PLoS ONE: Reverse Korrelation zwischen MicroRNA-145 und FSCN1 Affecting Magenkrebs Migration und Invasion

Abstrakt

MicroRNAs (miRs) spielen eine wichtige Rolle bei der Genexpression Entwicklung während der Prozesse der Tumorentstehung und Tumor modulieren. Frühere Studien haben festgestellt, dass miR-145 heruntergeregelt wird im Magen Neoplasma und auf Tumor Migration und Invasion bezogen. Doch sowohl der molekulare Mechanismus und die Funktion von miR-145 in Magenkrebs bleiben unklar. Die vorliegende Studie ist die erste Demonstration der signifikanten Herunterregulation von miR-145 Expression in infiltrative Magenkrebs im Vergleich zu Magenkrebs zu erweitern. Zusätzlich Analysen Korrelation starke inverse Korrelation zwischen miR-145 und FSCN1 Expressionsniveaus in infiltrative Magenkrebs aufgedeckt. Darüber hinaus haben wir gezeigt, dass miR-145 FSCN1 direkt zielt auf und unterdrückt die Zellmigration und Invasion in Magenkrebs. Der Zuschlag führte die Expression von FSCN1 zur Unterdrückung der Migration und Invasion in Magenkrebszellen, und re-exprimierenden FSCN1 in miR-145-überexprimierenden Zellen umgekehrt ihre Migration und Invasion Fehler. So schlossen wir, dass miR-145 Zellmigration und Invasion in Magenkrebs regelt in erster Linie durch direkte FSCN1 Targeting

Citation:. Chen Jj, Cai Wy, Liu Xw, Luo Qc, Chen G, Huang Wf, et al . (2015) umge Korrelation zwischen MicroRNA-145 und FSCN1 Affecting Magenkrebs Migration und Invasion. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10.1371 /journal.pone.0126890

Academic Editor: Chengfeng Yang, Michigan State University, UNITED STATES

Empfangen: 14. Januar 2015; Akzeptiert: 8. April 2015; Veröffentlicht: 26. Mai 2015

Copyright: © 2015 Chen et al. Dies ist ein offener Zugang Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons Attribution verteilt, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorgesehen sind der ursprüngliche Autor und Quelle genannt

Datenverfügbarkeit: Alle relevanten Daten sind innerhalb des Papiers und seiner Hintergrundinformationen Dateien

Finanzierung:. 1. National Natural Science Foundation of China (Erteilungsnummer 81172283) JCC (http://www.nsfc.gov.cn/). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zu veröffentlichen. 2. Natural Science Foundation der Provinz Fujian (Grant No 2012D037) JCC (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs hat eine der höchsten Sterblichkeitsraten bei malignen Tumoren weltweit [1]. Verbesserte Medizintechnik kann das Ergebnis von Magenkrebs zu verbessern. Allerdings bleibt Magenkrebs die zweithäufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle [2], die durch Tumorinvasion und Metastasierung verursacht wird. Zusammen, der Invasion und Metastasierung eines Prozesses bilden, in dem bösartigen Tumorzellen von einem primären Standort auf andere Bereiche übertragen und dann durch den lymphatischen Kanal, Blutgefäßen oder Körperhöhle [3] Tumoren an einem entfernten Ort bilden. Somit involviert die molekularen Mechanismen, die Klärung bei der Entwicklung und Invasivität von Magenkrebs ist notwendig.

1977 Ming klassifiziert Magenkarzinomen in die Erweiterung und infiltrative Typen basierend auf deren Wachstum und Invasivität Muster [4]. Diese Typen sind leicht erkennbar histologisch. Ausbau Karzinome wachsen en masse und durch Expansion in der Bildung von diskreten Tumorknötchen führt, während infiltrative Karzinomen Tumorzellen haben, die einzeln einzufallen [5]. Von den zwei Arten von Magenkrebs, ist infiltrativen Magenkrebs mehr invasiv als Magenkrebs zu erweitern. Eine solche Klassifizierung stellt somit eine Referenzproben Magenkrebs zu unterscheiden, klinisch und ermöglicht ausführliche Studien über die molekularen Mechanismen von Magenkrebs.

MicroRNAs (miRs) spielen eine entscheidende Rolle in vielen biologischen Prozessen, einschließlich Krebs-Prozesse, durch direkte Hemmung die Expression der Ziel-mRNAs durch verschiedene molekulare Mechanismen [6, 7]. Darüber hinaus unterziehen miRs abweichende Regelung während der Karzinogenese und können entweder als Onkogene oder Tumorsuppressoren wirken [7]. Jüngste Studien haben gezeigt, dass viele miRs Proliferation und Invasion in Magenkrebs beeinflussen. miR-21 ist hochreguliert bei Magenkrebs und fördert Tumorproliferation und Invasion in Magenkrebs durch PTEN Targeting [8]. Im Gegensatz dazu wird miR-145 herunterreguliert in menschlichen Magenkrebs [9]. Darüber hinaus hat die Forschung gezeigt, dass miR-145 Zellmigration unterdrücken kann und Invasion durch die Hemmung der N-Cadherin Proteintranslation in Magenkrebszellen [10]. Jedoch detektiert Kamikihara et al [11], um die Expression von N-Cadherin in 146 Patienten mit Magenkrebs durch Immunhistochemie, und die Ergebnisse zeigten, dass nur 31 Patienten (21%) hatten N-Cadherin-positiven Ausdruck. Daher könnten einige andere molekulare Mechanismen von miR-145 Zellmigration und Invasion in Magenkrebs zu regulieren.

FSCN1 ist ein 55-kDa Aktin-bindendes Protein, das mit Filopodien und Aktin-basierten Standsbildung verbunden ist, und es fördert die Zellbeweglichkeit, Migration und Invasion [12, 13]. FSCN1 Ausdruck fehlt oder niedrig in normalen Epithelien, aber FSCN1 ist in vielen Karzinomen überexprimiert, einschließlich kolorektalen Adenomen, epithelialen Ovarialkarzinom und Plattenepithelkarzinom des Ösophagus [14-16]. Darüber hinaus wurde eine Reihe von Studien gezeigt, dass FSCN1 Ausdruck erhöht die Proliferation und Invasion von Eierstock- und Magenkrebszellen [17, 18].

Neue Studien durchgesetzt haben, dass miR-145 wirkt als Tumorsuppressor gefunden und dass miR-145-Überexpression unterdrückt Migration und Invasion in Prostatakrebs und Blasenkrebs durch gezielte FSCN1 [19, 20]. Darüber hinaus unterdrückt miR-145 Magenkrebszellmigration und Invasion durch N-Cadherin-Targeting. Allerdings ist die positive Expressionsrate von N-Cadherin bei Magenkrebs Gewebe nur 21% [10, 11]. Um daher die wichtigsten Ziel Bestimmung Gen von miR-145 Magenkrebs-Invasion bei der Regulierung notwendig ist.

In der vorliegenden Studie haben wir festgestellt, dass zunächst miR-145-Expression wurde merklich herunterreguliert in infiltrative Magenkrebs im Vergleich zu bei Magenkrebs zu erweitern. Außerdem, wenn wir Beweise dafür, dass miR-145 Zellmigration und Invasion in Magenkrebs unterdrückt in erster Linie durch direkte FSCN1 Targeting, die die Rolle der miR-145 und FSCN1 in der Regulation der Magenkrebs maligne Phänotypen hervorgehoben.

Werkstoffe und Methoden

klinische Proben

Alle klinischen Proben wurden mit der informierten Einwilligung der Patienten gesammelt, die Gastrektomie an der Zhongshan-Krankenhaus der Universität Xiamen in Xiamen (Provinz Fujian, China) von Juni 2012 bis Oktober 2013 unterzog insgesamt. enthielten die 160 Paare von gesammelten klinischen Proben 80 nicht klassifiziert Magenkrebs Proben, 40 infiltrativen Magenkrebs Proben und 40 Magenkrebs-Proben erweitert. Der Tumor pathologischen Typ wurde durch Pathologie Untersuchung bestätigt, und die angepassten normalen Magenschleimhäuten wurden von mehr als 5 cm entfernt von den Tumoren gesammelt.

Ethik-Anweisung

Die Studienprotokolle wurden in Übereinstimmung mit den ethischen Richtlinien der Deklaration von Helsinki (1975) und wurden von der Medical Ethics Committee (Nr 20081012) von Zhongshan Krankenhaus der Universität Xiamen in Xiamen (Provinz Fujian, China) zugelassen. Wir erhielten in dieser Studie Zustimmung Aussagen von allen Teilnehmern geschrieben.

Zelllinien

Die MGC-803 und SGC-7901 menschlichen Magenkrebszelllinien aus dem Institut für Zellbiologie erworben wurden (Shanghai , China, http://www.cellbank.org.cn). Die 293T menschliche embryonale Nierenzelllinie wurde von der American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA) erhalten. MGC-803 und SGC-7901-Zellen wurden in RPMI-1640-Medium gehalten, während 293T-Zellen in DMEM gehalten wurden. Alle Medien enthielten 10% fötalem Rinderserum (FBS), 100 U /ml Penicillin und 100 ug /ml Streptomycin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

Luziferase-Reporter-Assay

Die Zellen wurden transfiziert mit Luciferase-Reportergenen, β-Galactosidase (β-gal) und miR-145 nachahmt oder miR-145-Inhibitor (Guangzhou RiboBio) unter Verwendung von Lipofectamin 2000 Transfektionsreagenz (Invitrogen). Luciferase-Aktivität wurde bei 48 h nach der Transfektion gemessen und die Transfektionseffizienz wurde normalisiert auf interne β-gal Aktivität.

RNA-Extraktion und RT-qPCR

Gesamt-RNA wurde extrahiert unter Verwendung von TRIzol-Reagens (Invitrogen ) und revers transkribiert mit M-MuLV reverse Transkriptase (Qiagen) cDNA gemäß dem Protokoll des Herstellers herzustellen. Echtzeit-PCR wurde unter Verwendung von SYBR Green basierte Erkennung in einem Rotor-Gene 6000 Instrument (Corbett Life Science) durchgeführt gemäß den Anweisungen des Herstellers und unter Verwendung der Primerpaare in Tabelle 1 aufgelistet miR-145 und U6 Primer wurden von Qiagen erhalten. GAPDH oder U6 endogene Kontrolle wurde als interner Standard verwendet, und die Ergebnisse wurden mit dem △△ CT berechnet Verfahren (wobei CT die Schwellenzyklus ist).

Plasmidkonstruktion

Die verwendeten Primer für die Konstruktion der Luciferase-Reporter und Plasmide sind in Tabelle 1 die menschliche FSCN1 3 'untranslatierten Region (UTR) wurde amplifiziert aus MGC-803-cDNA durch PCR-Amplifikation mit dem LA Taq DNA Polymerase (Takara) kloniert, und stromabwärts des Luciferase-codierende aufgelistet Sequenz in der PMIR-REPORT (Ambion) Vektor an den SacI und MluI-Restriktionsstellen (Promega) die menschliche FSCN1-3'UTR-Luciferase-Reporter zu konstruieren. Die Mutationen wurden in die miR-Bindungsstellen wurde ein QuikChange Mutagenesis Kit (TransGen) verwenden. Für die miR-145 und FSCN1 Expressionsplasmide wurden Sequenzen durch PCR amplifiziert und kloniert in die SpeI /NheI-Sites und XbaI /NdeI Seiten jeweils des PLV-cs.4.0-Basisvektor (Promega). Für die FSCN1 Interferenz Plasmids wurden zwei Paare von Sequenzen geglüht und subkloniert in PLKO.1 gemäß dem Protokoll des Herstellers.

Lentivirale Erzeugung und Transfektion

HEK293T-Zellen auf einer 6-Well-Insert ausgesät 24 h vor der Transfektion. Die miR-145-Expressionsplasmid, FSCN1 shRNA Plasmid oder FSCN1 Expressionsplasmid wurde dann mit dem Verpacken Plasmide (phr und pCMV-VSV-G) unter Verwendung des Lipofectamine 2000 Transfektionsreagenz (Invitrogen) cotransfiziert. Virale Überstände wurden bei 48 h nach der Transfektion gesammelt, bei 3000 g für 15 min zentrifugiert und gefiltert durch 0,45 um-Filter (Millipore). Virale Titer wurden durch Transduktion HeLa-Zellen bei Reihenverdünnungen bestimmt und GFP-Expression Analyse mittels Durchflusszytometrie. MGC-803-Zellen oder 7901 Zellen bei 50-70% Konfluenz wurden mit viralen Überständen infiziert, die 10 mg /ml Polybrene für 24 h. Frisches Medium wurde dann zu den infizierten Zellen, die später mit Puromycin ausgewählt wurden.

Die Zellmigration und Invasion Assay

Die Zellen (3x10 ^{5) wurden auf 8,0 &mgr; m Porengröße Boyden plattiert Kammern (Transwell, Corning Life Sciences, Acton, MA, USA) entweder beschichtet mit 10 &mgr; g Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) pro Vertiefung (für die Invasion Assays) oder unbeschichtet (für Migration Assays) in Serum-freien Medium, das 10 g /L Rinderserumalbumin enthält. Medium, das 10% FBS als Chemoattraktans in der unteren Kammer diente. Nicht eindringenden Zellen wurden mit Wattestäbchen nach 36 h entfernt (für die Invasion Assays) oder 20 Stunden (für Migration Assays). Invaded Zellen wurden mit Hämatoxylin (HE) und gezählt gefärbt. Die Daten werden als Mittelwert ± SD von drei individuellen Experimenten dargestellt}

Western Blotting

Proteine ​​wurden mit Erythrozyten-Lyse-Puffer extrahiert (ELB;. 50 mM Tris, 140 mM NaCl, 0,5% NP- 40 und 100 mM NaF (pH 7,6)), enthaltend 1 mM Phenylmethansulfonylfluorid (PMSF, Sigma-Aldrich, USA). Jede Probe wurde auf einem 10% SDS-PAGE-Gel aufgetrennt und dann auf Polyvinylidendifluorid (PVDF) Membranen überführt. Die Membranen wurden mit 5% Milch blockiert und mit primären Kaninchen-anti-human FSCN1 Antikörper inkubiert (1: 3000; Cell Signaling Technology, USA) oder Maus-anti-human GAPDH (1: 5000; Sigma-Aldrich) Antikörper über Nacht bei 4 ° C . Die Membranen wurden dann mit dem geeigneten Meerrettich-Peroxidase (HRP) inkubiert -konjugierten sekundären Antikörpern (Thermo Fisher Scientific). Die Banden wurden unter Verwendung eines verstärkten Chemilumineszenz (ECL) (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK) entwickelt. Das GAPDH-Protein wurde als Ladekontrolle verwendet.

Statistical analysis

Die Daten werden als Mittelwert ± SD ausgedrückt. Die statistische Signifikanz wurde mit dem Student-t-Test analysiert. Die Korrelation zwischen den miR-145 Ebenen und FSCN1 mRNA /Protein-Expressionsniveaus in der menschlichen Magenkrebs wurde von Spearman-Korrelation berechnet. Alle statistischen Analysen wurden berechnet GraphPad Prism-Statistik-Software (GraphPad Software) verwenden. P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen (NS, signifikant nicht; * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
. < 0,001)

Ergebnisse |

starke inverse Beziehung zwischen der Expression von miR-145 und seiner vermeintlichen Ziel, FSCN1, Magenkrebs in der menschlichen infiltrativen

Wir benutzten die TargetScan Datenbank (http://www.targetscan.org) die 3 'UTR der spezifischen Ziel-mRNAs von miR-145 zu identifizieren, die die Migration und Invasion von Magenkrebszellen regulieren kann. Von allen vorhergesagten mRNAs, wählten wir FSCN1, die in Tumor Migration und Invasion zuvor in Zusammenhang gebracht wurde. FSCN1 auch hoch Sequenzen am 3'-UTR erhalten, die der miR-145 seed Sequenz komplementär sind.

Zuerst untersuchten wir, ob die Korrelation von miR-145 und FSCN1 konnte durch die Messung der Expression klinisch relevant sein, miR-145 und FSCN1 mRNA /Protein-Spiegel in normalen /Tumorgepaarte Stichproben von 80 Patienten mit Magenkrebs. Die statistische Analyse ergab eine signifikante inverse Korrelation zwischen der Expression von miR-145 und die Expression von FSCN1 mRNA /Protein in den 80 Paaren von klinischen Proben (1A und 1B).

Ming klassifiziert Magenkarzinomen in expandierenden Typ und infiltrativen basierend auf Wachstum und Invasivität Muster und eine Korrelation besteht zwischen Ming-Klassifikation und die klinische Prognose [5]. Daher 40 infiltrativen Magenkrebs Proben und 40 Proben erweitert Magenkrebs wurden durch die Vertreter wie angegeben gewählt HE-Färbung (2A). In dieser Klassifizierung werden die Zellen eines expandierenden Karzinom, die aufgrund ihrer begrenzten Durchschlagskraft, zu aggregieren und eine umschriebene Masse in Form von polypoid und vegetirenden Läsionen erzeugen. Im Gegensatz dazu verteilt die Zellen von infiltrative Karzinom peripher und weit verbreitet, und eine Tumormasse bilden nicht. Wir testeten die Expression von miR-145 und FSCN1 mRNA bei Magenkrebs im Vergleich zu den benachbarten normalen Magenschleimhaut durch real-time PCR. miR-145 wurde merklich herunterreguliert in infiltrative Magenkrebs im Vergleich zu Magenkrebs erweitert, während die Expression von FSCN1 mRNA bemerkenswert war hochreguliert (2B). Wir wählten 10 infiltrativen Magenkrebs Proben und 10 Magenkrebs-Proben erweitert zusammen mit ihren angrenzenden normalen Gewebe-Expression durch qPCR und Western-Blot-Analyse. Die Gesamtexpressionsniveaus von miR-145 waren niedriger, insbesondere in den infiltrative Magenkrebs Proben im Vergleich zu den angrenzenden normalen Magenschleimhaut. Im Gegensatz dazu waren die Gesamt-mRNA /Protein-Niveaus von FSCN1 höher in der infiltrative Magenkrebs (2C). Folglich hatte die Expression von miR-145 und seiner vermeintlichen Ziel FSCN1 eine starke inverse Beziehung in menschlichen infiltrativen Magenkrebs, damit was darauf hindeutet, dass die wesentlichen Rollen von miR-145 und FSCN1 bei Magenkrebs Invasion sind.

miR -145 zielt direkt auf FSCN1 in Magenkrebszellen

Um festzustellen, ob miR-145, die Expression von FSCN1 in Magenkrebszellen reguliert, wir zunächst den Umfang der miR-145 in Magenkrebs MGC-803-Zellen hochreguliert mit ein Lentivirus-basierten Vektor. Wir führten dann qPCR, die ergab, dass miR-145-Überexpression signifikant nach unten reguliert die mRNA-Ebene von FSCN1 (3A) und Western-Blot-Experimente bestätigten, dass der Proteingehalt von FSCN1 auch in miR-145-überexprimierenden Zellen (3B unterdrückt wurde ). Umgekehrt Zuschlags von miR-145 Stufen einen miR-145-Inhibitor unter Verwendung von in Folge deutlich FSCN1 mRNA /Protein-Expression sowohl in der SGC-7901 und MGC-803-Zellen (3C) induziert. Wir erzeugten eine Glühwürmchen-Luciferase-Reportervektor der FSCN1 3 'UTR enthält, und dann cotransfiziert MGC-803-Zellen mit miR-145 imitiert oder miR-145-Inhibitor zu untersuchen, ob FSCN1 ein direktes Ziel von miR-145 ist. Die Lysate wurden auf Luciferase-Aktivität von 24 h nach der Transfektion analysiert. Die Luciferase-Test zeigte, dass die miR-145 imitiert in einem ungefähren 55% ige Abnahme der Aktivität führte, während der miR-145-Inhibitor die Luciferase-Aktivität um 62% in MGC-803-Zellen im Vergleich mit der miR-Negativkontrolle (Abb 3D) erhöht. Außerdem mutierten wir drei Haupt putative miR-145 Erkennungselemente (MREs) in der FSCN1 3 'UTR über QuikChange Mutagenese zur Verwendung in der Luciferase-Assay (Fig 3D). Die Ergebnisse zeigten, dass die regulatorischen Effekte der miR-145 nachahmt oder miR-145-Hemmer wurden in erster Linie außer Kraft gesetzt, was bestätigt, dass die zum Schweigen zu bringen Auswirkungen von miR-145 auf FSCN1 durch die Unterbrechung der miR-MRE-Interaktionen (Abb 3D) abgeschafft wurden. Zusammengefasst, sofern diese Studien überzeugende Beweise dafür, dass FSCN1 ein direktes Ziel von miR-145 in Magenkrebszellen ist.

Die Unterdrückung von FSCN1 für notwendig ist, miR-145, die Migration und Invasion von Magenkrebszellen zu hemmen

Magenkrebs MGC-803 und SGC-7901-Zellen wurden stabil mit zwei verschiedenen FSCN1 shRNAs transfiziert FSCN1 zu hemmen, um besser zu verstehen, die mögliche Rolle von FSCN1 in miR-145-vermittelten Tumor Migration und Invasion. Die Interferenzeffizienz FSCN1 shRNAs wurde durch Western-Blot-Analyse (4A und 4B) bestätigt. Die Transwell-Testergebnisse zeigten, dass die Fähigkeit der Zellen hoch nach Klopfen nach unten unterdrückt zu wandern und einzufallen wurde die Expression von FSCN1 in MGC-803 und SGC-7901-Zellen im Vergleich zur negativen Kontrollzellen (4C und 4D), wodurch eine wesentliche Rolle darauf hindeutet von FSCN1 in diesen Prozessen.

miR-145 ist bekannt, die Migration und Invasion von vielen Krebsarten, einschließlich Magenkrebs [10, 19, 21] zu unterdrücken. Wie erwartet, erzwungene Expression von miR-145 führte zu Migration und Invasion Raten in MGC-803 und SGC-7901-Zellen signifikant verringert. Darüber hinaus beeinträchtigt die gleichzeitige Wiederexpression von FSCN1 die miR-145-Zellen unterdrückt Migration und Invasion Fähigkeit fast vollständig in beiden miR-145-transfizierten MGC-803 und SGC-7901-Zellen (5A und 5B). Im Gegensatz dazu haben wir FSCN1 shRNA FSCN1 Ausdruck in miR-145-Inhibitor-transfizierten MGC-803 und SGC-7901-Zellen zu hemmen. Preissturz von FSCN1 vollständig umgekehrt die miR-145-Inhibitor-vermittelte Aktivierung von Zellmigration und Invasion, so dass die wesentliche Rolle der FSCN1 in diesem Prozess (5C und 5D) hindeutet. Insgesamt zeigten die obigen Ergebnisse, dass die Unterdrückung von FSCN1 für notwendig ist, miR-145, die Migration und Invasion von Magenkrebszellen zu hemmen.

Diskussion

Die Deregulierung von miRs wurde in verschiedenen verwickelt Krebserkrankungen des Menschen, einschließlich der menschlichen Magenkrebs. Jedoch haben die molekularen Mechanismen, durch die miRs den Prozess der Karzinogenese und das Verhalten der Krebszellen modulieren nicht vollständig definiert. Differential miR-Expression in Tumoren im Vergleich mit ihren angrenzenden normalen Geweben oder zwischen Gruppen von Tumorproben mit einem günstigen oder schlechten klinischen Ergebnis verwendet worden ist miR Signaturen mit potentiellen prognostischen und /oder prognostischen Wert bei bestimmten Krebsarten zu erzeugen. Dennoch bleibt die Beteiligung der aberrantly ausgedrückt miRs in menschlichen Magenkrebs weitgehend unerforscht. Frühere Studien haben berichtet, dass miR-145-heruntergeregelt wird in verschiedenen menschlichen Tumoren, einschließlich Brustkrebs, Lungenkrebs und Magenkrebs [9, 22, 23]. Lu et al [24] festgestellt, dass miR-145 fungiert als Tumorsuppressor und zielt auf zwei Onkogenen, nämlich ANGPT2 und NEDD9, in Nierenzellkarzinom. Eine andere Studie hat gezeigt, dass miR-145 Zellmigration und Invasion unterdrückt von N-Cadherin Proteintranslation in Magenkrebszellen Hemmung [10]. Jedoch fand Kamikihara et al [11], dass nur 21% Magenkrebs-Patienten haben N-Cadherin-positiven Ausdruck, wie durch Immunhistochemie analysiert. Daher ist es eine alternative molekulare Mechanismus miR-145 zugrunde liegen in der Regulation der Zellmigration und Invasion von Magenkrebs beteiligt ist.

In der vorliegenden Studie haben wir bestätigt, dass miR-145 wird herunterreguliert im Magenkrebsgewebe verglichen zum benachbarten normalen Magenschleimhaut, die mit früheren Ergebnissen [9] im Einklang steht. In einem Versuch, neuartige nachgeschalteten Targets von miR-145 zu identifizieren, verwendeten wir die TargetScan Datenbank Screening-Experimente durchzuführen. Von mehreren Kandidaten wählten wir FSCN1 für weitere Experimente, weil FSCN1 gefunden wurde, eine wichtige Rolle bei der Tumor Migration und Invasion zu spielen. Mehrere Beweis deuten darauf hin, dass FSCN1 die direkte Downstream-Ziel von miR-145 ist. Zum einen enthält FSCN1 hoch Sequenzen am UTR '3 erhalten, die auf die miR-145 Samen Sequenz komplementär sind. Zweitens wurde eine inverse Korrelation zwischen miR-145 und FSCN1 in den gepaarte Stichproben von Patienten mit Magenkrebs gefunden. Schließlich, wenn die klinischen Proben in Typ und infiltrativen auf Ming Klassifizierung basiert expandierenden Klassifizieren, fanden wir, dass miR-145 ist bemerkenswert herabreguliert in infiltrative Magenkrebs im Vergleich zu Magenkrebs zu erweitern. Inzwischen wurde eine stärkere inverse Korrelation auch zwischen miR-145 und FSCN1 Expressionsniveaus in infiltrative Magenkrebs festgestellt. Die vorliegende Studie werfen ein neues Licht auf den Zusammenhang zwischen miR-145 und FSCN1 in infiltrative Magenkrebs. In einer früheren Studie, unterteilt Lauren Magenkrebs in die folgenden zwei Arten: Darm-Typ und diffusen Typ [25]. Intestinalen Typ Krebs ist als Drüsentumor ähnelt Kolonkarzinom beschrieben und diffuse Art Krebs aus einzeln oder kleine Cluster von Zellen ohne Bildung von Drüsen zusammen. Die Tumorarten in Laurens und Ming-Klassifikation entsprechen eng miteinander. Die meisten wachsenden Tumoren haben Eigenschaften von Darm-Typ-Krebs, und die meisten infiltrative Tumoren sind diffuse Art Krebsarten [5]. Jedoch kann eine signifikante Anzahl von Magenkarzinomen nicht in intestinalen Typ oder diffuse Typ klassifiziert werden, einschließlich Krebsarten, die undifferenzierte infiltrieren nicht diffus und Drüsenkrebsarten, die diffus infiltrieren. Darüber hinaus Klassifizierung der Nachweis von Magenfrühkarzinomen mit Lauren ist relativ schwierig, weil die frühen Stadium der diffusen Typ Krebs, durch Definition, diffundieren nicht. Allerdings Klassifizierung Ming kann diese Probleme zu lösen [5]. In Ming Klassifizierung zeigen die Muster der Zellverteilung eindeutig einen fundamentalen Unterschied in ihrem Wachstumspotenzial sowie Macht der Durchdringung und Invasion. Als infiltrativen Magenkrebs mehr invasiv als expandierende Magenkrebs ist, legen diese Ergebnisse nahe, dass miR-145 und FSCN1 beide eine entscheidende Rolle bei Magenkrebs Invasion spielen.

Obwohl mehrere Berichte über die Regulierung der FSCN1 von miRs in vielen Karzinomen beteiligt [19, 20, 26], nach bestem Wissen hat keinen Bericht vorgeschlagen, dass FSCN1 ein direktes Ziel von miR-145 in Magenkrebs ist. In dieser Studie konnten wir bestätigen, dass miR-145 FSCN1 Ausdruck und direkt zielt auf die 3'-UTR von FSCN1 in Magenkrebszellen unterdrückt. Darüber hinaus beeinträchtigt die gleichzeitige Wiederexpression von FSCN1 die miR-145-unterdrückt die Zellmigration und Invasion Fähigkeit fast vollständig miR-145-transfizierten MGC-803 und SGC-7901-Zellen, die zeigten, dass die Unterdrückung von FSCN1 für miR notwendig ist -145, die Migration und Invasion von Magenkrebszellen zu hemmen. Daher ist FSCN1 ein wichtiger Downstream-Ziel von miR-145 Magenkrebs-Invasion bei der Regulierung.

Zusammenfassend stellt die vorliegende Studie festgestellt, dass miR-145 in erster Linie in infiltrative Magenkrebs herunterreguliert ist und dass miR-145 Expression und FSCN1 Ausdruck haben eine starke inverse Korrelation in infiltrative Magenkrebs. Funktionell haben wir gezeigt, dass miR-145 Zellmigration und Invasion in Magenkrebs unterdrückt in erster Linie durch direkte FSCN1 Targeting. Daher Wiederherstellung der Expression von miR-145 kann als eine alternative therapeutische Strategie gegen Magenkrebs erforscht werden.

• PLoS ONE: Atomic Einblick in die Altered O6-Methylguanine-DNA-Methyltransferase-Protein Architektur in Magenkrebs
• PLoS ONE: Gesundheit Behaviors der koreanischen Magenkrebs-Überlebende mit Hypertonie: Eine Anschaffungsneigung Analyse von KNHANES III-V (2005-2012)