Финансирование:. Это исследование была поддержана грантами от Национального научного фонда природы Китая (№ 30872964, № 30772461). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
S100 белки наибольшая подгруппа в EF-руки Ca 2 + -связывающим семейства белков и характеризуются их сотовом и паттернов экспрессии тканеспецифических. Эти белки, как известно, регулируют внутриклеточные процессы, такие как переход клеточного цикла и клеточного роста, дифференцировки и перистальтики [1]. Уникальной особенностью этих белков является то, что отдельные члены локализованы в специфических клеточных отсеков, из которых некоторые из них способны перенести на Ca 2+ активации [2], [3]. При транслокации, эти белки могут трансдукции Са сигнал 2+ во временной и пространственной образом, взаимодействуя с различными S100 белка конкретных целей. Интересно отметить, что большинство генов S100 расположены в кластере гена на хромосоме человека 1q21, участок частых хромосомных аномалий [4]. Эта ассоциация предполагает связь между хромосомными аномалиями и дерегулирования экспрессии генов S100 в различных опухолях. До настоящего времени, многие члены семьи S100 были идентифицированы, связаны с развитием опухоли и метастазирование [5], [6]. Однако точные роли и важности S100 белков в развитии и продвижении рака плохо изучены. Понимание биологической функции (ы) S100 белков будет зависеть от идентификации белковых мишеней S100. До сих пор, несколько возможных целевых белков, в том числе глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы, аннексина II, аннексина VI, аннексина XI, кальдесмона и CacyBP /SIP, как было показано, взаимодействуют с белками S100 в пробирке Клеточные линии и животные <бр> <р> клетку рака желудка линии MKN45, который оказался самым низким экспрессию CacyBP /SIP в нашем предыдущем исследовании [12], была сохранена в нашей лаборатории. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 (Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной сыворотки теленка, пенициллин (100 ед /мл) и стрептомицина (100 мкг /мл) в СО <суб> 2-инкубатор (Forma Научная, Marjetta, Огайо, США). BALB /с голых мышей в возрасте 4-6 недель были предоставлены институтом рака Шанхай для Клетки высевали в 96-луночные планшеты при 2,5 × 10 3 клеток /лунку в среде RPMI 1640, содержащей 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки. Каждый образец имел три повторах. Среду заменяли на 2-дневными интервалами, в течение 6 дней. Клетки инкубировали с 50 мкл 0,2% МТТ в течение 4 ч при 37 ° С в 5% CO <югу> 2 атмосферы в. После МТТ инкубации 150 мкл аликвоты 100% ДМСО добавляли к каждой культуре для растворения кристаллов. Жизнеспособные клетки были подсчитаны каждый день путем считывания оптической плотности при длине волны 490 нм с использованием 96-планшет-ридер, BP800 (Dynex Technologies, Chantilly, VA). клоногенности Рост опухоли в голых мышах логарифмически растущих клеток (1 × 10 7 клеток) трипсином, ресуспендировали в 0,1. мл раствора Хенкса D', и вводят в шейку hypodermia каждого бестимусных голых мышей. Затем мышей контролировали для объема опухоли, общего состояния здоровья, а также общего веса тела. Размер подкожных массы опухоли измеряли с помощью штангенциркуля в течение пяти недель. Объем опухоли вычисляли по следующей формуле: 0,5 × длина × ширина 2. Каждая экспериментальная группа состояла из пяти мышей. эндогенная экспрессия S100A6 при раке желудка клеточная линия MKN45 эффекты S100A6 на CayBP /SIP-опосредованных бета-catenin деградации
в Ca 2 + -зависимая образом [5], [7].
<р> Calcyclin-связывающий белок (CacyBP /SIP), белок 30 кДа идентифицировали на основании его способности взаимодействовать с S100A6 в Ca 2 + -зависимая образом в асцитной опухоли Эрлиха (EAT) клетки [8], ранее считалось как сопротивление множественной лекарственной (MDR) в молекуле о связанных рака желудка в нашей лаборатории [9]. Благодаря использованию моноклональных антител против CacyBP /SIP [10], мы показали, что избыточная экспрессия CacyBP /SIP ингибирует пролиферацию и tumorgenesis почечных раковых клеток [11]. Дальнейшие исследования предположили, что CacyBP /SIP подавляет рост рака желудка [12]. Несмотря на этот прогресс, влияние S100 белков на CacyBP /SIP при раке желудка остаются неясными. Кроме того, CacyBP /SIP также установлено, что компонентом убиквитинирование комплекса посредством связывания Siah1 и SKP1 [13]. И эта лигаза была описана регулировать деградацию нефосфорилированном -катенина [13].
<Р> CacyBP /SIP может связывать S100, Siah1 и SKP1 разными диапазонами. Было показано, что N-концевой области (аа 1-80) из CacyBP /SIP, чтобы иметь сродство к Siah1. C-концевой области CacyBP /SIP (aa178-229), как известно, образуют альфа-спирали; этот домен может взаимодействовать с S100 белков, в том числе S100A6 [14]. Skp1 связывающий домен не пересекается с области связывания S100 и Skp1 связывается с средней части (aa78-155) из CacyBP /SIP [15], [16]. Для наблюдения эффектов S100 белков на биологическом поведении CacyBP /SIP в рак желудка, эукариотических экспрессирующих векторов для дикого типа CacyBP /SIP и его усеченной мутанта, лишенного S100 белок-связывающий домен (CacyBP /SIPΔS100) были успешно построены и эффективно выражены в MKN45 клетках. МТТ, FACS анализ, клоногенному анализ и опухоли ксенотрансплантата эксперимент проводили для оценки эффектов CacyBP /SIP на рост клеток и онкогенеза и в пробирке
и В естественных условиях
. Результаты этих исследований могут способствовать выяснению воздействия S100 белков на биологическом поведении CacyBP /SIP в раковых клетках желудка.
Материалы и методы
естественных условиях онкогенеза исследования в. Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных Четвертого военного медицинского университета (разрешение номер: 11016) путем. Все операции проводили под пентобарбиталнатрием наркозом, и было сделано все возможное, чтобы свести к минимуму страдания.
Иммунофлуоресценции окрашивание
<р> Клетки высевали на покровные очищаемых и фиксировали 95% -ным спиртом в течение 20 мин при комнатной температура. Клетки на покровных стеклах промывали PBS и пропитывали в течение 10 мин с 0,5% Тритон Х-100 в PBS. Клетки инкубировали с анти-S100A6 антителом (разбавление 1:2000) после блокирования с 3% бычьего сывороточного альбумина в течение 1 ч. Затем клетки инкубировали с ФИТЦ-конъюгированное антитело против мышиных IgG (Santa Cruz Biotech., Санта Круз, США) и установлены на предметные стекла со смесью глицерина и поливинилового спирта, содержащего DABCO (1,4- diazobicylo- [2,2 , 2,] - октан). Иммунофлуоресценции анализировали с MRC-1024 Лазерный сканирующий конфокальный Imaging System (Bio-Rad).
Конструкция плазмид и трансфекция клеток
<р> олигонуклеотидных праймера, содержащих Eco RI
или Eco RV
сайт рестрикции были синтезированы, соответственно, для амплификации последовательности CDS из CacyBP /SIP или C-концевую делецию (aa178-229) мутанта CacyBP /SIP (Присоединение AF_314752). Эти два праймера: 5 'gggaattcgaatatggcttcagaagagcta 3' (смысловой) и 5 'gcgatatctcaaaattccgtgtctcctttg 3' (антисмысловой); 5 'gggaattcgaatatggcttcagaagagcta 3' (смысловой) и 5 'ccgatatcacacaatataagaactgta 3' (антисмысловой), соответственно. Условия ПЦР были: 5 мин при 94 ° С в течение первоначальной денатурации, а затем 35 циклов 45 сек при 94 °, 45 сек при 60 ° С, и 60 сек при 72 °, с конечным удлинением 10 мин при 72 ° С. Длины продуктов ПЦР 687 п.о. для CDS, и 534 пар оснований для C-концевую делецию. Каждый продукт ПЦР был вырезан с EcoR
I и EcoR
ограничение V переваривание и клонировали в расщепленный аналогично PFLAG-CMV. Новые векторы были названы PFLAG-CacyBP (дикого типа) и PFLAG-ΔS100 (CacyBP /SIPΔS100). Эти вставки последовательности были подтверждены с помощью секвенирования ДНК.
<Р> трансфекции клеток проводили с Липофектамином 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA), как описано производителем. В кратком изложении, клетки высевают и выращивают до 70-90% слияния без антибиотиков. Затем они были трансфицированы 1 мкг PFLAG-CacyBP или PFLAG-ΔS100. Через 24 часа после трансфекции, G418 (350 мг /мл) добавляли в культуральную среду для отбора трансфицированных клеток. Смешанные клоны размножали в течение еще 6 недель. Клетки, трансфицированные пустым вектором, PFLAG-CMV, были использованы в качестве отрицательного контроля. Эти стабильные клеточные линии были названы MKN45-CacyBP, MKN45-ΔS100 и MKN45-PFLAG для дикого типа, усеченные и отрицательных трансфектантов управления соответственно.
Co-иммунопреципитации
<р> Трансфектанты MKN45 были промывали в PBS, собирали и лизировали на льду в буфере, содержащем 20 мМ Трис-HCl (рН 7,5), 8 мМ MgCl <суб> 2, 150 мМ NaCl, 0,2 мМ EGTA, и 1% Нонидет Р-40. Экстракты центрифугировали при 12000 оборотах в минуту в течение 25 мин при 37 ° С в микроцентрифуге. Супернатанты использовали для анализа иммунопреципитации после добавления ингибиторов протеазы (10 мг /л лейпептина, 5 мг /л апротинина, 20 мг /л соевого ингибитора трипсина, 1 мМ фенилметилсульфонилфторида) и количественно оценивали по методу Брэдфорда. Супернатанты инкубируют с 30 мкл белка A /G-сефарозе и 1 мкг несвязанного антитела в течение 1-3 ч при 37 ° (предварительной очистки). Несвязанные фракции затем инкубировали с сывороткой, содержащей антитела против CacyBP /SIP в течение 1,5 ч при 4 ° С. Затем смесь инкубировали с дополнительным белком A /G-сефарозой в течение ночи при 4 ° С. Затем смолу промывают три раза в буфере, содержащем 20 мМ Tris-HCl (рН 7,5) и 150 мМ NaCl, дважды в буфере, содержащем 20 мМ Трис-HCl (рН 7,5) и 500 мМ NaCl, и, наконец, в 20 мМ Трис -HCl при рН 7,5. Все буферы, которые были использованы были дополнены с ингибиторами протеазы. Смола и связанные белки солюбилизировали в буфере для образцов SDS, кипятили в течение 5 мин при 98 °, и наносили на полиакриламидном геле SDS. Выражение S100A6 анализировали с помощью Вестерн-блоттинга с антителами против S100A6.
Вестерн-блот
<р> Клетки собирали и лизировали на льду в буфере, содержащем [50 ммоль /л Трис-Cl (рН 7,5), 150 ммоль /л NaCl, 0,2 ммоль /л ЭДТА, 1 ммоль /л PMSF и 1% NP 40], а затем количественно по методу Бредфорда. Мера 100 мкг лизатов подвергали электрофорезу в 10% SDS-PAGE и промокали на нитроцеллюлозной мембране. Мембраны блокировали 10% обезжиренным молоком при комнатной температуре в течение 2 ч и инкубируют с анти-CacyBP (1:1500) и анти-бета-актина антителом (Sigma, 1:5000) при 4 ° С в течение ночи. После трех промывок в течение 15 мин каждый раз в TBS с добавлением 0,1% Tween 20 (TBST), мембрану инкубировали с конъюгированным с пероксидазой козьим антителом против мышиного /кролика IgG-антител (Amersham-Pharmacia Biotech, Пекин, Китай) в течение 2 ч при комнатной температура. Усиленной хемилюминесценции (Amersham, Фрайбург, Германия) использовали для обнаружения.
Метил тиазолил тетразолия (МТТ)
клеточного цикла анализа
<р> Субконфлюэнтные клетки промывали ледяным PBS, суспендировали в 0,5 мл этанола, а затем выдерживали при температуре 4 ° с в течение 30 мин. Суспензию фильтровали через нейлоновое сито с 50 мкм, а содержание ДНК окрашивали ядер анализировали с помощью проточной цитометрии (EPICS XL, Coulter, Miami, FL). Профиль клеточного цикла анализировали с использованием многотактной-ДНК клеточного цикла анализируемом программного обеспечения. В пролиферативные индексы (PI) были рассчитаны следующим образом:. PI = (G2 + S) /(G1 + S + G2)
<р> Для измерения скорости распространения одной ячейки в пробирке
, были выполнены пластины клоногенному и мягкие агар клоногенные анализы [17]. Для пластины клоногенности, 1 × 10 3 клетки высевали в 9-см чашку и культивировали в среде RPMI 1640, в течение двух недель, чтобы обеспечить образование колоний. Колонии фиксировали в 70% этаноле, окрашивали раствором Гимза и подсчитывали. Для получения мягкого агара клоногенности, клетки отделяли и помещали в 0,3% агарозном геле с 0,5% -ном агарозном подкладке (1 × 10 3 /лунку в 24-луночный планшет). Число очагов > 100 мкм подсчитывали через 20 дней
репортер анализ гена
<р> Для анализа влияния CacyBP /SIP и CacyBP /SIPΔS100 на транскрипционной активности TCF /LEF, анализ репортерного гена был выполнен как описано ранее [18]. Если коротко, то клетки в 24-луночного планшета (50000 клеток на лунку) были котрансфицируют с или без PFLAG-CMV, PFLAG-CacyBP, PFLAG-ΔS100 и плазмиды-репортера, pTOPFLASH, содержащие дикого типа TCF /LEF сайты связывания с использованием Липофектамин 2000; ПРЛ-TK Renilla
люциферазы репортер служил в качестве контроля эффективности трансфекции. Активность люциферазы измеряли и количественно определяли с помощью люминометра с использованием двойного люциферазы репортерной системы анализа (Promega, Southampton, Великобритания). Эксперименты проводились в трех экземплярах и повторяли дважды. Результаты выражены как среднее соотношение между люциферазы светлячка активностью и рениллы активности люциферазы.
Статистический анализ
<р> Все данные были проанализированы с использованием статистического пакета программ SPSS (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс), и P
&л; 0,05 считалось статистически значимым. Значимость различий в частоте CacyBP /SIP-положительное окрашивание между соседними образцов опухолей и опухолей, были проанализированы с помощью теста хи-квадрат. Студенческая т
тест и один путь анализа расхождений с последующим многократными испытаниями сравнения Даннет были использованы для анализа других данных.
Результаты
<р> S100A6 был выбран в качестве модели для наблюдения эффекта S100 белков на биологическую функцию CacyBP /SIP. Эндогенная экспрессия S100A6 в клетку рака желудка линии MKN45 был впервые обнаружен с помощью Вестерн-блоттинга и иммунофлуоресценции окрашивания. Как показано на рис. 1A, была выражена S100A6 в MKN45 клетках. Иммунофлуоресценции окрашивание указывает на то, что S100A6 был в основном распространен в ядерной мембране очень мало найдено в ядерной плазме клеток MKN45 (рис. 1В).
Взаимодействие S100A6 и CacyBP /SIP в клетках рака желудка MKN45 <бр> <р> в предыдущем сообщении, CacyBP /SIP, который экспрессируется на относительно низком уровне в MKN45 клетках, широко выражена в нескольких различных типах желудочных линий раковых клеток [12]. Для того чтобы оценить взаимодействие между S100A6 и CacyBP /SIP, дикого типа и мутанта (aa178-229) CacyBP /SIP кДНК клонировали в вектор PFLAG-CMV и стабильно трансфицировали в клетки MKN45. Мы оценивали экспрессию CacyBP /SIP в этих стабильных клеточных линий с помощью Вестерн-блоттинга. Как показано на рис. 2A, FLAG-меченый CacyBP /SIP был обнаружен в дикого типа и мутантных CacyBP /SIP трансфектантов с анти-FLAG антителом, в то время как ни один сигнал не был обнаружен в клетках, трансфицированных пустым вектором
. <Р> Взаимодействие между S100A6 и CacyBP /SIP в трансфектант MKN45 клеток затем оценивали путем совместной иммунопреципитации. После инкубации с анти-антителом CacyBP, Иммунопреципитат были обнаружены S100A6 антителом. Как показано на рис. 2B, взаимодействие между S100A6 и дикого типа CacyBP /SIP наблюдался в лизатах MKN45-CacyBP клеток; Тем не менее, мутант CacyBP /SIP, который был усечен из aa178-229 области, получают небольшой сигнал в анализе с совместным иммунопреципитации. Таким образом, усеченный мутант CacyBP /SIP был назван CacyBP /SIPΔS100 и является полезным инструментом для исследования воздействия S100A6 на биологическое поведение CacyBP /SIP в раковых клетках желудка.
Влияние S100A6 на пролиферацию клеток индуцированный CacyBP /SIP в желудочном линии раковых клеток MKN45 в пробирке
<р> MTT и FACS анализы проводили для изучения влияния S100A6 на пролиферацию клеток, вызванной CacyBP /SIP в MKN45 ячейках в пробирке
. По сравнению с пустым вектором трансфектантов, MKN45-PFLAG, как дикого типа и CacyBP /SIPΔS100 трансфектантов значительно выявили снижение скорости пролиферации клеток МТТ-анализе ( P
≪ 0,05) (. Фиг.3А). Тем не менее, CacyBP /SIPΔS100 трансфектантов выставлены значительно более снизились темпы роста по сравнению с дикого типа CacyBP /SIP трансфектантов ( P
&л; 0,05).
<Р> Результаты анализа клеточного цикла по FACS аналогичным образом показывают, что избыточная экспрессия либо дикого или мутантного CacyBP /SIP снижает пролиферацию MKN45. Тем не менее, средние пролиферативные индексы (PI) клеток MKN45-ΔS100 (0,19 ± 0,03) был ниже, чем у клеток MKN45-CacyBP (0,29 ± 0,02) ( P
&л; 0,05) (. Рис 3B) , Взятые вместе, эти данные убедительно свидетельствуют о том, что дикого типа CacyBP /SIP ингибирует пролиферацию клеток MKN45, в то время как CacyBP /SIPΔS100 усиливает это ингибирование пролиферации.
Эффекты S100A6 на онкогенеза, вызванного CacyBP /SIP в MKN45 линия клеток желудка в пробирке
и в естественных условиях
<р> Анкоридж-независимый рост является важной характеристикой экстракорпорального
опухолевого роста. Таким образом, мы исследовали тормозится ли повышающая регуляция экспрессии /SIP CacyBP рост клеток MKN45 в средствах массовой информации и мягком агаре. Как показано на рис. 4A и B, выражение /SIP-CacyBP привело к значительному снижению роста MKN45 клеток в анализе формирования колонии, со средним сокращением на 32,1% в средних и 62,0% в мягком агаре ( P
≪ 0,05) , Тем не менее, трансфекция CacyBP /SIPΔS100 привело к еще большему снижению темпов роста со средним снижением темпов 84,2% в средних и 82,8% в мягком агаре ( P
&л; 0,01).
<Р> чтобы подтвердить этот эффект в естественных условиях
мы вводили подкожно MKN45-CacyBP, MKN45-ΔS100 и MKN45-PFLAG клетки к шее hypodermia голых мышей. Через три недели, средний объем опухоли в каждой группе был значительно отличается от других. В 5 й недели, средний объем опухоли в группе MKN45-PFLAG был 776,9 ± 90,9 мм 3, что значительно больше, чем у группы MKN45-CacyBP (578,9 ± 51,2 мм 3 ) ( P
&л; 0,05), и даже больше, чем у группы MKN45-ΔS100 (364,9 ± 71,9 мм 3) ( P
&л; 0,05) (рис. 4С).
<р> в качестве компонента убиквитинлигазы комплекса, CacyBP /SIP участвует в деградации нефосфорилированным β-catenin с помощью связывание SKP1 и Siah1. Таким образом, экспрессия бета-catenin было обнаружено косвенно оценить влияние S100 на Siah1-CacyBP /SIP-SKP1 unbiquitin лигазы. Во-первых, со-иммунопреципитации анализ показал, что усеченный мутант CacyBP /SIP связывают как Skp1 и Siah1 (рис. 5А), предполагая S100A6 не влияет на формирование Siah1-CacyBP /SIP-SKP1 unbiquitin лигазы комплекса. Во-вторых, β- белок катенин в клетках MKN45-ΔS100 значительно уменьшилось, по сравнению с клетками MKN45-CacyBP, а с каких-либо изменений не произошло в мРНК (рис. 5б). Кроме того, так как β-катенина необходим в качестве кофактора для активации фактора транскрипции, TCF /LEF, мы определили влияние CayBP /SIPΔS100 на /LEF активности Tcf с использованием временной трансфекции гена-репортера анализы. Выражение CacyBP /SIPΔS100 привело к снижению /LEF активности Tcf, чем дикого типа CacyBP /SIP (рис. 5в). MG132, ингибитор протеасомы, может устранить эффект как дикого типа CacyBP /SIP и CacyBP /SIPΔS100 на /LEF деятельности Tcf. Взятые вместе, мы сделать вывод, что S100A6 может повлиять на CayBP /SIP-опосредованного &beta-catenin деградации посредством взаимодействия с CayBP /SIP.
Обсуждение
<р> S100 белки семейства приобрели интерес из-за их дифференциальной экспрессии в опухоли тканей и их участие в прогрессии рака и метастазов [19] - [22]. S100 белки взаимодействуют с некоторыми белками-мишенями в кальций-зависимой или кальций-независимым способом и далее регулировать функцию этих целей [5], [23]. CacyBP /SIP представляет собой новый целевой белок, который может взаимодействовать с S100 белков, в том числе S100A6, S100A1, S100B и S100P, но не к S100A4, кальбиндин D, парвальбумина или кальмодулин [8], [16]. Предыдущие работы в нашей лаборатории показали, что избыточная экспрессия CacyBP /SIP могут ингибировать пролиферацию и онкогенеза рака желудка и почечно-клеточного рака [11], [12]. Несмотря на этот прогресс, влияние S100 белков на CacyBP /SIP остаются расследоваться.
<Р> Для выяснения регуляции S100 белков на функции /SIP CacyBP, мы построили усеченную CacyBP /SIP мутант без белка S100-связывающего домена , так что мутантный белок не мог взаимодействовать S100 белков и сохраняет способность взаимодействовать с Siah1 и Skp1. В этом исследовании, эукариотические векторы экспрессии для дикого типа CacyBP /SIP и его усеченной мутанта были эффективно экспрессируется в клетках MKN45. Co-иммунопреципитации продемонстрировали взаимодействие между S100A6 и дикого типа CacyBP /SIP в MKN45 клетках. Тем не менее, CacyBP /SIPΔS100 показал небольшой сигнал посредством анализа со-иммунопреципитации, что указывает на слабое или никакого взаимодействия с S100A6. МТТ, FACS анализ, клоногенному анализ и опухоли ксенотрансплантата эксперимент в голых мышей были выполнены, чтобы проверить эффект дикого и мутантного CacyBP /SIP на рост клеток и онкогенеза и в пробирке
и в пробирке <бр>. Эти эксперименты показали, что избыточная экспрессия CacyBP /SIP могут ингибировать пролиферацию и туморогенез из MKN45 рака желудка клеток. Важно отметить, что клетки, трансфицированные CacyBP /SIPΔS100 выставлены более интенсивные эффекты по отношению к трансфектантов дикого типа, предполагая, что S100 белки могут негативно регулировать ингибирование пролиферации клеток, индуцированной CacyBP /SIP в клеток рака желудка.
<Р> механизм, применяемый по S100A6 для модуляции CacyBP функции /SIP может лежать в белковых взаимодействий и функций. CacyBP /SIP идентифицируется участвовать в убихитинизация и деградации -катенина [24] - [28]. β- катенин было установлено, что избыточно экспрессируется или активируется в пролиферирующих клетках и во многих опухолях [29] - [31]. Фукусима и др. [32] обнаружили, что CacyBP /SIP-нокаутных клетки обнаруживают нарушение (и-catenin деградации дефектная G1 клеточного цикла, контрольной точки, указывая, что β-катенин путей деградации опосредовано CacyBP /SIP определяет существенную контрольную точку для развития тимоцитов и прогрессии клеточного цикла. Наши предыдущие исследования также показали, что CacyBP /SIP ингибирует рост и пролиферацию клеток рака желудка частично через деградацию бета-catenin. Является ли S100 регулирует CacyBP /SIP-опосредованной убиквитинлигаза сохраняет неизвестно. Накопленные доказательства показали, что несколько членов семейства белков S100 могут регулировать активация их белков-мишеней [33], [34]. недавно обнаруженная дрожжей гомолог CacyBP /SIP, SGT1 не только взаимодействует с S100 белками кальция регулируемым способом, но и ассоциируется с Skp1 с образованием SKP1 /cullin1 /F -.. коробка убиквитинлигаза комплекс [35] было обнаружено, что S100A6 может ингибировать фосфорилирование SGT1 путем казеинкиназой II, чтобы влиять на активность [36] в нашем настоящем эксперименте мы также определили, что CacyBP /SIPΔS100 сохраняют способность ассоциировать с Skp1 и Siah1, предполагая молекулу S100 не может повлиять на образование Siah1 /Skp1 /CacyBP убиквитинлигазы комплекса. Тем не менее, β-катенина белка, без изменения уровня мРНК в CacyBP /SIPΔS100 трансфицированных клеток заметно ниже, чем трансфектант клеток дикого типа. Транскрипционной активности TCF /LEF, целевого гена бета-катенина, был уменьшен в сочетании с мутантной CacyBP /SIP без привязки S100, по сравнению с диким CacyBP /SIP. Accoding к этим результатам, мы допускаем, что белок S100 может отрицательно регулировать активность Siah1-CacyBP /SIP-SKP1 убиквитинлигазы взаимодействием с CacyBP /SIP. Таким образом, блокирование сочетание S100 и CacyBP /SIP может способствовать бета-catenin деградации, приводит к ингибированию пролиферации раковых клеток. Это предположение может быть частично поддержана Ли и др, что в клетках с уменьшенным уровнем S100A6 количество бета-catenin уменьшается [26]. Эти результаты согласуются с данными относительно повышающей регуляции S100 белков и недостаточной деструкции бета-catenin в опухоли и пролиферирующие клетки [37]. Кроме того, CacyBP /SIP было показано взаимодействие с тубулина и ERK1 /2 и играют важную роль в перестроек цитоскелета, клеточной дифференцировки или дегенерации [38] - [42].
Выводы
<р> S100A6 белка негативно регулирует CacyBP /SIP-опосредованное ингибирование пролиферации клеток рака желудка, частично за счет эффекта на деградацию β-катенина и транскрипционной активации TCF /LEF. Тем не менее, основные механизмы регуляции S100A6 на белка убихитинизация и другие функции через CacyBP /SIP-зависимого пути требуют дальнейшего изучения.
DeNovix объявляет победителя конкурса на спектрофотометр / флуорометр Platinum DS11 FX +
Пищевые реакции регулируются микробиомом кишечника,
COVID-19:как выглядит болезнь
Не бойтесь колоноскопии
Микробы могут предсказать летальный исход у пациентов с COVID-19 на ИВЛ
Микробиомы кишечника и полости рта предсказывают тяжесть COVID-19
Исследователи надеются, что анализ крови, который точно диагностирует фибромиалгию, станет доступен в течение пяти лет.
У исследователей из Университета штата Огайо есть доказательства того, что образцы крови могут надежно обнаружить фибромиалгию, заболевание, которому часто ошибочно ставят диагноз из-за его общих симп
Генетика может влиять на состав микробиома больше, чем факторы окружающей среды.
Исследователи, изучающие мышей в Израильском технологическом институте Техниона, обнаружили, что на микробиом гораздо больше влияет генетика, чем среда материнского рождения. Катерина Кон |
Исследователи управляют видами бактерий в кишечнике с помощью диеты
Ученые из Медицинской школы Стэнфордского университета показали, что, изменяя диету на мышиной модели, можно отдать предпочтение приживлению одного штамма бактерий перед другими. Предостав