PLoS ONE: antrakinon G503 inducira apoptozu u rak želuca stanica kroz mitohondrijske Put

Sažetak pregled

G503 je antrakinon spoj izoliran od sekundarnih metabolita u mangrove endofitični gljiva iz South China Sea. Ovo istraživanje razjašnjava na djelovanje protiv tumora i pozadina mehanizma tog G503. Vijabilnost stanica test provodi u devet staničnih linija raka i dva normalne stanične linije je pokazao da je rak želuca stanična linija SGC7901 je najviše G503 osjetljive stanice raka. G503 izazvana smrt SGC7901 stanica putem apoptoze. izloženosti G503 aktivirane kaspaze-3, -8 i -9. Prethodna obrada s inhibitorom pan-kaspaze Z-VAD-FMK i kaspaza-9 inhibitora Z-LEHD-FMK, ali ne i kaspaza-8 inbibitor Z-IETD-FMK, prigušuje učinak G503. Ovi rezultati sugeriraju da je pravi mitohondrijska apoptoza put, a ne vanjska staza, bio je uključen u G503-inducirana apoptoza. Nadalje, G503 povećao omjer Bax Bcl-2, samo u mitohondrijima i smanjeni omjer u citosolu. G503 liječenje rezultiralo mitohondrijske depolarizacije, citokroma c otpuštanja i kasnijim cijepanjem kaspaze -9 i -3. Štoviše, on je izvijestio da endoplazmatski retikulum apoptoza put može se aktivirati pomoću G503 induciranjem capase-4 cijepanja. S obzirom na donjem 50% inhibitorne koncentracije za želučane stanice raka, G503 može poslužiti kao obećavajući kandidat za želučane kemoterapiji raka pregled

Izvor:. Huang L, Zhang T, Li S, Duan J, Ye F, Li H, et al. (2014) antrakinon G503 inducira apoptozu u rak želuca stanica kroz mitohondrijske puta. PLoS ONE 9 (9): e108286. doi: 10,1371 /journal.pone.0108286 pregled

Urednik: Javier S. Castresana, Sveučilište Navarra, Španjolska pregled

Primljeno: 19. travnja 2014; Prihvaćeno: 19. kolovoz 2014; Objavljeno: 30. rujna 2014 pregled

Copyright: © 2014 Huang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Data Dostupnost:. The autori potvrđuju da su svi podaci na kojima se temelji nalaze u potpunosti na raspolaganju bez ograničenja. Svi relevantni podaci u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled

Sredstva: Ova studija je podržana od strane Nacionalne zaklade za znanost priroda Kine, Grant. Broj: 30973449, 81172163, 81272515, 81272338, 81200706, Nacionalni ključ Sci-Tech posebnog projekta Kine, Grant broj: 2009ZX09103-642, 2013ZX09102053; Program doktorskog kolodvor u University, Grant Broj: 20120171110053, 20130171110053; Ključ Projekt Nature Science Foundation provincije Guangdong, Kina, Grant Broj: 10251008901000009; Ključ Sci-Tech Research Project provincije Guangdong, Kina, Grant Broj: 2011B031200006; Guandong Prirodni fonda za znanost, Grant broj: S2012010009250, S2012040006986; Ključ Sci-Tech Research Project Općine Guangzhou, Kina, Grant Broj: 2011Y1-00017-8, 12A52061519; Program mladi nastavnik na Sveučilištu Grant Broj: 10YKPY28; Changjiang Znanstvenici i inovativan tim za istraživanje na Sveučilištu, broj:. 985 projekt PCSIRT 0947. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

Natjecanje interesi: autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi. pregled

Uvod pregled

kirurgija, radioterapija i kemoterapija su primarni klinička tumora tretmani. Međutim, kirurgija i radioterapija su neučinkoviti u metastatskog karcinoma; Ako kemoterapija se pravilno, metastaze mogu inhibirati [1]. S obzirom na razvoj lijek protiv raka, antraciklini su najučinkovitije lijekovi protiv raka. [2] Prirodni proizvodi iz oceana su važan izvor novih lijekova protiv raka. [3] Morski mikroorganizama metaboliti s jedinstvenim strukturama i farmakoloških aktivnosti obično se koriste kao vodeći antitumorskih spojeva [4]. Antrakinon spojeva, kao što su daunorubicin, doksorubicin, epirubicin i mitoksantron, su najučinkovitije kliničkih lijekovi protiv raka. [2] Brodska antrakinon SZ-685C potiskuje proliferaciju raku dojke [5] - [6] i ljudske nazofarinksa karcinom (NPC) stanice [7]. Huang et al. pokazali da antrakinoni iz rabarbara poput emodin, aloe-emodin i rajnski, inhibiraju rast i proliferaciju raznih tumorskih stanica, kao što su adenokarcinoma pluća, mijeloične leukemije, neuroblastom, hepatocelularnog karcinoma, karcinoma mokraćnog mjehura i dr. [8] pregled

mehanizam antitumorskom aktivnosti antrakinona je prvenstveno u sljedećim aspektima [9] - [10]: DNA interakcije kroz vezanje, interkalirajućih i sprječava odvajanje dvostruku uzvojnicu DNA; izravni membranske učinci; oštećenja DNA, kao odgovor na topoizomeraze II inhibiciju ili stvaranje slobodnih radikala, kao što je reaktivnih vrsta kisika (ROS) i indukciju apoptoze putem topoizomeraze II inhibiciji funkcije p53 ili ROS generacije. Osim toga, antrakinoni također izazvati apoptozu kroz JNK (c-Jun N-terminalne kinaze) [11], Akt /PKB (protein kinaza B) [5], [12] i u mitohondrijima putevi [13] - [14].

G503 je antrakinon spoj izoliran od sekundarnih metabolita u mangrove endofitični gljiva br 1403 od Južnog kineskog mora [15] .Međutim, da li G503 posjeduje antikancerogena potencijal kao antrakinon spoj nije istražena. Dakle, ova studija je osmišljen kako bi se razjasnila anti-tumorsku aktivnost od G503, a temeljni mehanizam uključeni. Pregled

Materijali i metode

Kemikalije i reagensi pregled

3- (4 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-diphenylterazolium bromida (MTT) i ROS sakupljač N-acetil-cistein (NAC) kupljeni su od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Hochest 33.342, karboksi H2DCFDA, MitoProbe DiOC2 (3) Test Kit i MitoProbe pora promjenom Assay Kit (M34153) dobivena je od Invitrogen (USA). Aneksin V-FITC (fluorescein izotiocijanat) /PI (propidij jodid) Apoptoza Detection Kit je kupljen od keygen (Nanjing, Jiangsu, Kina). RPMI1640 medij i fetalnog goveđeg seruma (FBS) od Hyclon (Logan, UT, USA ). Pregled kaspaze-8 inhibitor Z-IETD-FMK, caspase-9 inhibitor Z-LEHD-FMK i caspase-obitelji inhibitora Z-VAD-FMK su Calbiochem (Gibbstown, NJ, USA) i Beyotime (Kina). Antitijela protiv kaspaze-3, caspase-4, caspase-8, kaspaza-9 i COXIV antitijela su dobivena od tvrtke Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). Antitijela protiv citokroma c pregled, Bax, Bcl-2, p38, p-p38 i anti-kozji LGG-HRP su iz Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Mišji anti-β-aktin i anti-GAPDH primarni antibodywere od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Anti-zečje LGG-peroksidaze i anti-mišji IgG-peroksidaze su od Vector (Burlingame, CA, USA) .Mitochondria izolacija set je kupljen od tvrtke Pierce (Pierce, IL, USA), komplet za određivanje proteina su kupili od Bio-Rad (Hercules , CA, USA), a za otkrivanje kit ECL su iz Applygen Technologies Inc. (Peking, Kina). pregled

fermentacija, vađenje i izolaciju G503 s Nigrospora pregled sp. Broj 1403 pregled

NO.1403 je izolirana iz propalo drva Kandeliacandel pregled (L.) Druce i reidentified kao Nigrospora pregled sp. (Broj GENEBANK pristupni: HQ891110), prikupljeni od Mai Po, Hong Kong, te slano jezero na Bahamima. G503 se izolira i pročišćava iz sekundarnih metabolita NO. 1403 [15]. Starter kulture su održavane na palentom s morskom vodom agar. Utikači agar podupiru micelija rast se izreže i prebačen u aseptičkim uvjetima u 250 ml Erlenmeyer tikvicu koja sadrži 100 ml tekućeg medija (glukoza 10 g /L, peptona, 2 g /l, ekstrakt kvasca 1 g /l, NaCl _{2 g /L, pH D 7,0). Tikvica se inkubira na 28 ° C. Nakon mućkanja na rotacijskoj mućkalici 3-5 dana, micelij se pod aseptičnim uvjetima se prenese u Erlenmeyer-ovoj boci od 500 ml koja sadrži tekućinu za kulturu (200 mL). Reakcijska tikvica se zatim inkubira na 28 ° C tijekom 25 dana. Pregled}

Kulture (150 L) je filtrirana kroz gaza. Filtrat se koncentrira do 5 L ispod 50 ° C i ekstrahira tri puta mućkanjem s jednakim volumenom etil-acetata. Spojeni organski ekstrakti su bili podvrgnuti koloni silika gela i ispere se s gradijentom petrolej etera do etil-acetat kako bi se dobio spoj. Pregled

Spoj je otopljen u dimetil sulfoksidu (DMSO) u koncentraciji od 50 dionicama mmol /L i razrijedi sa specifičnim koncentracijama prije primjene pregled

stanične kulture pregled

HUVECs su izolirani iz ljudske pupčane vene užadi normalnih parturitions i kultivirane po postupku opisanom prethodno [16] -. [ ,,,0],17]. Chang jetrene stanice i tumorske stanice brusiti-1 CNE-2 5-8F, HepG2, B7402, Rb, PC3, A549 i SGC7901, AGS održava se našem laboratoriju i uzgajane su u RPMI1640 mediju obogaćenom sa 10% FBS, 100 U /ml streptomicina i 100 u /ml penicilina (Gibco), na 37 ° C u vlažnoj atmosferi 5% CO _{2. Ova studija u skladu s načelima navedenima u deklaraciji Helsinkija, odobren od strane medicinskog etičkog povjerenstva Sun Sveučilišta Yat-Sen, i pismeni informirani pristanak dobiven je od donatora. Pregled}

Cell održivost Test pregled

stanice su nasađene u gustoći od 2 x 10 ^{4 stanica /mL u 24 jažica (HUVEC su nasađene u 24 jažica obložene želatinskim). Kada su stanice postigla gustoća od 60% -70%, su tretirani s različitim koncentracijama G503 tijekom 48 h u RPMI1640 mediju (1 ml /jažica) bez FBS; negativne kontrolne skupine su tretirane s PBS-om. Nakon toga, 100 ul MTT (5 mg /mL) je otopljen u PBS doda se u svaku udubinu i inkubirano je još 4 sata kako bi se omogućilo formiranje formazancrystals. Kristali su otopljeni u 1 ml DMSO-a u svakoj jažici. Optička gustoća (OD) vrijednosti ljubičasti rješenje koje zastupa preživljavanja stanice mjerene su na 570nm [18] - [19]. Nakon tri nezavisna pokusa, preživljavanje stanice je izračunata pomoću sljedeće formule: preživljavanje (%) = (znači eksperimentalni OD vrijednosti /znači kontrole OD vrijednost) × 100%. Vrijednosti su izražene kao koncentracija inhibicije od 50% (IC _{50), koji je izračunat je postupkom regresije u linearnom području. Pregled}}

Hoechst 33.342 pokus bojanja pregled

SGC7901 stanice su stavljene u ploče sa 6 jažica u gustoći od 10 ^{5 stanica po jažici, te obrađivana s koncentracijama u rasponu od 0 G503 umol /L do 40 umol /L 24 sata. Stanice su označene s 10 ug /ml Hoechst 33.342 [20] tijekom 10 min na 37 ° C i promatra pomoću fluorescentne mikroskopije (Olympus X71-A12FL /PH). Pregled}

Annexin V-FITC /PI pokus bojanja

SGC7901 stanice su sakupljene u gustoći od 5 × 10 ^{5 do 5 × 10 6 /mL G503 liječenja u koncentracijama u rasponu od 0 umol /L do 40 umol /L 24 sata u 6 jamica; stanice tretirane s 25 umol /L kolhicin su korištene kao pozitivna kontrola. Stanice su potom isprane i obojene u skladu s uputama proizvođača (Annexin V-FITC /PI Apoptoza Detection Kit). Ukratko, stanice su resuspendirane u 500 uL 1 × puferom za vezanje. Dalje, 5 ul AnnexinV-FITC i 5 ul 20 ug /ml PI je dodana u uzorak i inkubira na sobnoj temperaturi tijekom 15 min u mraku. Obojeni Uzorci su zatim ocjenjuje protočnom citometrijom (Becton Dickinson, New Jersey, USA) za identifikaciju apoptoze stanice. Pregled}

Određivanje mitohondrijskog membranskog potencijala

SGC7901 stanice su nasađene u ploče sa 6 jažica. Nakon postizanja gustoće od 60%, stanice su tretirane s 20 umol /L G503 tijekom 18 h, a zatim sakupljena procijeniti mitohondrijske membranski potencijal u skladu s preporukama proizvođača (MitoProbe DiOC2 (3) Test Kit). Ukratko, 1 × 10 ^{6 /mL Stanice su resuspendirane u 37 ° C PBS. Pozitivne kontrolne skupine koje su prethodno kondicionirane s 1 ul 50 mmol /L CCCP na 37 ° C tijekom 5 minuta. Sve grupe se zatim pomiješa s 5 ul 10 umol /L DiOC _{2 (3) kroz 30 min na 37 ° C i ocjenjuje protočnom citometrijom. Mitohondrijska Potencijal membrane je izračunata na temelju slijedeće jednadžbe:. Mitohondrijske membrane potencijal = (crveni intenzitet fluorescencije) /(zeleni fluorescentni intenzitet) pregled}}

Detekcija otvaranje mitohondrija propusnosti tranziciji Pore (MPTP) pregled

SGC7901 stanice su stavljene na ploče sa 6 jažica. Nakon postizanja gustoće od 60%, stanice su tretirane s 20μmol /L G503 18 sati i skupljeni za procjenu MPTP otvor protočnom citometrijom (Becton Dickinson, New Jersey, USA) u skladu s protokolom proizvođača (Test MitoProbe pora promjenom Kit). Ukratko, svaki uzorak je podijeljen u 3 alikvota i tretira na slijedeći način: alikvot 1 obrađena je s 5 ul 2 umol /L Calcein AM u mraku; alikvot 2 se tretira sa 5 ul Calcein AM i 5 ul 80 mmol /L COCl _{2 u mraku; i alikvot 3 se tretira sa 5 uL Calcein AM, 5 uL COCl 2 i 5 uL 100 umol /L ionomicinom. Alikvote se potom inkubiraju na 37 ° C tijekom 15 min u mraku. Nakon ispiranja s HBSS /Ca ^{2+ i ponovno suspendiraju u 400 ul HBSS /Ca 2+, stanice se ocjenjuje protočnom citometrijom u roku od 1 sat. Otvor stanje MPTP izračunava se kako slijedi: (fluorescencije alikvota 2- fluorescencije alikvota 3) /(fluorescencije alikvota 1- fluorescencije alikvota 3). Kalccin AM prodire u citoplazmu i organela uključujući i mitohondrija. COCl 2 gasi Kalccin AM fluorescenciju u citoplazmi, ali ne u mitohondrijima. Calcein AM premješta u citoplazmu iz mitohondrija pri otvaranju MFTP a fluorescenciju atenuiran COCl 2. Pregled}}

Izolacija staničnih mitohondrija i citoplazma pregled

SGC7901 stanica stavljeno je u 100 mm ploče; svaka grupa stavljeno je u dvije ploče. Nakon postizanja 60% do 70% konfluentnosti, stanice su tretirane sa ili bez 20 umol /L G503 tijekom 18 h. Nakon tretmana, mitohondrijske frakcije i citoplazmatski dobiveni su u skladu s uputama proizvođača (Mitohondrij izolacijski kit). Pregled

Western blot analiza pregled

Kao što je ranije opisano, stanice su lizirane u RIPA puferom [21] , Koncentracija proteina mitohondrija, citoplazme i cijele stanice bile su određene postupkom BCA pomoću Bio-Rad komplet za određivanje proteina. Ukupno je 60 ug proteina iz svake skupine su razdvojeni 12% ili 15% natrij dodecil-poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE). Proteini iz SDS-PAGE su prenesene na PVDF membranu. Nakon nespecifičnih vezajućih mjesta membrana blokirana su kroz 1-2 sata na sobnoj temperaturi uz TBST puferu koji je sadržavao 10% bez masnoće mlijeka, membrane se inkubiraju preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelom u skladu s uputama proizvođača. Sekundarnih antitijela sa ili bez fluorescencije konjugirane s odgovarajućim primarnim antitijelima su inkubirani 2 sata na sobnoj temperaturi. Membrane sa fluorescentnim sekundarnih protutijela određene su primjenom Odyssey sustav (Li-Cor, Nebraska, USA) za skeniranje fluorescentne trake [22], a membrane s normalnim sekundarnih antitijela su vizualizirani korištenjem ECL otkrivanje kit za imunobugačenja. Membrane su bile skinute i ponovno ispitane sa ß-aktin ili COXIV antitijela. β-aktin je korišten kao interni standard za ukupnom lizatu stanice i citoplazmatske ekstrakcije, a COXIV je korišten kao kontrola za mitohondrijskog ekstrakcija. Denzitometrijska analiza bendova je izvedena pomoću Količina One (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) [23]. Pregled

Statistička analiza pregled

Svi podaci su prikazani kao srednje vrijednosti ± SD najmanje trostrukih determinacija , SPSS 13.0 software je korišten za t-test i jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) u svim statističkim analizama. P pregled vrijednost 0,05 smatrana je statistički značajna u svim slučajevima. Pregled

Rezultati pregled

G503 posredovana inhibicija proliferacije je najpotentniji u SGC7901 stanica među 11 staničnih linija ispitanih pregled

Koristili smo MTT za određivanje je li antrakinon spoj G503 je citotoksično u slijedećim stanicama: dvije normalne stanične linije (Ljudske endotelne stanice pupčane vene (HUVEC) i stanice jetre Chang i devet tumorske stanične linije (brusiti -1, CNE-2 5-8F, HepG2, B7402, Rb, PC3, A549 i SGC7901). Sve stanice se inkubiraju s 0, 2,5, 5, 10, 20 ili 40 umol /L G503 tijekom 48 h. Cell Vijabilnosti mjereni su primjenom MTT pokusa kako je navedeno, a IC _{50 vrijednost za SGC7901 stanica bio je najmanji, a IC 50 vrijednosti za normalne stanične linije, HUVEC Chang jetrene stanice, bila je značajno veća od SGC7901 ( Tablica 1). pregled}

G503 inducira apoptozu u SGC7901 i AGS želučanih stanica raka pregled

s obzirom da je SGC7901 stanična linija je najosjetljiviji na G503 staničnih linija jedanaest ispituje (Tablica 1), što dodatno istražiti tu staničnu liniju odvojeno. SGC7901 stanice su obojene s Hoechst 33342 kako bi se utvrdilo je li inhibitorno djelovanje odnosi na apoptozu. Rezultati pokazuju porast u broju stanica koje pokazuju nuklearnog skupljanja i kondenzaciju kromatina s rastućim koncentracijama G503 (Slika 1A). Osim toga, istražiti je li G503 inducira apoptozu u drugim želučanih staničnim linijama karcinoma, AGS želučane stanice raka također su ispitani. Aneksin V /PI obojenje korišten za analizu učinaka G503 u SGC7901 i AGS želuca tumorskih stanica protočnom citometrijom. Za ove eksperimente, 25 umol /L kolhicin korišten je kao pozitivna kontrola. Nakon tretmana s 0 umol /L, 2.5 umol /L, 5 umol /L, 10 umol /L, 20 umol /L i 40 umol /L G503 i 25 umol /L colchicines 24 h, postotak apoptičnih SGC7901 stanica bile 5,625% ± 0,50%, 6,19% ± 0,13%, 10,25% ± 0,47% 16,99% ± 1,73%, 25.72% ± 0,55%, 31.03 ± 1.03% i 20.69% ± 1,91%, respektivno (Slika 1B); postotak apoptotičnih AGS stanica bila 15,37% ± 2,36%, 19,30% ± 4,45%, 22,72% ± 4,89%, 24,93% ± 4,76%, 30,44% ± 9,42%, 47,51% ± 18,29% i 31,49% ± 2,45%, odnosno (Slika 1C). Detekcija apoptoze u stanicama i AGS gore utvrđeno je da G503 inducira želučane stanica raka apoptozu na način ovisan o dozi. Pregled

G503 inducira apoptozu u kaspaze ovisan način

dodatno istraži mehanizam uključen u G503-inducirana apoptoza u želučanih stanica raka, proučavali smo SGC7901 stanice. Kaspaze-3 je efektor kaspaze koje mogu ući jezgru i u izravnoj interakciji s podlogom, čime pospješuje staničnu apoptozu [24]. Caspse-9 je inicijator kaspaze koje aktiviraju caspse-3 [25]. Stanice su tretirane s različitim koncentracijama G503 za indicirano vrijeme i skupljeni za procjenu kaspaze-3 i -9 pomoću Western blot-a. Ekspresija kaspaze-3 prekursora smanjena u dozi i vremenski ovisan način, a fragmenti kaspaza-3 cijepanja povećan u dozi i vremenski ovisan način (slika 2A, B). Ekspresija kaspaze-9 prekursora je također smanjena i fragmenti cijepanja povećana nakon stanice su tretirane s 20 umol /L G503 tijekom 24 sata (Slika 2C). Ovi učinci su ukinute inhibitora pan-kaspaze Z-VAD-FMK (Slika 2C, D). U skladu s aktivacijom caspase-9 i -3, apoptotičnog stopa stanične inducirana od 20 umol /L G503 u SGC7901 stanica značajno smanjena nakon prethodne obrade sa Z-VAD-FMK (Slika 2E). Ovi podaci sugerirao da G503 inducira apoptozu u SGC7901 stanica u kaspaze-ovisan način. Pregled

G503-inducirana apoptoza nije ovisan o kaspaze-8 pregled

Da bi istražili da li putu apoptoze smrt receptor-posredovane izazvana je G503, proučavali smo kaspaza-8, inicijator kaspaza od smrti receptor-posredovane apoptoze [26]. SGC7901 stanice su tretirane s različitim dozama G503 za indicirano vrijeme. Stanice su sakupljene za mjerenje kaspaze-8 pomoću Western blottinga. Rezultati su pokazali da kaspaze-8 prekursor smanjena i cijepa kaspaze-8 povećava u vremenu i o dozi ovisan način (slika 3A, B). Stanice su prethodno tretirane s 20 umol /L kaspaze-8 inhibitora Z-IETD-FMK 30 min, a zatim obradila s 20μmol /L G503 tijekom 24 h. Kaspaze-8 Proform povećana u stanicama zajedno liječenih inhibitorom kaspaze-8 i G503 usporedbi sa stanicama koje su tretirane sa samo G503. Međutim, caspase-9 Proform, cijepa caspase-9 i caspase-3 održavane su na sličnoj razini u stanicama koje su tretirane s ispitivanim inhibitorom kaspaze-8 i G503 ili G503 sam (Slika 3C). U skladu sa slikom 3C, G503-procesom apoptoze stope stanica u SGC7901 stanice nisu sniženi predobradom s Z-IETD-FMK (Slika 3D). Ovi podaci sugerirao da unatoč aktivacije G503, kaspaza-8 nije uključena u pro-apoptoze aktivnosti G503. Pregled

G503-inducirana apoptoza ovisi o kaspaze-9 pregled

kaspaze-9, inicijator kaspaze mitohondrijskog apoptoze, mogu biti aktivirane kombiniranjem sa citokrom c pregled (citoprotektivnost c pregled) i apoptoze proteaze aktivirajući faktor-1 (Apaf-1) [25] - [26]. Dodatno istražiti je li mitohondrijska put sudjeluje u G503 apoptozi, aktivacija kaspaze-9 ispitivan je nakon G503 tretmana u različitim koncentracijama i vremena. Osim toga, brzina apoptozna stanica je mjeren nakon zajedničko liječenje s G503 i caspase-9 inhibitora Z-LEHD-FMK. Rezultati su pokazali da je kaspaza-9 Proform smanjio i fragmenti cijepanja povećana u vremenu i način ovisan o dozi (Slika 4A, B). Dalje, stanice su tretirane s 20 umol /L Z-LEHD-FMK 30 min i koinkubirana sa 20 umol /L G503 tijekom 24 h. Kvantificiranje apoptoze stanica, stanice su obojene s AnnexinV /PI i analizirane protočnom citometrijom. Rezultati su pokazali da je stopa apoptozna stanica smanjena kad su tretirani CO-om su stanice sa Z-LEHD-FMK i G503 (slika 4c). Uzeti zajedno, ovi podaci pokazuju da G503-inducirana SGC7901 apoptoze stanica ovisi o kaspaza-9 aktivacije. Pregled

G503 inducira apoptozu preko mitohondrijske apoptoze pregled

To je dobro poznato da je mitohondrijski put je važan put apoptoze. Da bi istražili da li G503 inducira apoptozu preko mitohondrijske puta, ispitali smo apoptoze vezanih proteina, mitohondrijsku membranski potencijal (MMP), te otvaranje MPTP za potvrdu indukciju mitohondrijskog apoptoze. Pratite by G503 liječenja, mitohondrijska fluorescencija smanjen u usporedbi s kontrolnom skupinom (Slika 5a), čime se upućuje na to da MPTP je otvorio G503. Osim toga, kako je prikazano na Slici 5B, znatan intenzitet crvena /zelena fluorescentna zabilježeno je u kontrolnoj skupini. Međutim, nakon tretiranja s 20 umol /L G503, crveno /zeleno intenzitet fluorescencije je smanjena. Ovaj rezultat sugerira da je G503 smanjuje mitohondrijalni membranski potencijal SGC7901 stanica. Osim toga, ukupna citološ c pregled razina proteina nije osobito promijeniti između kontrole i droga skupine; Međutim, citološ c pregled je relocalized u citoplazmu s mitohondrijima (Slika 5c). Bax i Bcl-2 su ključni čimbenici u regulaciji mitohondrija kanala i otpuštanje različitih apoptoze povezanih proteina [27]. Dakle, proučavali smo distribuciju Bax i bcl-2 u različitim staničnim odjeljcima i ne promatrati istaknuto promjene u ukupnim razinama proteina Bax i bcl-2 između kontrolne i droga skupine; Međutim, G503 promovirala translokacije Bax iz citoplazme u mitohondrijima, kao i premještanje Bcl-2 iz mitohondrija u citoplazmi (Slika 5D). Uzeti zajedno, G503 inducira apoptozu u SGC7901 stanica preko mitohondrijske puta. Pregled

G503 inducira apoptozu u SGC7901 stanica u dijelu kroz kaspaze-4 aktivacije pregled

kaspaze-4 može izravno aktivirati kaspaza-9, ali ne kroz mitohondrijske puta [28] - [29]. Istražiti da li kaspaze-4 se aktivira G503 i da li aktiviraju kaspaze-9 aktivirane kaspaze-4, ispitali smo fragmenata cijepanja kaspaze-4 i -9. Rezultati su pokazali da je kaspaza-4 cijepanja fragmenta značajno povećana u stanicama koje su tretirane s G503 u usporedbi s kontrolnom skupinom (Slika 6A). Tretman s kaspaze-4 inhibitora Z-LEVD-FMK povećava kaspaze-9 Proform, koji nije bio otkriven u skupini G503 liječenja (Slika 6B). Ovi rezultati pokazuju da G503 izaziva SGC7901 želučane stanica raka apoptoze u dijelu kroz aktivaciju kaspaze-4. Pregled

Rasprava pregled

To je izvijestio da je p pregled -quinone skupinu kinon -containing molekularna igra vrlo važnu ulogu u borbi protiv raka potencijalnog [30]. Perchellet et al. Također su otkrili da p-kinon J4, o-kinon J1 i supstituiran modelu p-kinon J7 smanjen najviše održivost L1210 tumorskih stanica među osam spojeva sintetiziraju i prikazivani u svom preliminarnom istraživanju [31]. Da bismo razumjeli odnos između potencijala protiv raka od altersolanol A i strukture i aktivnosti, Teiten et al. ocjenjuje učinak altersolanol A i srodnih derivata antracen: tetraacetylaltersolanol A, B i tetrahydroaltersolanol ampelanol. Otkrili su da je samo altersolanol A i njezine acetiliranog derivata tetraacetylaltersolanol Predložena citotoksični učinak na K562 stanica, dok derivati ​​s redukcijom jedne od karbonilne skupine, kao što su B i tetrahydroaltersolanol ampelanol, nemaju učinka [32]. p pregled -quinone strukturi G503 (Slika S1) se također može pridonio stanica raka apoptoze, te u sljedećem istraživanju ćemo analizirati G503 i njegove derivate identificirati preliminarni odnos strukture i aktivnosti. U ovom istraživanju, nalazimo da je rak želuca stanična linija SGC7901 je najviše G503 osjetljivih stanica raka linija ispituje pomoću stanica održivosti test u devet staničnim linijama karcinoma i dva normalnim staničnim linijama. G503 inducira SGC7901 želučane smrt stanica karcinoma preko apoptoze na način ovisan o dozi. Još želučani stanica raka AGS također ispituje, te je osjetljiva na G503 apoptozi te. Kao rezultat toga, 20 umol /L G503 je optimalna koncentracija koja uzrokuje ozbiljne apoptozu. Pregled

Humani genom kodira najmanje 10 vrsta kaspaze homologa. Sljedeće kaspaze homolozi sudjeluju u apoptozu: Caspase-2, -3, -8, -9 i -10 [33]. Iako je kaspaza igra ulogu u apoptozi, postoje različiti kaspaze neovisni putevi postoje. Na primjer, u prisutnosti inhibitora kaspaze, faktor nekroze tumora (TNF) uzrokuje nekrozu stanica, koji posjeduje karakteristike apoptoze i nekroze [34] - [36]. Osim toga, faktor apoptoza-inducirajući (AIF) je DNA enzim koji razgrađuje izravno DNA. Kada je mitohondrijski Potencijal membrane je promijenjen, AIF otpušta u citoplazmu iz mitohondrija i aktivira se interakcijom s cyclophilinA [37] - [38]. Endo G također može degradirati DNA direktno u kaspaze neovisan način [39]. Pregled

U našoj studiji, G503 izloženost aktivira kaspaze-3, -8 i -9 u dozi i vremenski ovisan način (slika 2A, B, 3A, B, 4A, B). Je G503-inducirana apoptoza ovisi o kaspaze? Kada su tretirani CO-om stanice sa Z-VAD-FMK i G503, Z VAD-FMK inhibira kaspaze-9 i -3 aktivaciju (Slika 2C, D), a broj apoptičnih stanica induciranih G503 smanjena (Slika 2E), pokazujući time da je G503-inducirana SGC7901 staničnoj apoptozi je kaspaze-ovisna. Razlikovati bilo G503-inducirana apoptoza je ovisna o kaspazu-8, -9 ili oboje, SGC7901 stanice se predtretira s Z-IETD-FMK i Z-LEHD-FMK i zatim istovremeno pomiješa s G503. Rezultati pokazuju da je Z-IETD-FMK ne inhibiraju kaspaze-9 i -3 aktiviranje (Slika 3C) tako smanjiti broj apoptotičkih stanica induciranih G503 (Slika 3d); Međutim, Z LEHD-FMK smanjen broj apoptotičkih stanica (slika 4c). Tako, G503 induciranu SGC7901 apoptoze stanica nije ovisan o kaspazu-8, ali se nalazi na kaspazu-9. Pregled

mitohondrija sastoji se od vanjske membrane, membrane prostora i matriksa. Apoptoze vezane proteine, kao što kaspaze proenzime, citoprotektivnost c pregled i AIF postoji u prostoru membrane. Međutim, kada se pore formiraju na vanjskoj mitohondrijskoj membrani, odnosno propusnost je promijenjen, ovi proteini apoptoze vezane oslobađaju u citoplazmu. Članovi obitelji Bcl-2 kontroliraju permeabilnost vanjskoj mitohondrijskoj membrani i može se podijeliti u dva elementa koji potiču apoptozu (kao što je Bax i Bak) ili inhibirati apoptozu (kao što je bcl-2 i Bcl-XL). U proapoptotska članovi izazivaju oslobađanje apoptoze povezanih proteina, kao što citološ c
, iz mitohondrija, dok antiapoptotski članovi imaju suprotan učinak [40]. Bax ponajprije postoji u citoplazmi, dok Bcl-2 u kombinaciji s hidrofobnim skupinama na C-terminalni kraj stanične biološke membrane [41]. Bax struktura se mijenja tijekom vanjskog stresa, tako da se kombinira s vanjskim mitohondrijske membrane tospontaneously tvore galeriju po homologne oligomerizacije. To djelovanje potiče otpuštanje apoptoze povezanih proteina [42] i formiranja mitohondrija propusnosti pora promjenom (MPTP), koji se sastoji od naponske aniona kanala (VDAC) na vanjskoj mitohondrijskoj membrani i adenin nukleotida translocator (ant) na unutrašnja membrana [43]. Bax komunicira samo s VDAC stvoriti otvoreno poru kada su koncentracije Bax su niski. Nasuprot tome, istovremeno Bax interakciju s VDAC i ANT kada su koncentracije Bax visoke za otvaranje pora na unutarnje i vanjske membrane. Ovaj postupak smanjuje unutarnji membranski potencijal, povećava osmotski tlak u dijelu mitohondrijske matriksa promiče unutarnju membranu za bubrenje i povećava osmotski tlak vanjske membrane, čime pospješuje otpuštanje apoptoze povezanih proteina [26], [44] - [46 ]. Važan korak u mitohondrijske apoptoze je oslobađanje citološ c pregled [47] - [49]. Citološ c pregled kombinira s Apaf-1 i kaspaza-9 Proform stvoriti apoptosome. Apaf-1 izlaže svoj oligomerizacije domenu, a N-terminalni aktivacije kaspaze i zapošljavanje domene (kartica) kombinira s kaspaza-9 Proform karticu. Tako, caspase-9 aktivira i aktivirane kaspaze-9 cijepa nizvodne kaspaze, kao caspse-3 i -7. Efektorske kaspaza kraju cijepa njihove odgovarajuće supstrate za indukciju apoptoze stanica [47], [49] -. [50] pregled

U ovom istraživanju, G503 povećava udio Bax /Bcl-2 na mitohondrijskoj membrani i smanjuje omjer Bax /Bcl-2 u citoplazmi (Slika 5D). G503 također potiče otvaranje MPTP i smanjenje mitohondrijskog membranskog potencijala (Slika 5A, B). Zatim citološ c pregled prebačen je iz mitohondrija u citoplazmi (Slika 5c). Osim toga, G503 pospješuje prijenos Bax u mitohondrijima iz citoplazme i Bcl-2 u citoplazmi iz mitohondrija. Povećana Bax i smanjene Bcl-2 u mitohondrijima povećati propusnost mitohondrijske vanjskoj membrani i promovirati izlazak citološ c
. Regulacija Bax /Bcl-2 od strane G503 se može promatrati jer G503 je mali molekularni spoj. Moguće je da G503 direktno ulazi u stanice i kombinira s Bax i Bcl-2 mijenjati svoje strukture, čime se uzrokuje Bax vezanje na vanjskoj mitohondrijskoj membrani i bcl-2 otpuštanja iz mitohondrija. Pregled

Nekoliko je studija pokazalo da ROS generacije je neophodan za antrakinon induciranu apoptozu kod stanica raka [51] - [52]. ROS je jaki induktor oksidacije ozljeda koje mogu dovesti do parova baza oksidacijom, kao i depurinated a aldehidni DNA [44], [46], [48], unatoč tome ozljeda može brojač uravnotežena antioksidansi, čija ekspresija su posredovane Toll

• PLoS ONE: Izražavanje XPG proteina u razvoj, napredovanje i prognozi želučane Cancer
• PLoS ONE. Kirurški rezultati i prognostički čimbenici T4 rak želuca bolesnika bez Distant Metastasis