PLOS ONE: Genomic Profiling da submucosa-invasiva câncer gástrico pela matriz baseada em genômica comparativa Hybridization

Abstract

Genomic aberrações no número de cópias (CNAs) em câncer gástrico foi já amplamente caracterizada pela variedade hibridização genômica comparativa (array CGH) análise. No entanto, o envolvimento de CNAs genômicas no processo de invasão submucosa e metástases em linfonodos no câncer gástrico precoce ainda é pouco compreendido. Neste estudo, para resolver este problema, foram coletadas um total de 59 amostras de tumores de 27 pacientes com câncer gástrico submucoso-invasiva (SMGC), analisou seus perfis genômicos por matriz CGH, e comparou-os entre amostras pareadas de mucosa (MU) e submucoso (SM) invasão (23 pares) e invasão e linfonodo SM (LN) metástase (9 pares). Inicialmente, temos a hipótese de que a aquisição da CNA (s) específico é importante para esses processos. No entanto, não se observou diferença significativa no número de CNAs genômicas entre emparelhado MU e SM, e entre SM emparelhados e LN. Além disso, não fomos capazes de encontrar qualquer CNAs especificamente associados à SM invasão ou LN metástase. Entre os 23 casos analisados, 15 tiveram algum padrão semelhante de caracterização genômica entre SM e MU. Curiosamente, 13 dos 15 casos, também mostrou algumas diferenças nos perfis genômicos. Estes resultados sugerem que a maioria dos SMGCS são compostos de subpopulações heterogéneas derivadas da mesma origem clonal. Comparação de CNAs genômicas entre SMGCS com e sem metástase LN revelou que o ganho de 11q13, 11q14, 11q22, 14q32 e amplificação de 17q21 foram mais frequentes em SMGCS metastáticos, sugerindo que estes CNAs estão relacionados com a LN metástase de câncer gástrico precoce. Em conclusão, nossos dados sugerem que a geração de subclones geneticamente distintas, ao invés de aquisição da CNA específico em MU, é parte integrante do processo de invasão submucosa, e que subclones que adquirirem o ganho de 11q13, 11q14, 11q22, 14q32 ou ampliação de 17q21 são susceptível de se tornar metastático

Citation:. Kuroda a, Tsukamoto Y, Nguyen LT, Noguchi T, Takeuchi I, Uchida M, et al. (2011) Genomic Profiling da submucosa-invasiva câncer gástrico pela matriz baseada em hibridização genômica comparativa. PLoS ONE 6 (7): e22313. doi: 10.1371 /journal.pone.0022313

editor: Giuseppe Novelli, da Universidade Tor Vergata de Roma, Itália |

Recebido: 25 de fevereiro de 2011; Aceite: 19 de junho de 2011; Publicação: 21 de julho de 2011

Direitos de autor: © 2011 Kuroda et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiado em parte pelo Ministério da Educação, Ciência, Esporte e Cultura do Japão, e Grants-in-Aid para Jovens cientistas (B), No. 20.790.286 (http://www.mext.go.jp), ea Fundo de Investigação, a critério do Presidente, Universidade de Oita (http://www.oita-u.ac.jp/english/index.html). Nenhum financiamento externo adicional foi recebida para este estudo. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico continua a ser uma das doenças mais mortais, apesar de sua tendência constante declínio em todo o mundo. No geral, a mortalidade por câncer gástrico é estimada em 700.000 casos anualmente (10,4% de todas as mortes relacionadas com o cancro), ocupando o segundo apenas depois do cancro do pulmão [1]. Os resultados clínicos é melhor quando as células tumorais são confinados à mucosa. No entanto, uma vez que as células tumorais passar através da mucosa muscular, o resultado clínico torna-se pior, uma vez que o risco de metástases linfáticas, que é um dos factores de prognóstico mais importantes no cancro gástrico, aumenta de forma significativa a 18% ou mais, em comparação com menos de 4%, quando as células tumorais continuam a ser limitados à mucosa [2], [3]. Assim, uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de invasão submucosa é necessária.

é actualmente reconhecido que a acumulação de vários passos de anormalidades genéticas é responsável pelo início e progressão de vários cancros [4]. Na verdade, tem sido relatado que o número total de aberrações genómicas aumenta com a progressão do tumor em diversos tipos de tumores [5]. Nós também descobrimos que as frequências de ganhos em 20q, 20p12, 1q42, 3q27 e 13q34 e perdas em 4q34-qter, 4p15, 9p21, 16q22, 18q21 e 3p14, que tinha sido frequentemente detectado no câncer gástrico, foram mais frequentes em AGC do que EGC em [6]. Enquanto isso, recentemente, tem sido relatado que, durante o curso da progressão do tumor, uma célula de tumor de origem evolui para várias subpopulações distintas geneticamente, através da aquisição de uma vasta variedade de aberrações genómicos. A massa de tumor resultante, o qual é composto de subpopulações heterogéneas geneticamente, é considerada a tornar-se resistentes a uma variedade de pressões de selecção ambientais [7], [8], [9], [10].

Matriz baseada hibridização genômica comparativa (array CGH) fornece informações sobre as aberrações no número de cópias genômicas (CNAs) em todo o genoma [11]. Além disso, CGH é também aplicável ao estudo de heterogeneidade genómico intratumoral [12], [13], [14], [15]. Embora matriz vários grupos têm utilizado CGH para identificar regiões que albergam os genes oncogénicos ou tumor-supressor no cancro gástrico [6], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ], [23], [24], [25], CNA submucosa relacionadas com a invasão e a fase precoce de metástases de linfonodo ainda não foram determinadas. Além disso, uma vez que a maioria dos estudos anteriores de CNAs no câncer gástrico têm analisado apenas uma amostra para cada tumor, os detalhes da heterogeneidade dos perfis genômicos dentro de um único câncer gástrico têm permanecido em grande parte obscura.

Neste estudo, foi investigada a envolvimento de CNAs genômicas no processo de invasão submucosa e metástases em linfonodos no câncer gástrico precoce. Para este efeito, foram coletadas amostras de tumores de diferentes partes do mesmo tumor separadamente, analisou seus perfis genômicos por matriz CGH, e compararam os perfis genômicos entre amostras pareadas de mucosa (MU) e submucoso (SM) porções, e parte SM e da linfa nó (LN) metástase. Além disso, comparando a CNAs entre metastático e câncer gástrico submucoso-invasivo não-metastáticos (SMGC), identificou-se o candidato CNAs relacionadas com LN metástase de câncer gástrico precoce.

Materiais e Métodos

ética Declaração

Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética do Hospital Universitário de Oita (Aprovação P-05-04). consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes e /ou seus familiares.

Os pacientes, amostras de tecidos e extração de DNA genômico

Vinte e sete SMGCS foram cirurgicamente ressecado no Hospital Universitário de Oita. As secções de tecido foram cortadas a partir de tecido fixado em formalina, embebido em parafina, e corados com hematoxilina-eosina (HE) para análise histológica e com azul de toluidina (Wako, Osaka, Japão) para a extracção de ADN genómico (Figura 1A). Usando microdissecação laser de captura, foram coletadas amostras de 1 a 3 MU de a, SM e /ou porção de LN metastático do mesmo tecido SMGC separadamente. Como resultado, fomos capazes de obter um total de 59 amostras de 27 pacientes (Tabela 1). Todas as amostras incluíam uma proporção de células de tumor superior a 70% do total. O ADN genómico foi extraído de acordo com o método de digestão com proteinase K padrão, seguido por extracção com fenol /clorofórmio. tecido gástrico não-neoplásica dos mesmos pacientes foi usado como um controle normal.

array CGH e análise de dados

análise de matriz-CGH foi realizada usando 44 K de oligonucleotídeos matrizes CGH (Agilent Technologies Inc. , Paio Alto, CA). Etiquetagem e hibridação foram realizadas de acordo com o protocolo fornecido pela Agilent Technologies Inc. Resumidamente, 0,85-2? G de ADN de tumor e uma quantidade igual de ADN de controlo foram digeridos com Alui e Rsal (Promega, Madison, WI, EUA) durante 24 horas a 37 ° C. O tumor digerido e o ADN de controlo foram marcadas com Cy5-dUTP e Cy3-dUTP, respectivamente, utilizando um ADN genómico Labeling Kit Plus (Agilent), purificado com Microcon YM-30 filtros (Millipore, Billerica, MA, EUA), e concentrada a 80,5 ul. Quantidades iguais de ADN de tumor e de controlo foram subsequentemente reunidas e misturadas com ADN Cot-1 humano, dissolvido em tampão de hibridação (Agilent Oligo aCGH hibridação Kit; Agilent Technologies), desnaturado e hibridado com a matriz de CGH a 65 ° C durante 24 h. lâminas de vidro foram lavadas e depois digitalizado de acordo com as instruções do fabricante.

As imagens Microarray foram analisados ​​utilizando v.9.5.3.1 recurso de extração (Agilent Technologies) com normalização linear (protocolo de CGH-v4_95_Feb07), e os dados resultantes foram importados para v.4.0.81 DNA Analytics (Agilent Technologies). Após normalização dos dados em bruto, foi calculada a log2ratio de Cy5 (de tumor) para Cy3 (de controlo). regiões aberrantes foram determinadas pelo algoritmo de ADM-2 a um limiar de 8,0. Para detectar os ganhos e perdas, vamos definir os valores dos parâmetros para filtros de aberração como: número mínimo de sondas na região 2, log2ratio médio absoluto mínimo para a região 0,26, número máximo de regiões aberrantes 10000, eo percentual penetrância per recurso 0. Da mesma forma, a detectar amplificações e supressões, vamos definir os valores dos parâmetros para filtros de aberração como: número mínimo de sondas na região 2, log2ratio mínimo absoluto da média para a região 1,0, número máximo de regiões aberrantes 10000, eo percentual penetrância per recurso 0. os dados gerados pelas sondas mapeado para o cromossomos X e Y foram eliminados. posições genómicas de sondas e regiões aberrantes foram baseados na UCSC março 2006 sequência de referência humano (hg18) (NCBI construir sequência de referência 36). Todos os dados são Miame compatível (http://www.mged.org/Workgroups/MIAME/miame.html) e os dados brutos foram depositadas no banco de dados GEO Miame-compliant (http: //www.ncbi.nlm.nih .gov /geo /, número de acesso GSE26800). Uma visão geral do modelo experimental é mostrado na Figura 1B. Para comparação de ANC entre as porções de mu e SM emparelhados, que seleccionado a partir de 23 casos o total de 27 (Figura 1B, a e b), uma vez que os perfis de ambas as porções genómicas nestes casos foram analisados ​​com sucesso. De modo semelhante, para comparação de ANC entre SM emparelhado e porções de NL, que seleccionado 9 dos 12 casos com uma porção de LN (Figura 1B, C e d). Além disso, foram comparadas as frequências de ANC entre os casos com e sem metástases LN (Figura 1B, E e F).

A imuno-histoquímica

A imuno-histoquímica foi realizada como descrito anteriormente [21] usando anti EGFR (1:100; Dako, Glostrup, Dinamarca), anti-CTTN (1:200; Abcam, Cambridge, MA, EUA) e anti-erbB2; anticorpos (1:800 Cell Signaling Technology, Berverly, MA, EUA).

A análise estatística

foram utilizados o teste t pareado eo teste exato de Fisher. Diferenças no P
. ≪ 0,05 foram considerados estatisticamente significativos

Resultados

clonalidade Genômica e heterogeneidade em porções da mucosa e submucosa de SMGC

Para investigar a envolvimento de CNAs genômicas no processo de invasão submucosa, primeiro em relação ao número de CNAs entre amostras MU e SM emparelhados a partir das 23 SMGCS (Figura 2A). Onze dos 23 casos mostraram um aumento do número de CNA na porção SM, em comparação com a porção de MU, 11 apresentaram uma diminuição do número, e o restante um caso não mostrou qualquer alteração (Figura 2A). Como resultado, não havia nenhuma diferença estatisticamente significativa no número de ANC entre emparelhados porções mu e SM (Figura 2A, não significativa no teste t emparelhado). Além disso, para identificar CNAs especificamente associado com invasão de submucosa, foram comparadas as frequências médias de CNAs na porção MU com aqueles na parte SM emparelhado (Figura 2B), mas foram incapazes de encontrar qualquer.

Para investigar a diferença de CNAs entre MU e SM do mesmo tumor, foram comparados os perfis genômicos de emparelhado MU e SM em cada caso. Um caso representativo é mostrado na Figura 2C, D, E e F. O emparelhado MU e amostras SM partilhada um padrão semelhante de aberração genómico no cromossoma 9p (Figura 2D). No entanto, houve aberrações genómicos distintos em cromossomas 7P e 11 no mesmo caso, como mostrado na Figura 2E e F. A amplificação de 7p12 foi observada apenas em MU, mas não em SM (Figura 2E), e observou-se o ganho do cromossoma 11 Apenas em SM, mas não em MU (Figura 2F). Estes resultados sugerem que as células tumorais no MU e SM do presente processo foram clonalmente relacionada, mas composta de subpopulações heterogéneas geneticamente.

A seguir, para determinar se as células de tumor que mostram a amplificação de 7p12 e aqueles que mostra o ganho de 11q13 de caso 4 foram muito limitada para o MU e SM, respectivamente, foram analisadas as secções de tecido de processo 4 por imuno-histoquímica com anticorpos contra EGFR, o qual foi amplificado apenas na porção MU (Figura 2E), e CTTN, que foi obtida somente na SM porção (Figura 2F). Como mostrado na Figura 3, a imunorreactividade positiva para o EGFR foi limitada à parte MU (Figura 3D, E e F), enquanto que apenas a porção SM mostrou forte imunorreactividade para CTTN (Figura 3G, H e I). Estes resultados sugerem que, no caso 4, as células tumorais com 7P amplificação em MU não poderia ter invadido a SM, enquanto aqueles com cromossomo 11 o ganho poderia ter invadido o SM.

Em seguida, analisamos clonalidade genômica e heterogeneidade no MU e SM de outros casos. Entre os outros 22 casos, 14 apresentaram um padrão semelhante de aberração genômica nos MU e SM (Figuras S1 (6 casos) e S2 (8 casos)), sugerindo que as células cancerosas no MU e SM destes casos foram relação clonal . Curiosamente, 12 dos 14 casos mostrou uma diferença significativa nos padrões de perfil genômico entre MU e SM (Figuras S1 (6 casos) e S2 (6 casos)), sugerindo que esses casos também foram compostas de sub-populações geneticamente heterogêneas.

clonalidade Genômica e heterogeneidade no primário (SM) e metastático (LN) porções de SMGC

em seguida, para investigar o envolvimento de CNAs no processo de metástase em linfonodo de câncer gástrico precoce, comparamos o número CNA de entre o primário emparelhado (SM) e metastáticos (LN) de 9 porções SMGCS (Figura 4A). Três dos 9 casos mostraram um aumento do número de CNA na porção LN, enquanto que as restantes 6 pacientes apresentaram uma diminuição (Figura 4A). Como resultado, não havia nenhuma diferença significativa no número de ANC entre as porções de NL SM e emparelhados (Figura 4A, não significativa no teste t emparelhado). Além disso, para identificar CNAs especificamente associado com LN metástases, foram comparadas as frequências médias de CNAs em SM com aqueles na parte LN emparelhado (Figura 4B), mas foram incapazes de encontrar qualquer.

Para investigar a diferença de CNAs entre SM e LN do mesmo tumor, foram comparados os perfis genômicos de SM emparelhado e amostras de LN em cada caso. Um exemplo representativo é mostrado na Figura 4C, D e E. O SM emparelhado e amostras LN partilhada um padrão semelhante de aberração genómico no cromossoma 8 (Figura 4D), sugerindo que ambas as porções foram derivados a partir da mesma origem clonal. No entanto, observou-se o ganho do cromossoma 14 apenas em SM, mas não nos NL (Figura 4E). Estes resultados sugerem que as células tumorais nas porções SM e LN deste caso foram relação clonal, mas composta por subpopulações geneticamente heterogêneas.

Foram também analisadas clonalidade genômica e heterogeneidade em porções SM e LN de outros casos. Entre os outros 8 casos, 5 mostraram um padrão semelhante de aberração genômica em ambos SM e LN (Figura S3), o que sugere que as porções SM e LN emparelhados destes casos foram clonalmente relacionada. Além disso, 4 dos 5 casos mostraram uma diferença significativa nos padrões de perfil genômico entre SM e LN (Figura S3), sugerindo que esses casos também foram compostas de sub-populações geneticamente heterogêneas.

Comparação de perfis genômicos entre metastático e não metastático SMGC

Desde diferenças estatisticamente significativas foram detectadas nas frequências de CNAs entre SM emparelhado e porções LN (Figura 4B), a hipótese de que subpopulações transportando metástase relacionadas CNAs podem estar presentes na SM bem como a porção de LN SMGC metastático. Portanto, o próximo compararam as frequências de CNAs na porção SM de SMGCS metastáticos (12 casos) com os de SMGCS não-metastáticos (15 casos), e descobriu que os ganhos em 11q13, 11q14, 11q22 e 14q32 foram detectados com maior frequência em metastático SMGCS do que em SMGCS não-metastáticas (Figura 5A e Tabela 2). Também comparamos as frequências de alto nível aberrações no número de cópias, tais como a amplificação e de supressão, entre os dois grupos, e descobriu que a amplificação de 17q21 foi detectada com maior frequência em SMGCS metastáticas do que em SMGCS não-metastáticos (Tabela 3 e Tabela S1) . Estes resultados sugerem que os ganhos em 11q13, 11q14, 11q22, 14q32 e 17q21 na amplificação estão envolvidos na metástase de LN SMGCS.

A região comum mínima de 17q21 na amplificação continha 5 genes listados na Tabela 3. Desde ERBB2 , um oncogene conhecido [26], [27], [28], foi incluído na lista, foi realizada análise imuno-histoquímica da superexpressão ERBB2 em todos os 27 casos. Como mostrado na Figura 5B, a amplificação casos com 17q21 exibiram coloração forte para ERBB2 em SM, ao passo que um caso sem amplificação não o fez. Além disso, ERBB2 superexpressão foi significativamente associada com 17q21 amplificação (Tabela 4), sugerindo que a amplificação ErbB2 e superexpressão podem estar envolvidos na metástase LN de uma proporção de SMGCS.

Discussão

É amplamente Aceitam-se que um tumor surge a partir de uma única célula. No entanto, como ele progride para um estágio avançado ainda está sendo debatido. Os primeiros estudos de colo-rectal e os cancros pancreáticos levou a uma noção de que o desenvolvimento e a progressão destes cancros estão associados com a acumulação de aberrações cromossómicas, referidos como o modelo de tumorigénese de múltiplos passos [29], [30]. Por exemplo, as aberrações genómicas dos genes APC, KRAS, SMAD4 e TP53 estão envolvidos na sequência adenoma-carcinoma do cólon em [29]. No entanto, esses estudos concentraram-se em apenas uma proporção de genes relacionados com o tumor, e negligenciado o papel da maior parte dos outros genes. Além disso, este modelo não foi capaz de avaliar a importância da heterogeneidade genômica intratumoral para o desenvolvimento e progressão tumoral. Por outro lado, os estudos recentes levou ao estabelecimento de um outro modelo, o modelo designado evolução clonal [7], [9], [10]. Neste modelo, um único clone evolui para várias subpopulações distintas através da acumulação de diversas anormalidades genéticas. A população predominante pode ser substituído por subpopulações distintas dentro da mesma massa tumoral através dos efeitos de pressão de selecção do meio ambiente e /ou a fase de progressão tumoral. Como consequência, várias populações de células geneticamente heterogéneos podem coexistir em uma única massa de tumor. A evidência de heterogeneidade genética intratumoral associada com a evolução clonal foi obtido por uma variedade de tumores sólidos, incluindo o cancro da próstata [14], o esófago de Barrett [31], do cancro do ovário [32], [33], o cancro do colo do útero [34], o cancro da mama [15], [35], neuroblastoma [36], câncer pancreático [13], [37], e cancro colorectal [38]. Curiosamente, em um estudo do cancro da próstata metastático letal, não ANC especificamente relacionada com o local de metástases foram encontrados [14]. Da mesma forma, em um estudo de carcinoma do ovário seroso de alto grau, não houve evidência de uma relação entre a aquisição de resistência à cisplatina e CNA específicas [39]. Estes resultados sugerem que o modelo de tumorigénese de múltiplos passos, em que as aberrações específicas desempenhar papéis importantes no desenvolvimento e progressão do tumor, nem sempre representa a maneira pela qual os tumores adquirem o seu carácter maligno. No presente estudo, inicialmente a hipótese de que a aquisição da CNA (s) específica pode ser importante para a invasão submucosa. No entanto, não fomos capazes de encontrar qualquer CNAs que eram mais frequentes em SM do que na amostra MU emparelhado. Além disso, também não houve diferença significativa quanto ao número de CNAs nas porções MU e SM emparelhados. No entanto, verificou-se que a maioria dos SMGCS foram feitos de subpopulações clonalmente-relacionados, mas geneticamente distintos, o que sugere que a evolução clonal pode ocorrer durante a progressão do cancro gástrico. Tomados em conjunto, embora o número de casos examinados estava limitada, os nossos resultados sugerem que a geração de diferentes subpopulações geneticamente em vez de aquisição de CNA específica na porção MU pode ser importante para o processo de invasão submucosa. Com base nestas descobertas, propomos um modelo hipotético para o processo de SM invasão e metástase de câncer LN gástrico precoce (Figura 6). Para confirmar esta hipótese, serão necessários mais estudos com amostras maiores.

Nossos dados indicam que SMGCS são compostas de sub-populações geneticamente heterogêneas são importantes no contexto da pesquisa do câncer gástrico e tratamento, pois a heterogeneidade do tumor faz com que o desenvolvimento de drogas eficazes difíceis. Desde ANC genómicas ter um impacto sobre os perfis de expressão de genes em vários cancros [16], [21], [40], [41], [42], [43], é possível que cada uma das subpopulações geneticamente distintas dentro da mesma tumor pode ser diferente em ambos os comportamentos biológicos e resposta a drogas antineoplásicas, incluindo agentes de direccionamento molecular. Cooke et ai. propuseram que o esclarecimento de diferentes subpopulações genéticas dentro de um único tumor permitiria terapia eficaz empregando um agente específico visando uma aberração genômica comum ou agentes combinados visando as aberrações cromossômicas únicas em cada uma das distintas subpopulações [39]. Esta estratégia pode também aplicável ao tratamento do cancro gástrico.

Entre os 23 casos analisados, 15 mostraram uma relação clonal entre as porções MU e SM. Além disso, 13 dos últimos 15 casos também mostrou diferenças no CNAs entre as duas regiões, o que sugere que a evolução clonal frequentemente ocorre na fase inicial da carcinogênese gástrica. A relação entre as amostras MU e SM emparelhados nos outros 8 casos sem CNAs comum ainda não está claro. Duas possíveis explicações para isso pode ser sugerido. Uma delas é que os tumores nas porções emparelhados, que não têm CNAs comuns, desenvolvidos de forma independente. A outra é que as porções emparelhadas partilhadas outros tipos de aberrações genéticas, tais como mutações e translocações, que não podem ser detectados através de array CGH. Neste último caso, a próxima geração de sequenciamento pode ser útil para analisar tais relações.

Neste estudo, os ganhos em 11q13, 11q14, 11q22 e 14q32, e amplificação em 17q21, foram mais frequentes na porção SM de SMGCS metastáticas do que naqueles de SMGCS não-metastáticos. Curiosamente, os ganhos em 11q13 e 14q32 estão supostamente envolvidos na metástase hepática de câncer de cólon [38]. Portanto, estes dados sugerem que o ganho em 11q13 e 14q32 pode estar envolvida na metástase de cancros gastrointestinais. Cromossoma 17q21 abriga um oncogene potente, ERBB2. Associação de expressão ERBB2 com as características clínico-patológicas do câncer gástrico tem sido investigada em vários estudos [44], [45], [46], [47], [48], [49]. No entanto, a influência da superexpressão ERBB2 em LN metástase diferiram entre os estudos [44], [46], [47]. No presente estudo, apesar de o número limitado de SMGCS examinados, todos aqueles com amplificação e sobreexpressão ERBB2 mostrou linfonodo metástases. Um estudo mais aprofundado, utilizando um número maior de SMGCS serão obrigados a avaliar a importância dessa tendência.

Informações de Apoio
Figura S1.
Casos mostrando ambas as aberrações cromossômicas comuns e diferentes entre as porções MU e SM. Os painéis da esquerda mostram padrões comuns de aberrações cromossômicas em MU e SM para cada caso. O centro e painéis da direita mostram diferentes padrões de aberração genômica entre as duas partes em cada caso
doi:. 10.1371 /journal.pone.0022313.s001
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Figura S2.
Casos mostrando ambas as aberrações cromossômicas comuns e diferentes entre as porções MU e SM. padrões comuns e diferentes de aberração genômica entre MU e SM para cada caso são mostrados
doi:. 10.1371 /journal.pone.0022313.s002
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Figura S3.
Casos mostrando ambas as aberrações cromossômicas comuns e diferentes entre as porções SM e LN. Os painéis da esquerda mostram padrões comuns de aberração genômica entre SM e LN para cada caso. O centro e painéis da direita mostram diferentes padrões de aberração genômica entre as duas partes em cada caso
doi:. 10.1371 /journal.pone.0022313.s003
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Tabela S1.
amplificações recorrentes e exclusões em SMGCS.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0022313.s004
(DOC)

Reconhecimentos

Agradecemos Misuzu Taguchi, Yoko Miyanari e Tsuyoshi Iwao por sua excelente assistência técnica

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