PLoS ONE: silazni RPL6 po siRNA inhibira proliferaciju i progresiju staničnog ciklusa ljudskog želuca Cancer Cell Lines

Sažetak pregled

Naša ranija istraživanja pokazala da je ljudski ribosomalni proteina L6 (RPL6) bila je viša u višestruko otpornim na želučani stanice raka i prekomjerna ekspresija RPL6 mogu zaštititi rak želuca od apoptoze uzrokovan lijekovima. Također se pokazalo da je up-regulaciji RPL6 ubrzanog rasta i povećanu in vitro koloniziranja sposobnost GES stanica, a dolje regulacija RPL6 izložena suprotne rezultate. Ova studija je osmišljen kako bi istražili moguću ulogu RPL6 u terapiji želučanog karcinoma za kliniku. Izraz RPL6 i ciklina E u želučanog tkiva raka i normalne sluznice želuca je procijenjena immunohistochemisty. Utvrđeno je da RPL6 i ciklin E su izraženi na višu razinu u želučanom tkivu karcinoma nego u normalnoj sluznici želuca, a dva su u korelaciji u raka želuca. Vrijeme preživljavanja postoperativnih pacijenata je analiziran pomoću Kaplan- Meier analizu, a utvrđeno je da su pacijenti s RPL6 pozitivnim ekspresije pokazao kraće vrijeme preživljenja od bolesnika koji sa RPL6 negativnim izraza. RPL6 je tada genetski dolje regulirano u želučanom SGC7901 raka i AGS staničnim linijama siRNA. Pokazano je da dolje reguliranje RPL6 smanjena sposobnost koloniziranja želučanih stanica raka in vitro i smanjuje rast stanica in vivo. Štoviše, down-regulacije RPL6 mogao potisnuti G1 u S fazu tranzicije u tim stanicama. Nadalje, svjedoče nam da RPL6 siRNA dolje regulira ciklin izraz E u SGC7901 i AGS stanica. Uzeti zajedno, ovi podaci sugerirao da RPL6 je pretjerano izražena u ljudskim želučanog tkiva i izazvao lošu prognozu. Down-regulacija RPL6 mogao potisnuti rast stanica i napredovanja staničnog ciklusa i barem kroz niz regulaciju ciklina E, a koje bi se moglo koristiti kao novi pristup želučane terapiju raka pregled

Izvor:. Wu Q, Gou Y, Wang Q, Jin H Cui L, Zhang Y, et al. (2011) podreguliranje RPL6 po siRNA inhibira proliferaciju i progresiju staničnog ciklusa u ljudskim karcinoma želuca staničnih linija. PLoS ONE 6 (10): e26401. doi: 10,1371 /journal.pone.0026401 pregled

Urednik: Xin-yuan Guan, Sveučilište u Hong Kongu, Kina pregled

Primljeno: 7. kolovoza 2011. godine; Prihvaćeno: 26. rujna 2011; Objavljeno: 17. listopad 2011 pregled

Copyright: © 2011 Wu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan u sklopu koje potpore iz Nacionalnog Basic Research programa Kine (br 2010CB732400, br 2010CB529300) i Nacionalna zaklada prirodoslovni Kine (br 30801349). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

karcinoma želuca, s visokim moralom, bio je jedan od najvažnijih malignih karcinoma u azijskim zemljama. Njegova pojava bila je proces s multi-faktora i multi-koraka, koji su uključeni u promjene u mnogim molekula, uključujući aktivaciju proto-onkogena, inaktivacije tumor-supresorski geni, promjene staničnog ciklusa srodnih proteina i tako dalje. U posljednjih desetak godina, pronađene su veliki broj proto-onkogena i tumor-supresorski geni. Unatoč poveliki broj gena koji su već opisani, geni s onkogeni potencijal ili tumor supresije aktivnosti još se identificiraju. Međutim, molekularni mehanizam želučane karcinogeneze ostaje nejasan. Pregled

ribosom je bitna za sintezu proteina u svim stanicama, koji se sastoji od ribosomalnih RNA (rRNAs) i ribosomskih proteina (RPS). Mnogi RPS također igraju različite uloge koje su neovisne o biosintezi proteina, koji se zove ekstra ribosomalni funkcija [1]. Povećanje više istraživanja pokazali su da poremećaj proteina prijevoda sudjelovala u nastanku tumora i mnogih ribosomal proteini su disfunkcionalna u tumorima, ali mehanizmi su još uvijek nepoznati. [2] Predloženo je da se mnogi RPS djeluju kao haploinsufficient tumora uklanjanje smetnji u ribi i mnogi RPS gena također bi moglo biti onkogeni u ljudskoj vrsti [3]. Najraniji izvješće o odnosima između RPS i tumora je objavljen u 90-ih od 20 ^{og stoljeća, koji je pokazao povezanost RPS19 s progresijom karcinoma debelog crijeva i diferencijacije [4] .Thereafter, pronađeni su sve više i više RPS disfunkcionalna in tumora , kao što je visoka ekspresija RPL19 u tumorima dojke [5], prekomjerna ekspresija RPL7a i RPL37 u uzorcima prostate raka tkiva [6], višom ekspresijom RPL15 u jednjaka [7], RPS kao rano otkrivanje marker ljudskog skvamoznog karcinom grlića maternice [8], a prekomjerna ekspresija RPL36a povezane sa staničnom proliferacijom u hepatocelularnog karcinoma [9] i tako dalje. Izvješća se odnose na povezanost RPS s karcinogeneze i dalje su u porastu [2], [10]. Međutim, točan uloge RPS u razvoju tumora su raznolike i još uvijek je potrebno dodatno objašnjenje. Pregled}

Prije toga, analizirana profila mRNA ljudskog raka stanične linije želuca SGC7901 i njegova višestruka otporan varijanta SGC7901 /VCR diferencijalnom prikazuje PCR i potiskivanje odbijena hibridizacija [11], [12]. RPL6 je identificiran kao jedan od nad-izrazio gena u SGC7901 /ADR odnosu na SGC7901, što je dodatno potvrđeno RT-PCR i Northern blot analizu [13]. Naknadne studije su pokazale da se na regulaciju RPL6 zaštićenog želučane stanice raka iz adriamicin apoptozi i poboljšane otpornost želučanih stanica raka na više kemoterapijskih sredstava, uključujući vinkristin, adriamicin, etopside, cisplatinom i 5-fludrouracil [13]. Ovi podaci pokazuju da RPL6 promovirati maligne fenotipova želučanih stanica raka, što nas je dovelo do provoditi naknadne studije za daljnje istraživanje točnu ulogu RPL6 u karcinogeneze i razvoj karcinoma želuca. Onda smo otkrili da genetski up-regulaciji RPL6 u GES stanica može ubrzati rast i poboljšati in vitro koloniziranja sposobnost GES stanica, a dolje regulacija RPL6 mogao pokazivati ​​suprotne rezultate. Štoviše, up-regulaciji RPL6 promovirati G1 u S fazu tranzicije GES stanica. Daljnje istraživanje je pokazalo da RPL6 regulira prema gore ciklin izraz E u GES stanicama [14]. Uzeti zajedno, ovi podaci predložio da RPL6 promovirati maligne fenotipova želučanih stanica raka i RPL6 može igrati onkogeni ulogu u nastanku tumora i razvoj karcinoma želuca, što nas je dovelo do provođenje ovog istraživanja istražiti potencijalnu ulogu RPL6 u genu terapija karcinoma želuca i može se koristiti kao novi pristup želučane terapije protiv raka. pregled

Rezultati

RPL6 i ciklin E izraz u ljudskim uzorcima karcinoma želuca i odgovarajući susjedne ne-maligne tkiva pregled

Kako bi istražili odnos između RPL6 i ciklin E izražavanja s razvojem raka želuca, otkrili smo RPL6 i ciklin E izraz u ljudskim tkivima rak želuca i odgovarajuće susjedne ne-maligne tkivima imunokemijskim metodama. Rezultati su pokazali da RPL6 i ciklinE lokaliziran je gotovo u citoplazmi, a samo povremeno u jezgri u želučanih stanica raka (Sl. 1). Daljnja analiza otkrila da je pozitivan omjer (uključujući i primjerke koji obojen) RPL6 je 84% (46 od 55 bolesnika), dok je pozitivan omjer ciklina E je 75% (41 od 55 bolesnika) u ljudskim uzorcima s rakom želuca. Pozitivan omjer oba RPL6 i ciklina E je 70% (38 od 55 bolesnika), dok je negativan omjer (uključujući i primjerke koji nisu boje) oba RPL6 i ciklina E iznosila je 11% (6 od 55 bolesnika) u ljudskim uzorcima karcinoma želuca , Pozitivni omjer oba RPL6 i ciklina E bio je 18% (8 od 55 pacijenata) u podudarnim susjednim ne-maligne tkivima (podaci nisu prikazani). Kao i razlike između ekspresije RPL6 i ciklin ekspresije u ljudskim uzoraka raka želuca, nije bilo razlike. Ova studija je pokazala da RPL6 i ciklin E izrazi u ljudskim uzoraka raka želuca su relativne (Slika 1B, p. ≪ 0,05), koji može igrati con-velikodušni ulogu u razvoju raka želuca i RPL6 i ciklina E može poslužiti kao biomarkera za dijagnozu raka želuca i ciljne genske za želučano liječenju raka. Na kraju praćenja, vrijeme preživljavanja pacijenata su analizirani Kaplan- Meier metodi i rezultati otkrili da se tijekom pacijenata koji su bili praćeni, bolesnici s obje RPL6 pozitivnog i ciklina E pozitivnim pokazao kraće vrijeme preživljenja i lošiju prognozu od onih s obje RPL6 negativna i ciklin E negativan izraz, ili one s RPL6 pozitivno i ciklin E negativna ili RPL6 negativan i ciklin pozitivnog izražavanja, odnosno (Slika 2 a, str. < 0,01), što se može očitovati da pacijenti s obje RPL6 pozitivne i ciklin E pozitivna pokazali lošu prognozu. Također se pokazalo da pacijenti s RPL6 negativnog izražavanja pokazala dulje vrijeme preživljenja od RPL6 one pozitivne (slika 2B, str. ≪ 0,01), te bolesnici s ciklina E pozitivnog izražavanja pokazali lošu prognozu (slika 2c, str. ≪ 0,01). Dakle, može se zaključiti da je RPL6 možda služio kao biomarker za procjenu prognozu bolesnika s rakom želuca. Pregled

Izražavanje RPL6 u želučanim staničnim linijama karcinoma i njegovi derivati ​​pregled

Kako bi se dodatno istražiti potencijalnu ulogu RPL6 u genskoj terapiji raka želuca, SGC7901 i AGS stanice su transfektirane s RPL6 specifične siRNA i miješani bazen varijanti stanica G418-rezistentne talog. Varijante G418 otporan nose RPL6 specifične siRNA su u skladu s tim imenom kao SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 i SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2. U G418-otporne stanice koje nose otimati siRNA plazmidi su dizajnirani kao SGC7901-siControl i AGS-siControl respektivno. Kao što je prikazano na slici 3A, RPL6 ekspresija je bila značajno podregulirani u SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 i SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 stanicama u usporedbi s roditeljskim stanicama i kontrolnih stanica. U ovom istraživanju, SGC7901-siRPL6-2 i AGS-siRPL6-2 pokazao učinkovitiji inhibitornih rezultate, što ukazuje da su SGC7901-siRPL6-2 i AGS-siRPL6-2 stanice mogu se koristiti kao dobar model stanica razjašnjenja potencijal uloga RPL6 u genskoj terapiji raka želuca za kliniku. pregled

silazni RPL6 suzbijanje želučane rast stanica raka in vitro pregled

Kako bi se ispitalo da li dolje regulacija RPL6 izražavanja može inhibirati rast SGC7901 i AGS stanice, roditeljske stanice, kontrolne stanice i njihove varijante su posađene u kulturu ploče i njihov rast praćen je svaki dan s MTT testom. Kao što je navedeno od strane krivulja rasta na slici 3B, kontrolu (SGC7901-siControl i AGS-siControl) stanice pokazuju sličnu stopu rasta na roditeljski (SGC7901 i AGS) stanica, odnosno, dok SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 i SGC7901 -siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 stanice imaju nižu stopu rasta nego kontrolne stanice, a SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 stanice pokazuju najnižu stopu rasta (slika 3B, str. < 0,05). Sidri neovisno rast tih stanica je dalje analizirana sa mekom agaru testom formiranja kolonije. To je otkriveno da SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 i SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 stanice proizvele mnogo manje stanične kolonije u mekom agaru od svojih roditeljskih stanica i kontrolnih stanica (Slika 3C, p <. 0,05), stanice imenovani s SGC7901-siRPL6-2 i AGS-siRPL6-2 proizvedeno najmanje kolonije. Ovi podaci predložio da dolje regulacija RPL6 mogao potisnuti želučane rast stanica raka te spriječiti stvaranje kolonija sposobnost SGC7901 i AGS stanica. Pregled

RPL6 siRNA inhibiran tumorigenezi želučanih stanica raka in vivo pregled

Da dodatno potvrđuju učinke RPL6 u nastanku tumora raka želuca, analiza formacija tumora provedeno je u golim miševima. SGC7901, AGS i SGC7901-siRPL-2, AGS-siRPL6-2 stanice su potkožno nasadi se u desno ili lijevo gornji dio leđa atimičnih golih miševa na jednom mjestu. (Sl. 4A i C) četiri tjedna kasnije, miševi su ubijeni i transplantirane tumori su bili odstranjeni i veličine tumora su ocijenjeni (Slika 4B i D, str. ≪ 0,05). Došlo je do značajnog smanjenja veličine ksenografta u RPL6 dolje regulira stanice. Ovi podaci pokazuju da knock-down RPL6 mogao potisnuti želučane stanica raka tumorigenezi in vivo i RPL6 može igrati ključnu ulogu u promicanju maligni rast želučanih stanica raka in vivo. Pregled

RPL6 usporen G1-S faze tranzicije SGC7901 stanice pregled

Kako otkriti mehanizme na kojima se temelji supresijski ulogu RPL6 u rastu želučane stanice raka, analizirani su učinci RPL6 o raspodjeli staničnog ciklusa od SGC7901 stanica (Sl. 5A). Kao što je prikazano na Slici 5B, SGC7901-siRPL6-1 stanice pokazuju malo povećani postotak G1 fazi smanjen postotak S faze, a SGC7901-siRPL6-2 stanicama pokazali značajno povećao postotak G1 fazi smanjen postotak S fazi (P < 0.05 ) u usporedbi s roditeljskim stanicama i kontrolnih stanica. To pokazuje da RPL6 specifične siRNA mogao usporiti na G1-S tranziciju SGC7901 stanica. Pregled

RPL6 dolje regulira ekspresiju ciklina E u želučanih stanica raka na razini proteina

To je dobro poznata da G1-S napredovanje kontrolira ciklin D /cdk4 i ciklin E /cdk2 kompleksa, koje su regulirane od strane članova INK 4 obitelji, p21 i p27, respektivno. Ekspresija ovih regulatora u SGC7901 i AGS stanica i njegove inačice su određena Western blot analizi. Kao što je prikazano na slici 6, ekspresija ciklina E bio je značajno podregulirani u SGC7901-siRPL6-2 i AGS-siRPL6-2 stanica. Iskazi CDK2, p16, p21 i p27 su nepromijenjeni u varijantama SGC7901 i AGS stanica. Ovi podaci predložio da se na regulaciju RPL6 smanjio ekspresiju ciklina E u SGC7901 i AGS stanica, što bi moglo razgraničiti potencijalnu ulogu RPL6 i ciklin E u razvoju raka želuca i RPL6 može koristiti kao meta gena za rak želuca u klinika. pregled

Rasprava pregled

Ova studija je pokazala da RPL6 i ciklin E bili pretjerano izražena u želučanom tkivu raka i postoji pozitivna korelacija između njih u želučanim tkiva raka. Follow up Rezultati su pokazali da bolesnici s RPL6 negativnog izražavanja pokazala dulje vrijeme preživljenja od onih s RPL6 pozitivnog izražavanja, koja je tvrdila da RPL6 pozitivni pacijenti su pokazali lošu prognozu. Daljnja istraživanja pokazala su da se na regulaciju RPL6 strane RPL6-specifične siRNA inhibira proliferaciju i učvršćenja neovisan rast želučanog raka stanične linije in vitro, potisnute progresije staničnog ciklusa i potisnuta ciklin izraz E, Štoviše, obaranje RPL6 by RPL6 specifične siRNA potisnuta tvorba sposobnost tumor želuca stanica raka in vivo. pregled

u našem prethodnom istraživanju, diferencijalno izražene gene povezane s rezistencije na lijekove želučanih stanica raka izolira diferencijal prikaza RT-PCR i odbijena hibridizacija [11], [ ,,,0],12]. RPL6, komponenta velike podjedinice ribosoma, Tako se izolira kao klon prekomjerno eksprimiran u stanicama raka želuca multirezistentnog [11]. Pokazano je da RPL6 može zaštititi želučane stanice raka s kemoterapeutskim apoptoze uzrokovane lijekovima [13]. Ovi podaci sugerirao da RPL6 može uključiti u regulaciji maligni fenotip od raka želuca. Daljnje istraživanje je osmišljen kako bi istražili ulogu RPL6 u nastanku tumora i razvoj karcinoma želuca, a rezultati sugeriraju da je up-regulaciji RPL6 ubrzanog rasta i in vitro koloniziranja sposobnost GES stanicama dok down-regulacije RPL6 pokazuju suprotne rezultate. Također, up-regulaciji RPL6 ubrzano G1 u S fazu tranzicije GES stanica barem kroz regulaciji ciklin E izražavanja, dok se na regulaciju RPL6 pokazali suprotne rezultate [14]. Uzeti zajedno, ovi podaci predložio da RPL6 mogli igrati onkogeni ulogu u nastanku tumora i razvoj karcinoma želuca i može poslužiti kao novi pristup u genskoj terapiji raka želuca. Pregled

Danas, raste više pacijenata je umrlo od raka zbog su maligne fenotipova od njih. Rak terapija poremećen ljudi širom svijeta. Osim kemoterapije i operacije obrade, genska terapija je roman i obećavajući tretman raka. Jedan od najčešće korištenih metoda za gensku terapiju RNA interferencija (RNAi). RNAi, tj visoko konzerviranim utišavanje gena mehanizam ima važnu ulogu u regulaciji ekspresije gena. Utišavanje gena od post-transkripcijski mehanizam koji uključuje homologni dvostruku RNA je prvi put otkriven u umjetnim sustavima gdje je uveden dvostruki lanac RNA (dsRNA) putem injekcije ili ekspresijom genetski promijenjenim konstrukata. Ovaj fenomen se događa zbog male interferirajuće RNA (siRNA) u citoplazmi stanica sisavaca. U siRNA tehnologiji, dvije mehanizmi isplate su uzeti u obzir, direktna isporuka sintetičkih siRNA nukleotida i uvođenja plazmida DNA (pDNA) kodira kratko ukosnica konstrukt (shRNA) koji će biti enzimatski razgrađeni u siRNA [15]. SiRNA igrao inhibitornome uloge podudaranje sa sekvencama mRNA i inhibira posljedično ekspresiju mRNA i prijevod, a radio je kao negativne regulacije. Danas, sve više i više znanstvenici su otkrili da je srušen gensku ekspresiju siRNA može značajno potisnuti rast tumora i metastaza. X-vezanog inhibitor apoptoze proteina (XIAP), važnog člana inhibitora apoptoze proteina (IAP) obitelji, sudjeluje u kontroli diobe stanica, stanične proliferacije i inhibicije apoptoze [16], [17]. Down-regulacija XIAP po siRNA može značajno potisnuti proliferaciju tumorskih stanica i senzibilizirati tumorske stanice na kemoterapijskih agenasa [18], [19]. Osteoponinske (OPN) proteina, što je pretjerano izražen u većine bolesnika s rakom želuca i povezane s njegovom patogenezi, odigrao je važnu ulogu u širenju, invazije, metastazama i opstanak rakom želuca [20]. Zatim down-regulacije OPN strane OPN-specifične siRNA značajno inhibira rast, migraciju i invaziju želučanih stanica raka [21]. CML66, roman tumorski antigen koji se igrao onkogeni ulogu, bio je pretjerano izražen u većini staničnim linijama karcinoma i raka [22], srušivši svoj izraz od CMl66 specifične siRNA značajno inhibira proliferacija, invazija i metastaze HeLa stanica, kako u vivo i in vitro eksperimentima [23]. FABP5, koji kodira kožni masnih kiselina vezujući protein (C-FABP) je viša u raka prostate i djeluje kao potencijalnog onkogena. Down-regulacija FABP5 strane FABP5 specifične siRNA učinkovito inhibira rast prostate stanica raka na miševe [24]. Osim toga, kada ribosomalni protein RPS13 koji poboljšana rak želuca stanične linije rasta SGC7901 srušen RPS13 specifične siRNA, it rast značajno inhibiran SGC7901 stanica i sposobnost formiranja kolonija in vitro i potisnuti nastajanje tumora sposobnost u golih miševa [25]. Prethodna istraživanja su također otkrili da je sistemska isporuka siRNA putem atelocollagen, koji je posebno usmjeren na tumore, sigurno i izvedivo za liječenje raka kod raka prostate [26]. Dakle, dokaz je gore sugerirao da siRNA, inhibicijom ekspresije gena mogao biti novi pristup liječenju raka i napraviti gensku terapiju raka moguće za kliničko liječenje. Pregled

U ovom istraživanju, izrazi RPL6 i ciklin E u želučanom raka tkiva i odgovarajućeg susjedna non-neoplastična tkiva su otkrivene i rezultati pokazuju da RPL6 i ciklin E pokazuju višu ekspresiju u želučanom tkivu karcinoma nego u podudarnim susjednim ne-maligne tkiva. Nadalje, postoji korelacija između RPL6 i ciklin E izražavanja u želučanim tkiva raka, koji je predložio da se može igrati con-velikodušni ulogu u razvoju raka želuca i RPL6 može poslužiti kao biomarkera za dijagnozu raka želuca. Follow up rezultati su pokazali da bolesnici s obje RPL6 pozitivne i ciklin E pozitivnim izrazima pokazao kraće vrijeme preživljenja i lošijom prognozom od odgovarajuće kontrole i također pokazala da bolesnici s RPL6 negativnog izražavanja pokazala dulje vrijeme preživljenja i bolju prognozu nego bolesnika s RPL6 pozitivnog izražavanja, koja je tvrdila da RPL6 možda služio kao biomarkera za želučane prognozi raka i ciljnog gena za želučane terapiju raka u klinici. pregled

kako bi se dodatno istražiti potencijalnu izvedivost RPL6 kao genske terapije meti karcinoma želuca u klinici, pokucali smo dolje izražavanja RPL6 u SGC7901 i AGS stanica za RPL6 specifične siRNA, rezultati su pokazali da se na regulaciju RPL6 u raka želuca roditeljskih staničnih linija (SGC7901 i AGS) rasta učinkovito inhibirati stanica i in vitro koloniziranja sposobnosti. Nadalje, faza staničnog ciklusa pokazala da podreguliranje RPL6 usporio G1 u S fazu želučanih stanica raka. Western blot analiza pokazala je da RPL6 inhibiran napredovanja staničnog ciklusa kroz down-regulacije eksperimenata formacije ciklin E. tumora u golim miševima sugerira da dolje regulacija RPL6 mogao potisnuti nastajanje tumora in vivo. Pregled

ciklin E, ključna stanica ciklus protein koji je odigrao ključnu ulogu u G1-S tranzicije bila u neredu u mnogim tumorima [27], [28], [29], [30], [31]. Prethodna su istraživanja pokazala da ciklin E je važan molekula u nastanku tumora. U ovom istraživanju, otkrili smo da ciklin E izraz, zajedno sa RPL6 bila je viša u ljudskim tkivima oboljelih od raka želuca nego da se podudaraju susjednih nisu maligne tkivima, koji je predložio ulogu ciklina E odigrao u razvoju raka želuca. Daljnja istraživanja pokazala su da RPL6 utjecao rast stanica koje reguliraju ciklin E, koji je pokazao da je visoka ekspresija ciklina E ubrzan rast stanica, dok niska ekspresija ciklina E usporio proliferaciju stanica. Ciklin E i RPL6 mogu igrati Con-velikodušni ulogu u razvoju raka želuca. Pregled

U zaključku, ova studija je pokazala da RPL6 i ciklinE izraz bili su povezani jedni s drugima u želučanom tkivu raka i oni mogli igrati kon- velikodušni uloge u razvoju raka želuca, koji je sugerirao da RPL6 može koristiti kao dijagnostički alat u raka želuca. Praćenje analiza podataka pokazala je da pacijenti s RPL6 negativnog izražavanja pokazala dulje vrijeme preživljenja i bolju prognozu nego bolesnika s RPL6 pozitivnog izražavanja postoperativno, koji je sugerirao da RPL6 služio kao biomarkera za želučane prognozi raka i novog ciljnog gena za želučane terapije protiv raka. Daljnje studije pokazuju da se na regulaciju RPL6 ekspresiju RPL6 specifične siRNA inhibirana SGC7901 rast stanica i in vitro sposobnosti formiranja kolonija, usporio SGC7901 stanica G1 u S fazu tranzicije, i potisnuta stvaranja tumora in vivo. U zaključku, naše je istraživanje potvrdilo da RPL6 siRNA može se koristiti kao novi pristup u terapiji karcinoma želuca za kliniku. Pregled

materijali i postupci

Etika Izjava pregled

Za uzorke tkiva , svi pacijenti su bili informirani pristanak za korištenje viška patoloških uzoraka za istraživačke svrhe. Protokoli koji se koriste u ovom istraživanju su odobreni od strane bolnice zaštitu ljudskih subjekata odbora. Korištenje ljudskih tkiva odobrila je institucionalni pregled odbora Vojnomedicinsku Sveučilišta Četvrte i bio je uskladiti s Helsinškom deklaracijom i lokalnim propisima. Pacijenti koji nude uzorke za istraživanje potpisali informirani oblike pristanak. Za istraživanja na životinjama, svi postupci za pokuse na životinjama su provedena u skladu sa smjernicama Institucionalni Animal Care and Use Odbora pokusa na životinjama centru Vojnomedicinsku Sveučilišta Četvrte. ID Odobrenje za korištenje životinja je zauzeo 10.218 eksperimentom Animal Centar vojno-medicinskih sveučilišta Četvrte. Pregled

tkiva primjerci i stanične linije

tkiva primjerci ugrađeni s parafinom prikupljeni su od 55 bolesnika s rak želuca koji su bili podvrgnuti gastrektomije u našoj bolnici između 2004. i 2009. godine svih slučajeva raka želuca i susjednih ne-tumorskih tkiva je dijagnosticiran klinički i patološki. Podaci o kliničkopatološkim značajke i prognoze bolesnika prikupljeni su i analizirani retrospektivno. Ukupno 55 bolesnika su praćeni do kraja 2009. godine, a dvije od njih su izgubili tijekom razdoblja praćenja. Ljudski želuca linijske stanice adenokarcinoma SGC7901 dobiven je iz Akademije vojnih medicinskih znanosti, AGS dobiven iz Šangaja Cell banke (Shanghai, Kina). Dvije stanične linije su sačuvani u našem institutu. Sve stanične linije su održavane u RPMI1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) uz dodatak 10% toplinski inaktiviranog fetalnog telećeg seruma (FCS) pri 37 ° C s 5% CO _{2 u vlažnom inkubatoru (Forma Scientific, Marietta, OH). pregled}

imunohistokemija i Imunohistokemijska bodovanja pregled

deparafmizirani i rehidrirane sekcije su isprane u slatkoj vodi tijekom 10 minuta. Toplinski induciranih dohvat antigen je izvršena tijekom 20 min na 95 ° C sa 10 mM citrata natrij pufera (pH 6,0). Nakon što su stakalca ohladi na sobnoj temperaturi tijekom 40 minuta, bile su blokirani u 3% vodikovog peroksida tijekom 20 minuta, a zatim je u normalnom graničnim tekućini kozjim serumom tijekom 40 minuta. Nakon toga, su ostavljena da reagira preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima za IgG, RPL6 i ciklin (Santa Cruz). Nakon rewarming 40 minuta, oni su tada reagirao s drugom antitijela (Zhongshan Goldenbridge Biotehnologija Co.Ltd) za još 40 minuta na sobnoj temperaturi. Tada će produkti su razvijene s 3,3'-diaminobenzidinu i kontrasta hematoksilin. Ocjenjivanje je dovršen specijalist patolog i znanstvenika koji su zaslijepljeni kliničke i patološke informacije. U slučaju neslaganja, postignut je konsenzus po konferencija. Proporcije pozitivnih stanica (0 do +3) i bojanja intenziteta (0 do + 3) su procijenjeni odvojeno pri povećanju × 200. Bivši je izračunata brojanjem obojanih stanica tumora kod ukupnog broja tumorskih stanica, na primjer, kad su obojeni 25% od ukupnog broja stanica, udio rezultat je bio 1, a 50% jednaka do +2, 75% je do +3, 0% jednak 0. bodovanje intenzitet je procijenjena na boju obojenog tumorskih stanica jezgre, točnije, rezultat 0 znači bezbojan, 1 znači žuto, 2 znači žuta i 3 znači smeđe. U kombinaciji bodovanje + 1~ + 2 definirani su "negativne", a + 3~ + 6 smatrani su "pozitivan". Pregled

plazmida izgradnja i transfekcija pregled

Dva para ukosnica mala ometanja RNK (siRNA ) oligonukleotidima za RPL6 su dizajnirani u skladu sa smjernicama siRNA dizajn od Takara Biotechnology Co., Ltd usporedite ciljne sekvence u bazi podataka ljudskog genoma u potrazi BLAST izuzeti iz razmatranja bilo ciljnu sekvencu s 21 parova baza homologije u dodiru s drugim kodne sekvence , Za oligo-1, značenje: 5'-GATCCGGAGAAGGTTCTCGCAACTTTCAAGAGAAGTTGCGAGAACCTTCTCCTTTTTTGGAAA-3 'antisens: 5'AGCTTTTCCAAAAAAGGAGAAGGTTCTCGCAACTTCTCTTGAAAGTTGCGAGAACCTTCTCCG-3'; za oligo-2, smisao: 5'-GATCCGTCGAGTTCCTCTACGAAGATTCAAGAGATCTTCGTAGAGGAACTCGATTTTTTGGAAA-3 'antisens 5'-AGCTTTTCCAAAAAATCGAGTTCCTCTACGAAGATCTCTTGAATCTTCGTAGAGGAACTCGACG-3'; Posramljen DNA duplex također je osmišljen kao kontrola, za oligo-1, osjećaj: 5'-GATCCGGTGAGATCTTCGACACAGTTCAAGAGACTGTGTCGAAGATCTCACCTTTTTTGGAAA-3 ', negativna: 5'-AGCTTTTCCAAAAAAGGTGAGATCTTCGACACAGTCTCTTGAACTG TGTCGAAGATCTCACCG-3'. Za žarenje u obliku DNA dupleksa, 0.01 M svaki od osjetnih i protuosjetnih oligonukleotida korišteni. U duplexes su razrijeđeni i zatim veže s pSilencer3.1-H1 neo vektor (Takara Biotechnology (Dalian) CO., LTD). Proizvodi su pretvoreni u DH5a-kompetentnih stanica. Kolonije otporne na ampicilin su odabrani, identificirani restrikcijskom digestijom, te dodatno potvrđen je DNA sekvencom. Prema uputama proizvođača, siRNA plazmidi iz RPL6 su bili transfektirani u SGC7901 stanice korištenjem Lipofektamin reagensa 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA), redom. Dvadeset i četiri sata nakon transfekcije, G418 (400 ug /ml) se doda u medij kulture za uspostavljanje stabilnih klonova. Miješani klonovi proširena još 2 mjeseca. U SGC7901 i AGS stanice (koji se nazivaju i roditeljska stanica) koje stabilno eksprimiraju egzogenog RPL6 su imenovani kao SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 i SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2. A stanice transfecirane siControl su imenovani kao SGC7901-siRPL6 kontrolu i AGS-siRPL6 Control (koji se nazivaju i kontrolne stanice). Pregled

Razmnožavanje stanica Test pregled

3- (4,5-Dimetiltiazol-2 il) -2,5-difenil-tetrazolij-bromid (MTT) test je izveden na procjenu učinka RPL6 na proliferaciju stanica, kao što je ranije opisano [32]. Apsorbancija na 490 nm (A490) svake jamice očita na čitačem mikroploča BP800 (Biohit, u Helsinkiju, Finska). Svaki eksperiment je izveden u kvadruplikatima a je ponovljen 3 puta. Pregled

mekom agaru formiranje kolonija testovi pregled

Soft agar analiza koloniziranje je korišten za određivanje učvršćenja neovisan potencijal za rast stanica. Dvanaest jamica ispunjeno s 0,5 ml 0,5% plemenitog agar (Invitrogen) u RPMI1640 uz dodatak 10% telećeg seruma, kao donji sloj i ostavljeno da se skrutne, na 4 ° C preko noći. Ukupno 200 stanice su suspendirane u 025 ml 0,3% agaroze i posađene na donjoj agar. Cell pločice za kulture se održava tijekom 2 tjedna u CO _{2 inkubator. Broj kolonija broji pod mikroskopom. Pregled}

torn smjeru na miševe pregled

formiranje tumora provedeno je za procjenu učinaka RPL6 na torn smjeru in vivo. BALB /c miševe od 4 do 6 tjedana, osigurava Šangaj Cancer Institute, a smješten je u mikro-izoliranim kavezima pod pozitivnim pritiskom zraka, i održava na konstantnoj temperaturi (22 ° C) i vlažnosti za tumorogenosti studije. Približno 3 × 10 ^{6 stanica u log fazi su skupljene i injektirani supkutano u gornjem dijelu leđa BALB /c miševa. Najmanje tri golih miševa korištene su za svaku skupinu. Miševi su ubijeni 4 tjedna i težina tumora za svakog miša je procijenjen. Svi postupci za pokuse na životinjama su provedena u skladu sa smjernicama Institucionalni Animal Care and Use Odbora pokusa na životinjama centru Military Medical University Četvrte. Pregled}

Stanični ciklus analiza pregled

Za analizu staničnog ciklusa raspodjela faza SGC7901 i njegove varijante u log fazi su sakupljene i isprane dva puta s ledeno hladnim PBS-om. Pelete stanica su fiksirane u 70% etanolu, pomiješa se s RNA-ze A (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) i obojene s propidij jodidom (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO).

• PLoS ONE: DNA popravak Gene APE1 T1349G Polimorfizam i rizik od raka želuca u kineskoj populaciji
• PLoS ONE: Gubitak promijclocitnu leukemiju proteina u rak želuca: implikacije za IP-10 izražavanja i uvlače u tumor limfocita