PLoS ONE: Reverse Koreliacija tarp MicroRNA-145 ir FSCN1 Poveikio skrandžio vėžys migracija ir Invasion

Anotacija

mikro RNR (Mirs) vaidina svarbų vaidmenį tolygiam genų ekspresiją metu iš Tumorigenesis ir naviko vystymosi procesus. Ankstesni tyrimai parodė, kad miR-145 yra žemyn reguliuojamos skrandžio navikų ir yra susijęs su naviko migracijos ir invazijos. Tačiau ir molekulinės mechanizmas ir funkcijos miR 145 skrandžio vėžio lieka neaiški. Šis tyrimas yra pirmasis demonstravimas smarkiai žemyn reguliavimo PPN-145 raiškos infiltracinė skrandžio vėžiu, palyginti su plečia skrandžio vėžiu. Be to, koreliacija analizė parodė stiprius atgalinės koreliacijas tarp miR-145 ir FSCN1 ekspresijos lygį į infiltracinė skrandžio vėžio. Be to, mes parodė, kad Pasaulis-145 tiesiogiai skirta FSCN1 ir slopina ląstelių migraciją ir invazija skrandžio vėžio. Beldžiasi žemyn FSCN1 išraiška lėmė migracijos ir invazijos slopinimo skrandžio vėžio ląstelių, ir pakartotinai išreikšti FSCN1 į Pasaulis-145-ekspresija ląstelių atstatomi jų migracijos ir invazija defektus. Taigi, mes padarė išvadą, kad Pasaulis-145 reguliuoja ląstelių migraciją ir invazija į skrandžio vėžio pirmiausia tiesiogiai skirta FSCN1

nurodomoji dalis:. Chen Jj Cai Wy Liu XW, Lo QC, Chen, G Huang Wf et al , (2015) Atbulinės eigos Koreliacija tarp MicroRNA-145 ir FSCN1 Poveikis skrandžio vėžys migracija ir invazija. PLoS ONE 10 (5): e0126890. Doi: 10,1371 /journal.pone.0126890

Akademinė redaktorius: Chengfeng Yang Mičigano valstijos universitetas, JAV

Įstojo: sausio 14 2015; Priėmė: Balandžio 8, 2015 m Paskelbta: Gegužės 26, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Chen et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus ir jo Pagalbinė informacija failus

finansavimas:. 1. Nacionalinis gamtos mokslo fondas Kinijos (dotacijos Nr 81.172.283) JKK (http://www.nsfc.gov.cn/). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį. 2. Gamtos mokslų fondas iš Fujian provincijos (dotacijos Nr 2012D037) JKK (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys yra viena iš didžiausių mirtingumo dėl piktybinių navikų pasaulyje [1]. Patobulinta medicinos technologija gali pagerinti skrandžio vėžio rezultatus. Tačiau, skrandžio vėžys išlieka antra dažniausia vėžio mirčių [2], kurią sukelia naviko invazija ir metastazių. Kartu invazija ir metastazių sudaro procesas, kurio metu piktybinių vėžinių ląstelių perkėlimas iš pirminės svetainės kitose srityse ir tada formuoti auglius ne tolimoje svetainę per limfinę kanalą, kraujagyslės ar kūno ertmės [3]. Taigi, aiškinant molekulinius mechanizmus, dalyvaujančių plėtojant ir invaziškumo skrandžio vėžys yra būtina.

1977 m Mingas klasifikuojami skrandžio karcinomos į plečiasi ir infiltracinė tipai pagal jų augimo ir invaziškumo modelių [4]. Šie tipai yra lengvai atpažįstamos histologiškai. Plėsti karcinomos auga masiškai ir plėtimosi dėl kurio diskretinių naviko mazgelių susidarymą, o infiltracinė karcinomos turi vėžinių ląstelių, kurios įsiveržti individualiai [5]. Iš dviejų tipų skrandžio vėžio, infiltracinė skrandžio vėžys yra labiau invazinės nei plečiasi skrandžio vėžiu. Taigi tokia klasifikacija pateikiama rekomenduojama atskirti skrandžio vėžio mėginiai kliniškai ir palengvina išsamias studijas apie molekulinius mechanizmus skrandžio vėžio.

mikro RNR (Mirs) vaidina svarbius vaidmenis daugelyje biologinių procesų, įskaitant vėžio procesus, tiesiogiai slopina tikslinių mRNAs išraiška per įvairių molekulinius mechanizmus [6, 7]. Be to, Mirs pasitikrinti dėl netipiško reguliavimą kancerogenezėje metu ir gali veikti arba kaip onkogenų ar naviko slopintuvai [7]. Naujausi tyrimai parodė, kad daugelis Mirs įtakos platinimu ir invazija į skrandžio vėžį. Pasaulis-21 yra iki reguliuojama skrandžio vėžio ir skatina naviko proliferaciją ir invazija skrandžio vėžio nukreipiant PTEN [8]. Priešingai, miR-145 yra žemyn reguliuojama į žmogaus skrandžio vėžio [9]. Be to, tyrimai parodė, kad Pasaulis-145 gali slopinti ląstelių migraciją ir invazija slopindamas N-cad baltymų vertimą skrandžio vėžio ląstelių [10]. Tačiau, Kamikihara et al [11] "nustatė, ekspresijos lygį N-cad į 146 pacientai, sergantys skrandžio vėžio imunohistocheminiu, o rezultatai parodė, kad tik 31 pacientai (21%) turėjo N-cad-teigiamas išraiška. Todėl, kai kurie kiti molekuliniai mechanizmai miR-145 gali reguliuoti ląstelių migraciją ir invaziją skrandžio vėžio.

FSCN1 yra 55-kDa aktino-surišantis baltymas, kuris yra susietas su filopodija ir aktino-pagrįstas išsikišimo formavimui, taip pat ji skatina ląstelių judrumą, migracija ir invazija [12, 13]. FSCN1 išraiška nėra arba mažai normalaus epitelyje, bet FSCN1 ekspresija daugelyje karcinoma, įskaitant gaubtinės žarnos adenomos, epitelio kiaušidžių vėžio ir stemplės suragėjusių ląstelių karcinoma [14-16]. Be to, tyrimų serija parodė, kad vykdomas FSCN1 išraiška didina platinimu ir invazija kiaušidžių ir skrandžio vėžio ląstelių [17, 18].

Neseniai atlikti tyrimai parodė, kad Pasaulis-145 funkcijas kaip naviko slopintuvas ir kad Pasaulis-145 raiškos slopina migracija ir invazija į prostatos vėžio ir šlapimo pūslės vėžio nukreipiant FSCN1 [19, 20]. Be to, PPN-145 slopina skrandžio vėžio ląstelių migraciją ir invazija orientacija N-cad. Tačiau, teigiamas išraiška norma N-cad skrandžio vėžio audiniuose yra tik 21% [10, 11]. Todėl, nustatant pagrindinę tikslinę geną PPN-145 reguliuojant skrandžio vėžio invazijos yra būtina.

Šiame tyrime mes pirmą kartą nustatė, kad Pasaulis-145 išraiška buvo nepaprastai žemyn reguliuojama infiltracinė skrandžio vėžiu, palyginti su plečia skrandžio vėžiu. Be to, mes pateikė įrodymų, kad Pasaulis-145 nutylėtų ląstelių migraciją ir invazija į skrandžio vėžio pirmiausia tiesiogiai skirta FSCN1, kurioje atskleidžiamas PPN-145 ir FSCN1 vaidmenį skrandžio vėžio piktybinių fenotipų reglamentą.

Medžiagos ir metodai

klinikinius mėginius

Visi klinikiniai mėginiai buvo surinkti su informuoto sutikimo pacientų, kurie buvo pašalintas skrandis ne Zhongshan ligoninė Siameno universitetas Xiamen (Fujian Province, Kinija) nuo 2012 m birželio mėn iki 2013 m . iš viso 160 poros surinktų klinikinių mėginių 80 neklasifikuojamas skrandžio vėžys mėginius, 40 infiltracinė skrandžio vėžio mėginiai ir 40 plečia skrandžio vėžys mėginius. Navikas patologinis tipas buvo patvirtintas patologijos tyrimo ir suderintus normalus skrandžio gleivinės buvo renkami iš daugiau nei 5 cm atstumu nuo navikų.

Etika pareiškimas

studijų protokolai buvo laikantis etikos gairės Helsinkio (1975) ir buvo patvirtintas medicinos etikos komiteto (Nr 20.081.012) Zhongshan ligoninė Siameno universitetas Xiamen (Fujian Province, Kinija) deklaracija. Gavome raštišką sutikimą ataskaitas iš visų dalyvaujančių šiame tyrime dalyviai.

Mobilaus ryšio linijos

MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos buvo įsigyti iš ląstelių biologijos instituto (Šanchajus , Kinija, http://www.cellbank.org.cn). 293T žmogaus embriono inkstų ląstelių linija buvo gauta iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijoje (ATCC, MD, JAV). MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelės buvo prižiūrimi RPMI-1640 terpėje, o 293T ląstelės išliko DMEM. Visi žiniasklaidos pateikta 10% vaisiaus jaučio serumo (FBS), 100 V /ml penicilino ir 100 mikrogramai /ml streptomicino (INVITROGEN, Karlovi Varai, CA, JAV).

liuciferazės reporterio testą

ląstelės buvo perkeltų su liuciferazės reporteris genų, beta-galaktozidazė (β-gal) ir Pasaulis-145 imituoja arba Pasaulis-145 inhibitoriaus (Guangzhou RiboBio), naudojant Lipofectamine 2000 transfekcijq reagento (Invitrogen). Liuciferazė aktyvumas buvo matuojamas 48 h po transfekciją ir transfekcija efektyvumas buvo normalizuotas vidaus β-GAL veikla.

RNR gavybos ir RT qPCR

Viso RNR išskirta naudojant TRIzol reagentą (Invitrogen ) ir atvirkštinės-transkripcija su M-MuLV atvirkštinės transkriptazės (Qiagen) gaminti kDNR pagal gamintojo protokolą. Realaus laiko PGR buvo atliekama naudojant SYBR Green remiantis aptikti rotoriaus-Gene 6000 instrumento (Corbett gyvosios gamtos), pagal gamintojo nurodymus ir taikant išvardytus 1. Pasaulis-145 ir U6 pradmenys buvo gauti iš Qiagen lentelėje pradmenų poros. GAPDH arba U6 endogeninė kontrolė buvo naudojamas kaip vidinio standarto, o rezultatai buvo apskaičiuoti naudojant △△ CT (kai CT riba ciklas) metodas.

plazmidžių statybos

pradmenis, naudojami iš liuciferazės žurnalistų ir plazmidžių statybos, yra išvardyti 1 žmogaus FSCN1 3 "neišverstas regionas (UTR) buvo papildytas iš MGC-803 kDNR PGR amplifikacijos su LA Taq DNR polimerazė (TAKARA) Valgomosios ir klonuojami pasroviui liuciferazės kodavimo seka į pMIR-ATASKAITA (Ambion) vektoriaus ties SACI ir MluI restrikcijos vietų (PROMEGA) statyti žmogaus FSCN1-3'UTR-liuciferazės žurnalistė. Mutacijos buvo įtraukta į Mir-jungimosi vietų naudojant QuikChange mutagenezes rinkinį (TransGen). Dėl MIR-145 ir FSCN1 plazmidės, sekos buvo papildyta PGR ir klonuotas į SpeI /NheI svetainių ir Xbal /NdeI svetainėse, atitinkamai, iš PLV-cs.4.0 bazinis vektorius (Promega). Dėl FSCN1 trukdžių plazmidžių, dvi poros sekos buvo atkaitinimo ir subklonuotas į PLKO.1 pagal gamintojo protokolą.

lentiviruso gamyba ir transfekcija

HEK293T ląstelės buvo pasėjamos į 6 šulinėlių įdėklu 24 h iki transfekciją. Mir-145 išraiška plazmidės, FSCN1 shRNR plazmidės ar FSCN1 išraiška plazmidės buvo tada bendrai perkeltų su pakuote plazmidžių (PHR ir pCMV-VSV-G), naudojant Lipofectamine 2000 transfekcijq reagento (Invitrogen). Virusinės supernatantų, buvo imami 48 h po transfekciją, centrifuguojamos 3000 g 15 min, ir filtruojamas per 0,45 mkm filtrais (Millipore). Virusinės Titrai buvo nustatyti transdukciją HeLa ląstelių ne serijiniu būdu atskiedus ir analizuoti GFP išraiška, naudojant srauto citometrijos. MSV-803 ląstelių arba 7901 ląstelių 50-70% susiliejimo buvo užkrėstas virusų nuopile, kurių sudėtyje yra 10 mg /ml polibrenui 24 val. tada šviežią terpę buvo pridėta prie infekuotų ląstelių, kurios vėliau buvo atrinkti su puromicino.

Mobilusis migracija ir invazija tyrimas

Ląstelės (3x10 ^{5) buvo padengtas ant 8,0 mkm porų dydis Boyden kameros (Transwell, Corning Gyvosios gamtos mokslai, Acton, MA, JAV) arba padengta 10 mikrogramų Matrigel (BD biologijos mokslų, Bedford, MA, JAV) už šulinio (dėl invazijos tyrimai) arba į kairę nepadengtas (migracijos tyrimai) koncentracija serume be terpėje, turinčioje 10 g /l galvijų serumo albumino. Terpė su 10% FBS tarnavo kaip į apatinę kamerą chemoattractant. Ne-užplūsta ląstelės buvo pašalintas su medvilniniais tamponais po 36 h (dėl kišimosi tyrimai) arba 20 h (migracijos tyrimai). Įsiveržė ląstelės buvo tamsintas hematoksilinu (HE) ir suskaičiuoti. Duomenys pateikti kaip vidurkis ± SD iš trijų atskirų eksperimentų}

imunoblotingu

Baltymai buvo ekstrahuojamas eritrocitų lizės buferiniame tirpale (ELB,. 50 mM Tris, 140 mm NaCl 0,5% NP- 40 ir 100 mM NaF (pH 7,6)), kuriame yra 1 mM fenilmetansulfonil (PMSF; Sigma-Aldrich, JAV). Kiekvienas mėginys buvo atskirtos 10% SDS-PAGE metodu ir tada perkeliamas ant polivinilideno difluoridą (PVDF) membranas. Membranos buvo blokuotos 5% pieno ir inkubuojami su pirminės triušio anti-žmogaus FSCN1 antikūno (1: 3000; Mobilusis signalines technologijos, JAV) arba pelės anti-žmogaus GAPDH (1: 5000; Sigma-Aldrich) antikūno per naktį 4 ° C , tada Membranos buvo inkubuojami su atitinkamu krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto antrinių antikūnų (Thermo Fisher Scientific). Juostos buvo sukurtas naudojant sustiprintą chemiluminescencja (ECL) sistemą (Amersham biomokslų, Buckinghamshire, Jungtinė Karalystė). GAPDH baltymas naudojamas kaip pakrovimo kontrolę.

Statistinė analizė

duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SD. Statistinis reikšmingumas buvo analizuojami su Stjudento t-testą. Tarp Mir-145 lygių ir FSCN1 iRNR /baltymų ekspresijos lygį žmogaus skrandžio vėžio koreliacija buvo apskaičiuojamas Spirmeno koreliacijos. Visi statistinės analizės buvo apskaičiuotas naudojant GraphPad Prism statistikos programinę įrangą (GraphPad programinė įranga). P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas (NS, nėra reikšminga; * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
. < 0,001)

rezultatai

Stiprus atvirkštinis ryšys tarp PPN-145 ir jo spėjamą tikslą, FSCN1 išraiška, žmogaus infiltracinė tipo skrandžio vėžio

Mes naudojome TargetScan duomenų bazę (http://www.targetscan.org) nustatyti 3 'UTRs specifinių tikslinių mRNR PPN-145, kad gali reguliuoti migraciją ir invazija skrandžio vėžio ląsteles. Visų numatomų mRNR, mes išrinkome FSCN1, kuris anksčiau buvo auglio migracijos ir invazijos. FSCN1 taip pat turi labai užkonservuoti sekas ties 3 'UTR, kurie papildytų Mir-145 sėklų seka.

Pirmiausia, mes ištirti, ar miR-145 ir FSCN1 koreliacija gali būti kliniškai reikšmingas, matuojant išraiškos Pasaulis-145 ir FSCN1 iRNR /baltymų kiekiai normalus /naviko suporuotas mėginius iš 80 pacientų, sergančių skrandžio vėžiu. Statistinė analizė atskleidė reikšmingą atvirkštinę koreliaciją tarp PPN-145 išraiškos ir FSCN1 iRNR /baltymų raiškos 80 porų klinikinių mėginių (pav 1A ir 1B).

Ming klasifikuojami skrandžio karcinomos į besiplečiančią tipą ir infiltracinė tipas grindžiamas augimo ir invaziškumo modelius, o koreliacija tarp Ming klasifikavimo ir klinikinės prognozei [5]. Todėl buvo pasirinktas 40 infiltracinė skrandžio vėžio mėginiai ir 40 plečia skrandžio vėžio mėginiai, kaip nurodyta pagal atstovu jis dažymo (pav 2A). Šiuo klasifikaciją, besiplečiančioje karcinoma, remiantis jų riboto skverbiasi galią, užpildo ląsteles ir gamina ribotai masę į Polipveidīgs ir fungating pažeidimų formą. Priešingai, iš infiltracine karcinoma ląstelių plitimą periferiškai ir plačiai, ir navikas masė nesudaro. Mes išbandėme PPN-145 ir FSCN1 mRNR išraiška skrandžio vėžiu, palyginti su gretimų normalus skrandžio gleivinės realaus laiko PGR. ir miR-145 buvo nepaprastai žemyn reguliuojama infiltracine skrandžio vėžio, palyginti su plečiasi skrandžio vėžį, o FSCN1 mRNR išraiška buvo nepaprastai iki reguliuojama (pav 2B). Mes pasirinkome 10 infiltracinė skrandžio vėžio mėginiai ir 10 plečia skrandžio vėžio mėginiai kartu su savo gretimuose normaliuose audiniuose analizuoti ekspresiją qPCR ir Imunoblotingo. Bendras ekspresijos lygis miR-145 buvo mažesnis, ypač infiltracine skrandžio vėžio mėginių, palyginti su gretimuose normaliuose skrandžio gleivinės. Priešingai, bendras iRNR /baltymų lygiai FSCN1 buvo didesnis infiltracinė skrandžio vėžiu (pav 2C). Todėl miR-145 ir jo spėjamą tikslą FSCN1 išraiška turėjo stiprų atvirkštinį ryšį į žmogiškąjį infiltracinė tipo skrandžio vėžiu, taip rodo, kad laikomasi esminių vaidmenų PPN-145 ir FSCN1 yra skrandžio vėžio invazijos.

Pasaulis -145 tiesiogiai skirta FSCN1 skrandžio vėžio ląstelių

Norėdami nustatyti, ar Pasaulis-145 reglamentuoja FSCN1 išraišką skrandžio vėžio ląsteles, pirmiausia iki-reguliuojami PPN-145 lygį skrandžio vėžio MSV-803 ląstelių naudojant lentiviruso pagrindu vektorius. tada mes atliekamas qPCR, kuris atskleidė, kad miR-145 raiškos reikšmingai mažina reguliuojama lygis mRNR FSCN1 (pav 3A), ir Western Blot eksperimentų patvirtino, kad baltymas lygis FSCN1 taip pat buvo nuslopinta ir miR-145-ekspresija ląstelių (pav 3B ). Priešingai, nokdaunas miR-145 lygių, naudojant Pasaulis-145 inhibitoriaus, žymiai sukeltas FSCN1 iRNR /baltymų raišką tiek SGC-7901 ir MSV-803 ląstelių (pav 3c). Mes generuoja Firefly liuciferazė reporteris vektorių, įtraukiant FSCN1 3 'UTR ir tada bendrai Transfekuoti MSV-803 ląstelių su Pasaulis-145 imituoja arba Pasaulis-145 inhibitoriaus ištirti, ar FSCN1 yra tiesioginis taikinys miR-145. Lizatai analizuojami liuciferazės veiklos 24 valandas po transfekciją. Liuciferazės tyrimas parodė, kad Mir-145 imituoja, apytiksliai 55% sumažėja veiklos, o Mir-145 inhibitoriaus padidino liuciferazės veiklą 62% MSV-803 ląstelių, lyginant su Mir-neigiamos kontrolės (pav 3D). Be to, mes mutuotos tris pagrindines tariamą miR-145 pripažinimo elementus (MREs) į FSCN1 3 'UTR per QuikChange mutagenezės, skirtas panaudoti liuciferazės tyrime (pav 3D). Rezultatai parodė, kad reguliavimo poveikis Mir-145 imituoja arba miR-145 inhibitoriaus pirmiausia buvo panaikinta, kuris patvirtino, kad triukšmo slopinimo poveikis PPN-145 dėl FSCN1 buvo panaikintos pagal Mir-MRE sąveiką (pav 3D) sutrikimų. Bendrai, šie tyrimai, jei įtikinamų įrodymų, kad FSCN1 yra tiesioginė tikslinė miR 145 skrandžio vėžio ląsteles.

Represijos FSCN1 būtina Mir-145 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląstelių

Skrandžio vėžys MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelės buvo stabiliai perkeltų su dviem skirtingais FSCN1 shRNAs slopinti FSCN1 geriau suprasti galimą vaidmenį FSCN1 į Pasaulis-145-sąlygotas auglys migracijos ir invazijos. Trukdžių efektyvumas FSCN1 shRNAs buvo patvirtinta Vakarų dėmė analizė (pav 4a ir 4b). Į transwell tyrimo rezultatai parodė, kad ląstelių sugebėjimas migruoti ir įsiveržti buvo labai nuslopintas po beldžiasi žemyn FSCN1 išraišką MGC-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių, lyginant su neigiamos kontrolės ląstelių (pav 4c ir 4d), tokiu būdu rodo esminį vaidmenį iš FSCN1 šiuose procesuose.

miR-145 yra žinoma, kad slopinti migracija ir invazija daugelio vėžio rūšių, įskaitant skrandžio vėžio [10, 19, 21]. Kaip ir tikėtasi, vykdomas išraišką PPN-145 lėmė ženkliai sumažėjo migracijos ir invazija normas MGC-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių. Be to, tuo pačiu metu vėl išraiška FSCN1 pažeista Mir-145-supressed ląstelių migraciją ir invazija galimybę beveik visiškai abiejose Pasaulis-145-perkeltų MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių (pav 5A ir 5B). Priešingai, mes naudojome FSCN1 shRNR slopinti FSCN1 išraišką miR-145 inhibitoriaus-perkeltų MGC-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių. Nokdaunas iš FSCN1 visiškai priešinga Mir-145 inhibitoriaus tarpininkaujant aktyvavimo ląstelių migracijos ir invazija, todėl rodo esminį vaidmenį FSCN1 šiame procese (pav 5C ir 5D). Bendrai, pirmiau rezultatai parodė, kad FSCN1 represijos būtina Mir-145 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląsteles.

Diskusijos

iš Mirs dereguliavimo buvo susijęs įvairių žmogaus navikų, įskaitant žmogaus skrandžio vėžio. Tačiau, molekulinės tvarka, pagal kurią Mirs kuria reguliuoja kancerogenezėje ir vėžinių ląstelių elgesį procesą nebuvo visiškai apibrėžta. Skirtumas miR išraiška navikų, palyginti su jų gretimuose normaliuose audiniuose arba tarp grupių navikų mėginiuose su palankiu ar prastos klinikinės baigties buvo naudojamas generuoti mir parašus su potencialiu prognozavimo ir /arba prognostinė vertė tam tikrų vėžio rūšių. Nepaisant to, iš nenormaliai išreikštų Mirs žmonijos skrandžio vėžio dalyvavimas lieka iš esmės neištirta. Ankstesni tyrimai, pranešė, kad miR-145 yra žemyn reguliuojama įvairiose žmogaus piktybinių navikų, įskaitant krūties vėžio, plaučių vėžio ir skrandžio vėžio [9, 22, 23]. Lu et al [24] nustatė, kad Pasaulis-145 funkcijas kaip naviko slopintuvas ir tikslai du onkogenų, ty ANGPT2 ir NEDD9, inkstų ląstelių karcinoma. Kitas tyrimas parodė, kad Pasaulis-145 slopina ląstelių migraciją ir invazija slopindamas N-cad baltymų vertimą skrandžio vėžio ląstelių [10]. Tačiau Kamikihara ir kt [11] nustatė, kad tik 21% skrandžio vėžio pacientai turi N-cad-teigiamas išraišką kaip analizuojami imunohistocheminiu. Todėl alternatyva molekulinės mechanizmo, lemiančio mir 145 dalyvauja ląstelių migracijos ir invazijos skrandžio vėžio reguliavimą.

Šiame tyrime mes patvirtino, kad Pasaulis-145 yra žemyn reguliuoja skrandžio vėžio audiniuose palyginti į gretimuose normaliuose skrandžio gleivinės, kuris yra suderinamas su ankstesnių tyrimų išvadas [9]. Bandant nustatyti naujus pasroviui tikslus PPN-145, mes panaudojome TargetScan duomenų bazę atlikti patikros bandymus. Iš kelių kandidatų, mes išrinkome FSCN1 tolesnių eksperimentų, nes FSCN1 buvo nustatyta, kad vaidina svarbų vaidmenį navikų migracijos ir invazijos. Kai kurie faktai rodo, kad FSCN1 yra tiesioginis pasroviui tikslas miR-145. Pirma, FSCN1 sudėtyje yra labai užkonservuoti sekas ties 3 'UTR, kurie papildytų Mir-145 sėklų seka. Antra, atvirkštinis ryšys tarp miR-145 ir FSCN1 rastas suporuotas mėginių iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Galiausiai, kai klasifikuojant atitinkamus klinikinius mėginius į plečia tipą ir infiltracinė tipas remiantis Ming ir mišinių klasifikavimo, mes nustatėme, kad Pasaulis-145 yra nepaprastai žemyn reguliuojama infiltracinė skrandžio vėžiu, palyginti su plečia skrandžio vėžiu. Tuo tarpu stipresnis atvirkštinė koreliacija taip pat buvo aptikta tarp Pasaulis-145 ir FSCN1 ekspresijos lygį infiltracinė skrandžio vėžio. Šis tyrimas įžiebti naują šviesą tarp miR-145 ir FSCN1 koreliacijos infiltracinė skrandžio vėžio. Ankstesniame tyrime Lauren padalintas skrandžio vėžio į šias dviejų tipų: žarnyno tipą ir difuzinio tipo [25]. Žarnyno tipo vėžys yra aprašyta kaip liaukų auglio panašus storosios žarnos karcinoma, ir difuzinis tipas vėžys yra sudarytas iš pavienių arba mažų grupių ląstelių be liaukų formavimas. Naviko tipai Lauren s ir Ming klasifikavimo glaudžiai atitinka vienas kitą. Dauguma besiplečiantys navikų bruožus žarnyno tipo vėžio, ir dauguma infiltracinė navikai yra pasklidųjų tipo vėžio [5]. Tačiau nemažai skrandžio karcinoma negali būti skirstomi į žarnyno tipo ar difuzinio tipo, įskaitant nediferencijuotose vėžio, kurie neturi įsiskverbia difuziškai ir liaukų vėžio, kad įsiskverbia difuziškai. Be to, išankstinio skrandžio vėžio aptikimo naudojant Lauren klasifikaciją yra gana sunku, nes anksti pasklidosios tipo vėžio, pagal apibrėžimą, yra ne išsklaidyti. Tačiau Ming klasifikacija gali išspręsti šias problemas [5]. Ming klasifikacija, ląstelių pasiskirstymo modelius aiškiai rodo esminį skirtumą savo augimo potencialą, taip pat galią skverbtis ir invazijos. Kaip infiltracinė skrandžio vėžys yra labiau invazinės nei plečiasi skrandžio vėžiu, šie rezultatai rodo, kad Pasaulis-145 ir FSCN1 tiek žaisti lemiamus vaidmenis skrandžio vėžio invazijos.

Nors kelios ataskaitos susijęs su FSCN1 reglamentavimą Mirs daugelyje karcinoma [19, 20, 26], kiek mums žinoma, ne ataskaita rodo, kad FSCN1 yra tiesioginis taikinys miR 145 skrandžio vėžio. Šiame tyrime mes patvirtino, kad Pasaulis-145 malšina FSCN1 išraišką ir tiesiogiai orientuota į 3 'UTR iš FSCN1 skrandžio vėžio ląsteles. Be to, tuo pačiu metu vėl išraiška FSCN1 pažeista Mir-145-supressed ląstelių migracija ir invazija gebėjimas beveik visiškai Pasaulis-145-transfekuota MGC-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių, o tai reiškia, kad FSCN1 represijos būtina Mir -145 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląsteles. Todėl FSCN1 yra svarbus tolesnis tikslas miR-145 reguliuojant skrandžio vėžio invazijos.

Apibendrinant, šis tyrimas nustatė, kad Pasaulis-145 yra daugiausia žemyn reguliuojama infiltracinė skrandžio vėžiu ir kad Pasaulis-145 išraiška ir FSCN1 išraiška turi stiprų atvirkštinį ryšį į infiltracinė skrandžio vėžio. Funkciškai, mes parodė, kad Pasaulis-145 slopina ląstelių migraciją ir invazija į skrandžio vėžio pirmiausia tiesiogiai skirta FSCN1. Taigi, atkuriant PPN-145 išraišką galima ištirti kaip alternatyvus gydymo strategija prieš skrandžio vėžio.

• PLoS ONE: atominės Pažvelgti į pakeista O6-Metilguaninas-DNR metiltransferazei baltymų architektūros skrandžio vėžio
• PLoS ONE: Sveikata elgesį Korėjos skrandžio vėžio maitintojo netekimo su hipertenzija: polinkį analizė KNHANES III-V (2005-2012)