PLOS ONE: LAPTM4B-35, um câncer relacionado ao gene, que está associada com mau prognóstico em estágios TNM I-III de câncer gástrico Pacientes

Abstract

Fundo

proteína transmembranar Lisossomo associada 4β-35 (LAPTM4B-35), um membro da 4-tetratransmembrane abrangendo superfamília de proteínas de mamíferos, tem sido relatada a ser sobre-expresso em vários tipos de câncer. No entanto, a expressão de LAPTM4B-35 e o seu papel na progressão do cancro gástrico (GC) permanece desconhecida. O objetivo deste estudo foi investigar LAPTM4B-35 expressão no GC, o seu potencial relevância para os parâmetros clínico-patológicas e papel da LAPTM4B-35 durante a carcinogênese gástrica.

Métodos

No presente estudo, parafina -embedded espécimes com GC (n = 240, incluindo 180 amostras emparelhadas) e 24 pares de tecidos congelados frescos foram analisados. qRT-PCR e imuno-histoquímica (IHC) foram utilizados para analisar a expressão de LAPTM4B-35 em GC. Os efeitos de LAPTM4B-35 sobre a proliferação de células de GC, migração e invasão foram determinadas por ensaios de superexpressão e knockdown.

Resultados

IHC demonstraram que LAPTM4B-35 foi expressa em 68,3% (123/180 ) dos tecidos GC, enquanto em 16,1% (29/180) dos seus tecidos gástricos não cancerosas adjacentes emparelhados ( P
= 0,000). LAPTM4B-35
níveis de mRNA em tecidos de GC foram significativamente elevados quando comparados com os seus tecidos não cancerosos adjacentes emparelhados ( P
= 0,017). Superexpressão de LAPTM4B-35 foi significativamente associada com o grau de diferenciação, profundidade de invasão, invasão linfática e metástases em linfonodos ( P Art < 0,05). curvas de sobrevida de Kaplan-Meier revelou que os pacientes com LAPTM4B-35 expressão tiveram uma diminuição significativa na sobrevida global (OS) em estágios pacientes GC I-III ( P
= 0,006). A análise multivariada mostrou alta expressão de LAPTM4B-35 foi um fator prognóstico independente para OS no estágio I-III pacientes GC ( P
= 0,025).

Conclusão

Esses achados indicam que a sobre-expressão LAPTM4B-35 pode estar ligada à progressão de GC e de prognóstico reservado, e, assim, podem servir como um novo marcador de previsão do prognóstico em pacientes GC

citação:. Cheng X, Zheng Z, Z Bu, Wu X , Zhang L, Xing X, et al. (2015) LAPTM4B-35, um câncer relacionado ao gene, que está associada com mau prognóstico em estágios TNM I-III gástricas pacientes com câncer. PLoS ONE 10 (4): e0121559. doi: 10.1371 /journal.pone.0121559

Editor do Academic: Ken-ichi Mukaisho, Universidade Shiga de Ciência Médica, JAPÃO

Recebido: 10 Abril de 2014; Aceito: 12 de fevereiro de 2015; Publicação: 07 de abril de 2015

Direitos de autor: © 2015 Cheng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento: Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China (No. 30471677 e 81141024) e National Key Tecnologia R & D Programa (Pequim Ciência e Tecnologia Municipal. projeto Z121100007512010). Os financiadores não contribuiu para o desenho do estudo, o desempenho, reagentes, materiais, análise de dados e decisão de publicar

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico é o terceiro câncer mais comum na China e a principal causa de morte relacionada ao câncer na China [1]. A maioria dos pacientes GC já estão em estágio avançado no momento do diagnóstico (fase III e IV), tornando o prognóstico para ser sombrio, apesar de melhorar a abordagem de tratamento cirúrgico e adjuvante [2-5]. Independentemente de quimioterapia e cirurgia curativa destina-se, quase 60% dos pacientes com GC desenvolver recorrência e, eventualmente, morrer de doença metastática [6]. progressão GC é um processo multifatorial e várias etapas em que herdou e fatores ambientais desempenham um papel vital [7]. Observações anteriores indicam que os biomarcadores clássicos e sistemas de classificação, com base nos achados clínicos e patológicos, pode ter suas limitações em aplicações clínicas e impelem para desenvolver novos biomarcadores moleculares que podem prever o resultado e tratamento do paciente [8, 9].

associada ao lisossoma transmembranar proteína beta 4 (LAPTM4B) foi originalmente clonado no carcinoma hepatocelular (HCC) por Shao et al, que localizado no cromossomo 8q22, uma região frequentemente amplificados em câncer de mama e HCC [10, 11]. Ele codifica duas proteínas com diferentes pesos moleculares, 24 kDa e 35 kDa proteínas (LAPTM4B-24 e -35) com quatro regiões transmembranares putativos [12]. A localização de LAPTM4B-35 foi encontrada não só no lisossoma, mas também na membrana plasmática e organelas internas, tais como aparelhos e endossomas [13] de Golgi. Tem sido relatado que LAPTM4B-35 foi amplamente expressa em vários tipos de carcinomas. Relatórios anteriores indicavam que a sobre-expressão de LAPTM4B-35 está associado a comportamentos biológicos desfavoráveis ​​e mau prognóstico em muitos tipos de câncer, como câncer de mama [14], o HCC [15-17], carcinoma da vesícula biliar [18, 19], o cancro colorectal [20] , carcinoma epitelial do ovário [21] e carcinoma do endométrio [22]. Também tem sido relatado que a variação alélica de LAPTM4B foi associada com a susceptibilidade genética de GC [23]. Além disso, a sobre-expressão de LAPTM4B-35 por transfecção de ADNc LAPTM4B promove a proliferação celular, migração, invasão em xenoenxertos de HCC em ratinhos nus e induz a resistência a múltiplas drogas [24]. Knockdown de LAPTM4B por interferência de RNA inversamente inverteu todas estas características fenotípicas malignas em HCC [24, 25].

No entanto, LAPTM4B-35 expressão, a sua relevância para as características clínico-patológicas e papel biológico de LAPTM4B-35 em GC permanecem obscuros. No presente estudo, teve como objetivo identificar LAPMT4B-35 expressão em GC e sua relação potencial com características clinicopatológicas, e seu significado prognóstico. Além disso, os ensaios in vitro funcionais foram realizados para caracterizar os efeitos biológicos da LAPTMEB-35 carcinogénese gástrica.

Materiais e Métodos

Ética

Todos os pacientes assinaram o consentimento informado para a obtenção de amostras de tecido, e o protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Clínica da Peking University Hospital do Câncer.

amostras de tecido gástrico humano

Um total de 240 (167 machos e 73 fêmeas, idade 22-87 anos, ea idade média era de 60 anos) formol fixa embebidos em parafina tecidos GC, incluindo 180 emparelhado cancerosos e não cancerosos combinado tecidos da mucosa gástrica adjacentes, foram coletadas de pacientes submetidos à gastrectomia GC no Hospital Cancer Universidade de Pequim a partir de janeiro de 2003 a dezembro 2011. a informação clínica e histológica para cada caso também foi coletada de acordo com as diretrizes institucionais aprovados. Os 1997 critérios UICC-TNM foram utilizados para a classificação dos cancros gástricos. A mediana de duração de acompanhamento desde o momento do diagnóstico foi de 26,2 meses (variação de 2.4-119.0 meses). No total, 112 (46,7%) pacientes morreram no período de acompanhamento.

Imunohistoquímica

As secções de parafina (4 mm) foram desparafinados e reidratados em xilema e etanol. A imuno-histoquímica foi realizada como previamente descrito [16] utilizando-LAPTM4B-35 anticorpo anti (1: 200) (oferecida por Zhou Pro RL.). Como controlos negativos, as secções foram processados ​​tal como o mesmo protocolo excepto que foram incubadas durante a noite a 4 ° C em solução de bloqueio, sem o anticorpo primário.

A expressão de LAPTM4B-35 foi avaliada por dois patologistas experientes (Y Sun e B Dong), que trabalhou de forma independente e estavam cegos para os resultados clínicos dos pacientes. Discrepâncias entre os observadores foram encontrados em menos de 10% das lâminas examinadas, e um consenso foi alcançado após uma análise mais aprofundada. avaliação coloração era apenas utilizado os métodos semi-quantitativos para classificar LAPTM4B-35 expressão como células imunorreactivas manchadas negativos e positivos. A proporção de positividade foi pontuado como '' 0 "(< 10% de células positivas de tumor), '' 1" (10-50% de células tumorais positivas), e '' 2 "(> células tumorais positivas de 50%). A intensidade da coloração foi classificada como '' 0 "(sem coloração ou fracamente coradas), '' 1" (coloração moderada), ou '' 2 "(coloração forte). A soma da pontuação de intensidade de coloração ea pontuação percentual foi utilizado para definir os níveis LAPMT4B expressão: 0-2, expressão negativa e 3-4, expressão positiva (14). A expressão positiva avaliada apenas pelas secções com pelo menos 10% de área positiva de tumores.

cultura celular, LAPTM4B-35 plasmídeo de expressão e hCas9 /gRNA transfecção

linhas celulares de cancro gástrico (SGC- 7901, BGC-823, MGC-803, MKN-28 e AGS) foram cultivadas em DMEM (Wisent Inc., St-Bruno, QC, Canadá) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS) (Hyclone, Logan, UT, EUA) e 100 U /ml de penicilina e 100 ug /ml de estreptomicina a 37 ° C numa atmosfera de 5% de CO _{2. O pcDNA3
.
0-AF contendo toda a ORF de LAPTM4B produzir proteína LAPTM4B-35 foi oferecida por Prof. RL Zhou [11]. A transfecção foi realizada com Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com o protocolo do fabricante. clones de células positivas foram obtidas por selecção de antibiótico com G418 (Gibco, Grand Island, NY, EUA) a uma concentração de 800 ng /ml.}

e hCas9 gRNA vector foram obtidos a partir de China Zebrafish Resource Center (CZRC). O comprimento total do ADNc Cas9 foi clonado no vector e linearizada pXT7, tampado e mRNA foi sintetizado utilizando mMessage mMACHINE ARNm kits de transcrição de síntese (Life Technologies, Carlsbad, Califórnia, EUA). As sequências dos iniciadores gRNA utilizados foram: iniciador de sentido directo, 5'-TACGACTCACTATAGGGGGATGGTGCCGGTGCGGACAGTTT TAGAGCTAGAAATAGC-3 ', e o iniciador reverso: 5'-protocolo AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'.The foi seguido pelo trabalho publicado anterior [26]. hCas9 ARNm (3 ng /mL) e gRNA (0,2 ng /mL) foram co-transfectados em células SGC-7901 realizada com Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

isolamento de ARN, quantitativo em tempo real transcrição reversa PCR (qRT-PCR)

O RNA total foi extraído usando o reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) e reversamente transcrito em ADNc utilizando M-MLV de transcriptase reversa (Promega, Madison, WI, EUA) de acordo com a as instruções do fabricante. PCR em tempo real foi realizado utilizando o Fast-PCR em tempo real do sistema ABI 7500 (Life Technologies, Carlsbad, Califórnia, EUA). β-actina foi utilizado como um controlo interno. As sequências dos iniciadores utilizados estão listados abaixo: LAPMT4B-35: iniciador directo: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT-3 ', iniciador inverso: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; β-actina: iniciador directo: 5'CCTGTGGCATCCACGAAACT-3 'primer reverso: 5'GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'

A proliferação celular ensaio

A proliferação celular foi medida pela Cell Counting Kit-8. (CCK-8) (Dojindo, Japão) de acordo com o protocolo do fabricante. Um volume de 100 ul de suspensão de células (3000 células por poço) foi incubada numa placa de 96 poços (Costar, Corning, NY) durante 24, 48, 72, 96 horas. 10 ul da solução de CCQ-8 foi adicionada a cada poço e incubou-se durante 3 horas a 37 ° C. Os valores de absorvância de todos os poços foram então determinada a 450 nm com um comprimento de onda de referência de 630 nm no leitor de microplacas (Bio-Rad, EUA). O experimento foi realizado em triplicado e repetida duas vezes.

-cicatrização de feridas ensaio

A migração celular foi medida por ensaio de cicatrização pelo sistema IncuCyte HD (IncuCyte ZOOM, Essen BioScience, EUA). As células foram semeadas em placas de 96 poços a uma densidade de 6 x 10 ^{4 células por poço. A ferida foi feita através de células monocamada confluente com um bloco de pinos e as células foram lavadas com 1 x PBS, cultivadas em meio DMEM com soro bovino fetal a 10%. De fotografias de células foi visualizada usando o sistema de HD IncuCyte em intervalos de 4 horas a partir de 2 regiões separadas por poço usando uma objectiva de 10x. Valores a partir de 2 regiões de cada cavidade foram reunidas e média de todos os 3 repetições}

ensaios de invasão Transwell

O Transwell (tamanho de poro 8um; Célula Biolabs, EUA). Ensaio foi utilizado para analisar a invasão de células de acordo com as instruções do fabricante. 8 × 10 ^{4 células foram colocadas nas cavidades superiores em meios isentos de soro, e as câmaras inferiores foram cheias com DMEM e FBS a 10%. A seguir à incubação durante 72 horas a 37 ° C, as células não invasivas sobre a superfície superior das membranas foram removidas com um cotonete. As membranas foram fixadas com metanol durante 10 minutos e coradas com violeta de cristal a 0,5% durante 10 min. As células na parte inferior do filtro foram de cinco vistas microscópicas seleccionados aleatoriamente foram contadas.}

análise Western blot

Os níveis de linhas celulares de expressão de proteína de GC foram medidos por análise de Western Blot. As células foram lisadas em tampão de lise RIPA pré-arrefecida (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) contendo mistura de inibidores de protease (Roche, Basileia, Suíça) durante 30 minutos depois da centrifugação a 15.000 g durante 20 min, obteve-se o sobrenadante. 50 ug de extractos de proteína foram separados por electroforese em gel de poliacrilamida-SDS a 10%, e transferidos para o difluoreto de polivinilideno 0,45 (PVDF) membrana (Whatman, Alemanha). A membrana foi bloqueada durante 1 hora à temperatura ambiente com tampão de bloqueio (pH 7,6) contendo 5% de leite em pó desnatado, depois incubados com anti-anticorpo LAPTM4B-35 (1: 800; dotado pelo Prof. Zhou RL) a 4 ° C durante a noite . Rato anti-humana anticorpo β-actina (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) foi aplicado como um controlo interno. bandas imuno foram visualizadas usando um sistema de detecção de quimiluminescência (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

A análise estatística

O teste do qui-quadrado foi utilizado para comparar a diferença de LAPTM4B-35 expressão da proteína entre GC tecidos e tecidos não cancerosos adjacentes. modelos de análise de regressão logística não condicional foram utilizados para analisar as relações entre a expressão LAPTM4B-35 e os parâmetros clínico ajustados pelo status de gênero. A diferença de expressão LAPMT4B-35
mRNA entre GC e os tecidos não cancerosos adjacentes foi analisada pelo Wilcoxon combinado de teste de par.

A sobrevida global (OS) curva foi calculado com o método de Kaplan-Meier e analisados ​​com o teste de log-rank. riscos relativos (RR) de morte associado com LAPTM4B-35 expressão e outras variáveis ​​de previsão foram estimados a partir do univariada de Cox modelo em primeiro lugar. modelos multivariados de Cox também foram construídos para estimar o RR para a expressão LAPMT4B-35. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o pacote de software estatístico SPSS (versão 20.0; SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). A valor P
de dois lados inferior a 0,05 foi considerado como significância estatística.

Resultados

Análise da expressão de LAPTM4B-35 em linhas de células de GC e GC

Nós primeiro lugar, analisou a expressão de LAPTM4B-35
por RT-PCR em 5 linhagens de células GC (MGC-803, BGC-823, MKN-28, SGC-7901 e AGS), e depois detectada a sua a expressão da proteína pela mancha de Western. Os resultados mostraram que LAPTM4B-35 foi expressa em todas as linhas de células, tanto de ARNm e os níveis de proteína (Fig 1A, superior e o painel inferior), em seguida, nós escolhemos BGC-823 e células SGC-7901 para as seguintes testes da função celular.

LAPTM4B-35
expressão foi também detectada em 24 pares de amostras GC ressecados por qRT-PCR. Como podemos ver na figura 1B, a LAPTM4B-35
expressão em tecidos GC foi significativamente elevado quando comparado com os tecidos não cancerosos adjacentes emparelhados ( P
= 0,017) (Fig 1B).

LAPTM4B-35 expressão da proteína foi frequentemente observada em GC
humanos

Nós investigamos a expressão de LAPTM4B-35 no GC e os tecidos não cancerosos adjacentes por meio de análise imuno-histoquímica. LAPTM4B-35 não expressa na mucosa gástrica normal (Figura 2A), mas expresso na metaplasia intestinal, lesão displasia (dados não foram apresentados) e células tumorais, e principalmente localizada no citoplasma ou na membrana celular (Figura 2B e 2D -2H). LAPTM4B-35 frequentemente observada em tecidos GC em comparação com a mucosa combinado adjacente não cancerosos (68,3% vs. 16,1%, P
= 0,000) (Tabela 1).

Relação entre LAPTM4B-35 expressão e características clinicopatológicas

Foi analisada a relação entre LAPTM4B-35 expressão e características clínico-patológicas de pacientes do GC. Como o sexo, os objetos em nosso estudo tem seu desvio (167 vs. 73, Tabela 2), foram calculados a sua relação através da análise de regressão logística e ajustados para o status de gênero. LAPTM4B-35 foi mais frequentemente observada GCs pouco diferenciados em comparação com os moderados bem diferenciados (65,4% vs. 57,9%, P
= 0,017). Além disso, LAPTM4B-35 expressão foi associada com a invasão linfovascular ( P
= 0,000), profundidade da invasão ( P
= 0,016) e metástases em linfonodos ( P
= 0,029) (Tabela 2).

LAPTM4B-35 expressão e prognóstico de pacientes GC

Figura 3 mostra a análise da LAPTM4B-35 expressão e resultados clínicos. curvas de sobrevida de Kaplan-Meier mostrou que havia uma tendência de sobrevida global mais curto (OS) em pacientes com GC LAPTM4B-35 expressão positiva em comparação com as negativas ( P
= 0,064, log-rank = 3,425) (Fig 3A). Depois que os pacientes foram estratificados por TNM I-III ou pacientes sem invasão lypmphovascular, os pacientes com LAPTM4B-35 expressão positiva mostrou significativamente menor OS que aquelas negativas ( P = 0,006
e P = 0,001
., respectivamente) (Figura 3B e 3D)

Os resultados dos modelos uni e multivariada de Cox para OS de pacientes GC em TNM Fase I-III exibiu que a profundidade de invasão (RR = 3,103, IC 95%: 1.427 -6,748; P
= 0,004), metástase ganglionar (RR = 3,015, IC 95%: 1,552-5,858; P
= 0,001) e 35-LAPTM4B nível de expressão (RR = 2,249 , IC 95%: 1,242-4,072; P
= 0,007) afetou significativamente a sobrevivência de GC, respectivamente (Tabela 3); Além disso, LAPTM4B-35 expressão positiva foi um fator prognóstico independente (RR = 1,897, IC 95%: 1,041-3,457; P
= 0,025). metástase ganglionar (RR = 2,665, IC 95%: 1,362-5,213; P
= 0,001) também previu independentemente OS (Tabela 3)

LAPTM4B-35 promoveu a proliferação de células tumorais

a fim de investigar o efeito da LAPMT4B-35 na função da biologia das células, duas linhas celulares foram estabelecidos. células BGC-823 e SGC-7901 apresentando expressão relativamente menor ou maior de LAPTM4B-35 foram selecionados separadamente para superexpressão e ensaio knockdown (Fig 1A). Na primeira linha celular, BGC-823-AF-35 que sobre-expressam de forma estável LAPTM4B foi estabelecido, e MOCK foi usado como o controlo para esta linha celular. Em segundo lugar, LAPTM4B-35 foi batido de forma estável para baixo towarding a SGC-7901 (hCas9 /gRNA) pela II agrupados regularmente intercaladas curtas repete palindr�icas sistema (CRISPR) Tipo, e os resultados foram identificados por Western blot (Fig 4A).

ensaio de proliferação celular foi medida por CCK-8 kit de contagem de células. O valor de absorção das células BGC-823-AF de 72 horas após a divulgação foi significativamente maior do que as células-mãe e células Mock, eo resultado foi em frente ao derrubar de LAPTM4B-35 em células SGC-7901 (Fig 4b).

LAPTM4B-35 migração de células tumorais melhorada e capacidade de invasão

Após transfecção com pcDNA3.0-AF e hCas9 /gRNA, foi realizado ensaio de cicatrização de feridas para analisar a capacidade de migração de LAPTM4B-35 sobre-expressão /células knockdown câncer gástrico (Fig 5A). Os resultados mostraram que LAPTM4B-35 promovido BGC-823 migração celular (BGC-823-AF), quando comparado com BGC-823 e MOCK ( P Art < 0,05), e para baixo-regulação da LAPTM4B-35 expressão pode inverter o fenómeno em células de SGC-7901 ( P
< 0,05, figura 5B)

por conseguinte, o efeito de LAPTM4B-35 sobre a capacidade de invasão de células tumorais foi estudada utilizando o ensaio Transwell. (Figura 6A). Verificou-se que o número de células invadidas foi significativamente maior nas células BGC-823 LAPTM4B-35-transfectadas e inferior nas células SGC-7901 knockdown, do que nas células de controlo, respectivamente ( P
< 0,05, Fig 6B). Estes resultados sugerem que LAPTM4B-35 promove a migração e invasão das células cancerosas gástricas.

Discussão

GC é uma doença altamente heterogêneo onde até características clínicas e patológicas semelhantes levam a resultados distintos [27, 28], indicando que o sistema TNM de GC tem sua limitação e impulsionar a busca de novos biomarcadores moleculares que podem prever o resultado e tratamento do paciente. O oncogene LAPTM4B-35 está localizado no cromossomo 8q22, eo ganho do número de cópias de DNA no cromossomo 8q22 é um achado freqüente em GC de acordo com o nosso estudo anterior (dados não publicados). No cancro da mama, superexpressão de LAPTM4B-35 e 8q22 amplificação foram contribuíram para de nove
chemoresistance a antraciclinas e são permissivas para recorrência metastática [29].

Neste estudo, nós investigamos LAPTM4B-35
expressão em 24 de câncer de estômago e seus pares espécimes cirúrgicos gástricas não cancerosas por qRT-PCR e descobriu que LAPTM4B-35 nível de expressão
mRNA no câncer gástrico foi significativamente elevado em comparação com os do emparelhado grupo do tecido não canceroso. Além disso, a análise imuno-histoquímica em 180 pares de câncer gástrico mostrou LAPTM4B-35 foi overexpressed em tecidos GC (68,3%) em comparação com a sua mucosa não canceroso emparelhado (16,1%). LAPTM4B-35 promove o crescimento do tumor e da tolerância para o stress metabólico e genética através da indução de autofagia [30, 31]. No nosso estudo, a função de LAPTM4B no cancro gástrico foi investigada através de ensaios in vitro. A sobre-expressão de LAPTM4B-35 em células BGC-823 também aumentou a viabilidade celular em condições de cultura isento de soro, bem. Se este fenómeno é causado por autophage é necessário para ser investigado.

Além disso, nós também analisada a correlação de LAPTM4B-35 de expressão com os parâmetros clínico em câncer gástrico. expressão alta LAPTM4B-35 foi significativamente correlacionada com grau de diferenciação, invasão linfática, profundidade de invasão e metástases em linfonodos, sugerindo que LAPTM4B-35 podem ser amplamente ativado no câncer gástrico e pode desempenhar um papel vital na carcinogênese gástrica e progressão tumoral. Como a invasão linfovascular de tumores e metástases de linfonodo são altamente importantes indicadores clínicos prognósticos para recidiva do tumor, fizemos uma análise de sobrevivência. As curvas de Kaplan-Meier estratificada por LAPTM4B-35 expressão e estágio do tumor ou invasão linfovascular revelou que LAPTM4B-35 pacientes positivos têm OS significativamente mais pobres em comparação com LAPTM4B-35 negativas em estágios TNM I-III ou sem subgrupo invasão linfática. análise de regressão multivariada Cox neste subgrupo demonstrou que entre todos os fatores analisados, LAPTM4B-35 expressão é um fator prognóstico independente em pacientes com câncer gástrico em TNM estágios I-III, mas em estágio IV. É razoável, pois a paciente em estágio IV é incapaz de receber a operação radical e pode ser tratada com muitos outros tratamentos paliativos diferentes, todos os quais teriam impacto no prognóstico. Estes resultados indicam que a propensão para LAPTM4B-35 podem especificamente prevê os tipos mais agressivos e fatais de câncer gástrico em casos com mais cedo e sem metástase distal ou sem invasão linfática.

Em nosso estudo, descobrimos que LAPTM4B expressão positiva -35 geralmente correlacionada ao pior prognóstico em pacientes GC estratificados por estágio do tumor ou invasão linfática. Para a função de LAPTM4B-35 em GC, que posteriormente repetido mais ensaio in vitro. A sobre-expressão de LAPTM4B-35 em células BGS-823 revelou um aumento significativo na proliferação celular, migração e invasão, e a sub-regulação de LAPMT4B-35 com chumbo para os resultados opostos. Zhou et al. mostrou que LAPTM4B-35 superexpressão promove a sobrevivência celular, proliferação desregulada e migração em células de carcinoma hepatocelular [12]. Estudos recentes têm relatado que LAPTM4B-35 foi associado significativamente com uma pior evolução clínica em muitos tumores humanos, tais como HCC [16], tumor ovariano metastático [32], vesícula biliar [19, 33], cholangiocarcinoma extra-hepática [34] e câncer endometrial [22]. Estas evidências acumuladas apoiar os nossos resultados atuais, indicando que LAPTM4B-35 superexpressão podem desempenhar um papel importante na transformação maligna e progressão da GC.

Os mecanismos moleculares da LAPTM4B-35 em propriedades progressão tumoral ainda não estão claros. Alguns estudos anteriores indicaram que LAPTM4B-35 é necessário para lisossoma homeostase, acidificação e função, e que LAPTM4B-35 torna as células tumorais resistentes à morte celular mediada pelo lisossoma desencadeada por estresse ambiental e genotóxicos [30, 31]. A sobre-expressão de LAPTM4B-35 pode activar algumas proto-oncogenes, tais como c-myc, c-jun e c-fos [35], e promover a proliferação, migração e invasão em algumas linhas de cancro humanas que iria aumentar o crescimento e a metástase de HCC xenoenxertos em ratinhos nus [36]. investigação relacionada LAPTM4B implícito que pode melhorar a proliferação celular ou sobrevivência através do envolvimento na via de transdução de sinal, tais como a cinase-proteína via fosfatidilinositol 3-quinase B. E LAPTM4B-35 podem interagir com algumas proteínas relacionadas com o cancro, como proteína fosfatase 2A e proteína quinase C [10]. Li et ai descobriram que LAPTM4B-35 motiva resistência a múltiplos fármacos de células cancerosas através da promoção de efluxo de drogas e anti-apoptose através da activação da via PI3K /AKT de sinalização [24], indicando que LAPTM4B-35 pode ser um novo alvo de terapia. O papel funcional e mecanismo de LAPTM4B em GC necessitam de mais pesquisas.

Em conclusão, o estudo indica que LPTM4B-35 superexpressão desempenha um papel importante na promoção da proliferação celular, migração e invasão em cancros gástricos. LAPTM4B-35 expressão positiva em tecidos com câncer gástrico correlação com o mau resultado e provou ser um fator independente de prognóstico no subgrupo de pacientes GC em estágios TNM I-III ou sem invasão linfática. Assim, LAPTM4B-35 pode constituir um biomarcador útil para predizer o prognóstico em determinados subgrupo de GC. Além disso, como os papéis de LAPTM4B-35 para limitar a morte celular mediada pelo lisossoma e promover a autofagia ter efeitos significativos de sobrevivência em células cancerosas, e LAPTM4B-35 foi sobre-expresso em uma grande proporção de câncer gástrico, pode ser um alvo útil para tratar o grupo subtipo de câncer gástrico.

Informações de Apoio
S1 Dataset. Os resultados individuais de ARNm relativa de expressão LAPTM4B-35, a proliferação celular, migração e invasão, sobrevivência de pathients e clínico-patológico features.
(Excel)
doi:10.1371/journal.pone.0121559.s001
(XLS)

Acknowledgments

We obrigado Guoshuang Feng (do Centro Chinês para Controle e Prevenção de Doenças), pelo seu tipo de ajuda para as estatísticas de dados.

• PLOS ONE: A superexpressão do receptor de glicação avançada Endproducts (RAGE) está associada a mau prognóstico no câncer gástrico
• PLOS ONE: Impacto dos níveis de expressão intratumoral de Fluoropirimidina que metabolizam enzimas sobre resultados do tratamento de adjuvante S-1 Therapy em gástrica Cancer