PLoS ONE: Reverse Correlazione tra MicroRNA-145 e FSCN1 che influenzano il cancro gastrico Migrazione e Invasion

Estratto

I microRNA (miR) svolgono un ruolo importante nella modulazione dell'espressione genica durante il processo di tumorigenesi e lo sviluppo del tumore. Precedenti studi hanno trovato che il miR-145 è down-regolato nella neoplasia dello stomaco ed è legato alla migrazione del tumore e l'invasione. Tuttavia, sia il meccanismo e la funzione del miR-145 nel carcinoma gastrico molecolare rimangono poco chiari. Il presente studio è la prima dimostrazione del significativo down-regolazione dell'espressione miR-145 nel carcinoma gastrico infiltrante rispetto ad espandere il cancro gastrico. Inoltre, la correlazione analisi hanno rivelato forti correlazioni inverse tra i livelli di espressione FSCN1 miR-145 e nel cancro gastrico infiltrante. Inoltre, abbiamo dimostrato che miR-145 si rivolge direttamente FSCN1 e sopprime la migrazione delle cellule e l'invasione nel cancro gastrico. Abbattendo l'espressione di FSCN1 ha portato alla soppressione della migrazione e l'invasione delle cellule di cancro gastrico, e ri-esprimere FSCN1 nelle cellule miR-145-overexpressing invertito i loro difetti migrazione e l'invasione. Così, abbiamo concluso che miR-145 regola la migrazione cellulare e dell'invasione di cancro gastrico principalmente di mira direttamente FSCN1

Visto:. Chen Jj, Cai Wy, Liu Xw, Luo Qc, Chen G, Huang Wf, et al . (2015) Correlazione inversa tra MicroRNA-145 e FSCN1 che influenzano il cancro gastrico migrazione e l'invasione. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10.1371 /journal.pone.0126890

Editor Accademico: Chengfeng Yang, Michigan State University, Stati Uniti |

Ricevuto: 14 gennaio 2015; Accettato: 8 aprile 2015; Pubblicato: 26 maggio 2015

Copyright: © 2015 Chen et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

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Finanziamento:. 1. Fondazione nazionale di Scienze naturali di Cina (Grant No. 81.172.283) CCM (http://www.nsfc.gov.cn/). I finanziatori avevano alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto. 2. Natural Science Foundation della provincia del Fujian (Grant No. 2012D037) CCM (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). I finanziatori avevano alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto

Competere interessi:.. Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione

Introduzione

cancro gastrico ha uno dei tassi di mortalità più alti per i tumori maligni in tutto il mondo [1]. Migliorata tecnologia medica può migliorare l'esito del cancro gastrico. Tuttavia, il cancro gastrico resta la seconda causa più comune di decessi correlati al cancro [2], che è causato da invasione tumorale e metastasi. Insieme, invasione e metastasi formano un processo in cui le cellule tumorali maligne trasferiscono da un sito primario in altri settori e quindi formano tumori in un sito distante attraverso il canale linfatico, vasi sanguigni o cavità del corpo [3]. Quindi, chiarire i meccanismi molecolari coinvolti nello sviluppo e l'invasività del cancro gastrico è necessario.

Nel 1977, Ming classificato carcinomi gastrici in espansione e tipi infiltrative in base alle loro modelli di crescita e l'invasività [4]. Questi tipi sono istologicamente facilmente riconoscibili. carcinomi espansione crescere in massa e dall'espansione causando la formazione di noduli tumorali discreti, considerando carcinomi infiltrativa hanno cellule tumorali che invadono individualmente [5]. Dei due tipi di cancro gastrico, cancro gastrico infiltrante è più invasivo rispetto espansione cancro gastrico. Tale classificazione fornisce in tal modo un punto di riferimento per distinguere i campioni di cancro gastrico clinicamente e facilita gli studi dettagliati dei meccanismi molecolari del cancro gastrico.

I microRNA (miR) giocano un ruolo critico in molti processi biologici, inclusi i processi tumorali, inibendo direttamente l'espressione di mRNA bersaglio mediante vari meccanismi molecolari [6, 7]. Inoltre, miR sottoposti a regolamentazione aberrante durante la carcinogenesi e possono agire sia come oncogeni o soppressori tumorali [7]. Recenti studi hanno dimostrato che molti miR influenzano la proliferazione e l'invasione nel cancro gastrico. miR-21 è up-regolato in cancro gastrico e favorisce la proliferazione del tumore e l'invasione di cancro gastrico di mira PTEN [8]. Al contrario, miR-145 è down-regolato nel carcinoma gastrico umano [9]. Inoltre, la ricerca ha dimostrato che il miR-145 può sopprimere la migrazione delle cellule e l'invasione inibendo traduzione della proteina N-caderina in cellule di cancro gastrico [10]. Tuttavia, Kamikihara et al [11] ha rilevato i livelli di espressione di N-caderina in 146 pazienti con cancro gastrico di immunoistochimica, ed i risultati hanno mostrato che solo 31 pazienti (21%) hanno avuto espressione N-caderina-positivo. Di conseguenza, alcuni altri meccanismi molecolari di miR-145 potrebbe regolare la migrazione delle cellule e l'invasione di cancro gastrico.

FSCN1 è un 55-kDa proteine ​​actina-legame che è associato con filopodi e formazione protrusione actina-based, e promuove la motilità cellulare, la migrazione e l'invasione [12, 13]. espressione FSCN1 è assente o bassa in epiteli normali, ma FSCN1 è sovraespresso in molti carcinomi, tra adenomi colorettali, il cancro ovarico epiteliale e carcinoma a cellule squamose dell'esofago [14-16]. Inoltre, una serie di studi hanno indicato che applicata FSCN1 espressione aumenta la proliferazione e l'invasione delle cellule di cancro ovarico e gastrico [17, 18].

Recenti studi hanno scoperto che le funzioni miR-145 come un soppressore del tumore e che miR-145 sovraespressione sopprime la migrazione e l'invasione di cancro alla prostata e il cancro alla vescica di mira FSCN1 [19, 20]. Inoltre, miR-145 sopprime la migrazione delle cellule di cancro gastrico e l'invasione di mira N-caderina. Tuttavia, il tasso espressione positiva di N-caderina nei tessuti di cancro gastrico è solo il 21% [10, 11]. Pertanto, la determinazione del gene bersaglio chiave di miR-145 nel regolare gastrica invasione del cancro è necessario.

Nel presente studio, in primo luogo abbiamo scoperto che miR-145 espressione è stata notevolmente down-regolato nel carcinoma gastrico infiltrante rispetto a quello in espansione cancro gastrico. Inoltre, abbiamo dimostrato che miR-145 soppresso migrazione cellulare e dell'invasione di cancro gastrico principalmente di mira direttamente FSCN1, che ha evidenziato il ruolo di miR-145 e FSCN1 nella regolazione del cancro gastrico fenotipi maligni.

Materiali e metodi

campioni clinici

Tutti i campioni clinici sono stati raccolti con il consenso informato dei pazienti sottoposti a gastrectomia presso l'Ospedale di Zhongshan di Xiamen University in Xiamen (Fujian, Cina) dal giugno 2012 al ottobre 2013 . In totale, le 160 coppie di campioni clinici raccolti inclusi 80 classificati campioni cancro gastrico, 40 infiltrative campioni di cancro gastrico e 40 in espansione campioni di cancro gastrico. Il tipo patologico del tumore è stata confermata da un esame patologia, e le mucose gastriche normali appaiati sono stati raccolti da più di 5 cm di distanza dai tumori.

Etica dichiarazione

I protocolli di studio erano in conformità con la linee guida etiche della Dichiarazione di Helsinki (1975) e sono stati approvati dal Comitato Etico medica (n ° 20.081.012) di Zhongshan Hospital di Xiamen University a Xiamen (Fujian, Cina). Abbiamo ottenuto dichiarazioni scritte di consenso di tutti i partecipanti coinvolti in questo studio.

Le linee cellulari

Le linee di cellule di cancro gastrico umano MGC-803 e SGC-7901 sono stati acquistati presso l'Istituto di Biologia Cellulare (Shanghai , Cina, http://www.cellbank.org.cn). La linea cellulare di rene embrioni umani 293T è stato ottenuto dalla American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). MGC-803 e le cellule SGC-7901 sono stati mantenuti in terreno RPMI-1640, mentre le cellule 293T sono state mantenute in DMEM. Tutti i supporti contenevano il 10% di siero fetale bovino (FBS), 100 U /ml di penicillina e 100 mcg /ml di streptomicina (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

reporter luciferasi test

Le cellule sono state trasfettate con geni reporter luciferasi, β-galattosidasi (β-gal) e miR-145 imita o miR-145 inibitore (Guangzhou RiboBio) utilizzando Lipofectamine 2000 reagente di trasfezione (Invitrogen). l'attività luciferasi è stata misurata a 48 ore dopo la trasfezione, e l'efficienza di trasfezione è stata normalizzata l'attività β-gal interno.

estrazione di RNA e RT-qPCR

L'RNA totale è stato estratto usando il reagente TRIzol (Invitrogen ) e retrotrascritto con M-MuLV trascrittasi inversa (Qiagen) per produrre cDNA secondo il protocollo del produttore. Real-time PCR è stata eseguita utilizzando il rilevamento SYBR Green-based in una Rotor-Gene 6000 strumento (Corbett Life Science) in base alle istruzioni del fabbricante e utilizzando le coppie di primer elencati nella tabella 1. miR-145 e primer U6 sono stati ottenuti da Qiagen. GAPDH o U6 controllo endogeno è stato utilizzato come standard interno, ei risultati sono stati calcolati utilizzando il △△ CT (dove CT è il ciclo soglia) metodo.

plasmidi costruzione

I primer utilizzati per la la costruzione dei reporter luciferasi e plasmidi sono elencati nella Tabella 1. il FSCN1 3 'non tradotta regione umana (UTR) è stato amplificato da MGC-803 cDNA mediante amplificazione PCR con il lA Taq DNA Polymerase (Takara) e clonato a valle della codifica luciferasi sequenza nel vettore PMIR-REPORT (Ambion) ai siti di restrizione Saci e MluI (Promega) per costruire il giornalista FSCN1-3'UTR-luciferasi umana. Le mutazioni sono state introdotte nei siti miR-di legame con una mutagenesi kit QuikChange (transgen). Per i plasmidi di espressione miR-145 e FSCN1, sequenze sono state amplificate mediante PCR e clonati nei siti SpeI /NheI e siti XbaI /NdeI, rispettivamente del vettore Plv-cs.4.0-basic (Promega). Per il plasmide interferenza FSCN1, due coppie di sequenze sono state ricotto e subclonati in PLKO.1 secondo il protocollo del produttore.

Produzione lentivirali e trasfezione

cellule HEK293T sono state seminate su un inserto 6-bene a 24 ore prima della trasfezione. Il miR-145 plasmide di espressione, FSCN1 sHRNA plasmidi o l'espressione FSCN1 plasmide è stato poi co-trasfettate con plasmidi confezionamento (PHR e pCMV-VSV-G) utilizzando il reagente di trasfezione Lipofectamine 2000 (Invitrogen). surnatanti virali sono stati raccolti a 48 ore dopo la trasfezione, centrifugati a 3000 g per 15 minuti, e filtrati attraverso 0,45 micron filtri (Millipore). titoli virali sono stati determinati da trasduzione cellule HeLa a diluizioni seriali e analizzare l'espressione della GFP citometria a flusso. MGC-803 cellule o 7901 cellule a 50-70% di confluenza sono stati infettati con surnatanti virali contenenti 10 mg /ml Polybrene per 24 h. mezzo fresco è stato poi aggiunto alle cellule infette, che sono stati successivamente selezionati con puromicina.

migrazione cellulare e dell'invasione saggio

Celle (3x10 ^{5) sono stati piastrati su 8,0 micron pori dimensioni Boyden camere (Transwell, Corning Life Sciences, Acton, MA, USA) o rivestite con 10 mcg di Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) per bene (per l'invasione saggi) oa sinistra non patinata (per i saggi di migrazione) nel siero-libera mezzo contenente 10 g /L di siero albumina bovina. Piano contenente 10% FBS servito come chemiotattico nella camera inferiore. Le cellule non-invasori sono stati rimossi con tamponi di cotone dopo 36 h (per saggi di invasione) o 20 ore (per i test di migrazione). le cellule hanno invaso sono state colorate con ematossilina (HE) e contati. I dati sono presentati come media ± SD da tre singoli esperimenti}

Western blotting

Le proteine ​​sono state estratte con tampone di lisi degli eritrociti (ELB;. 50 mM Tris, 140 mM NaCl, 0,5% NP 40 e 100 mM NaF (pH 7,6)) contenente 1 mM phenylmethanesulfonyl fluoruro (PMSF, Sigma-Aldrich, USA). Ogni campione è stato separato su un gel SDS-PAGE 10% e poi trasferito su polivinilidene difluoruro (PVDF) membrane. Le membrane sono state bloccate con 5% di latte e incubate con coniglio primario anticorpi FSCN1 anti-umano (1: 3000; Cell Signaling Tecnologia, USA) o il mouse GAPDH anti-umano (1: 5000; Sigma-Aldrich) anticorpi overnight a 4 ° C . Le membrane sono state poi incubate con l'appropriato perossidasi di rafano (HRP) coniugata anticorpi secondari (Thermo Fisher Scientific). Le bande sono state sviluppate utilizzando un sistema (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK) chemiluminescenza (ECL). La proteina GAPDH è stato utilizzato come controllo di caricamento.

Analisi statistica

I dati sono espressi come media ± SD. La significatività statistica è stata analizzata con il test t di Student. La correlazione tra i livelli di miR-145 e livelli di espressione di mRNA FSCN1 /proteine ​​nei tumori gastrici umani è stato calcolato la correlazione di Spearman. Tutte le analisi statistiche sono state calcolate utilizzando GraphPad Prism software di statistiche (GraphPad Software). P
< 0.05 è stato considerato statisticamente significativo (NS, non significativo; * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
. < 0,001)

Risultati

forte relazione inversa tra l'espressione di miR-145 e il suo target putativo, FSCN1, nel tipo infiltrante cancro gastrico umano

Abbiamo usato il database TargetScan (http://www.targetscan.org) per identificare i 3 'UTR di specifici mRNA bersaglio di miR-145 che può regolare la migrazione e l'invasione delle cellule di cancro gastrico. Di tutti i mRNA previsti, abbiamo selezionato FSCN1, che è stato precedentemente implicati nella migrazione del tumore e l'invasione. FSCN1 ha anche altamente sequenze in UTR 3 'che sono complementari alla sequenza di semi di miR-145 conservato.

In primo luogo, abbiamo studiato se la correlazione di miR-145 e FSCN1 potrebbe essere clinicamente rilevante misurando l'espressione di livelli /proteina miR-145 e FSCN1 mRNA in normale /tumorale accoppiati campioni provenienti da 80 pazienti con cancro gastrico. L'analisi statistica ha evidenziato una significativa correlazione inversa tra l'espressione di miR-145 e l'espressione di mRNA FSCN1 /proteina nei 80 coppie di campioni clinici (Fig 1A e 1B).

Ming classificato carcinomi gastrici in tipo espansione e il tipo infiltrante basa su modelli di crescita e l'invasività, ed esiste una correlazione tra la classificazione di Ming e la prognosi clinica [5]. Pertanto, 40 infiltrative campioni di cancro gastrico e 40 in espansione campioni di cancro gastrico sono stati scelti come indicato dal rappresentante HE colorazione (fig 2A). In questa classificazione, le cellule di un carcinoma in espansione, in virtù della loro capacità di penetrazione limitata, aggregato e producono una massa circoscritta in forma di polipoide e lesioni fungiformi. Al contrario, le cellule di carcinoma infiltrante distribuite perifericamente e ampiamente, ed una massa tumorale non forma. Abbiamo testato l'espressione di miR-145 e FSCN1 mRNA in cancro gastrico rispetto alla adiacente normale mucosa gastrica mediante real-time PCR. miR-145 è stato notevolmente down-regolato nel carcinoma gastrico infiltrante rispetto ad espandere il cancro gastrico, mentre l'espressione di mRNA FSCN1 era notevolmente up-regolati (Fig 2B). Abbiamo selezionato 10 infiltrative campioni di cancro gastrico e 10 in espansione campioni di cancro gastrico con i loro tessuti normali adiacenti per analizzare l'espressione da qPCR e western blotting. I livelli di espressione complessivi di miR-145 sono stati inferiori, in particolare nei infiltrativi campioni di cancro gastrico rispetto al normale adiacente mucosa gastrica. Al contrario, nel complesso i livelli di mRNA /proteine ​​FSCN1 erano più alti nel infiltrativa cancro gastrico (Fig 2C). Di conseguenza, l'espressione di miR-145 e la sua putativo bersaglio FSCN1 aveva una forte relazione inversa nel tipo infiltrante cancro gastrico umano, suggerendo in tal modo che i ruoli essenziali di miR-145 e FSCN1 sono in gastrica invasione del cancro.

miR -145 obiettivi direttamente FSCN1 in cellule di cancro gastrico

Per determinare se miR-145 regola l'espressione di FSCN1 in cellule di cancro gastrico, per prima cosa up-regolati il ​​livello di miR-145 nel carcinoma gastrico MGC-803 cellule utilizzando un vettore lentivirus-based. Abbiamo quindi effettuato qPCR, che ha rivelato che miR-145 sovraespressione significativamente down-regolato il livello di mRNA di FSCN1 (Fig 3A), e gli esperimenti Western Blot ha confermato che il livello di proteine ​​di FSCN1 è stata anche soppressa nelle cellule miR-145-overexpressing (fig 3B ). Al contrario, l'abbattimento di miR-145 livelli utilizzando un inibitore di miR-145 ha provocato in modo significativo indotto espressione /proteine ​​FSCN1 mRNA sia SGC-7901 e MGC-803 cellule (Fig 3C). Abbiamo generato una lucciola vettore reporter luciferasi contenente UTR il FSCN1 3 'e poi co-trasfettate MGC-803 cellule con miR-145 imita o un inibitore della miR-145 per indagare se FSCN1 è un bersaglio diretto di miR-145. I lisati sono stati analizzati per l'attività della luciferasi 24 h post-trasfezione. Il saggio luciferasi ha mostrato che imita miR-145 portato ad una riduzione di circa il 55% dell'attività, mentre l'inibitore di miR-145 ha aumentato l'attività della luciferasi del 62% in MGC-803 cellule rispetto al controllo miR-negativo (Fig 3D). Inoltre, abbiamo mutato tre principali elementi di riconoscimento miR-145 putativi (MRES) nel 'UTR via QuikChange mutagenesi FSCN1 3 per l'utilizzo nel saggio luciferasi (Fig 3D). I risultati hanno mostrato che gli effetti regolatori dei miR-145 imita o miR-145 inibitore sono stati in primo luogo abrogate, che ha confermato che gli effetti silenziamento del miR-145 su FSCN1 sono stati aboliti dalla perturbazione delle interazioni miR-MRE (Fig 3D). Collettivamente, questi studi hanno fornito prove convincenti che FSCN1 è un bersaglio diretto di miR-145 in cellule di cancro gastrico.

La repressione di FSCN1 è necessario per miR-145 per inibire la migrazione e l'invasione delle cellule di cancro gastrico

cancro gastrico MGC-803 e le cellule SGC-7901 sono stati stabilmente trasfettate con due diversi FSCN1 shRNAs per inibire FSCN1 per capire meglio il ruolo potenziale di FSCN1 nella migrazione tumorale miR-145-mediata e l'invasione. L'efficienza di interferenza FSCN1 shRNAs è stata confermata mediante analisi western blot (Fig 4A e 4B). I risultati del test transwell hanno mostrato che la capacità delle cellule di migrare e invadere era altamente soppressa dopo l'abbattimento espressione di FSCN1 in MGC-803 e cellule SGC-7901 rispetto alle cellule di controllo negativo (Fig 4C e 4D), suggerendo quindi un ruolo essenziale di FSCN1 in questi processi.

miR-145 è noto per sopprimere la migrazione e l'invasione di molti tipi di cancro, compreso il cancro gastrico [10, 19, 21]. Come previsto, forzata espressione di miR-145 portato diminuito in modo significativo i tassi di migrazione e l'invasione in MGC-803 e le cellule SGC-7901. Inoltre, simultanea ri-espressione di FSCN1 compromessa la migrazione cellulare e dell'invasione capacità miR-145-repressa quasi completamente in entrambe le cellule MGC-803 e SGC-7901 miR-145-trasfettate (Fig 5A e 5B). Al contrario, abbiamo usato FSCN1 shRNA per inibire l'espressione FSCN1 in miR-145 inibitore-trasfettate MGC-803 e le cellule SGC-7901. Knockdown di FSCN1 completamente invertito il miR-145 attivazione inibitore-mediata della migrazione cellulare e dell'invasione, suggerendo così il ruolo essenziale di FSCN1 in questo processo (Fig 5C e 5D). Collettivamente, i risultati di cui sopra hanno dimostrato che la repressione di FSCN1 è necessaria per miR-145 per inibire la migrazione e l'invasione delle cellule di cancro gastrico.

Discussione

La deregolamentazione del miR è stato implicato in vari tumori umani, tra cui il cancro dello stomaco umano. Tuttavia, i meccanismi molecolari con cui miR modulano il processo di carcinogenesi e il comportamento delle cellule tumorali non sono stati completamente definiti. miR differenziale nei tumori rispetto alle loro tessuti normali adiacenti o tra gruppi di campioni tumorali con un esito clinico favorevole o povera è stato usato per generare firme miR con potenziale prognostico e /o il valore predittivo in alcuni tipi di cancro. Tuttavia, il coinvolgimento dei miR aberrante espresse in cancro gastrico umano rimane in gran parte inesplorato. Precedenti studi hanno segnalato che miR-145 è down-regolato in varie neoplasie umane, tra cui il cancro al seno, cancro del polmone e cancro gastrico [9, 22, 23]. Lu et al [24] ha trovato che le funzioni miR-145 come un soppressore del tumore e si rivolge a due oncogeni, cioè ANGPT2 e NEDD9, nel carcinoma a cellule renali. Un altro studio ha dimostrato che miR-145 sopprime la migrazione delle cellule e l'invasione inibendo traduzione della proteina N-caderina in cellule di cancro gastrico [10]. Tuttavia, Kamikihara et al [11] ha rilevato che solo il 21% dei pazienti affetti da cancro gastrico hanno espressione N-caderina-positivi analizzati mediante immunoistochimica. Pertanto, un meccanismo molecolare alla base alternativa miR-145 è coinvolto nella regolazione della migrazione cellulare e l'invasione del cancro gastrico.

Nel presente studio, abbiamo confermato che miR-145 è down-regolato nei tessuti di cancro gastrico rispetto all'adiacente normale mucosa gastrica, che è coerente con i precedenti risultati [9]. Nel tentativo di identificare i bersagli a valle nuovi di miR-145, abbiamo usato il database TargetScan per eseguire esperimenti di screening. Da diversi candidati, abbiamo selezionato FSCN1 per ulteriori esperimenti perché FSCN1 è stata trovata a svolgere un ruolo importante nella migrazione del tumore e l'invasione. Diverse linee di evidenza suggeriscono che FSCN1 è il bersaglio a valle diretta di miR-145. In primo luogo, FSCN1 contiene altamente sequenze in UTR 3 'che sono complementari alla sequenza di semi di miR-145 conservata. In secondo luogo, una correlazione inversa tra miR-145 e FSCN1 è stato trovato nei campioni accoppiati da pazienti affetti da cancro gastrico. Infine, quando la classificazione dei campioni clinici in tipo e tipo infiltrante basò sulla classificazione di Ming in espansione, abbiamo scoperto che miR-145 è notevolmente down-regolato nel carcinoma gastrico infiltrante rispetto ad espandere il cancro gastrico. Nel frattempo, è stata anche rilevata una correlazione inversa forte tra i livelli di espressione di miR-145 e FSCN1 a cancro gastrico infiltrante. Il presente studio ha gettato nuova luce sulla correlazione tra miR-145 e FSCN1 nel cancro gastrico infiltrante. In uno studio precedente, Lauren diviso tumori gastrici nelle seguenti due tipi: il tipo intestinale e tipo diffuso [25]. cancro intestinale tipo è descritto come un tumore ghiandolare simile carcinoma del colon e cancro tipo diffuso è composto di cluster solitari o piccoli di cellule senza la formazione di ghiandole. I tipi di tumore nella classificazione di Lauren e Ming di corrispondere fedelmente gli uni agli altri. La maggior parte dei tumori in espansione hanno caratteristiche di cancro intestinale-tipo, e tumori più infiltrative sono di tipo tumori diffusi [5]. Tuttavia, un numero significativo di carcinomi gastrici non può essere classificato in tipo intestinale o tipo diffuso, tra cui i tumori indifferenziati che non si infiltrano diffusamente e tumori ghiandolari che si infiltrano diffusamente. Inoltre, il rilevamento di cancro gastrico precoce utilizzando classificazione di Lauren è relativamente difficile perché la fase precoce del cancro tipo diffuso, per definizione, non è diffusa. Tuttavia, la classificazione di Ming può risolvere questi problemi [5]. Nella classificazione di Ming, i modelli di distribuzione delle cellule indicano chiaramente una differenza fondamentale nel loro potenziale di crescita così come il potere di penetrazione e l'invasione. Come cancro gastrico infiltrante è più invasivo rispetto espansione cancro gastrico, questi risultati suggeriscono che miR-145 e FSCN1 entrambi giocano un ruolo cruciale nel gastrico invasione cancro.

Anche se diversi studi hanno implicato la regolazione della FSCN1 da miR in molti carcinomi [19, 20, 26], al meglio delle nostre conoscenze, nessun rapporto ha suggerito che FSCN1 è un bersaglio diretto di miR-145 nel cancro gastrico. In questo studio, abbiamo confermato che miR-145 reprime l'espressione FSCN1 e gli obiettivi del 3 'UTR di FSCN1 in cellule di cancro gastrico direttamente. Inoltre, la contemporanea ri-espressione di FSCN1 compromesso il miR-145-soppressa la migrazione delle cellule e la capacità di invasione quasi completamente miR-145-trasfettate MGC-803 e le cellule SGC-7901, che indicavano che la repressione di FSCN1 è necessario per miR -145 per inibire la migrazione e l'invasione delle cellule di cancro gastrico. Pertanto, FSCN1 è un importante obiettivo a valle del miR-145 nel regolare gastrica invasione cancro.

In sintesi, il presente studio ha individuato che il miR-145 è in primo luogo down-regolato in cancro gastrico infiltrante e che miR-145 espressione e l'espressione FSCN1 hanno una forte correlazione inversa nel carcinoma gastrico infiltrante. Funzionalmente, abbiamo dimostrato che miR-145 sopprime la migrazione delle cellule e l'invasione di cancro gastrico principalmente di mira direttamente FSCN1. Quindi, ripristinando l'espressione di miR-145 può essere esplorata come una strategia terapeutica alternativa contro il cancro gastrico.

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