PLOS ONE: Des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique pendant les premiers stades de cancer gastrique Progression

Résumé

Contexte

cancer gastrique stade précoce est le plus souvent asymptomatique et peut facilement être manquée facilement par gastroscopie classique. À l'heure actuelle, il n'y a pas de biomarqueurs utiles pour la détection précoce du cancer de l'estomac, et leur identification de biomarqueurs est nécessaire de toute urgence.

Méthodes

Le suc gastrique a été obtenu à partir de 185 sujets qui ont été divisés en trois groupes : maladie non néoplasique gastrique (NGD), le cancer gastrique avancé et le cancer gastrique précoce (EGC). Les teneurs en acides aminés aromatiques dans le suc gastrique ont été quantifiées en utilisant la chromatographie liquide à haute performance.

Résultats

Les valeurs médianes (de 25 au 75e centile) de la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane dans le gastrique le jus était de 3,8 (1,7 à 7,5) ug /ml, 5,3 (02.03 à 09.09) pg /ml et 1,0 (0,4 à 2,8) ug /ml dans le NGD; 19.4 (5,8 à 72,4) ng /ml, 24,6 (11,5 à 73,7) ng /ml et 8,3 (2,1 à 28,0) ng /ml dans du EGC. Des niveaux plus élevés de la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane dans le suc gastrique ont été observés chez les individus des groupes EGC comparés à ceux du groupe NGD (NGD vs. EGC, P
< 0,0001). Pour la détection des EGC, les zones sous le récepteur d'exploitation courbes caractéristiques (ASC) de chaque biomarqueur étaient les suivants: tyrosine, 0,790 [intervalle de confiance à 95% (IC), 0,703 à 0,877]; phénylalanine, 0,831 (IC à 95%, 0,750 à 0,911); et le tryptophane, 0,819 (IC à 95%, 0,739 à 0,900). La sensibilité et la spécificité de la phenylalanine ont été 75,5% et 81,4%, respectivement, pour la détection de l'EGC. Une analyse de régression logistique multiple a montré que des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique ont été associés à un cancer gastrique (coefficients ß ajustés variaient de 1,801 à 4,414, P
< 0,001).

Conclusion

augmentation des niveaux de tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane dans les échantillons de suc gastrique ont été détectés dans la phase précoce de la carcinogenèse gastrique. Ainsi, la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane dans le suc gastrique peuvent être utilisés comme marqueurs pour la détection précoce du cancer gastrique. Une analyse de suc gastrique est une méthode efficace, économique et pratique pour le dépistage du développement de cancer gastrique dans la population générale

Citation:. Deng K, Lin S, Zhou L, Li Y, Chen M, Wang Y, et Al. (2012) Des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique pendant les premiers stades de cancer gastrique Progression. PLoS ONE 7 (11): e49434. doi: 10.1371 /journal.pone.0049434

Editeur: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Catolica de Chile, Faculté de médecine, Chili

Reçu le 27 Avril 2012; Accepté 7 Octobre 2012; Publié le 13 Novembre, 2012 |

Droit d'auteur: © 2012 Deng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Cette recherche a été soutenu par la national science Foundation naturel de la Chine [numéro Grant: 3097415] (URL: http://www.nsfc.gov.cn/e_nsfc/desktop/zn/0101.htm). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique est le deuxième type le plus commun de cancer en Asie de l'est, et le pronostic des patients atteints de cancer gastrique est faible en raison de la détection tardive [1], [2], [3]. À ce jour, la survie de cancer de l'estomac et de la qualité de vie des patients est seulement considérablement amélioré si le cancer est diagnostiqué tôt [4]. Malheureusement, moins de 5% des cas de cancer gastrique précoce sont détectés et diagnostiqués rapidement [5].

Endoscopie suivie par une biopsie pathologique est maintenant la méthode préférée pour détecter le cancer gastrique au début (EGC). Cependant, EGC est manquée fréquemment pendant la gastroscopie, car une lésion mineure peut être facilement négligé, biopsié insuffisamment ou mal interprété par les pathologistes [6], [7]. EGC est largement asymptomatique avant l'apparition des symptômes sévères, et une enquête endoscopique sur la base des symptômes sévères retarde toujours la détection du cancer de l'estomac. le dépistage en population peut faciliter la détection précoce et le diagnostic du cancer gastrique. Cependant, le manque de endoscopistes expérimentés et l'inconfort du patient associé à la procédure de réduire l'application de cette méthode comme outil de dépistage pour EGC.

biomarqueurs moins invasives et plus efficaces sont nécessaires pour la détection de EGC en masse dépistage. Les biomarqueurs pepsinogène actuelle, l'antigène carcinoembryonnaire (CEA), et des glucides antigène 19-9 (CA 19-9), ne sont pas suffisantes pour prédire avec précision le cancer gastrique à un stade précoce [8], [9], [10].

Il est bien établi que les anomalies métaboliques se produisent avant les changements morphologiques significatifs dans les tissus malins [11]. Une quantité importante d'informations concernant l'état métabolique de l'épithélium gastrique est contenue dans le suc gastrique. Par conséquent, le suc gastrique peut être utilisé pour établir un test de diagnostic et d'identifier des biomarqueurs utiles et efficaces pour le dépistage EGC. Dans les études précédentes, nous avons établi l'analyse du spectre de fluorescence du suc gastrique [12], [13], [14] et a identifié trois biomarqueurs de fluorescence (acides aromatiques des acides dans le suc gastrique) [15] qui peut être utilisé pour distinguer gastrique avancé cancer (AGC) de maladies bénignes. Cependant, il est encore incertain si ces biomarqueurs peuvent se différencier entre les EGC et les maladies bénignes. Cette étude a été réalisée pour tester l'hypothèse que les biomarqueurs de suc gastrique ont une valeur de dépistage de diagnostic dans la détection de EGC.

Méthodes de

Déclaration
éthique

Le comité d'éthique de l'Université de Pékin Santé Centre des sciences a approuvé cette étude. Le consentement éclairé écrit a été obtenu à partir de tous les participants, et l'ensemble de la recherche clinique a été menée selon les principes énoncés dans la Déclaration d'Helsinki.

Sample Collection

Des échantillons ont été prélevés dans les salles d'endoscopie de Pékin Université Troisième Hôpital. Tous les échantillons de patients obtenus pour cette étude ont été histologiquement confirmé par une biopsie de la muqueuse et /ou de la pathologie post-opératoire à partir de Décembre 2008 à Juillet 2012. Après une nuit de jeûne, les patients ont subi une gastroscopie. Des échantillons de suc gastrique qui étaient exempts de résidus alimentaires bruts, la bile et de sang ont été recueillies. Les échantillons ont été séparés en aliquotes de 2 ml et immédiatement stockés à -80 ° C pour analyse ultérieure. Warthin-Starry (WS) coloration a été utilisé pour détecter la Helicobacter pylori
état de l'infection dans tous les échantillons (l'antre gastrique était l'un des sites de biopsie et le nombre total de sites de biopsie a été plus de deux).
<

échantillons de suc gastrique de h3> les participants ont été obtenus à partir de 49 patients avec EGC (6 cas ont été inclus dans une précédente publication [15]). Il y avait 26 cas de carcinome focal et 23 cas de dysplasie sévère qui pourraient être classés comme EGC [16]. En plus des échantillons de suc gastrique isolés à partir de patients atteints de EGC, des échantillons provenant de 70 patients atteints d'une maladie non néoplasique gastrique (NGD) qui a subi une procédure ambulatoire d'endoscopie au cours de la même période, ont été utilisés comme groupe témoin de comparaison. Le groupe témoin contenait 47 patients souffrant de gastrite chronique superficielle, 18 patients souffrant de gastrite atrophique chronique, et 5 patients souffrant d'ulcères gastro-duodénaux. En outre, des échantillons de suc gastrique ont été prélevés au hasard parmi 66 patients avec AGC (tableau 1). Il n'y avait pas d'anomalies significatives observées dans les tests de la fonction hépatique et rénale pré-endoscopiques des sujets recrutés. La plupart des patients atteints de cancer gastrique recrutés n'a pas été diagnostiquée auparavant, et aucun des patients ont montré une malnutrition importante (performance status Kamofsky, KPS > 90).

Exemple de traitement

Les échantillons congelés ont été décongelés à température ambiante et centrifugée à 14.000 tpm pendant 20 minutes à 4 ° C. Le précipité a été retiré, et la couche supérieure a été récupérée et stockée temporairement à 4 ° C pour l'expérience suivante. Les échantillons ont été numérotés au hasard. L'expérimentateur a été aveuglé au diagnostic des patients recrutés pour l'étude.

Quantification de la protéine totale dans Gastric Juice

Pour quantifier la teneur en protéines, 100 pl de suc gastrique surnageant a été récupéré et immédiatement dilué avec 900 ul de 0,15 M de tampon phosphate (pH 7,3) pour ajuster le pH. La teneur totale en protéines dans le suc gastrique a été mesurée en utilisant un BCA (acide bicinchoninique) kit de dosage de protéines (Beijing Cowin Biotech Co. Ltd, Beijing, Chine) selon le protocole du fabricant. Si la concentration en protéines était hors de la plage de travail de l'essai (20-2000 pg /ml), l'échantillon a été encore diluée et réanalysé.

acides aminés aromatiques de Quantitative système dans l'estomac des échantillons de jus ont été quantifiés en utilisant un détecteur de fluorescence en combinaison avec HPLC [17], [18] et le système quantitatif établi précédemment [15] a été appliqué dans cette étude. Un filtre HPLC Inlet, un DIAMonSIL (2) C18 (3 pm, 250 x 4,6 mm) colonne analytique (Dikma Technologies, Beijing, Chine) et un système de chromatographie Agilent 1100 liquide série (Agilent Technologies, Waldbronn, Allemagne) ont été utilisés dans cette étude. Le système se composait d'un solvant unité sous vide de dégazage, quatre pompes à gradient de solvant, un injecteur automatique d'échantillon à température régulée, un thermostat de colonne, et un détecteur de fluorescence 3D (FLD). logiciel ChemStation a été utilisé pour quantifier la quantité d'acides aminés aromatiques dans les échantillons de suc gastrique. Avant l'analyse par HPLC en phase inverse, le suc gastrique, le surnageant a été filtré à travers un filtre de 0,45 um HPLC. Les acides aminés aromatiques dans le suc gastrique ont été séparés pendant la HPLC sur une colonne analytique C18 en utilisant 0,05% (v /v) d'acide trifluoroacétique /eau (qualité HPLC; Dikma Technologies) en tant que solvant A et de l'acétonitrile pur (qualité HPLC, Merck, Darmstadt, Allemagne) comme solvant B modificateurs de phase mobile dans un système d'élution à gradient linéaire. Après un lavage à l'aiguille, les échantillons ont été injectés en un volume de 20-100 ul de volume d'injection. La procédure de HPLC et les conditions expérimentales pour chaque échantillon sont énumérés dans le tableau 2.

des acides aminés aromatiques Quantification

Des solutions standard et de contrôle de la qualité qui contenaient des concentrations équivalentes de L-tyrosine, L-phénylalanine et L -tryptophan (99%, Alfa Aesar, Ward Hill, MA, USA) ont été préparés à des concentrations de 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0, 18,0 et 20,0 pg /ml pour établir des courbes d'étalonnage. Les normes ont été stockés à -80 ° C. aliquotes Vingt microlitres de ddH _{2O (solution de contrôle à blanc) et les échantillons standard et de contrôle de la qualité ont été utilisés pour établir et vérifier les courbes d'étalonnage avant le dosage des trois acides aminés aromatiques dans les échantillons de suc gastrique. Si les niveaux de tyrosine, de phénylalanine et /ou du tryptophane sont hors de la plage de mesure, les échantillons ont été retestés après avoir modifié le volume d'injection (20-100 ul). Si une concentration de l'échantillon était indétectable après plusieurs tentatives d'analyse, il a été attribué un score de zéro.}

Méthodes statistiques

Quand une distribution normale acceptable a été atteint, les données sont exprimées en moyenne ± SD (écart type), et les comparaisons entre les groupes ont été faites en utilisant le test ANOVA à sens unique. Quand une distribution normale acceptable n'a pas été atteint, les données ont été exprimées comme les médianes (25e au 75e centile). Kruskal-Wallis Epreuves suivie par de multiples comparaisons post hoc des tests (Bonferroni corrigée importance du niveau de 0,05 /3 = 0,017) Dunn ont été utilisés pour déterminer les différences entre les trois groupes. Le Kruskal-Wallis et les tests de Dunn ont été effectuées en utilisant Minitab (version 16, Minitab Company, State College, PA) avec la macro KrusMC.MAC (obtenue à partir du site Web de Minitab). Le test de Mann-Whitney U a été utilisé pour les comparaisons entre les deux groupes. Un test du chi carré a été utilisé pour estimer l'association entre deux variables binaires. Une corrélation de Pearson a été choisi pour analyser l'association entre les variables. Une corrélation partielle a été utilisée pour évaluer l'association entre les niveaux d'acides aminés aromatiques et le diagnostic clinique, ce qui a donné lieu à la suppression d'un ensemble de variables de contrôle. Le récepteur d'exploitation (ROC) courbes et les zones sous la courbe (AUC) du ROC ont été appliqués pour évaluer la validité des biomarqueurs et d'identifier les valeurs de coupure optimisées. Tous les autres tests statistiques étaient bilatéraux, avec P
< 0,05 considérée comme statistiquement significative. Des modèles de régression logistique ont été utilisés pour calculer les coefficients bêta et P
valeurs pour chaque facteur /covariable. Tous les calculs ont été réalisés avec Excel 2003 (Microsoft Corporation, Seattle, WA, USA), et les tests statistiques ont été calculées à l'aide du logiciel SPSS version 15.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), logiciel SAS 8.1 (SAS Institute Inc., Cary, Caroline du Nord) et PASS 2008 progiciel (NCSS, Kaysville, UT)

les de

Résultats des caractéristiques cliniques des patients

Cette étude contenait 185 patients séparés en 3 groupes:. 70 patients NGD , 66 patients AGC et 49 patients EGC. Il n'y avait pas de différence significative dans la survenue de Les infections de Helicobacter pylori (6 cas manqués) entre les trois sous-groupes. L'âge et le sexe ont varié entre les trois sous-groupes ( P
= 0,049 et P
= 0,023) (tableau 1).

protéine totale dans le suc gastrique

la médiane (25e à 75e percentile), les valeurs de la teneur totale en protéines dans les échantillons de suc gastrique sont les suivantes: NGD, 1,5 (0,9-2,4) mg /ml; AGC, 3,3 (2,3 à 5,1) mg /ml; et EGC, 2,8 (1,6 à 3,7) mg /ml (tableau 3). Une augmentation de la teneur totale en protéines a été observée dans les échantillons de suc gastrique provenant des groupes AGC et EGC par rapport à celle du groupe NGD (test de Dunn, AGC contre NGD P
< 0,0001; EGC vs. NGD, P
< 0,0001) (tableau 1). Il n'y avait aucune différence dans la teneur totale en protéines entre le groupe AGC et le groupe CGE (les tests de Dunn P
= 0,044, ce qui est supérieur au seuil de signification de 0,017) (tableau 3).

système
quantitatif

Comme le montre le chromatogramme de fluorescence (figure 1), les trois acides aminés aromatiques ont été complètement séparés. Les temps de rétention pour chacun des trois acides aminés étaient les suivants: la tyrosine, 8 min; la phénylalanine, 12 min; et le tryptophane, 16 min. La courbe d'étalonnage, de linéarité et de travail des plages ont été les suivants: tyrosine, Y = 0.32X + 1,30, R ^{2 = 0,9999, 0,5-20,0 pg /ml; phénylalanine, Y = 7.15X + 1,03, R 2 = 0,9999, 0,5-20,0 pg /ml; et le tryptophane, Y = 0,25X + 3.01, R 2 = 0,9999, 0,5-20,0 pg /ml. Les taux de récupération de la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane ont été 100,5 ± 2,7% 101,3 ± 3,4% et 99,6 ± 1,6%, respectivement. Les précisions de la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane ont été 100,1 ± 0,5% 100,0 ± 1,8% et 98,7 ± 1,5%, respectivement. Ce système expérimental est stable et fiable pour la quantification des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique.}

Dosage des acides aminés aromatiques

La médiane (25e à 75e percentile), les valeurs de la tyrosine, phénylalanine et tryptophane étaient 3,8 (01/07 à 07/05) ug /ml, 5,3 (2,3 à 9,9) ug /ml et 1,0 (0,4 à 2,8) ug /ml dans les échantillons NGD; 18.3 (6,4 à 52,3) ng /ml, 25,7 (11,1 à 76,1) ng /ml et 4,7 (2,5 à 20,3) ng /ml dans les échantillons d'AGC; et 19,4 (5,8 à 72,4) ng /ml, 24,6 (11,5 à 73,7) ng /ml et 8,3 (2,1 à 28,0) ng /ml dans les échantillons EGC (tableau 3). Les teneurs en acides aminés aromatiques dans le suc gastrique était significativement différente entre les groupes NGD, AGC et EGC (test de Kruskal-Wallis, tyrosine χ ^{2 = 49,847, phénylalanine χ 2 = 62,397, tryptophane χ 2 = 52,846, tous les P
< 0,0001). Les niveaux de tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane ont été significativement augmentés dans le suc gastrique obtenu à partir des deux groupes AGC et EGC par rapport à ceux du groupe NGD (test de Dunn, AGC vs. NGD, tous les P
< 0,0001; EGC vs. NGD, tous les P
< 0,0001) (tableau 3 et figure 2). Après ajustement de l'effet des niveaux de protéines totales dans le suc gastrique, des associations significatives existaient encore entre les niveaux d'acides aminés aromatiques et le diagnostic clinique (corrélation partielle, AGC vs. NGD: tyrosine, R = 0,334, P
< 0,001; phénylalanine, R = 0,257, P
< 0,001; et le tryptophane, R = 0,312, P
< 0,001; EGC vs. NGD: tyrosine, R = 0,378 , P
< 0,001; phénylalanine, R = 0,392, P
< 0,001; et le tryptophane, R = 0,380, P
< 0,001). Il n'y avait pas de différences significatives dans les niveaux de tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane entre les échantillons de jus gastrique AGC et EGC (test de Dunn, P
= 0,811, P
= 0,781 et P
= 0,691, respectivement) (tableau 3). Ce résultat est conforme aux résultats précédents [15] qui ont indiqué qu'il n'y a pas d'associations existent entre l'infection de Helicobacter pylori et les niveaux d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique (test de Mann-Whitney U, tyrosine, P
= 0,871; phénylalanine, P
= 0,742;. tryptophane, P
= 0,913)}

Validité des acides aminés aromatiques pour la détection de l'AGC et EGC

Dans l'analyse ROC de la courbe de distinguer entre AGC et NGD, les zones sous les courbes (AUC) pour la tyrosine, la phénylalanine, le tryptophane et la protéine totale ont été intervalle de confiance 0,824 [95% (IC), 0,753 à 0,895, P
< 0,001], 0,858 (IC à 95%, de 0,794 à 0,922, P
< 0,001), 0,818 (IC à 95%, de 0,747 à 0,889, P
<0,001) et 0,803 (IC à 95%, 0,728 à 0,878, P
< 0,001), respectivement (figure 3A et le tableau 4). Selon l'analyse ROC de la courbe de distinguer entre EGC et NGD, les AUC pour la tyrosine, la phénylalanine, le tryptophane et la protéine totale étaient 0,790 (IC à 95%, de 0,703 à 0,877, P
< 0,001), 0.831 (95 % CI, 0,750 à 0,911, P
< 0,001), 0,819 (IC à 95%, de 0,739 à 0,900, P
< 0,001) et 0,719 (IC à 95%, 0,623 à 0,814 , P
< 0,001), respectivement (figure 3B et le tableau 4). Les valeurs seuils optimisés pour distinguer AGC ou EGC de NGD ont été choisis en déterminant les montants maximaux de sensibilité et la spécificité des courbes ROC (tableau 4). Après avoir sélectionné les valeurs optimisées, la sensibilité, la spécificité et la précision nécessaires pour la distinction entre les AGC et NGD sont les suivants: la tyrosine, 83,3%, 68,6% et 75,7%; la phénylalanine, 81,8%, 75,7% et 78,7%; le tryptophane, 84,8%, 68,6% et 76,5%; et des protéines totales, 75,8%, 74,3% et 75,0%. Après avoir sélectionné les valeurs optimisées, la sensibilité, la spécificité et la précision nécessaires pour la distinction entre les EGC et NGD étaient les suivants: la tyrosine, 75,5%, 71,4% et 73,1%; la phénylalanine, 75,5%, 81,4% et 79,0%; le tryptophane, 61,2%, 97,1% et 82,4%; et des protéines totales, 59,2%, 81,4% et 72,3% (tableau 4). Après avoir sélectionné les valeurs optimisées rapportées dans notre précédente étude [12], [15], la sensibilité, la spécificité et la précision de la détection de EGC sont les suivants: la tyrosine, 51,0%, 94,3% et 76,5%; la phénylalanine, 79,6%, 74,3% et 76,5%; le tryptophane, 61,2%, 94,3% et 80,7%; et des protéines totales, 83,7%, 62,9% et 71,4%. L'utilisation d'une valeur optimisée différente, nous avons obtenu des résultats similaires. En utilisant une combinaison de la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane n'a pas amélioré de façon significative la détection d'AGC ou EGC parce que les concentrations des trois acides aminés aromatiques dans les échantillons de suc gastrique sont étroitement liés les uns aux autres (la tyrosine-phénylalanine, R = 0,871; tyrosine tryptophane, R = 0,941; phénylalanine-tryptophane, R = 0,840, P
<. 0,001 pour chaque)

analyse de régression logistique

Dans l'analyse de régression logistique, la association entre les niveaux d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique et EGC a été évaluée. Les analyses de régression logistique univariée ont été réalisées pour évaluer les valeurs prédictives des biomarqueurs candidats pour la détection des EGC. Dans ces analyses univariée, les coefficients ß (SE) de l'âge, le sexe, l'état, la protéine de Helicobacter pylori et des taux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique ont été calculés. Quatre variables (âge et tyrosine élevée, la phénylalanine et les niveaux de tryptophane dans le suc gastrique) avaient une P
< 0,05 et ont été identifiés par analyse de régression logistique multiple (tableau 5). Parce qu'il y avait colinéarités entre la tyrosine, la phénylalanine et le tryptophane (tous les R > 0,8), nous avons évalué la relation entre les niveaux de tyrosine, la phénylalanine ou le tryptophane et EGC en trois modèles distincts et estimé les coefficients ajustés dans chaque modèle. Les niveaux élevés de ces acides aminés aromatiques dans le suc gastrique ont été associés à EGC (tyrosine: ajuster le coefficient β 1,801, SE 0,527; phénylalanine: ajuster le coefficient β 2,555, SE 0,586; tryptophane: ajuster le coefficient β 4,414, SE 0,945) (Tableau 5 ). Ainsi, des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peuvent être des marqueurs indépendants pour la détection de EGC.

Discussion

Dans nos études précédentes, nous avons observé une augmentation de fluorescence du suc gastrique dans AGC et identifié trois biomarqueurs de fluorescence pour le dépistage du cancer gastrique avancé [12], [15]. Que ces biomarqueurs potentiels sont utiles pour la détection précoce du cancer gastrique est incertain. Dans notre étude actuelle, nous avons vérifié la validité de l'utilisation des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique pour le diagnostic de l'EGC. Nos résultats montrent que des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques sont présents dans le suc gastrique des patients atteints EGC par rapport aux patients NGD. Ainsi, des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peuvent être utiles pour la détection précoce des EGC.

En raison de la taille de l'échantillon de thesmall, analyse de puissance pour Kruskal-Wallis essai et ROC AUC ont été effectuées. À notre connaissance, les formules ou procédures permettant de déterminer la taille de l'échantillon nécessaire pour tester les différences dans des emplacements multiples échantillons en utilisant des méthodes non paramétriques sont beaucoup plus compliquées [19], et aucune méthode de calcul de puissance ou de taille de l'échantillon est actuellement disponible en ce qui concerne l'hypothèse alternative générique pour le test de Kruskal-Wallis [20]. Lachenbruch et Clements a suggéré que le test de Kruskal-Wallis pourrait avoir une plus grande puissance que le F-test lorsque les distributions de la population ne sont pas normales. Ils ont affirmé que, par rapport à la F-test, le test de Kruskal-Wallis a été plus robuste contre les départs de l'hypothèse de l'égalité de la variance [21]. Ainsi, en utilisant la puissance de la F-test pour rapprocher la puissance du test de Kruskal-Wallis peut fournir une mauvaise limite inférieure pour des distributions normales. Après une transformation de rang, les pouvoirs immédiats (1 - β d'erreur) ont été calculées en utilisant le test F (ANOVA) telle que transposée dans SAS 8.1. Tous les pouvoirs immédiats sont plus de 0,99. Ainsi, nous pouvons conclure de manière fiable que les niveaux de protéine totale et des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique sont significativement différentes entre les NGD, AGC et EGC. Les analyses de puissance pour les courbes ROC ont été effectuées en utilisant le logiciel PASS 2008. Aucun des pouvoirs était inférieure à 0,99. Par conséquent, il est acceptable de conclure que des niveaux élevés d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peut être des prédicteurs valables pour AGC ou EGC.

La production accrue d'acides aminés aromatiques en EGC correspond aux résultats d'une étude précédente [15] et est compatible avec les premiers rapports dans d'autres maladies malignes (sang [22], du poumon [23], [24], [25], du sein [23], [24], de la vessie [26], etc.). Nous pensons que les raisons suivantes peuvent expliquer ce phénomène. Tout d'abord, les cellules tumorales nécessitent des acides aminés aromatiques suffisantes pour accumuler dans les foyers cancéreux pour répondre aux besoins accrus fortement pour la synthèse des protéines pour favoriser la croissance rapide. Une expression élevée d'acides aminés transporteurs (tels que L-type amino-acide transporteur 1) dans diverses tumeurs [27], [28], [29], [30], [31], [32], [33], [34], [35] a été rapportée dans de nombreuses études. transporteurs d'acides aminés peuvent améliorer le transport des acides aminés et d'accumuler des acides aminés aromatiques à proximité de foyers cancéreux. L'infiltration des acides aminés aromatiques excessive peut augmenter de manière significative dans le suc gastrique dans l'EGC par rapport à NGD. Deuxièmement, le métabolisme aberrant dans les cellules cancéreuses précéderait les changements visibles dans l'estomac cancérogenèse [11]. Il est connu que les anomalies du transport des acides aminés et le métabolisme dans une zone cancéreuse se produisent fréquemment dans le stade précoce du cancer gastrique. suc gastrique, qui est produit par l'épithélium gastrique, contient une quantité substantielle d'informations sur l'état métabolique de l'épithélium. Par conséquent, l'information obtenue à partir de l'analyse du suc gastrique peuvent être utiles dans la séparation des biomarqueurs pour la détection précoce du cancer gastrique. Enfin, les métalloprotéinases de matrice (MMP), qui sont des enzymes qui dégradent la matrice extracellulaire et la membrane basale, jouent un rôle dans la phase précoce de la tumorigenèse [36], [37], [38], [39], [40]. La sur-expression et l'activité de MMP accélère la dégradation de la matrice extracellulaire et la membrane basale. La dégradation de la matrice génère des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique entourant les cellules tumorales. En outre, le sang des acides aminés aromatiques peuvent facilement pénétrer dans la membrane basale et une altération de l'épithélium carcinome foyers et d'améliorer les taux d'acides aminés dans le suc gastrique. Ces causes peuvent expliquer l'augmentation significative des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique des patients EGC.

La phase précoce du cancer gastrique a peu de symptômes et peut être facilement manquée par endoscopie conventionnelle [6], [41]. Ces problèmes réduisent le taux de détection précoce et un traitement efficace pour le cancer gastrique. Des taux anormaux d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peuvent être utilisés pour surveiller l'apparition de troubles du métabolisme des acides aminés et de révéler les transformations malignes précoces qui se produisent dans l'estomac. En particulier, nos résultats indiquent que les teneurs en acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peut distinguer EGC de gastrite. Cette constatation introduit la possibilité que ces biomarqueurs peuvent être utilisés pour le dépistage de masse du cancer gastrique à un stade précoce. La mesure des niveaux d'acides aminés aromatiques dans les échantillons de suc gastrique peut être une méthode efficace, économique, rapide et pratique pour détecter AGC ou EGC dans une population.

Bien que les acides aminés aromatiques peuvent être prometteurs biomarqueurs pour EGC, il sont encore des inconvénients associés à cette approche. Le recours à des procédures moins invasives serait bénéfique à des fins de dépistage. Les sucs gastriques dans notre étude ont été aspirés pendant l'endoscopie, ce qui limiterait sérieusement l'applicabilité de l'évaluation de biomarqueurs de suc gastrique pour la détection de EGC. Pour augmenter l'application potentielle de cette constatation, des moyens non-endoscopiques peuvent être introduits pour échantillonner le suc gastrique. Une capsule endogastrique [42], [43], [44] est une longueur de 45-50 cm de fil de nylon relié à une capsule contenait du papier absorbant. Une capsule peut faire l'échantillonnage de suc gastrique plus acceptable, indolore et pratique pour les patients par rapport à la collecte de suc gastrique par endoscopie. Les teneurs en acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peuvent être influencés par le fluide et la nourriture consommée par le patient. Par conséquent, à jeun chez les patients avec la motilité gastrique pauvres est essentielle pour améliorer la précision des dosages de biomarqueurs et la détection du cancer gastrique. Parce que la taille de l'échantillon dans cette étude est de petite taille, des études plus importantes sont nécessaires pour déterminer si les acides aminés aromatiques dans le suc gastrique peuvent aider dans le dépistage du cancer gastrique à un stade précoce. En outre, d'autres études permettront d'identifier les valeurs limites optimisées pour chaque marqueur. Une fois les valeurs de dépistage de diagnostic sont identifiées, de nouvelles méthodes (telles que la spectrométrie de masse) pourraient permettre la détection simple, rapide et à haut débit d'acides aminés aromatiques dans le suc gastrique.

En conclusion, une augmentation significative des niveaux d'hydrocarbures aromatiques les acides aminés ont été trouvés dans le suc gastrique des patients atteints de stade tardif ou d'un cancer gastrique à un stade précoce par rapport au groupe NGD. Une analyse des acides aminés aromatiques peut être un procédé efficace pour la détection précoce du cancer de l'estomac. Si elle est validée dans une étude à grande échelle, des acides aminés aromatiques dans le suc gastrique seraient utiles en tant que biomarqueurs pour le dépistage EGC dans la population générale.

Remerciements

Les auteurs tiennent à remercier Qiuming Geng , Shigang Ding Qinqin Tao, Jingjing Lu, Yan Deng et tous les collègues dans les salles d'endoscopie de l'Université de Pékin Troisième Hôpital pour leur aide dans la collecte de suc gastrique.

• PLOS ONE: Promoteur fonctionnel -308G > une variante dans Tumor Necrosis Factor alpha Gene est associée à des risques et la progression du cancer gastrique dans une population chinoise
• PLOS ONE: MUC4 et MUC1 Expression dans l'adénocarcinome de l'estomac corrèle avec Invasion du navire et de métastase ganglionnaire: Une étude immunohistochimique de cancer gastrique précoce