene 6000 väline (Corbett Life Science) mukaisesti valmistajan ohjeiden ja käyttämällä alukeparia lueteltu taulukossa 1. miR-145 ja U6 alukkeet saatiin Qiagen. GAPDH tai U6 endogeeninen kontrolli käytettiin sisäisenä standardina, ja tulokset laskettiin käyttämällä △△ CT (jos CT on kynnys sykli) menetelmällä.

Plasmidi rakentaminen

käytetyt alukkeet rakentaminen lusiferaasin toimittajat ja plasmidit on lueteltu taulukossa 1. ihmisen FSCN1 3'-alue (UTR) monistettiin MGC-803 cDNA PCR-monistuksella LA Taq DNA-polymeraasia (TaKaRa) ja kloonattiin alavirtaan lusiferaasin koodaus sekvenssin pMIR-RAPORTTI (Ambion) vektori on Sacl ja MluI restriktiokohdat (Promega) rakentamiseksi ihmisen FSCN1-3'UTR-lusiferaasireportterilla. Mutaatiot tuotu miR sitovat kohdat käyttäen QuikChange -mutageneesitarvikkeissa (transgeeniset). Jotta miR-145 ja FSCN1 ekspressioplasmidit, sekvenssit monistettiin PCR: llä ja kloonattiin Spel /Nhel-sivustoja ja Xbal /Ndel sivustoja, vastaavasti, PLV-cs.4.0-perusvektoriin (Promega). Sillä FSCN1 häiriöitä plasmidi, kaksi paria sekvenssit hybridisoitiin ja alakloonattiin PLKO.1 mukaan valmistajan protokollan.

Lentivirusvektorikonstruktit tuotanto ja transfektio

HEK293T-solut ympättiin 6-kuoppaiselle insertin 24 h ennen transfektiota. MIR-145-ekspressioplasmidin, FSCN1 shRNA plasmidiin tai FSCN1 ekspressioplasmidin sitten kotransfektoidaan kanssa pakkaus plasmideilla (pHR ja pCMV-VSV-G) käyttäen Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Invitrogen). Viral supernatantit kerättiin 48 h transfektion jälkeen, sentrifugoitiin 3000 g: ssä 15 minuutin ajan, ja se suodatettiin läpi 0,45 um: n suodattimien (Millipore). Virustiitterit määritettiin transdusoimalla HeLa-soluja sarjalaimennoksia ja analysoida GFP: n ilmentymisen virtaussytometriaa käyttämällä. MGC-803-solut tai 7901 solujen 50-70% konfluenssiin infektoitiin virussupernatantteja, joka sisälsi 10 mg /ml polybreeniä 24 tuntia. Tuoretta väliainetta lisättiin sitten tartunnan soluja, jotka myöhemmin valittu puromysiinin.

Solun maahanmuutto- ja invaasiomääritys

Solut (3x10 ^{5) maljattiin 8,0 um huokoskoko Boyden kammiot (TranswellTM, Corning Life Sciences, Acton, MA, USA) joko päällystetty 10 ug: matrigeelin (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) kuoppaa kohti (for invaasio määritykset) tai vasemmalle päällystämättömiä (siirtolaisuuden määritykset) seerumittomassa joka sisälsi 10 g /l naudan seerumin albumiinia. Joka sisälsi 10% FBS: ää toimi kemoattraktantti alemmassa kammiossa. Non-tunkeutuvat solut poistettiin vanutupoilla kuluttua 36 h (for invaasio määritykset) tai 20 h (muuttoliikkeen määritykset). Tunkeutuneet solut värjättiin hematoksyliinillä (HE) ja laskettiin. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmesta yksittäisestä kokeesta.}

Western blotting

Proteiinit uutettiin punasolujen lyysauspuskuria (ELB; 50 mM Tris, 140 mM NaCl, 0,5% NP- 40 ja 100 mM NaF (pH 7,6)), joka sisälsi 1 mM fenyylimetaanisulfonyylifluoridia (PMSF, Sigma-Aldrich, USA). Kukin näyte erotettiin 10% SDS-PAGE-geelillä ja tämän jälkeen siirrettiin polyvinylideenidifluoridi (PVDF). Membraanit blokattiin 5% maitoa ja inkuboitiin ensisijaisen kanin anti-humaani FSCN1-vasta-ainetta (1: 3000, Cell Signaling Technology, USA), tai hiiren anti-humaani-GAPDH (1: 5000, Sigma-Aldrich), vasta-ainetta yli yön 4 ° C: ssa . Membraanit inkuboitiin sitten sopivalla piparjuuriperoksidaasi (HRP) konjugoitua sekundaarisia vasta-aineita (Thermo Fisher Scientific). Bändit kehitettiin käyttäen parannetun kemiluminesenssi (ECL) (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). GAPDH-proteiinia käytettiin latauskontrollina.

Tilastollinen analyysi

Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. Tilastollinen merkitsevyys analysoitiin Studentin t-testiä. Korrelaatio miR-145 tasoilla ja FSCN1 mRNA /proteiinin ekspressiotasot ihmisen syöpien laskettiin Spearmanin korrelaatiota. Kaikki tilastolliset analyysit laskettiin GraphPad Prism tilastoja ohjelmisto (GraphPad Software). P
< 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä (NS, ei merkittävää; * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001).

tulokset

Strong käänteinen suhde ilmentymisen miR-145 ja sen otaksuttu tavoite, FSCN1, ihmisen infiltroiva tyyppi mahasyövän

Käytimme TargetScan tietokanta (http://www.targetscan.org) tunnistamiseksi 3 'UTR on erityinen tavoite mRNA miR 145, joka voi säädellä maahanmuuttoa ja invaasion mahalaukun syöpäsoluja. Kaikista ennustettu mRNA: t, valitsimme FSCN1, joka on aiemmin osallistuvat kasvaimen muuttoliikettä ja invaasiota. FSCN1 on myös erittäin konservoituneita sekvenssejä 3 'UTR, jotka ovat komplementaarisia miR 145 siemenen sekvenssin.

Ensin tutkitaan, onko korrelaatio miR 145 ja FSCN1 voisi olla kliinisesti merkittävä mittaamalla ilmaus miR-145 ja FSCN1 mRNA /proteiinin tasot normaaleissa /kasvaimen pariksi näytteitä 80 potilaista mahalaukun syöpä. Tilastollinen analyysi osoitti merkittävää käänteinen korrelaatio ekspression miR-145 ja ilmaus FSCN1 mRNA /proteiinin 80 paria kliinisissä näytteissä (kuvio 1A ja 1 B).

Ming luokitellaan mahakarsinoomat kasvattamiseen tyyppi ja infiltratiivinen tyyppi perustuu kasvuun ja invasiivisuus kuvioita, ja välillä on vastaavuussuhde Ming luokittelu ja kliiniset ennuste [5]. Sen vuoksi, 40 infiltroiva mahasyövän näytteitä ja 40 laajenevat mahasyövän näytteet valittiin kuten edustajan HE värjäystä (kuvio 2A). Tässä luokittelu, solut laajeneva karsinooma, nojalla niiden rajoitettu levinneisyys, aggregaatin ja tuottaa sidotun massan muodossa polypoid ja fungaalinen vaurioita. Sitä vastoin solut infiltratiivinen syöpä levinnyt perifeerisesti ja laajalti, ja kasvaimen massa ei muodosta. Testasimme ilmentyminen miR-145 ja FSCN1 mRNA mahasyövän verrattuna viereiseen normaaliin mahalaukun limakalvon reaaliaikaisella PCR: llä. miR-145 oli erittäin säädellä vähentävästi infiltratiivinen mahasyövän verrattuna laajenee mahasyövän, kun taas ilmaus FSCN1 mRNA oli merkittävästi säädelty (kuvio 2B). Valitsimme 10 infiltratiivinen mahasyövässä näytteitä ja 10 laajenevat mahasyövän näytteitä yhdessä niiden vieressä normaaleissa kudoksissa analysoida ilmentymisen qPCR ja western-blottauksella. Yleistä ekspressiotasot miR-145 olivat pienempiä, erityisesti infiltratiivinen mahasyövän näytteitä verrattuna viereiseen normaaliin mahalaukun limakalvon. Sitä vastoin yleinen mRNA /proteiinin tasot FSCN1 olivat korkeammat infiltratiivinen mahasyövän (kuvio 2C). Näin ollen ilmaus miR-145 ja sen otaksuttu kohde FSCN1 oli vahva käänteinen suhde ihmisen infiltratiivinen tyyppi mahasyövän, mikä viittaa siihen, että olennainen roolit miR-145 ja FSCN1 ovat mahasyövässä hyökkäystä.

miR -145 suoraan kohdistaa FSCN1 mahalaukun syöpäsoluissa

Voit selvittää, miR 145 säätelee ilmentymistä FSCN1 mahalaukun syöpäsoluissa, ensin säädelty tasolle miR 145 mahasyövän MGC-803-solujen avulla lentiviruksesta-pohjainen vektori. Suoritimme sitten qPCR, mikä osoitti, että miR 145 yli-ilmentymisen merkittävästi alassäädetty mRNA taso FSCN1 (kuvio 3A) ja Western blot tutkimukset vahvistivat, että proteiini taso FSCN1 myös tukahdutettiin miR-145-yli-ilmentävät solut (kuvio 3B ). Kääntäen, knockdovvn miR 145 tasot käyttäen miR 145 estäjä tuloksena merkittävästi indusoi FSCN1 mRNA /proteiinin ilmentymistä sekä SGC-7901 ja MGC-803-soluissa (kuvio 3C). Olemme tuottaneet tulikärpäsen lusiferaasireport- sisältävä vektori FSCN1 3 'UTR ja sitten kotransfektoidaan MGC-803-solujen miR 145 jäljittelee tai miR 145 estäjä tutkia, FSCN1 on välittömänä kohteena miR-145. Lysaatit analysoitiin lusiferaasiaktiivisuuden 24 h transfektion jälkeen. Lusiferaasimääritystä osoitti, että miR 145 jäljittelee johtivat noin 55%: n lasku toimintaa, kun taas miR 145 estäjä lisäsi lusiferaasiaktiivisuutta 62% vuonna MGC-803 soluja verrattuna miR-negatiivinen kontrolli (kuvio 3D). Lisäksi olemme mutatoitu kolme suurta oletetun miR-145 tunnustamista elementit (MRE) on FSCN1 3 'UTR kautta QuikChange mutageneesin käyttöä lusiferaasimääritystä (kuvio 3D). Tulokset osoittivat, että sääntelyn vaikutukset miR 145 jäljittelee tai miR 145 estäjä olivat pääosin kumottu, joka vahvisti, että hiljentäminen vaikutukset miR-145 FSCN1 luovuttiin häiriöitä MIR-MRE vuorovaikutukset (kuvio 3D). Yhdessä nämä tutkimukset avulla on saatu näyttöä siitä, että FSCN1 on välittömänä kohteena miR 145 mahalaukun syöpäsoluja.

tukahduttaminen FSCN1 on välttämätöntä miR 145 estämään migraation ja invaasion mahalaukun syöpäsolujen

Mahasyöpää MGC-803 ja SGC-7901-solut transfektoitiin stabiilisti kaksi erilaista FSCN1 shRNAs estävän FSCN1 ymmärtää paremmin mahdollista roolia FSCN1 in miR-145-välitteistä kasvaimen muuttoliikettä ja invaasiota. Häiriön tehokkuutta FSCN1 shRNAs varmistettiin Western blot -analyysillä (kuvio 4A ja 4B). Transvvell- määritys Tulokset osoittivat, että solujen kyky siirtää ja tunkeutua sen erittäin tukahdutettiin jälkeen kaatamalla ilmentymistä FSCN1 in MGC-803 ja SGC-7901-soluissa verrattuna negatiiviseen kontrolliin soluissa (kuvio 4C ja 4D), mikä viittaa siihen, keskeinen rooli of FSCN1 näissä prosesseissa.

miR-145 tiedetään tukahduttaa migraation ja invaasion monia syöpätyyppejä, mukaan lukien mahasyöpä [10, 19, 21]. Kuten odotettua, täytäntöön ilmentyminen miR 145 johti merkittävästi vähentynyt muuttoliikkeen ja invaasion hinnat MGC-803 ja SGC-7901-soluissa. Lisäksi samanaikainen uudelleen ilmentäminen FSCN1 vaarantuu MIR-145-supressed solumigraation ja invaasiota kyky lähes kokonaan sekä miR-145-transfektoiduissa MGC-803 ja SGC-7901-soluissa (kuvio 5A ja 5B). Käänteisesti, käytimme FSCN1 shRNA estämään FSCN1 ilmentymisen miR 145 estäjä-transfektoiduissa MGC-803 ja SGC-7901-soluissa. Knockdovvn FSCN1 täysin päinvastainen miR 145 estäjä aktivaatio solumigraation ja invaasio, joka viittaa siten olennainen merkitys FSCN1 tässä prosessissa (kuvio 5C ja 5D). Yhdessä edellä esitetyt tulokset osoittivat, että tukahduttaminen FSCN1 on välttämätöntä miR 145 estämään migraation ja invaasion mahalaukun syöpäsoluja.

Keskustelu

vapautuminen Mirs on liitetty eri ihmisen syövissä, mukaan lukien ihmisen mahasyöpä. Kuitenkin molekyylitason mekanismit, joilla MIRS moduloivat karsinogeneesin prosessiin ja käyttäytymistä syöpäsolujen ei ole täysin määritelty. Ero miR ilmentyminen kasvaimissa verrattuna niiden viereisten normaaleissa kudoksissa tai ryhmien välillä kasvaimen näytteiden suotuisa tai huono kliininen tulos on käytetty tuottamaan miR allekirjoituksia mahdollisten prognostisten ja /tai ennustava arvo tietyissä syöpätyypeissä. Kuitenkin osallistuminen poikkeavasti ilmaistu Mirs ihmisen mahasyövän edelleen paljolti hyödyntämättä. Aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että miR 145 säätyy alas erilaisissa ihmisen maligniteettien, mukaan lukien rintasyöpä, keuhkosyöpä ja mahasyöpä [9, 22, 23]. Lu et ai [24] havaitsivat, että miR 145 toimii tuumorisuppressorina ja tavoitteet kaksi onkogeenien eli ANGPT2 ja NEDD9, munuaissolukarsinoomassa. Toinen tutkimus on osoittanut, että miR 145 tukahduttaa solumigraation ja invaasiota estämällä N-kadheriinin valkuaisaineiden translaation mahasyövässä soluissa [10]. Kuitenkin Kamikihara et al [11] osoitti, että vain 21% mahasyövän potilailla on N-kadheriinin-positiivinen ilme analysoituna immunohistokemiallisesti. Siksi vaihtoehtoinen molekyylimekanismin taustalla miR-145 on mukana säätelyyn Solujen migraation ja invaasion mahasyövän.

Tässä tutkimuksessa olemme vahvistaneet miR 145 säätyy alas mahasyövän kudoksissa verrattuna viereiseen normaaliin mahalaukun limakalvo, joka on yhdenmukainen aiempien tulosten kanssa [9]. Yritetään tunnistaa uusia alavirtaan kohteet miR-145, käytimme TargetScan tietokannan testauspakko kokeissa. Useista ehdokkaista, valitsimme FSCN1 lisäkokeita varten, koska FSCN1 on havaittu tärkeitä rooleja kasvaimen muuttoliikettä ja invaasiota. Useat tekijät osoittavat, että FSCN1 on suora alavirtaan kohteena miR-145. Ensinnäkin, FSCN1 sisältää erittäin konservoituneita sekvenssejä 3 'UTR, jotka ovat komplementaarisia miR 145 siemenen sekvenssin. Toiseksi, käänteinen korrelaatio miR 145 ja FSCN1 havaittiin pariksi näytteissä mahasyöpäpotilaista. Lopuksi luokittelussa kliininen näytteet laajenee tyyppi ja infiltratiivinen tyyppi perustuu Ming luokittelu, huomasimme, että miR-145 on erittäin säädellä vähentävästi infiltratiivinen mahasyövän verrattuna laajentamaan mahasyövän. Samaan aikaan vahvempi käänteinen korrelaatio havaittiin myös välillä miR-145 ja FSCN1 ekspressiotasot infiltratiivinen mahasyövässä. Tässä tutkimuksessa uutta tietoa korrelaatio miR-145 ja FSCN1 in infiltratiivinen mahasyövässä. Aiemmassa tutkimuksessa, Lauren jaettu mahasyövistä seuraaviin kahteen tyyppiin: suoliston tyyppi ja hajanainen tyyppi [25]. Suoliston tyyppinen syöpä on kuvattu rauhas kasvain muistuttava paksusuolen syöpä, ja hajanainen tyyppi syöpä koostuu yksinäinen tai pieniä klustereita soluja ilman muodostumista rauhaset. Kasvain tyyppejä Lauren ja Ming luokittelu läheisesti vastaavat toisiaan. Useimmat laajeneva kasvaimet ovat piirteitä suoliston-tyyppinen syöpä, ja useimmat infiltroiva kasvaimet ovat hajanaisia ​​tyyppiä syöpiä [5]. Kuitenkin huomattava määrä mahakarsinoomat ei voida luokitella suoliston tyyppiä tai hajanainen tyyppi, kuten erittelemätön syöpiä, jotka eivät imeydy hajanaisesti ja rauhas syövät, jotka tunkeutua hajanaisesti. Lisäksi varhaisten mahasyöpä käyttäen Lauren luokitus on melko vaikeaa, koska alkuvaiheessa hajanainen tyyppi syövän, määritelmän mukaan ei ole hajanainen. Kuitenkin Ming luokittelu voi ratkaista nämä ongelmat [5]. Vuonna Ming luokittelu, kuviot solun jakautuminen osoittavat selvästi perustavanlaatuinen ero niiden kasvupotentiaalia sekä voima levinneisyys ja hyökkäystä. Kuten infiltratiivinen mahasyöpä on enemmän invasiivisia kuin laajeneva mahasyövän, nämä tulokset viittaavat siihen, että miR-145 ja FSCN1 molemmat keskeisessä asemassa ovat mahasyövässä hyökkäystä.

Vaikka useat raportit ovat sekaantuneet säätelyyn FSCN1 mukaan Mirs monissa karsinoomat [19, 20, 26], parhaan tietomme Alalla ei ole esitetty, että FSCN1 on välittömänä kohteena miR 145 mahasyövän. Tässä tutkimuksessa olemme vahvistaneet, että miR-145 tukahduttaa FSCN1 ilmaisun, ja sitä on kohdistettu 3 'UTR: FSCN1 mahalaukun syöpäsoluja. Lisäksi samanaikainen uudelleen ilmentäminen FSCN1 vaarantuu MIR-145-supressed solumigraation ja invaasiota kyky lähes kokonaan miR-145-transfektoiduissa MGC-803 ja SGC-7901-soluissa, mikä osoitti, että tukahduttaminen FSCN1 on välttämätöntä miR -145 estää migraation ja invaasion mahalaukun syöpäsoluja. Siksi FSCN1 on tärkeä alavirtaan tavoite miR 145 säätelyssä mahasyövässä hyökkäystä.

Yhteenvetona tämän tutkimuksen havaittiin, että miR-145 on ensisijaisesti säädellä vähentävästi infiltratiivinen mahasyövän ja että miR 145 lauseke ja FSCN1 ilme on vahva käänteinen korrelaatio infiltratiivinen mahasyövässä. Toiminnallisesti, osoitimme, että miR 145 tukahduttaa solumigraatio ja invaasiota mahasyövän ensisijaisesti suoraan kohdistaminen FSCN1. Siten palauttaminen ilmaus miR 145 voidaan tutkia vaihtoehtona terapeuttinen strategia vastaan ​​mahasyövän.

• PLoS ONE: Atomic Insight osaksi Altered O6-metyyliguaniini-DNA metyylitransferaasi proteiini Architecture mahasyövän
• PLoS ONE: terveyskäyttäytymistä Korean Mahalaukun Cancer Survivors kanssa Hypertensio: taipumus analyysi KNHANES III-V (2005-2012)