PLoS ONE: korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä alkuvaiheissa mahasyövän Progression

tiivistelmä

Background

alkuvaiheen mahasyöpä on useimmiten oireeton ja voidaan helposti hukata helposti tavanomaisilla gastroskopia. Tällä hetkellä ei ole olemassa käyttökelpoisia biomarkkereita varhaiseksi havaitsemiseksi mahasyöpä, ja niiden tunnistaminen biomarkkereiden tarvitaan kipeästi.

Methods

Mahalaukun mehu saatiin 185 aiheita, jotka jaettiin kolmeen ryhmään : ei-neoplastisten mahalaukun sairauksien (NGD), kehittynyt mahasyöpä ja varhaisen mahasyövän (EGC). Tasot Aromaattisten aminohappojen mahanesteessä olivat kvantitatiivisesti käyttäen suuren erotuskyvyn nestekromatografialla.

Tulokset

mediaaniarvot (kahdeskymmenesviides-seitsemäskymmenesviides persentiili) tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin mahalaukun mehu oli 3,8 (1,7-7,5) ug /ml, 5,3 (2,3-9,9) ug /ml ja 1,0 (0,4-2,8) pg /ml NGD; 19,4 (5,8-72,4) ug /ml, 24,6 (11,5-73,7) ug /ml ja 8,3 (2,1-28,0) ug /ml EGC. Korkeammalla tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin mahanesteessä havaittiin yksilöiden EGC ryhmissä verrattuna niitä on NGD ryhmän (NGD vs. EGC, P
< 0,0001). Havaitsemiseksi EGC seuraavilla alueilla saa toimivien ominaiskäyrät (AUC) kunkin biomarkkereiden olivat seuraavat: tyrosiini, 0,790 [95%: n luottamusväli (CI), 0,703-0,877]; fenyylialaniinin, 0,831 (95% CI, 0,750-0,911); ja tryptofaania, 0,819 (95% CI, 0,739-0,900). Herkkyys ja fenyylialaniinin olivat 75,5% ja 81,4%, tässä järjestyksessä, havaitsemiseksi EGC. Usean regressioanalyysimme osoitti, että korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä liittyi mahasyövän (oikaistu β kertoimet vaihtelivat 1,801-4,414, P
< 0,001).

johtopäätös

Lisääntyvät tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin mahanesteessä näytteet havaittiin varhaisessa vaiheessa mahasyövän. Siten tyrosiini, fenyylialaniini ja tryptofaani mahanesteessä voitaisiin käyttää biomarkkereita varhaiseksi havaitsemiseksi mahasyövän. Mahalaukun mehu analyysi on tehokas, taloudellinen ja helppo tapa seulontaan alussa mahalaukun syövän kehittymisen väestössä.

Citation: Deng K, Lin S, Zhou L, Li Y, Chen M, Wang Y, et al. (2012) Korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä alkuvaiheissa mahasyövän Progression. PLoS ONE 7 (11): e49434. doi: 10,1371 /journal.pone.0049434

Editor: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Catolica de Chile, lääketieteellisen tiedekunnan, Chile

vastaanotettu: 27 huhtikuu 2012; Hyväksytty: 07 lokakuu 2012; Julkaistu 13 marraskuuta 2012

Copyright: © 2012 Deng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China [Grant numero: 3097415] (URL: http://www.nsfc.gov.cn/e_nsfc/desktop/zn/0101.htm). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

mahalaukun syöpä on toiseksi yleisin syöpätyyppi Itä-Aasiassa, ja ennusteen mahasyövän potilaista on huono seurauksena myöhään havaitseminen [1], [2], [3]. Tähän mennessä mahasyöpä selviytyminen ja potilaan elämänlaatu on vain parantanut jos syöpä diagnosoidaan varhain [4]. Valitettavasti alle 5% varhaisen mahasyövän tapaukset havaitaan ja diagnosoidaan nopeasti [5].

tähystys seurasi patologinen biopsia on nyt edullinen menetelmä havaita varhain mahalaukun syöpä (EGC). Kuitenkin EGC on jäänyt usein aikana gastroskopian koska vähäinen vaurio voidaan helposti huomaamatta, koepala puutteellisesti tai tulkittu virheellisesti patologit [6], [7]. EGC on pitkälti oireeton ennen puhkeamista vakavia oireita, ja tähystyksen perustuvan tutkimuksen vakavia oireita aina viivästyttää havaitsemista mahasyöpä. Väestöpohjainen seulonta voi helpottaa varhaisen havaitsemisen ja diagnoosi mahasyöpä. Sekä puute kokenut endoscopists ja potilaan epämukavuutta menettelyä vähentää sovellettaessa tätä menetelmää seulontavälineenä EGC.

Vähemmän invasiivisia ja tehokkaampaa biomarkkereiden tarvitaan havaitsemiseen EGC massasta seulonta. Nykyinen biomarkkerit pepsinogeeni karsinoembryonaaliselle antigeeni (CEA), ja hiilihydraattiantigeeniä 19-9 (CA19-9), eivät ole riittäviä ennustaa tarkasti mahasyövän varhaisessa vaiheessa [8], [9], [10].

on hyvin tunnettua, että aineenvaihdunnan häiriöt tapahtuvat ennen merkittäviä morfologisia muutoksia pahanlaatuinen kudos [11]. Huomattava määrä tietoa metabolista tilaa mahalaukun epiteelin sisältyy mahanesteessä. Siksi mahanesteessä voidaan käyttää luomaan diagnostinen testi ja tunnistaa arvokkaita ja tehokkaita biomarkkereita EGC seulontaan. Edellisessä tutkimuksissa olemme laatineet fluoresenssispektriä analyysi mahanesteen [12], [13], [14] ja tunnistettu kolme fluoresenssi biomarkkerit (aromaattiset aminohapot mahanesteessä) [15], jota voidaan käyttää erottamaan edenneen mahasyövän syöpä (AGC) hyvänlaatuisesta sairauksia. On kuitenkin vielä epävarmaa, ovatko nämä biomarkkerit pystyvät erottamaan EGC ja hyvänlaatuisia sairauksia. Tämä tutkimus suoritettiin testaamaan hypoteesia, että mahanesteen biomarkkerit on diagnostinen seulonta arvo havaitsemisessa EGC.

Methods

Ethics lausunto

Eettisen komitean Pekingin yliopiston Health Tiedekeskus hyväksyi tämän tutkimukseen. Kirjallinen suostumus saatiin kaikille osallistujille, ja koko kliininen tutkimus tehtiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistuksen.

Näytteenotto

Näytteitä kerättiin endoskooppisilla huonetta Peking yliopiston kolmas sairaala. Kaikki potilaan näytteet on saatu tätä tutkimusta varten histologisesti vahvistettiin limakalvon biopsialla ja /tai postoperatiivinen patologian joulukuun 2008 heinäkuussa 2012. Sen jälkeen yön yli kestäneen paaston potilaat tehtiin gastroskopia. Näytteitä mahanesteen jotka olivat vapaita brutto ruoanjäänteet, sappi ja verta kerättiin. Näytteet erotettiin 2 ml: n erissä ja välittömästi varastoitiin -80 ° C: ssa myöhempää analyysiä varten. Warthin-Starry (WS) värjäys käytettiin havaitsemaan helikobakteeri
tartuntatilanne kaikki yksilöt (mahalaukkua oli yksi koepala sivustoja ja kokonaismäärä koepala sivustoja oli enemmän kuin kaksi).

Osallistujat

Mahalaukun mehu näytettä otettiin 49 potilasta, joilla EGC (6 tapausta olivat mukana aiemmassa julkaisussa [15]). Oli 26 tapauksia polttovälin syöpä ja 23 tapausta -kar- jotka voitaisiin luokitella EGC [16]. Sen lisäksi, että mahanesteen näytteet eristettiin potilaiden EGC, näytteiden 70 joilla on ei-neoplastisten mahalaukun sairauksien (NGD), joille avohoidossa tähystys menettely saman ajanjakson aikana käytettiin kontrolliryhmän vertailuun. Vertailuryhmä sisälsi 47 kroonista pinnallinen gastriitti, 18 potilasta, joilla on krooninen atrofinen gastriitti, ja 5 potilasta, joilla mahahaava. Lisäksi mahanesteessä näytteet satunnaisesti kerättiin 66 potilaalla on AGC (taulukko 1). Ei ollut merkittäviä poikkeavuuksia havaittu ennalta Endoskooppinen munuaisten ja maksan toiminta testit palvelukseen aiheista. Useimmat palvelukseen mahasyövän potilaat eivät olleet aiemmin todettu, ja yksikään potilaista osoitti merkittävää aliravitsemuksesta (Kamofsky suorituskykyluokan, KPS > 90).

Näytteen käsittely

pakastetut näytteet sulatettiin huoneenlämpötilassa ja sentrifugoitiin 14000 rpm 20 minuutin ajan 4 ° C: ssa. Sakka poistettiin, ja ylempi kerros otettiin talteen ja tallennetaan väliaikaisesti 4 ° C: ssa seuraavan kokeen. Näytteet luettiin sattumanvaraisesti. Kokeen sokaisi diagnoosin potilaiden rekrytoitiin tutkimukseen.

kvantifiointi Total Protein mahanesteessä

määrällisesti valkuaispitoisuus, 100 ui mahanesteen otettiin talteen ja heti laimennettiin 900 ui 0,15 M fosfaattipuskuria (pH 7,3) pH: n säätämiseksi. Kokonaisproteiinipitoisuus mahanesteessä mitattiin käyttämällä BCA (bikinkoniini- happo) proteiini iinianalyysikitissä (Beijing Cowin Biotech Co Ltd, Peking, Kiina) mukaan valmistajan protokollaa. Jos proteiinipitoisuus oli poissa työalue määrityksen (20-2000 ug /ml), näytettä laimennettiin edelleen ja analysoitiin uudelleen.

Quantitative System

aromaattiset aminohapot mahan mehu näytteet kvantitatiivisesti käyttäen fluoresenssidetektoria yhdessä HPLC [17], [18], ja aiemmin perustetut määrällisen järjestelmän [15] sovellettiin tässä tutkimuksessa. HPLC Inlet Filter, joka on Diamonsil (2) C18 (3 pm, 250 x 4,6 mm) analyyttisen pylvään (Dikma Technologies, Peking, Kiina) ja Agilent 1100 sarjan nestekromatografiajärjestelmään (Agilent Technologies, Waldbronn, Saksa) käytettiin tässä tutkimus. Järjestelmä koostui tyhjiössä liuottimen kaasausyksikköön, neljä liuotingradientti pumput, lämpötila-säädellään automaattinen näytteen injektori, sarake termostaatti, ja 3D-fluoresenssi-ilmaisimella (FLD). ChemStation ohjelmaa käytettiin: n määrän kvantifioimiseksi aromaattisten aminohappojen mahanesteessä näytteitä. Ennen käänteisfaasi-HPLC-analyysi, mahanestettä supernatantti suodatettiin 0,45 um: n HPLC-suodattimen. Aromaattiset aminohapot mahanesteessä erotettiin aikana HPLC: llä C18 analyyttiseen kolonniin käyttäen 0,05% (v /v) trifluorietikkahappo /vedessä (HPLC-laatu, Dikma Technologies) liuottimena A ja puhdasta asetonitriiliä (HPLC-laatu, Merck, Darmstadt, Saksa) liuotin B liikkuva faasi määritteet eluoimalla lineaarisella gradientilla järjestelmään. Sen jälkeen, kun neula pesun näytteet injektoitiin tilavuus 20-100 ul: injektiotilavuus. HPLC-menettely ja koeolosuhteita kullekin näytteelle on esitetty taulukossa 2.

aromaattinen aminohappo kvantifiointi

Standard ja laadunvalvonta ratkaisuja, jotka sisälsivät yhtä pitoisuudet L-tyrosiini, L-fenyylialaniini ja L- -tryptophan (99%, Alfa Aesar, Ward Hill, MA, USA), valmistettiin pitoisuuksina 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0, 18,0 ja 20,0 ug /ml perustaa kalibrointikäyriä. Standardit varastoitiin -80 ° C: ssa. Kaksikymmentä mikrolitran alikvootit DDH _{2O (sokeakoekuoppaa liuos) ja standardi ja laadunvalvonta näytteitä käytettiin luomaan ja tarkistaa kalibrointikäyrät ennen mittaamalla kolmea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä näytteitä. Jos tasot tyrosiinin, fenyylialaniinin ja /tai tryptofaania olivat poissa mitatun alue, näytteet analysoitiin uudelleen vaihdon jälkeen injektiotilavuus (20-100 ui). Jos näytteen konsentraatio oli havaittavissa useiden yritysten jälkeen klo analyysi, se annettiin pisteet nolla.}

tilastolliset menetelmät

Kun hyväksyttävä normaalijakaumaa saavutettiin, data ilmaistiin keskiarvoina ± SD (keskihajonta), ja vertailut ryhmien kesken tehtiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVA testi. Kun hyväksyttävä normaalijakaumaa ei saavutettu, tiedot ilmaistiin mediaanit (kahdeskymmenesviides-seitsemäskymmenesviides persentiili). Kruskal-Wallis kokeista seuraa Dunnin monivertailu post hoc testit (Bonferronin korjattu merkitsevyystasolla 0,05 /3 = 0,017) käytettiin määrittämään erot kolmeen ryhmään. Kruskal-Wallisin ja Dunnin testit suoritettiin käyttäen Minitab (versio 16, Minitab Company, State College, PA) kanssa KrusMC.MAC makro (saatu Minitab verkkosivuilla). Mann-Whitneyn U-testiä käytettiin vain vertailua kahden ryhmän välillä. Chi-neliö testiä käytettiin arvioida yhdistyksen kahden binary muuttujia. Pearsonin korrelaatio valittiin analysoida yhdistyksen välillä muuttujia. Osittainen korrelaatio käytettiin arvioimaan assosiaatiota aromaattisen aminohapon tasoja ja kliininen diagnoosi, joka johti poistaminen joukon ohjaamiseksi muuttujia. Vastaanotin toimii (ROC) käyriä ja alueet käyrän alla (AUC) ROC sovellettiin arvioimaan pätevyyttä biomarkkereita ja tunnistaa optimoitu raja-arvot. Kaikki muut tilastolliset testit olivat kaksipuolisia, jossa P
< 0,05 määritellään tilastollisesti merkitsevä. Logistinen regressio malleja käytetään laskemaan β kertoimien ja P
arvot kunkin tekijän /kovariaatin. Kaikki laskelmat suoritettiin Excel 2003 (Microsoft Corporation, Seattle, WA, USA), ja tilastolliset testit laskettiin SPSS versio 15.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), SAS 8.1 ohjelmisto (SAS Institute Inc., Cary, NC) ja PASS 2008 ohjelmistopaketti (sävyä NCS, Kaysville, UT).

tulokset

Kliiniset ominaisuudet potilaiden

tutkimus sisälsi 185 potilasta jaettu 3 ryhmään: 70 NGD potilaiden 66 AGC potilaita ja 49 EGC potilaita. Ei ollut merkittäviä eroja esiintyminen Helicobacter pylori
infektioiden (6 tapausta jääneet) välillä kolme alaryhmää. Ikä ja sukupuoli vaihtelivat joukossa kolmeen alaryhmään ( P
= 0,049 ja P
= 0,023) (taulukko 1).

Total Protein mahanesteessä

mediaani (kahdeskymmenesviides-seitsemäskymmenesviides persentiili) arvot proteiinin kokonaismäärästä mahanesteessä näytteet olivat seuraavat: NGD, 1,5 (0,9-2,4) mg /ml; AGC, 3,3 (2,3-5,1) mg /ml; ja EGC, 2,8 (1,6-3,7) mg /ml (taulukko 3). Nostamalla kokonaisproteiinipitoisuus havaittiin mahanesteessä näytteet AGC ja EGC ryhmiä suhteessa kuin NGD ryhmän (Dunnin testi, AGC vs. NGD, P
< 0,0001; EGC vs. NGD, P
< 0,0001) (taulukko 1). Ei ollut eroa proteiinin kokonaismäärästä välillä AGC ryhmän ja EGC ryhmän (Dunnin testit, P
= 0,044, joka on suurempi kuin merkitsevyystaso 0,017) (taulukko 3).

määrälliset System

Kuten on esitetty fluoresenssin kromatogrammissa (kuvio 1), kolme aromaattisia aminohappoja täysin erillään. Retentioajat kunkin kolmen aminohapon olivat seuraavat: tyrosiini, 8 min; fenyylialaniini, 12 min; ja tryptofaani, 16 min. Kalibrointikäyrän, lineaarisuus ja työskentelyalueet olivat seuraavat: tyrosiini, Y = 0.32X + 1,30, R ^{2 = 0,9999, 0,5-20,0 ug /ml; fenyylialaniini, Y = 7.15X + 1,03, R 2 = 0,9999, 0,5-20,0 ug /ml; ja tryptofaani, Y = 0,25-kertaisiksi + 3,01, R 2 = 0,9999, ,5-+20,0 ug /ml. Saannot tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin olivat 100,5 ± 2,7%, 101,3 ± 3,4% ja 99,6 ± 1,6%: lla. Tarkkuudet tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin olivat 100,1 ± 0,5%, 100,0 ± 1,8% ja 98,7 ± 1,5%: lla. Tämä kokeellinen järjestelmä oli vakaa ja luotettava kvantifiointiin aromaattisten aminohappojen mahanesteessä.}

Aromaattinen Aminohapot Pitoisuus

mediaani (kahdeskymmenesviides-seitsemäskymmenesviides persentiili) arvot tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaani oli 3,8 (1,7-7,5) ug /ml, 5,3 (2,3-9,9) ug /ml ja 1,0 (0,4-2,8) ug /ml NGD näytteitä; 18,3 (6,4-52,3) ug /ml, 25,7 (11,1-76,1) ug /ml ja 4,7 (2,5-20,3) ug /ml AGC näytteitä; ja 19,4 (5,8-72,4) ug /ml, 24,6 (11,5-73,7) ug /ml ja 8,3 (2,1-28,0) ug /ml EGC näytteet (taulukko 3). Tasot aromaattisten aminohappojen mahanesteessä olivat huomattavasti eri joukossa NGD, AGC ja EGC ryhmien (Kruskal-Wallisin testi, tyrosiini χ ^{2 = 49,847, fenyylialaniini χ 2 = 62,397, tryptofaani χ 2 = 52,846, kaikki P
< 0,0001). Tasot tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin lisääntyivät merkitsevästi mahanesteessä saatu sekä AGC ja EGC ryhmissä verrattuna on NGD ryhmän (Dunnin testi, AGC vs. NGD, kaikki P
< 0,0001; EGC vs. NGD, kaikki P
< 0,0001) (taulukko 3 ja kuvio 2). Oikaisun jälkeen vaikutus koko proteiinin tasot mahanesteessä merkitseviä silti välillä oli aromaattisen aminohapon tasoja ja kliininen diagnoosi (osittainen korrelaatio, AGC vs. NGD: tyrosiini, R = 0,334, P
< 0,001; fenyylialaniini, R = 0,257, P
< 0,001 ja tryptofaani, R = 0,312, P
< 0,001; EGC vs. NGD: tyrosiini, R = 0,378 P
< 0,001; fenyylialaniini, R = 0,392, P
< 0,001 ja tryptofaani, R = 0,380, P
< 0,001). Ei ollut merkittäviä eroja tasojen tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin välillä AGC ja EGC mahanesteen näytteitä (Dunnin testi, P
= 0,811, P
= 0,781 ja P
= 0,691, vastaavasti) (taulukko 3). Tämä tulos oli yhdenmukainen aiempien havaintojen [15], että osoittavat ettei järjestöjen välillä helikobakteeri
infektio ja tasot aromaattisten aminohappojen mahanesteen (U-testi, tyrosiini, P
= 0,871, fenyylialaniini, P
= 0,742; tryptofaani, P
= 0,913).}

voimassaolo Aromaattinen Aminohapot havaitsemiseksi AGC ja EGC

ROC käyräanalyysi erottaa AGC ja NGD, alueet käyrien alla (AUC) tyrosiinia, fenyylialaniinia, tryptofaania ja kokonaisproteiinin oli 0,824 [95%: n luottamusväli (CI), 0,753-0,895, P
< 0,001], 0,858 (95% CI, +0,794-+0,922, P
< 0,001), 0,818 (95% CI, 0,747-0,889, P
<0,001) ja 0,803 (95% CI, ,728-,878, P
< 0,001), (kuvio 3A ja Taulukko 4). Mukaan ROC-käyrä analyysi erottaa EGC ja NGD, AUC tyrosiinin, fenyylialaniinin, tryptofaanin ja kokonaisproteiinin oli 0,790 (95% CI, ,703-,877, P
< 0,001), 0,831 (95 % CI, 0,750-0,911, P
< 0,001), 0,819 (95% CI, 0,739-,900, P
< 0,001) ja 0,719 (95% CI, +0,623-+0,814 P
< 0,001), (kuvio 3B ja taulukko 4). Optimoitu raja-arvot erottaa AGC tai EGC peräisin NGD valittiin määrittämällä suurimman summia herkkyys ja spesifisyys ROC käyrät (taulukko 4). Kun olet valinnut optimoitu arvot, herkkyys, spesifisyys ja tarkkuus tarvitaan erottamaan AGC ja NGD olivat seuraavat: tyrosiini, 83,3%, 68,6% ja 75,7%; fenyylialaniinin, 81,8%, 75,7% ja 78,7%; tryptofaani, 84,8%, 68,6% ja 76,5%; ja kokonaisproteiinin, 75,8%, 74,3% ja 75,0%. Kun olet valinnut optimoitu arvot, herkkyys, spesifisyys ja tarkkuus tarvitaan erottamaan EGC ja NGD olivat seuraavat: tyrosiini, 75,5%, 71,4% ja 73,1%; fenyylialaniinin, 75,5%, 81,4% ja 79,0%; tryptofaani, 61,2%, 97,1% ja 82,4%; ja kokonaisproteiinin, 59,2%, 81,4% ja 72,3% (taulukko 4). Kun olet valinnut optimoidut arvot ilmoitetaan edellisessä tutkimuksessa [12], [15], herkkyys, spesifisyys ja tarkkuus havaitsemiseksi EGC olivat seuraavat: tyrosiini, 51,0%, 94,3% ja 76,5%; fenyylialaniinin, 79,6%, 74,3% ja 76,5%; tryptofaani, 61,2%, 94,3% ja 80,7%; ja kokonaisproteiinin, 83,7%, 62,9% ja 71,4%. Käyttämällä eri optimoitu arvo, saimme samanlaisia ​​tuloksia. Käyttämällä yhdistelmää tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin ei merkittävästi parantaa havaitsemista AGC tai EGC, koska pitoisuudet kolmen aromaattisten aminohappojen mahanesteessä näytteet liittyvät läheisesti toisiinsa (tyrosiini-fenyylialaniini, R = 0,871; tyrosine- tryptofaani, R = 0,941, fenyylialaniini-tryptofaani, R = 0,840, P
< 0,001 kullekin).

regressioanalyysimme

logistinen regressio analyysissä assosiaatio välisiä aromaattisten aminohappojen mahanesteessä ja EGC arvioitiin. Univariate logistinen regressio analyysit tehtiin arvioimaan ennustava arvoja ehdokas biomarkkereiden havaitsemiseen EGC. Näiden univariate Analyysien β kertoimet (SE) ikä, sukupuoli, Helicobacter pylori
tila, proteiinia ja kohonnut aromaattinen aminohappo tasot mahanesteessä laskettiin. Neljä (ikä ja kohonnut tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin tasoilla mahanesteessä) oli P
< 0,05 ja tunnistettiin käyttämällä useita regressioanalyysimme (taulukko 5). Koska oli collinearities välillä tyrosiinin, fenyylialaniinin ja tryptofaanin (kaikki R > 0,8), arvioimme suhde tasojen tyrosiinin, fenyylialaniinin tai tryptofaanin ja EGC kolmessa erillisessä ja arvioitujen oikaistun kertoimien kunkin mallin. Kohonneet tasot näiden aromaattisten aminohappojen mahanesteessä liittyi EGC (tyrosiini: säätää β kerroin 1,801, SE 0,527, fenyylialaniini: säätää β kerroin 2,555, SE 0,586, tryptofaani: säätää β kerroin 4,414, SE 0,945) (taulukko 5 ). Siten kohonneet aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voi olla riippumattomia markkereita havaitsemiseksi EGC.

Keskustelu

Aiemmissa tutkimuksissa on havaittu lisääntynyt fluoresenssi mahanesteen AGC ja tunnistettu kolme fluoresenssi biomarkkereita seulontaan edennyt mahasyöpä [12], [15]. Olipa nämä mahdolliset biomarkkereita ovat hyödyllisiä varhaiseksi havaitsemiseksi mahasyövän on epävarmaa. Meidän tutkimuksessa testasimme pätevyyttä aromaattisilla aminohappojen mahanesteessä diagnosoimiseksi EGC. Tuloksemme osoittavat, että korkea aromaattisia aminohappoja ovat läsnä mahanesteessä potilaista, joilla on EGC verrattuna NGD potilaille. Siten korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voi olla arvokasta varhaisen havaitsemisen EGC.

Koska thesmall otoskoko, teho analyysi Kruskal-Wallisin testiä ja ROC AUC tehtiin. Tietääksemme kaavat tai määräytymistapa otoskoko tarpeen testata erot useisiin näytteisiin paikoissa käyttäen epäparametrisia menetelmät ovat paljon monimutkaisempia [19], ja mitään valtaa tai otoskoko laskentamenetelmä on tällä hetkellä saatavilla koskien geneerinen vaihtoehtoinen hypoteesi että Kruskal-Wallisin testi [20]. Lachenbruch ja Clements ehdotti, että Kruskal-Wallisin testi saattaa olla suurempi voima kuin F-testi, kun väestöjakaumat eivät ole normaaleja. He väittivät, että verrattuna F-testi, Kruskal-Wallisin testi oli vankempi vastaan ​​lähdöt oletus tasa varianssianalyysin [21]. Siten käyttämällä voimalla F-testi lähentää valtaa Kruskal-Wallisin testi voi tarjota huono alaraja normaalijakaumat. Sen jälkeen listalla muutos, läheisiin valtuudet (1 - β error) laskettiin käyttäen F-testi (ANOVA) toteutettuna SAS 8.1. Kaikki läheisiin valtuudet ovat enemmän kuin 0,99. Voimme siis luotettavasti päätellä, että tasot kokonaisproteiinia ja aromaattisten aminohappojen mahanesteessä ovat merkittävästi erilaisia ​​joukossa NGD, AGC ja EGC. Virta analyysit ROC käyrät tehtiin käyttämällä PASS 2008 ohjelmistoa. Yksikään valtuuksien oli alle 0,99. Näin ollen, se on hyväksyttävää päätellä, että korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voi olla arvokas ennustavat AGC tai EGC.

parannettu tuotanto aromaattisten aminohappojen EGC vastaa tuloksia aikaisemmassa tutkimuksessa [15] ja on yhdenmukainen alussa raportit muut pahanlaatuiset sairaudet (veren [22], keuhko [23], [24], [25], rintojen [23], [24], virtsarakon [26], jne.). Me spekuloida, että seuraavat syyt voivat selittää tätä ilmiötä. Ensimmäinen, kasvainsolut edellyttävät riittävää aromaattisten aminohappojen kerääntyä syövän pesäkkeitä vastaamaan voimakkaasti kasvavan tarpeen proteiinisynteesiä tukemaan nopeaa kasvua. Suuri ilmaus aminohappojen kuljettajat (kuten L-tyypin aminohappojen kuljettaja 1) erilaisissa kasvaimissa [27], [28], [29], [30], [31], [32], [33], [34], [35] on raportoitu monissa tutkimuksissa. Aminohappo kuljettajat voivat lisätä liikenteen aminohappojen ja kerääntyä aromaattisten aminohappojen lähellä syöpä pesäkkeitä. Tunkeutuminen liikaa aromaattisten aminohappojen voi lisätä merkittävästi mahalaukun mehua EGC verrattuna NGD. Toiseksi poikkeava aineenvaihdunta syöpäsoluissa edeltäisi näkyviä muutoksia vatsa syövän syntymistä [11]. Tiedetään, että poikkeavuudet aminohappojen kuljetus ja aineenvaihdunnan syöpä alueella esiintyy usein alkuvaiheessa mahasyövän. Mahanesteessä joka syntyy mahalaukun epiteelin, sisältää huomattavan määrän tietoa metabolisesta tilasta epiteelin. Siksi saatuja tietoja analysoimalla mahanesteessä voivat olla käyttökelpoisia erottaa biomarkkereita varhaiseksi havaitsemiseksi mahasyövän. Lopuksi, metalloproteinaasien (MMP: t), jotka ovat entsyymejä, jotka hajottavat soluväliaineen ja tyvikalvon, rooleja alkuvaiheessa tuumorigeneesiä [36], [37], [38], [39], [40]. Yli-ilmentyminen ja aktiivisuus MMP kiihdyttää hajoamista soluväliaineen ja tyvikalvon. Hajoamista matriisi tuottaa aromaattisia aminohappoja mahanesteessä ympäröivän kasvainsoluja. Lisäksi veri aromaattisten aminohappojen voisi helposti tunkeutumaan heikentynyt tyvikalvon ja epiteelin karsinooma pesäkkeitä ja parantaa aminohappojen tasot mahanesteessä. Nämä syyt voivat selittää merkittävän parannuksen aromaattisten aminohappojen mahalaukun mehu EGC potilaista.

Varhainen vaihe mahasyöpä on muutama oireita ja voidaan helposti hukata tavanomaisilla tähystys [6], [41]. Nämä ongelmat hidastavan varhaisen havaitsemisen ja tehokas hoito syöpään. Epätavallisen korkeat aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voidaan käyttää valvomaan esiintymisen aminohapon häiriöistä ja paljastaa alussa pahanlaatuisia muutoksia, joita esiintyy vatsassa. Erityisesti meidän tulokset osoittavat, että tasot aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voi erottaa EGC gastriitti. Tämä havainto sisällytetty mahdollisuus, että nämä biomarkkerit voidaan käyttää massaseulontatyötä mahasyövän varhaisessa vaiheessa. Mittaus aromaattisten aminohappojen tasot mahanesteessä näytteet voivat olla tehokas, taloudellinen, nopea ja kätevä tapa havaitsemiseksi AGC tai EGC populaatiossa.

Vaikka aromaattisia aminohappoja voidaan lupaavaa biomarkkereita EGC, siellä ovat edelleen liittyviä haittoja tämän lähestymistavan. Käyttö vähemmän invasiivisia toimenpiteitä olisi hyödyllistä seulonnassa. Mahalaukun mehut tutkimuksessamme imettiin aikana tähystys, mikä vakavasti rajoittaa sovellettavuutta arvioitaessa mahanesteen biomarkkereiden havaitsemiseksi EGC. Lisätä mahdollisuuksia soveltaa tämän havainnon, ei-Endoskooppinen keinoja voidaan ottaa käyttöön näytteenottoa mahanesteessä. Endogastric kapseli [42], [43], [44] on 45-50 cm pituus siimalangalla kytketty kapseli sisälsi imukykyinen paperi. Kapseli voi tehdä mahanesteessä näytteenoton hyväksyttävämpi, kivuton ja kätevä potilaista verrattuna mahanesteessä kokoelma endoskopialla. Tasot aromaattisten aminohappojen mahanesteessä voidaan vaikuttaa nesteen ja ruoasta potilaalle. Näin ollen täydellinen paasto potilailla, joilla on huono mahan on välttämätöntä parantaa tarkkuutta biomarkkereiden määrityksiä ja mahasyövän havaitsemiseen. Koska otoskoko tässä tutkimuksessa on pieni, suurempia tutkimuksia edellytetään onko aromaattisia aminohappoja mahanesteessä voi auttaa seulonta alkuvaiheen mahasyöpä. Lisäksi lisätutkimuksia tunnistaa optimoitu raja-arvot kunkin merkin. Kun diagnostinen seulonta arvot tunnistetaan, uusia menetelmiä (kuten massaspektrometria) voisivat mahdollistaa yksinkertainen, nopea ja suuren suoritustehon havaitseminen aromaattisten aminohappojen mahanesteessä.

Yhteenvetona merkitsevästi kohonneeseen aromaattisia aminohapot havaittiin mahanesteessä sairastavien potilaiden loppuvaiheen tai alkuvaiheen mahasyövän verrattuna NGD ryhmään. Analyysi aromaattisten aminohappojen voi olla tehokas menetelmä varhaiseen toteamiseen mahasyöpä. Jos validoitu laajamittainen tutkimus, aromaattiset aminohapot mahanesteessä olisi hyödyllistä biomarkkereina seulomiseksi EGC väestössä.

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää kohteeseen Qiuming Geng , Shigang Ding Qinqin Tao, Jingjing Lu Yan Deng ja kaikki kollegoiden tähystys huoneissa Pekingin yliopiston kolmas sairaala heidän avustaan ​​mahanesteessä kokoelma.

• PLoS ONE: Functional Promoottori -308G > muunnos, tuumorinekroositekijä a Gene liittyy riski ja eteneminen mahasyövän kiinalainen Population
• PLoS ONE: MUC4 ja MUC1 ilmentäminen Adenokarsinooma Vatsa korreloi Aluksen Invasion ja imusolmukemääritysmenetelmä Metastasis: immunohistokemiallisessa tutkimus Early Mahalaukun Cancer