PLOS ONE: clínico e prognóstico Associação de Fator de Transcrição SOX4 em Câncer Gástrico

Abstract

O câncer gástrico (GC) é uma das neoplasias malignas mais comuns em todo o mundo. No entanto, pouco se sabe sobre o processo molecular pelo qual esta doença desenvolve-se e progride. Este estudo investigou correlações entre a expressão do fator de transcrição nuclear SOX4 e vários parâmetros clínico-patológicas, bem como a sobrevida dos pacientes. Os níveis de expressão de SOX4 nuclear foram analisados ​​por imuno-histoquímica; os dados composta por tecidos gástricos de 168 pacientes com GC. Emparelhado t
testes foram utilizados para analisar as diferenças na expressão SOX4 nuclear entre tecidos tumorais e não tumorais de cada paciente. Dois-atado Χ ^{2 testes foram realizados para determinar se as diferenças na expressão SOX4 nuclear e os parâmetros clínico-patológicas foram significativas. endpoints Time-to-evento para os parâmetros clínico-patológicas foram plotados utilizando o método de Kaplan-Meier, ea significância estatística foi determinada por meio de testes de log-rank univariadas. Cox modelo de riscos proporcionais foi usado para a análise multivariada para determinar a independência dos efeitos prognóstico da expressão SOX4 nuclear. Superexpressão de SOX4 nuclear foi significativamente correlacionada com profundidade de invasão ( P Art < 0,0001), estado nodal ( P
= 0,0055), metástases à distância ( P
= 0,0195 ), fase ( P
= 0,0003), ea invasão vascular ( P
= 0,0383). Os pacientes que apresentaram elevados níveis de expressão de SOX4 nuclear alcançado uma taxa de sobrevivência significativamente mais pobres livre de doença, em comparação com pacientes com baixos níveis de expressão SOX4 ( P
= 0,003). A análise de regressão univariada de Cox mostrou que a superexpressão de SOX4 nuclear era um marcador de prognóstico claro para GC ( P
= 0,004). A sobre-expressão de SOX4 nuclear pode ser utilizado como um marcador para prever o resultado de doentes com GC}

citação:. Fang C-G, Hseu Y-C, Lin Y-F, Hung S-T, Tai C, Uen Y-H, et al. (2012) Clínica e Associação prognóstico do Fator de Transcrição SOX4 no câncer gástrico. PLoS ONE 7 (12): e52804. doi: 10.1371 /journal.pone.0052804

editor: Anthony WI. Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 12 de setembro de 2012; Aceito: 21 de novembro de 2012; Publicação: 20 de dezembro de 2012

Direitos de autor: © 2012 fang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por duas bolsas (CMFHR10020 e CMFHR10064) de Chi Mei Medical Center (www.chimei.org.tw). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a incidência de câncer gástrico (GC) diminuiu entre 1940 s e 1980 s no mundo ocidental, mas GC permanece extremamente difundida em todo o mundo. Ela afeta cerca de um milhão de pessoas por ano e é a segunda causa mais frequente de morte por câncer [1], [2]. A grande variação na incidência é evidente em todos os continentes [1]. Na Ásia e em partes da América do Sul, GC é o tumor maligno epitelial mais comum e é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer. Em Taiwan, as estatísticas do governo emitidos em 2011 classificou GC como o sexto doença maligna mais frequentemente diagnosticado, resultando em mais de 2000 mortes por ano (http://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm). avanços consideráveis ​​têm sido feitas em técnicas cirúrgicas e quimioterapia, que melhoraram o tratamento de GC, mas a taxa de cura para os casos avançados permanece baixa e a morbidade permanece elevada [3], [4]. Uma compreensão mais completa das características patogênese e biológicos da doença é necessário para melhorar ainda mais os métodos de tratamento.

Entre os marcadores prognósticos agora disponíveis para GC, o mais importante é American Joint Committee on Cancer (AJCC) estágio determinada pela profundidade da invasão, o envolvimento dos gânglios linfáticos e metástases à distância. No entanto, o prognóstico varia até mesmo entre pacientes no mesmo estágio. Assim, a busca de marcadores biológicos específicos para identificar subgrupos de pacientes que são propensos a experimentar um curso particularmente agressiva da doença está em curso [5]. Em décadas recentes, vários estudos têm sugerido que alterações genéticas podem desempenhar um papel no desenvolvimento e progressão de [6] GC. Estudos em patologia molecular pode ajudar na compreensão da patogênese da doença e também pode revelar marcadores moleculares de prognóstico úteis. Alguns marcadores prognósticos biológicos sugeridos incluem superexpressão da proteína quinase CK2, vav3, mesothelin, e do receptor do factor de crescimento epidérmico [7] - [11].

Nos seres humanos, a região determinante do sexo Y box (SRY) família, também referida como a família SOX, compreende 20 factores de transcrição altamente conservadas que desempenham papéis importantes no desenvolvimento. Estes factores de transcrição são definidos por uma sequência de assinatura de domínio conservado no grupo de alta mobilidade (HMG) de ligação a DNA (DBD) [12], [13]. SOX4 é uma proteína de 47 kDa que é codificada por um único gene exão, que é altamente conservada em vertebrados. Em ratinhos, SOX4 é especificamente expresso no ovário, testículo, glândula mamaria, e o timo e em linhas de células linfocíticas de pré-B de rato [14] e t. Além disso, SOX4 é essencial para o desenvolvimento do coração, linfócitos, e timócitos, e ratinhos SOX4-nulo morrem de defeitos cardíacos [15]. A capacidade proliferativa das células progenitoras de células-B é severamente reduzida em células de ratinhos knockout SOX4 [16].

A importância clínica de SOX4 ganhou atenção crescente nos últimos anos, com numerosos relatos sugerindo que SOX4 pode contribuir para tumoral progressão. Três estudos independentes triagem para oncogenes importantes mostrou que SOX4 é freqüentemente alterada através de inserções retrovirais [17] - [19]. O vírus da leucemia murina tipicamente SOX4 alvo, e estabilizado a mensagem SOX4 para produzir os linfomas de células B que exibiu um aumento dos níveis de mensagem SOX4 [19]. O aumento da expressão SOX4 está associada com tumores da bexiga, da próstata, do cólon e, e com tumores do pulmão de não-pequenas células-[20] - [23]. No entanto, o papel de SOX4 em tais tumores não está totalmente compreendida e os dados relatados demonstram certos contradições. Considerando SOX4 knockdown resultou na apoptose das células de carcinoma adenóides císticos ACC3, SOX4 superexpressão promovido paragem do ciclo celular e a apoptose de células de carcinoma do cólon HCT116 [24], [25]. O microRNA (miRNA) miR-335 inibiu a invasão de células metastático e deliberado, pelo menos em parte, por meio de segmentação sox4
e seu alvo putativo TNC
, que codifica um componente da matriz extracelular implicado na célula migração [26]. Por outro lado, quanto maior for o nível de expressão SOX4, melhor o prognóstico para pacientes com meduloblastomas e outros tipos de tumores [27]. Assim, SOX4 podem exercer diferentes efeitos sobre as células tumorais, dependendo do contexto e do mecanismo de primeira transformação; mais estudos são necessários para esclarecer esta questão.

Até o momento, o significado prognóstico dos níveis de expressão SOX4 nuclear em GC humana não foi estabelecida. Este estudo investigou as correlações entre a expressão SOX4 nuclear e os parâmetros clínico-patológicas, e avaliou a importância da SOX4 nuclear em predizer o prognóstico para pacientes com GC.

Materiais e Métodos

Declaração de Ética

o conselho de revisão institucional a Chi Mei Medical Center aprovou o protocolo de aquisição de tecidos para o estudo imuno-histoquímica e immunoblotting. consentimento informado por escrito foi obtido de cada participante antes da aquisição de tecidos.

Os participantes e amostras

O grupo de pacientes composto 168 casos GC consecutivos, de 1997 a 2004 documentar fatores patológicos e clínicos e evolução clínica. Todos os casos neste estudo receberam total de radical ou gastrectomia subtotal com linfadenectomia D2 ou D3. Completude da ressecção cirúrgica foi realizada em todos os casos, e exame anatomopatológico revelou nenhum envolvimento tumor das margens de ressecção em espécimes cirúrgicos (classificados como R0: nenhum tumor residual com base na categoria R na classificação AJCC). Nenhum dos nossos pacientes do estudo tinham recebido quimioterapia e /ou radioterapia pré-operatória. A porção não-tumor foi obtida a partir de mucosa gástrica grosseiramente normal, separado a partir do tumor, a partir de amostras gástricas ressecado. parâmetros clínico-patológicas de GCs foram determinados de acordo com a classificação AJCC. A duração de follow-up para a sobrevivência livre de doença foi definida como o período entre a data da operação e no dia de recaída, de acordo com a ficha do paciente. Para cada paciente, analisamos um par de tecidos gástricos tumorais e não tumorais para determinar a expressão SOX4 nuclear.

Análise imuno-histoquímica

expressão SOX4 Nuclear foi analisada por imuno-histoquímica. blocos de tecido embebidos em parafina foram seccionados a 5 mm e transferidas para lâminas de microscópio (Muto Puré Chemicals Co. Ltd., Tóquio, Japão). O tecido da mama foi utilizado um controlo positivo para SOX4. O controlo negativo implica a omissão do anticorpo primário e incubação com solução salina de tampão fosfato. Os cortes foram desparafinados com xileno, seguido de reidratação em álcoois graduados. secções desparafinadas foram incubadas em tampão de pH 6,0 de citrato de 40 min a 95 ° C numa placa de aquecimento para recuperar antigénios. Além disso bloqueio antigénio foi realizada utilizando uma solução de Dako REAIS Peroxidase-bloqueio (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) durante 5 min. As lâminas foram subsequentemente incubados com o anticorpo primário: policlonal anti-SOX4 (Tempo de vida, Victoria, Canadá) durante 1 hora à temperatura ambiente, a uma diluição de 1:400. Detecção da coloração imunorreactivo foi realizada utilizando o método do complexo avidina-biotina-peroxidase de acordo com as instruções do fabricante. Foi utilizado um sistema sensível Dako REAIS EnVision Detection (Dako North America Inc., Carpinteria, CA). Após incubação com diaminobenzidina durante 5 minutos, as secções foram contrastadas com hematoxilina e montadas em Dako Faramount aquosa Meio de Montagem (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) para a interpretação microscópica. Como um fator de transcrição, única SOX4 nuclear foi marcado. pontuação semiquantitativa da intensidade (0, nenhuma coloração; 1, coloração fraca; 2, coloração forte) e fracção de células cancerosas positivas (0, nenhuma coloração; 1, menos de metade; 2, mais de metade) foi realizadas [22]. O resultado final foi calculada para cada amostra, multiplicando a intensidade e a percentagem de imunomarcação: 0, nenhuma coloração; 1, coloração fraca; 2, coloração moderada; 4, de coloração forte. Seções com uma pontuação de 0 ou 1 exibida baixa expressão de SOX4, enquanto que aqueles que marcou 2 ou 4 foram definidos como tendo alta expressão ou superexpressão de SOX4. coleta de dados clínicos e análise imuno-histoquímica foram realizados de forma independente um do outro, em um estudo cego-investigador.

RNA Extração e cDNA síntese

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