PLoS One: downregulációját RPL6 siRNS proliferációját gátolja, és a sejtciklus progressziójában humán gyomornyálkahártya rákos sejtvonalak

absztrakt

korábbi tanulmány kimutatta, hogy az emberi riboszomális protein L6 (RPL6) volt, akár szabályozott multidrog-rezisztens gyomor rákos sejtek és a túlzott expressziója RPL6 lehetne megvédeni a gyomorrák a kábítószer-indukált apoptózis. Azt is demonstrálták, hogy up-szabályozás RPL6 felgyorsult növekedés és a fokozott in vitro telepképző képességét GES sejtek míg leszabályozza RPL6 kiállított ellenkező eredményt. A jelen tanulmány célja az volt, hogy vizsgálja meg a lehetséges szerepét RPL6 terápiájában gyomorrák a klinikán. A kifejezés a RPL6 és ciklin E gyomorrákban szövetekben és a normál gyomornyálkahártya értékeltük immunohistochemisty. Azt találtuk, hogy RPL6 és ciklin E fejeztük magasabb szinten a gyomorrák szövetekben, mint a normál gyomornyálkahártya, és a két korrelatív a gyomorrák. Túlélési ideje posztoperatív betegek analizáltuk Kaplan-Meier analízis és azt találták, hogy a betegek a RPL6 pozitív expresszió azt mutatta, rövidebb túlélési idő, mint a betegeket, hogy a RPL6 negatív kifejezést. RPL6 Ezután genetikailag lefelé szabályozni a gyomorrák SGC7901 és AGS sejtvonalak siRNS. Kimutatták, hogy down-regulációja RPL6 csökkentett kolóniaképző képességét gyomorrák-sejtek in vitro és a csökkent sejtszámot in vivo növekedését. Sőt, down-regulációja RPL6 lehetett elnyomni G1-S fázis átmenet ezekben a sejtekben. Továbbá azt bizonyítja, hogy RPL6 siRNS leszabályozott ciklin E kifejezést SGC7901 és AGS sejteket. Összefoglalva, ezek az adatok azt javasolta, hogy RPL6 volt overexpresszált humán gyomor szövetek és okozott rossz prognózissal. Leszabályozza RPL6 tudta elnyomni a sejtnövekedést és a sejtciklus progressziójában legalább keresztül alulszabályozza ciklin E és amelyet fel lehet használni, mint egy új megközelítése gyomorrák terápia. Katalógusa

Citation: Wu Q, Gou Y, Wang Q, Jin H, Cui L, Zhang Y, et al. (2011) downregulációját RPL6 siRNS proliferációját gátolja, és a sejtciklus progressziójában humán gyomornyálkahártya rákos sejtvonalak. PLoS ONE 6 (10): e26401. doi: 10,1371 /journal.pone.0026401 katalógusa

Szerkesztő: Xin-jüan Guan, The University of Hong Kong, Kína katalógusa

Beérkezett: augusztus 7, 2011; Elfogadva: szeptember 26, 2011; Megjelent: október 17, 2011 katalógusa

Copyright: © 2011 Wu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány részben támogatta a támogatást a Nemzeti Alap Research Program Kína (No. 2010CB732400, No. 2010CB529300), valamint a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 30801349). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák, magas erkölcs, egyike volt a leginkább rosszindulatú rákok az ázsiai országban. A előfordulás volt a folyamat multi-faktorok és a multi-lépések, részt vesz a változások sok molekulák, beleértve a aktiválását proto-onkogének, inaktiválása tumor-szuppresszor gének, módosított sejtciklus kapcsolatos fehérjék, és így tovább. Az elmúlt évtizedben, számos proto-onkogének és a tumor-szuppresszor gének találtak. Annak ellenére, hogy a jókora gének száma már leírt, új géneket onkogén potenciállal vagy tumor-visszaszorító tevékenységek még mindig azonosítani. Azonban a molekuláris mechanizmusa gyomor carcinogenesis tisztázatlan marad.

riboszóma elengedhetetlen fehérjeszintézis összes sejtek, amelyek alkotja riboszomális RNS-ek (rRNS), és riboszomális fehérjék (RPS). Sok panel, szintén játszik a különböző szerepeket, amelyek függetlenek a fehérje bioszintézis, amely az úgynevezett extra riboszóma funkció [1]. Növelése több kutatások kimutatták, hogy zavar fehérje fordítás részt tumorigenezis és sok riboszomális fehérjék voltak diszfunkcionális tumorokban, de a mechanizmusok még ismeretlen [2]. Javasolták már, hogy számos panel, jár, mint haploinsufficient tumorszuppresszorok a halakban és a sok panel, a gének is lehet onkogének humán típusú [3]. A legkorábbi jelentés közötti kapcsolatok panel, és a tumorok tették közzé 90 s az 20 ^{században, amely kimutatta, az egyesület a RPS19 colon carcinoma progressziója és differenciálódását [4] .Thereafter, egyre több panel, találtak diszfunkcionális tumorokban , mint például a magas expressziója RPL19 emlőtumorok [5], a túlzott expressziója RPL7a és RPL37 prosztata-rákos szöveti mintákat, [6] magasabb expresszióját RPL15 a nyelőcsőrák [7], az RPS mint a korai felismerés markere humán pikkelyes sejtes karcinóma, a méhnyak, [8] és a túlzott kifejezése RPL36a társított sejtproliferáció hepatocelluláris karcinóma [9], és így tovább. Kapcsolatos jelentések az egyesület RPS a rákkeltő képességet arra is növekszik [2], [10]. Azonban a pontos szerepét RPS daganat kialakulásában igen sokfélék, és még tisztázásra szorul. Katalógusa}

Korábban már elemeztük a mRNS profilok humán gyomorrák sejtvonal SGC7901 és multirezisztens variáns SGC7901 /VCR differenciál megjelenített PCR és szuppresszió szubtraktív hibridizációs [11], [12]. RPL6 azonosították, mint az egyik, overexpresszált géneket in SGC7901 /ADR képest SGC7901, amely alátámasztotta RT-PCR és Northern-blot-analízis [13]. Későbbi vizsgálatok kimutatták, hogy up-regulációját RPL6 védett gyomorrák sejtek adriamicinnel indukált apoptózis és fokozott ellenállása gyomorrák-sejtek több kemoterápiás gyógyszerek, ideértve a vinkrisztin, adriamicin, etopszid, ciszplatin és 5-fludrouracil [13]. Ezek az adatok azt mutatták, hogy RPL6 elősegítheti a malignus fenotípus gyomorrák sejtek, amelyek vezetett bennünket, hogy végezzen a későbbi vizsgálatban, hogy tovább vizsgálja a pontos szerepe RPL6 a carcinogenezisben és a gyomorrák kialakulásával. Aztán rájöttünk, hogy a genetikailag up-szabályozása RPL6 a GES sejtek növekedésének gyorsítása és fokozza az in vitro telepképző képességét GES sejtek míg leszabályozza RPL6 lehetett mutatnak az ellenkező eredményt. Sőt, up-regulációját RPL6 elősegítheti G1-S fázis átmenet GES sejteket. További tanulmányok kimutatták, hogy RPL6 felülszabályozott ciklin E expresszióját GES sejtekben [14]. Együttesen ezek az adatok arra utalnak, hogy RPL6 elősegítheti a malignus fenotípus gyomorrák sejtek és RPL6 játszhat onkogén szerepet tumorigenezis és gyomorrák kialakulásával, ami vezetett bennünket, hogy végezzen a jelen tanulmány, hogy vizsgálja meg a lehetséges szerepét RPL6 gén terápia a gyomorrák és lehet használni, mint egy újszerű megközelítés gyomorrák terápia.

Eredmények

RPL6 és ciklin E expresszió humán gyomorrák példányok és kiegyenlített szomszédos, nem neoplasztikus szövetekben katalógusa

közötti összefüggések feltárását RPL6 és ciklin E kifejezés a gyomorrák kialakulásával, észrevettük RPL6 és ciklin E kifejezés a humán gyomorrák szövetek és kiegyenlített szomszédos, nem daganatos szövetekben immunhisztokémiai festéssel. Az eredmények azt mutatták, hogy a RPL6 és ciklin lokalizált szinte a citoplazmában, és csak alkalmanként atommagok gyomorrák sejtek (1A.). További elemzés felfedezték, hogy a pozitív arány (beleértve a példányok, foltos) a RPL6 84% volt (46, 55 beteg), míg a pozitív aránya ciklin E 75% volt (41, 55 beteg) a humán gyomorrák példányok. A pozitív arány mindkét RPL6 és ciklin E 70% volt (38, 55 beteg), míg a negatív arány (beleértve a példányok, amelyek nem festi) mindkét RPL6 és ciklin E 11% -os volt (6. 55 beteg) a humán gyomorrák példányok . A pozitív arány mindkét RPL6 és ciklin E 18% volt (8 55 beteg) párosított szomszédos nem neopláziás szövetek (az adatokat nem mutatjuk be). Ami a különbségek RPL6 expresszió és ciklin expresszióját humán gyomorrák példányok, nem volt különbség. A jelen tanulmány igazolta, hogy RPL6 és ciklin E kifejezések humán gyomorrák minta volt relatív (ábra. 1B, p < 0,05), amely játszhat con-nagyvonalú szerepet a fejlesztés a gyomorrák és RPL6 és ciklin E szolgálhat biomarker gyomorrák diagnózis és egy olyan gént cél gyomorrák terápiában. Végén a nyomon követése, a túlélési idő a betegek analizáltuk Kaplan-Meier-módszer és az eredmények azt mutatták, hogy közben a betegeket, hogy követtünk, betegek egyaránt RPL6 pozitív és ciklin E pozitív mutatott rövidebb túlélési időt és rosszabb prognózist, mint azok, mind RPL6 negatív és ciklin E negatív kifejezés, vagy azok, RPL6 pozitív és ciklin E negatív vagy RPL6 negatív és ciklin pozitív expressziós illetőleg (ábra. 2 a, p < 0,01), ami lehet feltárta, hogy a betegek egyaránt RPL6 pozitív és ciklin E pozitív megmutatta rossz prognózissal. Azt is kimutatták, hogy a betegek RPL6 negatív kifejezés azt mutatta hosszabb túlélési időt, mint RPL6 pozitívak (ábra. 2B, p < 0,01), és a betegek a ciklin E pozitív expresszióját mutatta, rossz prognózissal (ábra. 2C, p < 0,01). Ezért a következtetés vonható le, hogy RPL6 is szolgált a biomarker értékeléséhez gyomorrák prognózisa betegek. Katalógusa

kifejezése RPL6 gyomorrákban sejtvonalak és annak származékai katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a lehetséges szerepét RPL6 génterápiában gyomorrák, SGC7901 és AGS sejteket transzfektáltunk RPL6-specifikus siRNS és a vegyes medence G418-rezisztens sejt variánsok állítunk elő. A G418-rezisztens variánsok hordozó RPL6-specifikus siRNS ennek megfelelően nevezték SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 és SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2. A G418-rezisztens sejteket hordozó Scramble siRNS plazmidokat tervezték SGC7901-siControl és AGS-siControl volt. Amint az a 3a ábrát, RPL6 expresszió szignifikánsan down-szabályozott SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 és SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 sejteket, mint a szülői sejtek és a kontroll sejtek. A jelen tanulmányban SGC7901-siRPL6-2 és AGS-siRPL6-2 megmutatta hatékonyabb gátló eredményeket, amelyek azt mutatták, hogy a SGC7901-siRPL6-2 és AGS-siRPL6-2 sejteket fel lehet használni, mint egy jó sejt modell tisztázni a potenciális szerepét RPL6 génterápiában gyomorrák a klinikán.

alulszabályozása RPL6 elnyomja gyomorrák sejtek növekedését in vitro

Annak vizsgálata, vajon down-regulációja RPL6 expresszió gátolja a növekedést a SGC7901 és AGS-sejtek, a szülői sejtek, kontroll sejtek és ezek variánsai beoltunk tenyésztő lemezekre, és a növekedésüket ellenőriztük mindennapi MTT assay. Amint azt a növekedési görbék ábra 3B kontroll (SGC7901-siControl és AGS-siControl) sejtekben mutatott hasonló növekedési üteme a szülői (SGC7901 és AGS) sejtek illetve, míg a SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 és SGC7901 -siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 sejteknél alacsonyabb növekedési üteme, mint a kontroll sejtek és SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 sejtek esetében a legalacsonyabb növekedési ütem (ábra. 3B, p < 0,05). A rögzítéstől független növekedés ezen sejtek tovább elemeztük lágy agar telepképző assay. Kiderült, hogy a SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 és SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 termelt sejtek sokkal kevésbé sejt kolóniákat lágy-agarban, mint a szülői sejtek és kontrollsejtek (3C., P < 0,05), a sejtek elnevezett SGC7901-siRPL6-2 és AGS-siRPL6-2 gyártott legkisebb telepeket. Ezek az adatok azt sugallják, hogy a down-regulációja RPL6 lehetett elnyomni gyomor rákos sejtek növekedését, és gátolják az kolónia képződését képességét SGC7901 és AGS sejtekben.

RPL6 siRNS gátolt tumorigenezis gyomorrák-sejtek in vivo

további megerősítéséhez a hatásait RPL6 a tumorigenezis gyomorrák, a tumor képződését vizsgálatot végeztünk csupasz egerekben. SGC7901, AGS és SGC7901-siRPL-2, AGS-siRPL6-2 sejteket szubkután oltunk jobb vagy bal felső hátsó athymikus egerek egy telephelyen. (4A. És C) Négy héttel később az egereket leöltük, és a transzplantált tumorok kivágtuk és a tumor méretét értékeltük (ábra. 4B és D, P < 0,05). Szignifikáns csökkenés méretű xenograftok RPL6 alulszabályozott sejteket. Ezek az adatok azt mutatták, hogy knock-down a RPL6 lehetett elnyomni gyomorrák sejt tumorigenezis in vivo és RPL6 játszhat kulcsfontosságú szerepet játszhat a rosszindulatú növekedés a gyomorrák-sejtek in vivo.

RPL6 lassult G1-S fázis átmenet SGC7901 sejtek katalógusa

feltárni a mechanizmusban, az elnyomó szerepe RPL6 a gyomorrák a rákos sejtek növekedését, hatásait RPL6 sejtciklus eloszlása ​​SGC7901 sejtet vizsgáltunk (ábra. 5A). Ábrán látható az 5B, SGC7901-siRPL6-1 sejtek mutattak enyhén emelkedett százalékában G1 fázisban és a csökkent százalékos aránya az S fázisban, míg SGC7901-siRPL6-2 sejtek szignifikánsan megnövekedett százalékos G1 fázisban és a csökkent százalékos aránya S fázis (P < 0,05 ), mint a szülői sejtek és kontroll sejtek. Ezek azt mutatták, hogy RPL6-specifikus siRNS lehetett lelassítsa a G1-S átmenet SGC7901 sejteket.

RPL6 alulszabályozott expressziója ciklin E gyomor rákos sejtekben a protein szinten

Köztudott hogy G1-S progresszió vezérli ciklin D /CDK4 és a ciklin E /CDK2 komplexeket, melyek szabályozzák INK4 család tagjai, a p21 és p27, ill. Az expressziós Ezeknek szabályozók SGC7901 és AGS sejtek és variánsai határoztuk meg Western-blot-analízis. Amint azt a 6. ábra mutatja, expressziója ciklin E szignifikánsan down-szabályozott SGC7901-siRPL6-2 és AGS-siRPL6-2 sejteket. Kifejezései CDK2, p16, p21 és p27 változatlan maradt SGC7901 és AGS sejt változatok. Ezek az adatok azt sugallják, hogy a down-regulációja RPL6 csökkent expressziójának ciklin E SGC7901 és AGS sejtekben, ami megszabja a potenciális szerepét RPL6 és ciklin E a fejlesztés a gyomorrák és RPL6 lehet használni, mint egy gént cél gyomorrák a klinikán. katalógusa

Vita katalógusa

a jelen tanulmány igazolta, hogy RPL6 és ciklin E túlzott volt a kifejezett gyomorrák szövetekben, és van egy pozitív korreláció közöttük gyomorrákban szövetekben. Nyomon követése eredmények azt mutatták, hogy a betegek a RPL6 negatív kifejezés azt mutatta hosszabb túlélési idő, mint azok a RPL6 pozitív kifejezés, amely azt sugallta, hogy RPL6 pozitív betegnél rossz prognózissal. További kutatások kimutatták, hogy a down-regulációja RPL6 által RPL6-specifikus siRNS gátolta a proliferációt és rögzítéstől független növekedését a gyomor rákos sejtvonalak in vitro, elfojtott sejtciklus progresszióját és elnyomott ciklin E kifejezés, Ezen kívül, kiütése RPL6 által RPL6-specifikus siRNS elfojtott tumorképződés képességét gyomorrák-sejtek in vivo.

a mi korábbi tanulmány, differenciálisán expresszált géneket társított multidrog rezisztencia gyomorrák sejteket izoláltunk differenciális display RT-PCR és szubtraktív hibridizációval [11], [ ,,,0],12]. RPL6, egy komponense nagy alegységében riboszóma, tehát izolált, mint egy klón túlzott kifejezett multidrog-rezisztens gyomorrák-sejtek [11]. Kimutattuk, hogy RPL6 tudja védeni a gyomor rákos sejtek kemoterápiás gyógyszer-indukált apoptózist [13]. Ezek az adatok azt javasolta, hogy RPL6 járhat a szabályozás a malignus fenotípus gyomorrák. További vizsgálat célja, hogy vizsgálja meg a szerepét RPL6 tumorigenezis és gyomorrák kialakulásával, és az eredmények azt javasolta, hogy up-szabályozás RPL6 felgyorsult növekedés és az in vitro kolóniaképzése képességét GES sejtek míg leszabályozza RPL6 kiállított ellentétes eredményeket. Továbbá, up-szabályozása RPL6 gyorsított G1-S fázisátmenetével GES sejtek legalább up-szabályozás a ciklin E kifejezés míg leszabályozza RPL6 megmutatta ellentétes eredményeket [14]. Összefoglalva, ezek az adatok arra utalnak, hogy RPL6 játszhat onkogén szerepet tumorigenezis és a gyomorrák kialakulásával és szolgálhat egy újszerű megközelítés génterápia gyomorrák.

Manapság egyre több beteg meghalt rákban, mert a a rosszindulatú fenotípus őket. Rákterápia zavart emberek világszerte. Emellett a kemoterápia és a sebészet a kezelés, a génterápia egy új és ígéretes rák kezelésére. Az egyik leggyakrabban használt módszerek génterápia RNS-interferencia (RNSi). RNSi, egy erősen konzervált géncsendesítés mechanizmus fontos szerepet játszik a génexpresszió szabályozásában. Gene silencing egy poszttranszkripciós mechanizmus magában homológ kettős szálú RNS-t először felfedezett mesterséges rendszerekben, ahol a kettős szálú RNS (dsRNS) vezették át injektálással vagy expressziója transzgenikus konstrukciók. Ez a jelenség akkor fordul elő a kis interferáló RNS-t (siRNS-t) a citoplazmában emlős sejtek. A siRNS-technológia, két szállítási mechanizmusok tartották, közvetlen szállítás szintetikus siRNS nukleotid- és bevezetése egy plazmid DNS-t (pDNS) kódoló egy rövid hajtű konstrukciót (shRNS), amely enzimatikusan bomlik siRNS [15]. SiRNS játszott annak gátló szerepek összevetjük a szekvenciák mRNS és gátolja az ebből mRNS expresszió és a fordítás és dolgozott, mint negatív szabályozás. Manapság egyre több a tudósok felfedezték, hogy a leütött génexpresszió siRNS jelentősen elnyomja tumor növekedés és anyagcsere. X-kromoszómához kötött apoptózisgátló protein (XIAP), fontos tagja a apoptózisgátló proteinek (IAP) család, részt vesz a kontroll sejtosztódás, sejt proliferáció és az apoptózis gátlása [16], [17]. Down-regulációja XIAP siRNS jelentősen elnyomja a tumorsejtek szaporodásához és érzékennyé tumorsejtek kemoterápiás szerek [18], [19]. Az osteopontin (OPN) fehérje, amely túlexpresszálódik a legtöbb gyomorrák betegek és társított annak patogenezisében, fontos szerepet játszott a proliferáció, invázió, metasztázis és a túlélés a gyomorrák [20]. Majd le-szabályozására OPN által OPN-specifikus siRNS szignifikánsan gátolta a növekedést, a migrációs és behatolás a gyomorrák-sejtek [21]. CML66, egy újszerű tumor antigén, amely játszott egy onkogén szerepét, volt overexpresszált többségében a rákos sejtvonalak és a rák [22], bontani annak expresszióját CMl66-specifikus siRNS jelentős mértékben gátolta a proliferációt, invázió és metasztázis HeLa sejtek mind a vivo és in vitro kísérletekben [23]. FABP5, amely kódolja kután zsírsav kötő protein (C-FABP), a fel-szabályozott prosztatarák, és működik egy feltételezett onkogén. Down-regulációja FABP5 által FABP5-specifikus siRNS hatékonyan gátolta a prosztata rákos sejtek növekedését csupasz egerekben [24]. Ezen túlmenően, ha a riboszomális fehérje RPS13 amely fokozott gyomorrák sejtvonal SGC7901 növekedést leütött által RPS13-specifikus siRNS, ez jelentősen gátolta SGC7901 sejtnövekedést és telepképző képesség in vitro és elfojtott tumorképződést képességét pucér egér [25]. Korábbi kutatások azt is megállapította, hogy a szisztémás szállítását siRNS keresztül atelocollagen, amely kifejezetten a daganatok, biztonságos és megvalósítható rákterápia prosztatarákos [26]. Ezért bizonyíték fent azt javasolta, hogy az siRNS, azáltal, hogy gátolja a génexpressziót lehet egy újszerű megközelítés a rák-terápia, és a génterápia a rák megvalósítható a klinikai kezelés.

A jelen vizsgálatban, kifejezései RPL6 és ciklin E a gyomor rákos szövet és az egyező szomszédos nem neoplasztikus szövetekben detektáltunk, és az eredmények azt mutatták, hogy RPL6 és ciklin E megmutatta magasabb expressziót gyomorrák szövetekben, mint a párosított szomszédos nem neopláziás szövetek. Továbbá van egy összefüggés RPL6 és ciklin E expresszió gyomorrák szövetekben, amely azt sugallta, hogy azok játszhatnak a con-nagyvonalú szerepet a fejlesztés a gyomorrák és RPL6 szolgálhat egy biomarker gyomorrák diagnózist. Nyomon követése eredmények igazolták, hogy a betegek mind RPL6 pozitív és ciklin E pozitív kifejezéseket mutattak rövidebb túlélési időt és rosszabb prognózist, mint a megfelelő szabályozás és azt is jelezte, hogy a betegek a RPL6 negatív kifejezés azt mutatta hosszabb túlélési időt és jobb prognózissal, mint akiknek RPL6 pozitív kifejezés, amely azt javasolta, hogy RPL6 is szolgált a biomarker gyomorrák prognózisa és a gén célzott gyomorrák terápia klinikán. katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a lehetséges megvalósíthatóságát RPL6 génterápia célpontja gyomorrák klinika, kopogtunk le RPL6 expresszió SGC7901 és AGS sejtek RPL6-specifikus siRNS, eredmények azt mutatták, hogy a down-regulációja RPL6 gyomorkarcinómában szülői sejtvonalak (SGC7901 és AGS) hatékonyan gátolta a sejtek növekedését és in vitro telepképző képességét. Továbbá, a sejtciklus analízis jelezte, hogy a down-regulációja RPL6 lassult G1-S fázis gyomorrák-sejtek. Western-blot analízis azt mutatta, hogy RPL6 gátolta a sejtciklus előrehaladását keresztül, leszabályozza ciklin E. Tumor képződés kísérleteket csupasz egerekben azt javasolta, hogy down-regulációja RPL6 lehetett elnyomni tumor kialakulását in vivo.

ciklin E, egy kulcs sejt ciklus fehérje kulcsszerepet játszottak a G1-S átmenet volt zavar a sok különböző tumorokban [27], [28], [29], [30], [31]. Korábbi kutatások kimutatták, hogy a ciklin E egy fontos molekula tumorigenezis. A jelen vizsgálatban, felfedeztük, hogy a ciklin E kifejezés együtt RPL6 magasabb volt a humán gyomorrák szövetek, mint hogy párosított szomszédos, nem neoplasztikus szövetekben, amely azt sugallta a szerepe a ciklin E játszott a fejlesztés a gyomorrák. További kutatások kimutatták, hogy RPL6 befolyásolta a sejtek növekedését szabályozó ciklin E, ami azt mutatta, hogy a magas expressziója ciklin E felgyorsult a sejtek növekedését, miközben az alacsony kifejeződése ciklin E lassult sejtburjánzást. Ciklin E és RPL6 játszhat con-nagyvonalú szerepet a gyomorrák kialakulásával. Katalógusa

Összefoglalva, a jelen vizsgálat igazolta, hogy RPL6 és ciklin kifejezés jártak egymással gyomorrák szövetek és ők játszhatnak kon- nagyvonalú szerepek a fejlesztés a gyomorrák, amely azt sugallta, hogy a RPL6 lehet használni, mint egy diagnosztikai eszköz a gyomorrák. Kövesse nyomon az adatok elemzése kimutatta, hogy a betegek a RPL6 negatív kifejezés azt mutatta hosszabb túlélési időt és jobb prognózissal, mint akiknek RPL6 pozitív kifejeződése a műtét után, amely azt sugallta, hogy RPL6 szolgált biomarker gyomorrák prognózisa és új gén célzott gyomorrák terápiát. További tanulmányok azt mutatták, hogy down-regulációja RPL6 expresszió RPL6-specifikus siRNS gátolta SGC7901 sejtek növekedését és in vitro kolónia képződését képesség, lassult SGC7901 sejt G1-S fázis átmenet, és elfojtott tumor kialakulását in vivo. Összefoglalva, jelen tanulmány megerősítette, hogy RPL6 siRNS lehet használni, mint egy új megközelítése gyomorrák terápia klinika. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A szövetminták minden beteg beleegyezését kell használni a felesleges vizsgált mintákban a kutatási célokra. A jegyzőkönyvek ebben a tanulmányban alkalmazott hagyta jóvá a kórházi Emberi alanyok bizottság. Az emberi szövetek által jóváhagyott intézményi felülvizsgálati tanács negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem, és megfelelt a Helsinki Nyilatkozat, és a helyi törvényeknek megfelelően. Betegek kínál mintákat a vizsgálat aláírt tájékozott beleegyezés formája. Az állatok kutatási, valamennyi eljárás állatkísérletek szerint végeztük az Institutional Animál Care and Use Committee iránymutatásai kísérlet Animal közepén a negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem. A jóváhagyási azonosítót az állatokban No. 10218 szerint Kísérlet Animal Center negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem. Katalógusa

szövetmintából és sejtvonalak

szövetmintából beágyazott paraffin gyűjtöttünk 55 beteg gyomorrák átesett gastrectomián kórházunkban 2004 és 2009 között minden esetben a gyomorrák és a szomszédos, nem daganatos szövetek diagnosztizáltak klinikai és patológiai. Adatok klinikopatológiai jellemzők és prognózis a betegek gyűjtötték és elemezték visszamenőlegesen. Összesen 55 betegek utánkövetése végéig a 2009-es év, és közülük kettő alatt elveszett a követési periódus. Az emberi gyomor adenokarcinóma sejtvonal SGC7901 kapunk Akadémia Katonai Orvostudományi, AGS-t nyert a sanghaji Cell Bank (Sanghaj, Kína). A két sejtvonal őrizték intézetünkben. Az összes sejtvonalat tartjuk RPMI1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA), kiegészítve 10% hővel inaktivált magzati borjúszérummal (FCS), 37 ° C-on, 5% CO _{2, párásított inkubátorban (Forma Scientific, Marietta, OH). katalógusa}

immunhisztokémia és immunhisztokémiai pontozási katalógusa

paraffint és rehydráltuk metszeteket friss vízzel 10 percig. Hővel indukált antigén-visszanyerés végeztük 20 percen át 95 ° C-on 10 mM citrát nátrium-pufferben (pH = 6,0). Miután a lemezeket lehűtjük, szobahőmérsékleten 40 percig, azokat blokkoltuk 3% -os hidrogén-peroxid 20 percig, majd a normál kecske szérummal határoló folyékony 40 percig. Ezt követően, voltak reagálni hagyjuk egy éjszakán át 4 ° C-on a primer antitestekkel IgG, RPL6 és ciklin (Santa Cruz). Miután felmelegítés 40 percig voltak ezután második antitestekkel (Zhongshan Goldenbridge Biotechnology CO.LTD) további 40 percen át szobahőmérsékleten. Ezután a termékeket fejlesztettek 3,3'-diaminobenzidin és ellenfestjük hematoxilin. Pontozás fejeződött szakemberrel patológus és egy tudós, akik tudták, hogy a klinikai és patológiai adatokat. Eltérés esetén, egyetértés született a konferencia. Az arányok a pozitív sejtek (0-3), és a festődés intenzitása (0-3) értékeltük külön-külön nagyításnál × 200. Az előbbi úgy számítottuk ki, hogy megszámoljuk a festett tumorsejtek körében az összes tumorsejtek, így például, ha a 25% -a teljes sejteket megfestettük, az arány pontszám volt 1 és 50% egyenlő 2, 75% egyenlők a 3, 0% felel meg a 0 intenzitása pontozási értékeltük ki a színes festett tumor sejtmag, konkrétan 0 pontot jelent akromatikus, 1 azt jelenti, borostyán, 2 azt jelenti, sárga, és 3 olyan barna. Kombinált pontozás + 1~ + 2 definiáltuk "negatív", és + 3~ + 6 tartották "pozitív". Katalógusa

A plazmid építési és transzfekciós katalógusa

Két pár hajtű kis interferáló RNS (siRNS ) oligo a RPL6 terveztünk az siRNS tervezési irányelveinek Takara Biotechnology Co., Ltd. összehasonlítása célszekvenciák az emberi genom adatbázis BLAST keresés kiiktatnak venni bármely megcélzott szekvencia 21 bázispár homológiát összefüggő más kódoló szekvenciákat . Az oligo-1, értelme: 5'-GATCCGGAGAAGGTTCTCGCAACTTTCAAGAGAAGTTGCGAGAACCTTCTCCTTTTTTGGAAA-3 'antiszensz: 5'AGCTTTTCCAAAAAAGGAGAAGGTTCTCGCAACTTCTCTTGAAAGTTGCGAGAACCTTCTCCG-3'; az oligo-2, értelme: 5'-GATCCGTCGAGTTCCTCTACGAAGATTCAAGAGATCTTCGTAGAGGAACTCGATTTTTTGGAAA-3 ', antiszensz: 5'-AGCTTTTCCAAAAAATCGAGTTCCTCTACGAAGATCTCTTGAATCTTCGTAGAGGAACTCGACG-3'; Tülekedés DNS duplexet is tervezték kontrollként, az oligo-1, értelme: 5'-GATCCGGTGAGATCTTCGACACAGTTCAAGAGACTGTGTCGAAGATCTCACCTTTTTTGGAAA-3 ', antiszensz: 5'-AGCTTTTCCAAAAAAGGTGAGATCTTCGACACAGTCTCTTGAACTG TGTCGAAGATCTCACCG-3'. Égetőkemencei alkotnak DNS duplexeket, 0,01 M egymástól szensz és antiszensz oligonukleotidok használtunk. A duplexeket hígítani, majd ligáltuk pSilencer3.1-H1 neo vektor (TaKaRa Biotechnology (Dalian) Co.., Ltd). A termékeket transzformáljuk DH5a kompetens sejteket. Ampicillin-rezisztens kolóniákat választunk, amely a restrikciós emésztést, és a további DNS-szekvenálással igazoltuk. Szerint a gyártó utasításait, siRNS plazmidok RPL6 t transzfektáltunk SGC7901 sejtekbe Lipofectamine 2000 reagenssel (Invitrogen, Carlsbad, CA), ill. Huszonnégy órával a transzfekció után, G418 (400 ng /ml) adtunk hozzá a tenyésztő táptalaj létrehozó stabil klónokat. A vegyes klónokat kiterjesztett további 2 hónapig. A SGC7901 és AGS sejtek (más néven szülői sejtek) stabilan expresszáló exogén RPL6 nevezték SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 és SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2. És a sejteket transzfektáltuk siControl nevezték SGC7901-siRPL6 vezérlés és AGS-siRPL6 vezérlő (más néven kontroll sejtek).

Cell proliferációs vizsgálati

3- (4,5-dimetil-2- il) -2,5-difenil-tetrazólium-bromidot (MTT) vizsgálatot végeztünk, hogy értékelje a hatását RPL6 sejtproliferációra a korábban leírt [32]. Az abszorbanciát 490 nm-en (A490) az egyes üregekben olvasott A mikrolemez leolvasón BP800 (Biohit, Helsinki, Finnország). Mindegyik kísérletet végeztünk négyszeresen és 3-szor ismételtünk.

Lágy agar kolónia képződését assay

Lágy agar telepképző assay-t használták, hogy meghatározzák rögzítéstől független sejt növekedési potenciállal rendelkezik. Tizenkét lyukú lemezekre töltöttük 0,5 ml 0,5% -os nemes agart (Invitrogen) RPMI1640, kiegészítve 10% borjúszérummal, mint egy alsó réteget, és hagyjuk megszilárdulni át 4 ° C-on egy éjszakán át. Összesen 200 sejtet szuszpendálunk 0,25 ml 0,3% -os agaróz, és beoltjuk az alsó agar. Sejttenyésztő lemezeket tartjuk 2 hétig, egy CO _{2 inkubátorban. A telepek számát megszámoljuk mikroszkóp alatt.}

tumorképző nude egerekben

A tumor képződés végeztük, hogy értékelje a hatását RPL6 a tumorképző in vivo. BALB /c meztelen egereket 4-6 héten keresztül biztosították Shanghai Cancer Institute és elhelyezett mikro-izolátor ketrecekben alatt pozitív légnyomás, és tartjuk egy állandó hőmérsékletű (22 ° C) és páratartalom a tumorképző tanulmány. Körülbelül 3 × 10 ^{6 sejteket log fázisban összegyűjtjük és szubkután injektáltuk a hát felső BALB /c csupasz egerekben. Legalább három csupasz egereket használtunk minden csoportban. Az egereket megölték 4 héttel később és a tumor tömegét minden egyes egér értékeltük. Minden eljárások állatkísérletek szerint végeztük az Institutional Animál Care and Use Committee iránymutatásai kísérlet Animal közepén a negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem. Katalógusa}

A sejtciklus analízis katalógusa

elemzése sejtciklus fázis elosztási, SGC7901 és variánsai a log fázisban összegyűjtöttük és kétszer mostuk jéghideg PBS-sel. A sejtüledéket fixáltuk 70% -os etanolban, az oldathoz RN-áz A (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) és propidium-jodiddal festettük (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO).

• PLoS One: A DNS-javító gén APE1 T1349G polimorfizmusa és a kockázat az gyomorrák a kínai Population
• PLoS One: elvesztése a promielocitás leukémia fehérjét gyomorrákban: következmények az IP-10 expresszió és tumor-infiltráló Lymphocytes