PLoS One: LAPTM4B-35, a rákkal kapcsolatos Gene társul rossz prognózissal TNM szakaszai I-III gyomorkarcinóma Patients

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

Lizoszóma kapcsolódó transzmembrán fehérjét 4β -35 (LAPTM4B-35), tagja az emlős 4-tetratransmembrane spanning fehérje szupercsalád, leírták, hogy overexpresszióját számos rák. Azonban a kifejezés a LAPTM4B-35 és a szerepe a progressziójában gyomorrák (GC) továbbra is ismeretlen. A cél az volt, hogy vizsgálja LAPTM4B-35 expresszió GC, potenciális relevanciáját klinikai és patológiai paraméterek és szerepe LAPTM4B-35 alatt a gyomor kialakulásában. Katalógusa

Módszerek katalógusa

A jelen tanulmányban, paraffin -embedded példányok GC (n = 240, köztük 180 párosított példányok) és 24 páros friss fagyasztott szöveteket vizsgáltak. QRT-PCR és immunhisztokémiai (IHC) elemeztük expressziójának LAPTM4B-35 GC. A hatások a LAPTM4B-35 GC sejtburjánzást, migrációs és behatolás határoztuk túltermelése és akciós vizsgálatokban. Katalógusa

Eredmények katalógusa

IHC azt mutatta, hogy LAPTM4B-35-ben kifejezve 68,3% (123/180 ) GC szövetek, míg 16,1% (29/180) az párosított szomszédos jóindulatú gyomor- szövetek ( P katalógusa = 0,000). LAPTM4B-35 katalógusa mRNS szintek GC szöveteket is szignifikánsan emelkedett képest a párosított szomszédos rákos szövetekben ( P katalógusa = 0,017). Túlexpressziója LAPTM4B-35 szignifikáns összefüggést mértékű megkülönböztetést, mélysége invázió, lymphovascularis invázió és a nyirokcsomó áttétek ( P katalógusa < 0,05). A Kaplan-Meier túlélési görbék feltárta, hogy a betegek LAPTM4B-35 expresszió volt jelentős csökkenést a teljes túlélés (OS) szakaszosan I-III GC betegeknél ( P
= 0,006). A többváltozós elemzés megmutatta magas expresszióját LAPTM4B-35 volt független prognosztikai tényezője OS szakaszában I-III GC betegek ( P katalógusa = 0,025). Katalógusa

Következtetés katalógusa

Ezek a megállapítások azt jelzik, hogy LAPTM4B-35 fokozott expressziója összefüggésbe hozható a GC progresszió és a rossz prognózissal, és így szolgálhat egy új predikciós markere prognózis GC betegeknél.

bevezető hivatkozás: Cheng X, Zheng Z, Bu Z, Wu X , Zhang L, Xing X, et al. (2015) LAPTM4B-35, a rákkal kapcsolatos Gene társul rossz prognózissal TNM szakaszai I-III gyomorrákos betegek. PLoS ONE 10 (4): e0121559. doi: 10,1371 /journal.pone.0121559 katalógusa

Akadémiai Kiadó: Ken-ichi Mukaisho, Shiga University of Medical Science, JAPAN katalógusa

Beérkezett: április 10, 2014; Elfogadva: február 12, 2015; Megjelent: április 7, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Cheng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír és az azt támogató információs fájlokat. katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatott Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 30471677 és 81141024) és a Nemzeti Key Technology R &D Program (pekingi Városi Tudományos és Technológiai Project Z121100007512010). A finanszírozók hozzájárult a tanulmány design, teljesítmény, reagensek, anyagok, adatok elemzése és döntés közzétételére. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomor rák a harmadik leggyakoribb daganatos Kínában és a vezető oka a rák okozta halál Kínában [1]. A legtöbb GC betegek már előrehaladott állapotban van a diagnózis idején (stádium III és IV), ezáltal a prognózis gyászos, annak ellenére, hogy javítja a sebészeti és az adjuváns kezelési megközelítés [2-5]. Függetlenül attól, hogy a kemoterápia és a tervezett kuratív műtét, közel 60% -ánál a GC fejleszteni megismétlődik, és végül elpusztulnak az áttétes betegség [6]. GC progresszió multifaktoriális és többlépéses folyamat, amelyben az öröklött és a környezeti tényezők játszanak lényeges szerepet [7]. Korábbi megfigyelések azt mutatják, hogy a klasszikus biomarkerek és átmeneti rendszerek, a klinikai és patológiai, talán megvannak a maguk korlátai a klinikai alkalmazások és kikényszeríti, hogy új molekuláris biomarkerek előre jelezni képes a betegek gyógyulását és a kezelés [8, 9]. Katalógusa

lizoszóma-asszociált protein transzmembrán 4 beta (LAPTM4B) már eredetileg klónozták hepatocelluláris karcinómák (HCC-k) által Shao és munkatársai, amely található kromoszóma 8q22, egy régió gyakran felerősödik a mellrák és a HCC [10, 11]. Ez két fehérjét kódol, különböző molekulatömegű, 24 kDa és 35 kDa méretű fehérjék (LAPTM4B-24 és -35) négy feltételezett transzmembrán régiókat [12]. A lokalizáció LAPTM4B-35 kiderült, hogy nem csak a lizoszóma, hanem a plazma-membrán és a belső organellumok, mint a Golgi-készülék és endoszómák [13]. Leírták, hogy a LAPTM4B-35 széles körben kifejezve különböző típusú carcinoma. Korábbi jelentések jelezték, hogy overexpressziója LAPTM4B-35 kapcsolatban van a kedvezőtlen biológiai viselkedés és rossz prognózissal számos rák, így például mellrák, [14] HCC [15-17], epehólyag karcinóma [18, 19], a colorectalis rák [20] , epitheliális petefészekrák [21] és az endometrium karcinóma [22]. Azt is leírták, hogy allélikus változata LAPTM4B társult genetikai fogékonysága GC [23]. Sőt, overexpressziója LAPTM4B-35 által transzfekciója LAPTM4B cDNS elősegíti a sejtek proliferációját, a migráció, invázió a HCC xenograftok pucér egerekben és indukál multidrog rezisztencia [24]. Kiütése LAPTM4B RNS interferencia fordítva fordított összes ilyen rosszindulatú fenotípusos jellemzők HCC [24, 25]. Katalógusa

Azonban LAPTM4B-35 kifejezést, a jelentősége a klinikai és patológiai jellemzőit és biológiai szerepének LAPTM4B-35 GC továbbra sem tisztázott. A jelen tanulmányban célul tűztük ki, hogy azonosítani LAPMT4B-35 expresszió GC és annak lehetséges kapcsolatát klinikopatológiai jellemzők és prognosztikai jelentősége. Ezen túlmenően, az in vitro funkcionális vizsgálatot végeztünk jellemzésére biológiai hatásainak LAPTMEB-35 a gyomor tumorgenézisre. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai katalógusa

Minden betegnek írásbeli beleegyezését adta beszerzésének szövetminták, és a vizsgálati protokollt jóváhagyta a Klinikai Kutatási Etikai Bizottság a pekingi egyetem Cancer Kórház. katalógusa

az emberi gyomor szövetmintából

az összesen 240 (167 férfi és 73 nő, idősebb 22-87 év, és az átlagos életkor 60 év) formalin fixált, paraffinba ágyazott GC szövetekben, köztük 180 páros rákos, és kiegyenlített szomszédos jóindulatú gyomornyálkahártya szöveteket gyűjtötték GC átesett betegek gastrectomián Peking Egyetem Cancer Kórház 2003. januártól decemberig 2011. A klinikai és szövettani információkat mindegyik esetben is megfelelően gyűjtjük jóváhagyott intézményi előírásoknak. Az 1997-es UICC-TNM kritériumokat alkalmazott osztályozása gyomorrák. A medián követési időtartam óta a diagnózis idején 26,2 hónap (2,4-119,0 hónap). Összesen 112 (46,7%) beteg halt meg a követési időszak alatt. Katalógusa

Az immunhisztokémiai katalógusa

Paraffin szakaszok (4 um) viaszmentesített és rehydráltuk a fatest és etanol. Immunhisztokémiai vizsgálatot végeztünk a korábban leírtak [16], anti-LAPTM4B-35 antitestet (1: 200) (megajándékozott Pro. RL Zhou). Negatív kontrollként a metszeteket feldolgozni, mint az ugyanazt a protokollt, kivéve, hogy azokat egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C-blokkoló oldatban anélkül, hogy a primer antitesttel.

A expresszióját LAPTM4B-35 értékelték két tapasztalt patológusok (Y V és B Dong), akik egymástól függetlenül dolgoztak, és nem ismerték a betegek klinikai kimenetelt. Közötti eltérések megfigyelők találtak kevesebb, mint 10% -át a vizsgált diák és egyetértés született után további felülvizsgálatra. A festési értékelés csak használják a szemikvantitatív módszerek minősítette LAPTM4B-35 expresszió negatív és pozitív festett immunreaktív sejteket. Az arány a pozitivitást pontoztuk '' 0 "(< 10% pozitív tumorsejtek), '' 1" (10-50% pozitív tumorsejtek), és a '' 2 "(> 50% pozitív tumorsejtek). A festés intenzitását pontozni '0 "(nincs festés vagy gyengén foltos),' '1" (mérsékelt festés), vagy' '2 "(erős festés). Az összeg a festés intenzitása pontszám és a százalékos pontszám volt, hogy meghatározza a LAPMT4B expressziós szintek: 0-2, negatív kifejezés, 3-4, pozitív kifejeződése (14). A pozitív expresszió csak értékelték a szakaszok legalább 10% pozitív terület a daganatok.

Sejttenyésztés, LAPTM4B-35 expressziós plazmid és hCas9 /gRNA transzfekció

A gyomor rákos sejtvonalat (SGC- 7901, BGC-823, MGC-803, MKN-28 és AGS) DMEM-ben tenyésztjük (Wisent Inc., St-Bruno, QC, Kanada), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS) (Hyclone, Logan, UT, USA) és 100 egység /ml penicillinnel és 100 ng /ml sztreptomicinnel, 37 ° C-atmoszférában, 5% CO _{2. A pcDNA3 katalógusa. 0-AF katalógusa tartalmazza a teljes ORF LAPTM4B termelő LAPTM4B-35 fehérje megajándékozott Prof. RL Zhou [11]. A transzfekciós végeztük Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) alkalmazásával a gyártó protokollja. A pozitív sejt klónokat nyert antibiotikum szelekcióval G418-at (Gibco, Grand Island, NY), olyan koncentrációban, 800 ng /ml.}

hCas9 és gRNA vektort ütött Kínából Zebrahal Resource Center (CZRC). A teljes hossza Cas9 cDNS kiónoztunk pXT7 vektort és linearizált, és kupakkal mRNS-t szintetizálunk mMESSAGE mMACHINE mRNS transzkripciós szintézis kit (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornia, USA). A gRNA primer szekvenciák a következők voltak: menetirányú primer, 5'-TACGACTCACTATAGGGGGATGGTGCCGGTGCGGACAGTTT TAGAGCTAGAAATAGC-3 ', és reverz primer: 5'-AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'.The protokollt követte előző közzétett papír [26]. hCas9 mRNS-t (3 ng /ul) és gRNA (0,2 ng /ul) kotranszfektáltunk be SGC-7901 sejt végzett Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

RNS-izolálás, kvantitatív valós idejű reverz transzkripció PCR (qRT-PCR)

Teljes RNS-t extraháltunk TRIzol reagenssel (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), és reverz transzkripcióval cDNS-be a M-MLV reverz transzkriptáz (Promega, Madison, WI, USA) szerint a gyártó utasításai szerint. Real-time PCR-t végeztünk az ABI 7500 gyors, valós idejű PCR-rendszer (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornia, USA). β-aktin használtunk belső kontrollként. A primer szekvenciákat használják az alábbiak: LAPMT4B-35: menetirányú primer: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT-3 ', reverz primer: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; β-aktin: menetirányú primer: 5'-CCTGTGGCATCCACGAAACT-3 'reverz primer: 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'.

Cell proliferációs vizsgálati

A sejtproliferációt a sejteket megszámláljuk Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japán) szerint a gyártó protokollt. A térfogat 100 jil sejtszuszpenziót (3000 sejt per lyuk) inkubáltunk egy 96-lyukú lemezen (Costar, Corning, NY), 24, 48, 72, 96 óra hosszat. 10 pl, a CCK-8-oldatot adunk az egyes lyukakhoz, és inkubáljuk 3 órán át 37 ° C-on. Abszorbancia értékeket az összes mérőhelyeket ezután határozzuk meg 450 nm-en egy referencia hullámhossza 630 nm in Microplate Reader (Bio-Rad, USA). A kísérletet három párhuzamossal végzünk és kétszer megismételjük.

sebgyógyító assay

A sejtmigrációt mértük sebgyógyító assay által IncuCyte HD rendszer (IncuCyte ZOOM, Essen BioScience, USA). Sejteket szélesztettünk 96 mérőhelyes lemezeken a sűrűsége a 6 × 10 ^{4 sejt per lyuk. Sebe keresztül konfluens egyrétegű sejteket egy PIN blokk és a sejteket megmostuk 1 × PBS-sel, tenyésztettük DMEM közegben, 10% magzati borjúszérumot. Fényképeket sejtet rajzolódik a IncuCyte HD rendszer 4 óránként 2 külön régiót per is egy 10x objektív. Az értékek a 2 régiója esetében jól összeöntjük, és átlagoltuk minden 3 ismétlésben.}

Transwell inváziós vizsgálatból

A Transwell (8 mikrométer pórusméretű Cell Biolabs, USA) vizsgálatot alkalmazunk, hogy elemezzék sejtek invázióját szerint a gyártó utasításai szerint. 8 × 10 ^{4 sejteket helyezzük a felső kamrák szérummentes közegben, és az alsó kamrákat tele DMEM és 10% FBS. Az inkubálást követően 72 órán át 37 ° C-on, nem invazív sejtek a felső felületén a membránokat eltávolítjuk egy vattacsomóval. A membránokat metanollal fixáltuk 10 percig, és megfestettük 0,5% -os kristályibolya 10 percig. A sejteket az alsó a szűrő volt az öt, véletlenszerűen kiválasztott mikroszkópos nézetek megszámoltuk.}

Western-blot-analízis

A fehérje expressziós szintjeit GC sejtvonalak mértük Western blot analízissel. A sejteket lizáltuk előhűtött RIPA lízispufferben (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) tartalmazó proteáz inhibitor koktél (Roche, Basel, Svájc) 30 percig végzett centrifugálás után 15000 20 percig, a felülúszót kapunk. 50 ng fehérje extraktumokat elválasztottuk 10% SDS-poliakrilamid gél-elektroforézissel, és vittük át a 0,45 jim polivinilidén-difluorid (PVDF) membránra (Whatman, Németország). A membránt blokkoltuk 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük a blokkoló pufferrel (pH = 7,6), amely 5% zsírmentesített száraz tejet, majd inkubáljuk anti-LAPTM4B-35 antitestet (1: 800; tehetséges Prof. RL Zhou), 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán . Egér anti-humán β-aktin antitestet (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) alkalmaztunk belső kontrollként. Az immunreaktív sávokat tettük láthatóvá egy kemilumineszcenciás kimutatási rendszer (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

Statisztikai analízis

Chi-négyzet tesztet használtuk, hogy összehasonlítsuk a különbség LAPTM4B-35 fehérje expressziója között GC szövetek és a szomszédos rákos szövetekben. Feltétlen logisztikus regressziós analízis modelleket elemeztük közötti kapcsolatok LAPTM4B-35 expresszió és a klinikopatológiai paraméterek igazítani a nemi állapotát. A különbség a LAPMT4B-35 katalógusa mRNS expressziója között GC és a környező szövetek rákos elemeztük a Wilcoxon páros tesztet. Katalógusa

A teljes túlélés (OS) görbét a Kaplan-Meier módszerrel és elemzik a log-rank teszt. Relatív kockázatok (RR) kapcsolatos elhalálozás LAPTM4B-35 expresszió és egyéb prediktor változók alapján becsültük az egyváltozós Cox modell először. Többváltozós Cox modell is épültek megbecsülni RR LAPMT4B-35 expresszió. A statisztikai elemzéseket végeztünk SPSS szoftver statisztikai csomaggal (version 20.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). A kétoldalas P katalógusa értéke kisebb, mint 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikáns. Katalógusa

Eredmények katalógusa

Expression elemzése LAPTM4B-35 GC sejtvonalak GCk katalógusa

Először is megvizsgálta a kifejezés a LAPTM4B-35
RT-PCR 5 GC sejtvonalak (MGC-803, BGC-823, MKN-28, SGC-7901 és AGS), majd a feltárt annak fehérje expresszióját Western-blottal. Az eredmények azt mutatták, hogy LAPTM4B-35-ben kifejezve, az összes sejtvonal mind mRNS és fehérje szinten (1A ábra, felső és alsó panel), majd választottuk BGC-823, SGC-7901 sejtek a mi következő sejt funkció vizsgálatok.

LAPTM4B-35 katalógusa kifejezés is kimutatható volt 24 pár eltávolított GC példányok qRT-PCR-rel. Mint látható, a 1B ábra, a LAPTM4B-35 katalógusa expressziót GC szövetekben szignifikánsan magasabb volt, összehasonlítva a párosított szomszédos rákos szövetekben ( P katalógusa = 0,017) (1B ábra).

LAPTM4B-35 fehérje expressziót gyakran megfigyelhető az emberi GC katalógusa

Megvizsgáltuk a kifejezés LAPTM4B-35 GC és szomszédos rákos szövetek immunhisztokémiai analízis. LAPTM4B-35 nem fejezték ki normál gyomornyálkahártya (2A ábra), de expresszálódik a bél metaplázia, diszplázia lézió (Az adatokat nem mutatjuk be) és a tumor-sejtek, és főleg a lokalizált belül a citoplazmában vagy a sejtmembránon (2B ábra és a 2D -2H). LAPTM4B-35 gyakran megfigyelhető GC szövetekben képest kiegyenlített szomszédos jóindulatú nyálkahártya (68,3% vs. 16,1%, P katalógusa = 0,000) (1. táblázat). Katalógusa

közötti kapcsolat LAPTM4B-35 expresszió és klinikopatológiai jellemzők

viszonyát elemezte LAPTM4B-35 expresszió és klinikopatológiai jellemzőit GC betegeknél. Mivel a nemek, a tárgyak a mi tanulmány az eltérést (167 vs. 73, 2. táblázat), kiszámítottuk a kapcsolatot logisztikus regressziós analízis és beállítani a nemi állapotát. LAPTM4B-35-ben gyakrabban figyeltek rosszul differenciált GC képest mérsékelt jól differenciált is (65,4% vs. 57,9%, P katalógusa = 0,017). Továbbá LAPTM4B-35 expresszió kapcsolódó lymphovascularis invázió ( P katalógusa = 0,000), mélysége invázió ( P katalógusa = 0,016) és a nyirokcsomó-áttétek ( P = katalógusa 0,029) (2. táblázat).

LAPTM4B-35 expressziójának és prognózisa GC betegek

3, ábra ábrázolja az elemzés LAPTM4B-35 expresszió és a klinikai eredményeket. Kaplan-Meier túlélési görbék azt mutatta, hogy a tendencia a rövidebb teljes túlélés (OS) GC betegek LAPTM4B-35 pozitív kifejezés, mint a negatívak ( P katalógusa = 0,064, log-rank = 3,425) (ábra 3A). Miután betegeket az TNM I-III vagy nem szenvedő betegeknél lypmphovascular invázió betegek LAPTM4B-35 pozitív kifejeződése szignifikánsan rövidebb, mint az OS negatívak ( P katalógusa = 0,006 és P = 0,001 katalógusa -kal) (3B ábra és 3D). katalógusa

Az eredmények egy- és többváltozós Cox modellek OS GC betegek TNM stádium I-III mutatott, hogy mélysége invázió (RR = 3,103, 95% CI: 1,427 -6,748; P katalógusa = 0,004), nyirokcsomó áttét (RR = 3,015, 95% CI: 1,552-5,858; P katalógusa = 0,001) és LAPTM4B-35 expressziós szint (RR = 2,249 , 95% CI: 1,242-4,072; P katalógusa = 0,007) szignifikánsan befolyásolta a túlélést a GC volt (3. táblázat); továbbá LAPTM4B-35 pozitív kifejeződése volt független prognosztikai faktor (RR = 1,897, 95% CI: 1,041-3,457; P katalógusa = 0,025). Nyirokcsomómetastasis (RR = 2,665, 95% CI: 1,362-5,213; P katalógusa = 0,001) függetlenül is jósolta OS (3. táblázat). Katalógusa

LAPTM4B-35 mozdítani a tumorsejtek proliferációját

Annak érdekében, hogy megvizsgálják, milyen hatása LAPMT4B-35 a funkció a sejtbiológia, két sejtvonalak alakultak. BGC-823, SGC-7901 sejteket bemutató viszonylag alacsonyabb vagy magasabb szintű expresszióját LAPTM4B-35 külön-külön kiválasztott túltermelése és akciós assay (1A ábra). Az első, sejtvonal BGC-823-AF overexpresszáló LAPTM4B-35 stabilan alakult, és Mock használtunk kontrollként ezen sejtvonal. Másodszor, LAPTM4B-35-ben stabilan leütött towarding az SGC-7901 (hCas9 /gRNA) a II-es típusú fürtözött rendszeresen interspaced rövid palindrom ismétlődések (CRISPR) rendszer, és az eredmények alapján azonosítottuk Western blot (ábra 4A). Katalógusa

a sejtproliferációt assay mértük CCK-8 sejt számlálás kit. Az abszorbancia értéke a BGC-823-AF sejtek 72 óra után terjed szignifikánsan magasabb volt, mint a szülő-sejtek és MOCK-sejtek, és az eredmény az volt éppen szemközt a kopogás le a LAPTM4B-35 SGC-7901 sejtek (ábra 4B).

LAPTM4B-35 fokozott a tumorsejtek migrációját és invázióját képesség

Miután transzfekcióval pcDNA3.0-AF és hCas9 /gRNA végeztünk sebgyógyító assay, hogy elemezze a migrációs képességét LAPTM4B-35 túlzott expresszió /knockdown gyomorrák sejtek (5A). Az eredmények azt mutatták, hogy a LAPTM4B-35 mozdítani BGC-823 (BGC-823-AF) sejtmigráció képest BGC-823 és Mock ( p
< 0,05), és a down-regulációja LAPTM4B-35 expresszió visszafordítani ezt a jelenséget SGC-7901 sejtek ( P katalógusa < 0,05, 5B). katalógusa

ennek a hatása LAPTM4B-35 a invazív tumorsejtek vizsgáltuk a transzwell assay (6A). Azt találtuk, hogy az elfoglalt sejtek száma szignifikánsan magasabb volt a LAPTM4B-35-transzfektált BGC-823 sejteket és az alsó az akciós SGC-7901 sejteket, mint a saját kontroll sejtekben, illetve ( p
< 0,05, 6B). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy LAPTM4B-35 elősegíti a migrációs és behatolás gyomorrák sejtek. Katalógusa

Vita katalógusa

GC egy igen heterogén betegség, ahol még hasonló klinikai és patológiai jellemzői vezethet eltérő eredményekre [27, 28], jelezve, hogy a TNM stádium rendszerben GC megvan a korlátozást, és kikényszeríti, hogy keressen új molekuláris biomarkerek előre jelezni képes páciens eredményét és a kezelést. Az onkogén LAPTM4B-35 kromoszómán helyezkedik el 8q22, és az erősítés a DNS kópiaszám kromoszómán 8q22 gyakori megállapítás GC szerint a korábbi tanulmány (nem közölt adatok). Az emlőrák, túltermelése LAPTM4B-35 és 8q22 amplifikáció hozzájárult de nove katalógusa kemorezisztenciájának hogy antraciklineket és megengedő metasztatikus kiújulás [29]. Katalógusa

Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, LAPTM4B-35
expresszió 24 gyomorrák és azok párosított jóindulatú gyomorfekély sebészeti mintákban qRT-PCR és megállapította, hogy LAPTM4B-35
mRNS expressziós szint a gyomorrák szignifikánsan emelkedett képest, hogy a párosított jóindulatú szöveti csoport. Továbbá immunhisztokémiai analízis 180 pár gyomorrák megmutatta LAPTM4B-35-ben túltermelõdik GC szövetekben (68,3%), mint a páros jóindulatú nyálkahártya (16,1%). LAPTM4B-35 elősegíti a tumor növekedését és a tolerancia metabolikus és genetikai stressz indukálása útján autofágia [30, 31]. Jelen vizsgálatunkban, a funkció a LAPTM4B gyomorkarcinómában vizsgáltuk in vitro vizsgálatokban. Túlexpressziója LAPTM4B-35 BGC-823 sejtekben is nőtt sejtek életképességének szérummentes tenyésztési körülmények is. Ha ez a jelenség okozza autophag szükséges, hogy meg kell vizsgálni. Katalógusa

Továbbá, azt is elemezte korrelációja LAPTM4B-35 expresszió klinikopatológiai paraméterek gyomorrákban. Nagy LAPTM4B-35 expresszió szignifikáns korrelációt mértékű megkülönböztetést, lymphovascularis invázió mélysége invázió és a nyirokcsomó-áttétek, ami arra utal, hogy a LAPTM4B-35 lehet széles körben aktiválódik a gyomorrák és lehet fontos szerepet játszanak a gyomor carcinogenesis és a tumor progresszióját. Mivel a tumor lymphovascularis invázió és metasztázis lymphonode rendkívül fontos klinikai prognosztikai mutatók daganat kiújulásának, tettünk egy túlélési analízis. Kaplan-Meier görbék rétegezni LAPTM4B-35 expresszió és a tumor stádiuma vagy lymphovascularis invázió során kiderült, hogy LAPTM4B-35 pozitív betegek szignifikánsan rosszabb OS képest LAPTM4B-35 negatív tulajdonságok TNM szakaszaiban I-III vagy anélkül lymphovascularis invázió alcsoport. Többváltozós Cox regressziós analízis ebben az alcsoportban kimutatták, hogy az összes vizsgált tényezők, LAPTM4B-35 expresszió független prognosztikai tényező gyomorrákos betegek TNM állapotok I-III, de a színpadi IV. Ésszerű, mert a beteg szakaszban IV nem képes fogadni radikális működés és lehet kezelni számos más különböző palliatív kezelések, amelyek mindegyike hatással van a prognózist. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy a hajlam LAPTM4B-35 specifikusan jósolja a legtöbb agresszív és halálos típusú gyomorrák esetekben korai és anélkül disztális metasztázis vagy anélkül lymphovascularis invázió.

A mi jelen tanulmányban azt találtuk, hogy LAPTM4B -35 pozitív kifejezés általában korrelál rosszabb prognózissal GC betegek rétegezni tumorstádium vagy lymphovascularis invázió. A funkció LAPTM4B-35 GC-ben tovább végzett in vitro vizsgálatban. Túlexpressziója LAPTM4B-35 BGS-823 sejtekben mutatott jelentős növekedése a sejtproliferációt, migrációt és inváziót, és down-regulációja LAPMT4B-35 ólmozott az ellenkező eredményt. Zhou et al. megmutatta, hogy LAPTM4B-35 fokozott expressziója elősegíti a sejt túlélését, deregulált proliferációját és migrációját a HCC-sejtek [12]. A legújabb vizsgálatok szerint LAPTM4B-35 társult jelentősen rosszabb klinikai kimenetelt számos emberi rosszindulatú betegségek, mint például a HCC [16], metasztázisos petefészek-tumor [32], az epehólyag [19, 33], extrahepatikus cholangiocarcinoma [34], és az endometrium rák [22]. Ezek a felhalmozott bizonyítékok támasztják jelenlegi megállapítások, jelezve, hogy LAPTM4B-35 fokozott expressziója lehet fontos szerepet játszanak a malignus transzformáció és progressziójának GC.

A molekuláris mechanizmusok LAPTM4B-35 tumor progressziójának tulajdonságok még mindig nem tisztázott. Egyes korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy LAPTM4B-35 szükséges a lizoszóma homeosztázis, a savasodás és a funkció, és hogy LAPTM4B-35 teszi tumorsejtek rezisztensek lizoszóma-közvetített sejthalál által kiváltott környezeti és a genotoxikus stresszek [30, 31]. Túlexpressziója LAPTM4B-35 képes aktiválni egyes proto-onkogének, mint a c-myc, c-jun és c-fos [35], és elősegíti a proliferáció, migráció, és invázió bizonyos humán rákos vonalak, amelyek növelnék a növekedés és áttét a HCC xenograftok pucér egerekben [36]. Kapcsolódó vizsgálat azt sugallta, hogy LAPTM4B javíthatja a sejtproliferációt vagy a túlélési bevonása révén a szignáltranszdukciós útvonal, például a foszfatidilinozitol 3-kináz-protein-kináz B útvonal. És LAPTM4B-35 kölcsönhatásba léphet bizonyos rákkal kapcsolatos fehérjék, mint például a protein foszfatáz 2A és a protein-kináz-C [10]. Li és munkatársai megállapították, hogy LAPTM4B-35 motiválja multidrog rezisztencia rákos sejtek előmozdításával efflux és az anti-apoptosis aktiválásával PI3K /Akt szignalizáció [24], jelezve, hogy LAPTM4B-35 lehet egy új cél a terápia. A funkcionális szerepe és mechanizmusa LAPTM4B GC szükség további vizsgálatra. Katalógusa

Összefoglalva, a jelenlegi tanulmány azt mutatja, hogy LPTM4B-35 túltermelése játszik fontos szerepet elősegíti a sejtek szaporodása, migrációja és inváziót gyomorrák. LAPTM4B-35 pozitív kifejeződése gyomorrákban szövetekben összefüggésben van a rossz eredményt, és kiderült, hogy egy független prognosztikai faktor alcsoportban GC beteg TNM szakaszaiban I-III vagy anélkül lymphovascularis invázió. Így LAPTM4B-35 jelenthetnek hasznos biomarker megjósolni prognózis bizonyos alcsoportja GC. Ezen túlmenően, mivel a szerepe LAPTM4B-35 korlátozásában lizoszóma-közvetített sejthalál és előmozdítása autofágia jelentős túlélési hatást a rákos sejtekben, és LAPTM4B-35-t túlzott kifejezve egy nagy arányban gyomorrák, lehet, hogy egy hasznos cél kezelésére az altípus csoport gyomorrák. katalógusa

alátámasztó információk
S1 adatcsomag. Egyedi eredmények relatív mRNS-LAPTM4B-35 expresszió, sejt szaporodása, migrációja és invázió, a túlélés pathients klinikopatológiai features.
(Excel)
doi:10.1371/journal.pone.0121559.s001
(XLS)

Acknowledgments

We köszönöm Guoshuang Feng (kínai Center for Disease Control and Prevention) az ő kedves segítséget az adatok statisztikai. katalógusa

• PLoS One: a receptor túlexpressziója előrehaladott glikáció végtermékeinek (RAGE) van rossz prognózissal társul gyomorrákban
• PLoS One: Hatása Intratumoralis expressziós szintet fluoropirimidint metabolizáló enzimek a kezelés kimenetelét adjuváns S-1 terápia gyomorrákban