Plos ONE: LAPTM4B-35, Rak-Related Gene, je povezana s slabo prognozo na TNM Faze I-III želodca Rak Patients

Povzetek

Ozadje

lizosomska povezano transmembranski protein 4β -35 (LAPTM4B-35), član 4-tetratransmembrane dolžini proteina superdružine sesalcev, je bila opisana kot močno izraženi pri številnih raka. Vendar pa izraz LAPTM4B-35 in njegova vloga pri napredovanju raka želodca (PK) ostaja neznan. Cilj te raziskave je bil raziskati LAPTM4B-35 izraz v GC, njen potencialni pomen za clinicopathologic parametrov in vlogi LAPTM4B-35 med želodca rakotvornost.

Načini

V tej študiji, parafin smo analizirali -embedded osebki z GC (n = 240, vključno s 180 parnih vzorcev) in 24 v paru, sveže zamrznjene tkiva. QRT-PCR in imunohistokemija (IHK) so bile uporabljene za analizo izražanja LAPTM4B-35 v GC. Učinki LAPTM4B-35 na proliferacije GC celic, migracije in invazije so bili določeni s prekomerno in rasklapanje testov.

Rezultati

IHC je pokazala, da je bila LAPTM4B-35, izražena v 68,3% (123/180 ) GC tkiva, medtem ko je v 16,1% (29/180) svojih parnih sosednjih noncancerous želodčnega tkiva ( P
= 0,000). LAPTM4B-35
mRNA v GC tkivih so tudi znatno povišana v primerjavi z njihovimi seznanjenih sosednjih noncancerous tkiva ( P
= 0,017). Čezmerno LAPTM4B-35 je bila značilno povezana s stopnjo diferenciacije, globina invazije, lymphovascular invazije in bezgavkah metastaze ( P
< 0,05). Kaplan-Meier krivulji preživetja je pokazala, da so imeli bolniki s LAPTM4B-35 izražanja znatno zmanjšanje skupnega preživetja (OS) v fazah I-III bolnikov GC ( P
= 0,006). Multivariatna analiza je pokazala visoko izraz LAPTM4B-35 je neodvisen napovedni dejavnik za OS v fazi I-III bolnikih GC ( P
= 0,025).

Zaključek

Te ugotovitve kažejo, da se LAPTM4B-35 čezmernim lahko nanaša na napredovanje GC in slabo prognozo, zato lahko služi kot nov napovedni označevalec prognozo pri bolnikih GC

Navedba. Cheng X, Zheng z, Bu z, Wu X Zhang L, Xing X, et al. (2015) LAPTM4B-35, Rak-Related Gene, je povezana s slabo prognozo na TNM Faze I-III Rak želodca bolnikov. PLoS ONE 10 (4): e0121559. doi: 10,1371 /journal.pone.0121559

Akademska Urednik: Ken-ichi Mukaisho, Shiga University of Medical znanosti, JAPONSKA

Prejeto: 10. april 2014; Sprejeto: 12. februar 2015; Objavljeno: 7. april 2015

Copyright: © 2015 Cheng et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v papir in njene dodatne informacije datotek

Financiranje: To delo je podprl National Natural Science Foundation Kitajske (št 30471677 in 81141024) in National Key Technology R & D programa (Peking Občinski znanost in tehnologijo. projekt Z121100007512010). Med financerji prispeval k zasnove študija, zmogljivost, reagenti, materialov, analizo podatkov in odločitve v zvezi z objavo

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je tretji najpogostejši rak na Kitajskem in vodilni vzrok smrti, povezanih z rakom na Kitajskem [1]. Večina bolnikov GC so že v zaključni fazi v času diagnoze (stadija III in IV), zaradi česar je napoved, da je žalostna, kljub izboljšanju kirurške in adjuvantno pristop zdravljenja [2-5]. Ne glede na kemoterapijo in nameravano kurativno operacijo, skoraj 60% bolnikov z GC razvoj ponovitve in sčasoma odmrejo metastatskega bolezni [6]. GC napredovanje je multifaktorska in večstopenjski proces, v katerem je podedoval in okoljski dejavniki igrajo bistveno vlogo [7]. Predhodne ugotovitve kažejo, da bi lahko imela klasične biomarkerjev in uprizoritvenim sistemi, ki temeljijo na kliničnih in patoloških ugotovitvah svoje omejitve klinično prakso in silijo k razvoju novih molekularnih biomarkerjev, ki lahko napovedujejo izid in zdravljenje pacientov [8, 9].

-lizosomska povezan protein transmembranski 4 beta (LAPTM4B) je bil prvotno klonirali v hepatoceličnih karcinomov (HCCs) s Shao et al, ki se nahaja na kromosomu 8q22, regija pogosto dopolnjena z rakom dojke in HCC [10, 11]. To kodira dve beljakovine z različno molekulsko maso, 24-kDa in 35 kDa beljakovine (LAPTM4B-24 in -35), s štirimi domnevno regijah transmembranski [12]. Lokalizacija LAPTM4B-35 je bilo ugotovljeno, da ni samo v lizosomska, ampak tudi v plazemski membrani in notranjih organele kot Golgi napravi in ​​endosomov [13]. Ugotovljeno je bilo, da je bil LAPTM4B-35 močno izražena v različnih vrst raka. Prejšnja poročila so pokazala, da je čezmernim LAPTM4B-35 povezana z neugodnimi bioloških vedenja in slabo prognozo v mnogih vrst raka, kot so rak dojke [14], HCC [15-17], žolčnika raka [18, 19], kolorektalnega raka [20] , epitelijski karcinom na jajčnikih [21] in endometrija, karcinoma [22]. Ugotovljeno je bilo tudi, da je bil alelna variacija LAPTM4B povezana z genetsko predispozicijo GC [23]. Poleg tega čezmernim LAPTM4B-35, ki ga transfekciji LAPTM4B cDNA spodbuja celično proliferacijo, migracijo, invazijo v HCC presadkov v golih miših in povzroča odpornost mnogovrstnimi [24]. Rasklapanje od LAPTM4B motnje RNA nasprotno obrnilo vse te malignih funkcij fenotipskih v HCC [24, 25].

Vendar LAPTM4B-35 izraz, njegova pomembnost za clinicopathologic značilnosti in biološka vloga LAPTM4B-35 v GC ostajajo nejasne. V tej študiji smo želeli ugotoviti LAPMT4B-35 izraz v GC in možnosti njenega odnosa z clinicopathological lastnosti in svojo napovedni pomen. Poleg tega, in vitro funkcionalne analize so bile izvedene za označevanje biološke učinke LAPTMEB-35 želodčnega tumorjev.

Materiali in metode

Etika

Vsi bolniki so podpisali privolitev za jemanje vzorcev tkiva, in protokol študija je odobril raziskave Odbor za etiko Kliničnem Peking University Cancer Hospital.

osebki človekove želodčnega tkiva

skupaj 240 (167 moških in 73 žensk, starih 22-87 let, povprečna starost je bila 60 let) formalinom fiksno parafin vgrajeni GC tkiva, vključno z 180 v paru rakavi poveže in sosednjih noncancerous želodčne sluznice tkiva, so bili zbrani pri bolnikih GC v postopku želodca na Peking University Cancer Hospital od januarja 2003 do decembra 2011. klinični in histološki informacije za vsak primer so bili zbrani tudi v skladu z odobrenimi smernicami ustanove. Iz leta 1997 merila UICC-TNM so bili uporabljeni za razvrstitev želodca raka. Mediana spremljanja trajanja, saj v času diagnoze je bila 26,2 mesecev (razpon, 2.4-119.0 mesecev). Skupaj je 112 (46,7%) bolnikov je umrlo v obdobju spremljanja.

Imunohistokemija

Parafinski odseki (4 m) so razvoskana in rehidrirane v ksilemu in etanola. Imunohistokemija bila izvedena, kot je opisano prej [16] z uporabo anti-LAPTM4B-35 protitelesa (1: 200) (s Pro RL Zhou nadarjenih.). Kot negativne kontrole, so odseki obdelajo kot v istem protokolu, razen da so inkubirali preko noči pri 4 ° C v blokirni raztopini brez primarnega protitelesa.

izraz LAPTM4B-35 je bila ocenjena z dvema izkušeni patologi (Y Sun in B Dong), ki je deloval samostojno in so zaslepljeni s kliničnimi izidi pacientov. Razlike med opazovalci so našli v manj kot 10% pregledanih diapozitivov in soglasje je bilo doseženo po nadaljnji pregled. Obarvanjem ocena je bila pravkar uporabili semikvantitivnimi metode za razvrščanje LAPTM4B-35 izraz kot negativne in pozitivne obarvanih imunoreaktivnih celic. Razmerje pozitivnosti je dosegel kot '' 0 "(< 10% pozitivne tumorske celice)," "1 (10-50% pozitivnih tumorske celice) ter '' 2" (> 50% pozitivne tumorske celice). Intenzivnost obarvanja je dosegel kot " '0" (brez barvanja ali šibko obarvajo), "" 1 "(zmerno obarvanje), ali' '2" (močno obarvanje). Vsota točk intenzivnosti obarvanja in rezultatom odstotek je bila uporabljena za določitev ravni LAPMT4B izražanja: 0-2, negativen pomen in 3-4, pozitivno izražanje (14). Pozitivna izraz ovrednoti samo oddelkov z najmanj 10% pozitivno območje tumorjev.

celične kulture, LAPTM4B-35 plazmidov in hCas9 /gRNA transfekciji

želodcu rakave celične linije (SGC- 7901, je bila BGC-823, MGC-803, MKN-28 in AGS) gojimo v DMEM (Wisent Inc., St-Bruno, QC, Kanada), dopolnjen z 10% fetalni goveji serum (FBS) (Hyclone, Logan, UT, ZDA) in 100 U /ml penicilina in 100 ug /ml streptomicina pri 37 ° C v atmosferi s 5% CO _{2. pcDNA3
. 0-AF
vsebuje celotno ORF LAPTM4B proizvajajo LAPTM4B-35 protein je nadarjen prof RL Zhou [11]. Transfekcijski je bila izvedena z Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA), v skladu s protokolom proizvajalca. Pozitivne klone celic so bili pridobljeni z antibiotičnim izbiro s G418 (Gipco, Grand Island, NY) pri koncentraciji 800 ng /ml.}

hCas9 in gRNA Vektor smo prišel iz Kitajske Cebrica Resource Center (CZRC). Celotna dolžina Cas9 cDNA smo klonirali v vektor pXT7 in linearized in omejena mRNA smo sintetizirali s pomočjo mMESSAGE mMACHINE mRNK sinteze prepis kompleti (Life Technologies, Carlsbad, California, ZDA). V začetnih oligonukleotidov zaporedja gRNA uporabljeni so bili: naprej primer, 5'-TACGACTCACTATAGGGGGATGGTGCCGGTGCGGACAGTTT TAGAGCTAGAAATAGC-3 ", in obratno premaz: 5'-AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'.The protokol je sledilo prej objavljene papirja [26]. hCas9 mRNA (3 ng /ul) in gRNA (0,2 ng /ul) so kotransfektiramo v SGC-7901 celice izvedene z Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

RNA izolacija, kvantitativna realnem času povratne transkripcijo PCR (QRT-PCR)

Celotna RNA je bila ekstrahirana z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) in reverzno transkripcijo v cDNA z uporabo M-MLV reverzne transkriptaze (Promega, Madison, WI, ZDA), po katerem navodila proizvajalca. PCR v realnem času smo izvedli s pomočjo ABI 7500 Fast realnem času sistem PCR (Life Technologies, Carlsbad, California, ZDA). β-aktin uporabimo kot notranjo kontrolo. Sekvence oligonukleotidov, so navedeni spodaj: LAPMT4B-35: naprej premaz: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT-3 ', povratne premaz: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; β-aktin: naprej primer: 5'CCTGTGGCATCCACGAAACT-3 'reverse primer: 5'GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'

Cell širjenje test

proliferacijo celic smo merili, ki jih mobilni štetja Kit-8. (CCK-8) (Dojindo, Japonska) v skladu s protokolom izdelavi je. Volumen 100 nI iz celične suspenzije (3000 celic na jamico) smo inkubirali z 96 vdolbinami (Costar, Corning, NY), 24, 48, 72, 96 ur. 10 u.l raztopine CCK-8 dodamo v vsako vdolbino in inkubiramo za 3 ure pri 37 ° C. Absorbcijske vrednosti vseh vrtinah smo nato določimo pri 450 nm z referenčno valovno dolžino 630nm v čitalnik mikroplošč (Bio-Rad, ZDA). Poskus smo izvedli v treh izvodih in dvakrat ponovi.

-celjenje ran test

Cell migracije je merjena z celjenje ran testom, ki ga sistem IncuCyte HD (IncuCyte ZOOM, Essen BioScience, ZDA). Celice smo zasejali v 96 vdolbinami pri gostoti 6 x 10 ^{4 celic na vdolbino. Rana je bila narejena s pomočjo konfluentnih enoslojne celice s pin blok in celice sprali z 1 × PBS, kultivirani v DMEM mediju z 10% fetalnega govejega seruma. Fotografije celice so posneli s pomočjo sistema IncuCyte HD v 4-urnih intervalih od 2 posameznih regij na dobro uporabo 10x cilja. Vrednosti iz regij 2 v vsako jamico zberemo in v povprečju v vseh 3 ponovitev}

Transwell invasion testi

Transwell (8μm velikost por, Cell BioLabs, ZDA). Bil test uporabljen za analizo celic invazijo v skladu z navodili proizvajalca. 8 x 10 ^{4 celice damo v zgornjih komorah v mediju brez seruma, in spodnji komore so bile napolnjene z DMEM in 10% FBS. Po inkubaciji 72 ur pri 37 ° C, smo neinvazivni celic na zgornji površini membran odstranimo z vato. Membrane so bile določene z metanolom 10 minut in obarvamo z 0,5% kristal vijoličnim 10 minut. Celice na spodnji strani filtra bili iz preštejemo pet naključno izbranih mikroskopskih pogledov.}

Western blot analizo

Vrednosti protein izražanje celičnih linij GC smo merili z analizo Western Blot. Celice smo lizirali v predhodno ohlajeno RIPA liznega pufra (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) vsebuje zaviralca proteaz koktajl (Roche, Basel, Švica) 30 minut po centrifugiranju pri 15,000g za 20 minut smo supernatant, pridobljen. 50 ı-ıg proteinskih ekstraktov ločimo z 10% SDS poliakrilamidnem gelu in prenese na 0.45μm poliviniliden difluorida (PVDF) membrana (Whatman, Nemčija). Membrana smo blokirali 1 uro pri sobni temperaturi z (pH 7,6), ki vsebuje 5% nemastno mleko v prahu pufru za blokiranje, nato inkubiramo z anti-LAPTM4B-35 protiteles (1: 800; prof RL Zhou obdarjen) pri 4 ° C preko noči . Miš anti-humana β-aktina protitelesa (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) je bila uporabljena kot notranje kontrole. Imunološko trakovi smo prikazali s pomočjo sistema za detekcijo kemiluminescenca (Pierce biotehnologija, Rockford, IL).

Statistična analiza

Chi-kvadrat test je bil uporabljen za primerjavo razlike v LAPTM4B-35 beljakovin izražanja med GC tkiva in sosednjih noncancerous tkiva. Brezpogojne logistični modeli regresijske analize so bile uporabljene za analizo odnosov med LAPTM4B-35 izražanja in clinicopathological parametrov prilagojenih glede na stanje spolov. Razlika LAPMT4B-35
mRNA izraz med GC in sosednjih noncancerous tkiv je analizirala Wilcoxonov ujema preizkus par.

celotno preživetje (OS) krivulja je bila izračunana po metodi Kaplan-Meier in analizirali s testom log-ranga. Relativna tveganja (RRS) smrti, povezanih z LAPTM4B-35 izražanja in drugih spremenljivk napovedovalec so bili ocenjeni z univariantne Cox sorazmernih tveganj modela, najprej. Multivariatno Cox modeli so bili zgrajeni tudi oceniti RR za LAPMT4B-35 izražanja. Vse statistične analize so bile izvedene z uporabo programske opreme statistični paket SPSS (različica 20.0; SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA). Obojestranskega P
vrednost manj kot 0,05 smo upoštevali kot statistično pomembne.

Rezultati

analiza Izražanje LAPTM4B-35 v celičnih linijah GC in GK

smo najprej preučiti izraz LAPTM4B-35
RT-PCR v 5 celičnih linijah GC (MGC-803, BGC-823, podjetja MKN-28, SGC-7901 in AGS), nato pa odkrijejo svoje protein izraz Western blot. Rezultati so pokazali, da je bila LAPTM4B-35, izražena v vseh linijah celic v obeh mRNA in koncentracije proteina (slika 1A, zgornja in spodnja plošča), nato pa smo se odločili BGC-823 in SGC-7901 celic za naše naslednje preiskav delovanja celic.

LAPTM4B-35
izraz je bila odkrita tudi v 24 parov odstranjenimi GC vzorcih z QRT-PCR. Kot lahko vidimo v Sl 1B, LAPTM4B-35
izraz v GC tkivih je pomembno zvišana v primerjavi s seznanjenimi sosednjih noncancerous tkiva ( P
= 0,017) (slika 1B).

LAPTM4B-35 protein izraz je pogosto opaziti v človeških GC

smo raziskovali izražanje LAPTM4B-35 v PK in sosednjih noncancerous tkiva z imunohistokemičnim analize. LAPTM4B-35 niso izrazili v normalnem želodčni sluznici (slika 2A), vendar izražena v intestinalno metaplazijo, displazija lezija (podatki niso prikazani) in tumorskih celic, in večinoma locirane v citoplazmo ali na celične membrane (slika 2B in 2D 2H). LAPTM4B-35 pogosto opazili pri GC tkiva v primerjavi z ujemajočo sosednjo noncancerous sluznice (68,3% v primerjavi z 16,1%, P
= 0,000) (tabela 1).

Razmerje med LAPTM4B-35 izražanja in clinicopathological značilnosti

smo analizirali odnos med LAPTM4B-35 izražanja in clinicopathological značilnosti bolnikov GC. Kot spola, predmeti v naši raziskavi je njihov odklon (167 vs 73, tabela 2) smo izračunali svoj odnos z logistično regresijsko analizo in prilagojeni za status spolov. LAPTM4B-35 je bila pogostejša pri slabo diferenciranih GCS primerjavi z zmernimi, dobro diferenciranih tistih (65,4% v primerjavi z 57,9%, P
= 0,017). Poleg tega je bila LAPTM4B-35 izraz povezan z lymphovascular invazije ( P
= 0,000), globina invazije ( P
= 0,016) in na bezgavkah metastaze ( P
= 0,029) (tabela 2).

LAPTM4B-35 izražanja in prognoza GC bolnikov

Slika 3 prikazuje analizo LAPTM4B-35 izražanja in klinične izide. Kaplan-Meier krivulji preživetja pokazala, da je težnja krajše celokupno preživetje (OS) pri bolnikih GC z LAPTM4B-35 pozitiven izraz v primerjavi z negativnimi ( P
= 0,064, log-rank = 3,425) (Slika 3A). Potem ko so bolniki razdeljeni glede na TNM I-III ali bolnikih brez lypmphovascular invazije, bolniki z LAPTM4B-35 pozitiven izražanja pokazala bistveno krajši OS od teh negativnih ( P
= 0.006 in P
= 0,001 ., v tem zaporedju) (slika 3B in 3D)

Rezultati univariatne in multivariatne modele Cox je za OS bolnikov GC v TNM faza I-III razstavljal, da globina invazije (RR = 3,103; 95% CI: 1,427 -6,748; P
= 0,004), bezgavko metastaze (RR = 3,015; 95% IZ: 1,552-5,858; P
= 0,001) in LAPTM4B-35 izraz raven (RR = 2,249 95% iZ: 1,242-4,072; P
= 0,007), pomembno vplivala na preživetje GC, oziroma (tabela 3); poleg tega je bil LAPTM4B-35 pozitiven izraz neodvisen napovedni dejavnik (RR = 1,897; 95% IZ: 1,041-3,457; P
= 0,025). Bezgavka metastaze (RR = 2,665; 95% IZ: 1,362-5,213; P
= 0,001) tudi samostojno napovedal OS (tabela 3)

LAPTM4B-35 spodbuja proliferacijo tumorskih celic

da bi raziskali vpliv LAPMT4B-35 v odvisnosti od celične biologije, so bili vzpostavljeni dve celične linije. BGC-823 in SGC-7901 celic, ki predstavljajo relativno nižjo ali višjo izražanje LAPTM4B-35 so bili posebej izbrani za prekomerno in rasklapanje testa (slika 1A). V prvem, celične linije BGC-823-AF prekomerno ekspresijo LAPTM4B-35 je bil stalni sedež, in MOCK smo uporabili kot kontrolo za to celične linije. Drugič, LAPTM4B-35 stabilno podrli towarding za SGC-7901 (hCas9 /gRNA) s sistemom II nakopičenih redno razmaknjene kratke Palindromno ponavlja (CRISPR) tipa, in rezultati so bili opredeljeni z Western blot (slika 4A).

testa proliferacije celic smo izmerili s CCK-8 celično štetje kit. Vrednost absorbance celic BGC-823-AF v 72 urah po nanosu je bila bistveno višja od teh matičnih celic in Mock celic, in rezultat je bil ravno nasprotno jo podreti od LAPTM4B-35 v SGC-7901 celic (slika 4b).

LAPTM4B-35 okrepljeno migracije tumorske celice in invazija sposobnost

po transfekciji s pcDNA3.0-AF in hCas9 /gRNA, smo izvedli rane, celjenje metodo za analizo migracije sposobnost LAPTM4B-35 prekomerno ekspresijo /razgradljiv želodca rakave celice (slika 5A). Rezultati so pokazali, v primerjavi z BGC-823 in Mock, ki LAPTM4B-35 napredoval BGC-823 (BGC-823-AF) celične migracije ( P
< 0,05), in navzdol ureditev LAPTM4B-35 izražanja lahko obrne ta pojav v SGC-7901 celic ( P
< 0,05, slika 5B)

v skladu s tem je učinek LAPTM4B-35 na invazivnosti tumorskih celic smo preučevali s pomočjo transwell testa. (slika 6A). Ugotovili smo, da v razgradljiv SGC-7901 celic je bilo število napadel celica bistveno višja LAPTM4B-35-transficiranih 823 BGC-celic in manjši kot v svojih kontrolnih celicah, oziroma ( P
in 0.05, fig 6B). Ti rezultati kažejo, da LAPTM4B-35 pospešuje migracije in vdor želodčnih rakavih celic.

Pogovor

GC je zelo heterogena bolezen, pri kateri celo podobne klinične in patološke lastnosti vodijo do različnih rezultatov [27, 28], kar pomeni, da TNM počivališče sistem GC ima svoje omejitve in silijo k iskanju novih molekularnih bioloških označevalcev, ki lahko napovedujejo bolnikovo izid in zdravljenje. Onkogena LAPTM4B-35 se nahaja na kromosomu 8q22 in dobiček števila kopij DNA na kromosomu 8q22 je pogosta ugotovitev v GC po naši prejšnji raziskavi (neobjavljeni podatki). Pri raku dojke, prekomerno LAPTM4B-35 in 8q22 ojačanje so prispevali k de in nove
chemoresistance za antraciklini in so permisivno metastatske ponovitve [29].

V tej študiji smo raziskovali LAPTM4B-35
izraz v 24 rakom želodca in njihovih seznanjenih noncancerous želodca kirurških vzorcih z QRT-PCR in ugotovila, da je -35 LAPTM4B
mRNA nivo izražanja na raka želodca je pomembno zvišana v primerjavi s tem v paru noncancerous skupina tkivo. Poleg tega imunohistokemični analizi 180 parov raka želodca pokazala LAPTM4B-35 so izraženi pri GC tkiva (68,3%) v primerjavi z njihovo seznanjeno noncancerous sluznice (16,1%). LAPTM4B-35 spodbuja rast tumorja in strpnosti do metabolične in genetske stresa z indukcijo avtofagija [30, 31]. V naši tej študiji je bila funkcija LAPTM4B na raka želodca, ki jih preiskujejo in vitro testih. Čezmerno LAPTM4B-35 v BGC-823 celicah poveča tudi sposobnost preživetja celic v serumu pogojih brez kulture kot dobro. Če je ta pojav posledica autophage je potrebno, da je treba raziskati.

Poleg tega smo analizirali tudi korelacijo LAPTM4B-35 izražanja s clinicopathological parametri pri bolnikih z rakom želodca. Visoka LAPTM4B-35 izraz je pomembno povezana s stopnjo diferenciacije, lymphovascular invazijo, globina invazije in bezgavkah metastaze, kar kaže, da se LAPTM4B-35 lahko v veliki meri aktivira raka želodca in lahko igrajo ključno vlogo pri želodčnem kancerogenosti in napredovanje tumorja. Kot so tumor lymphovascular invazija in lymphonode metastaze zelo pomembne klinične napovedni kazalci za tumorja ponovitve, smo naredili analizo preživetja. Kaplan-Meier krivulje, ki jih LAPTM4B-35 izražanja in stopnjo tumorja ali lymphovascular invazije stratificiran je pokazala, da imajo LAPTM4B-35 pozitivnih bolnikov bistveno slabše OS v primerjavi z LAPTM4B-35 negativnih na TNM fazah I-III ali brez lymphovascular invazijo podskupine. Multivariatno Cox regresijska analiza v tej podskupini je pokazala, da je LAPTM4B-35 izraz pri vseh analiziranih dejavnikov neodvisen napovedni dejavnik pri bolnikih želodca raka v TNM faze I-III, vendar v fazi IV. To je smiselno zato, ker pacient v stopnji IV ne more sprejeti radikalno operacijo in se lahko zdravijo z mnogimi drugimi različnimi paliativne zdravljenja, od katerih vse bi vplivala na prognozo. Ti rezultati kažejo, da lahko nagnjenost za LAPTM4B-35 posebej napoveduje najbolj agresivnih in usodne vrst raka želodca v primerih, v začetku in brez distalnega metastazami ali brez lymphovascular invazijo.

V našem tej raziskavi smo ugotovili, da LAPTM4B -35 pozitiven izraz običajno povezana s slabšo prognozo pri bolnikih GC s stopnjo tumorja ali lymphovascular invazije stratificirano. Za funkcijo LAPTM4B-35 v GC Nadalje smo izvedli in vitro testu. Čezmerno LAPTM4B-35 v BGS-823 celic je pokazala znatno povečanje celične proliferacije, migracije in invazije, in navzdol ureditev LAPMT4B-35 osvinčeni do nasprotnih rezultatov. Zhou et al. je pokazala, da LAPTM4B-35 prekomerno spodbuja celično preživetje, deregulirane proliferacijo in migracijo v HCC celic [12]. Nedavne študije so poročali, da je bil LAPTM4B-35 značilno povezana z slabšem kliničnim izidom v številnih človeških rakavimi obolenji, kot so HCC [16], metastatskim tumor jajčnikov [32], žolčnika [19, 33], zunaj jeter holangiokarcinom [34] in raka endometrija [22]. Te nabrane dokazi podpirajo naše trenutne ugotovitve, ki kažejo, da lahko LAPTM4B-35 prekomerno igrajo pomembno vlogo v maligno transformacijo in napredovanje GC.

molekularne mehanizme LAPTM4B-35 v tumorskih lastnosti napredovanje še vedno nejasna. Nekatere prejšnje študije so pokazali, da je LAPTM4B-35 potrebna za lizosomska homeostaze, dokisanje in funkcijo, ter da LAPTM4B-35 postane tumorske celice odporne na-lizosomska posreduje celične smrti zaradi okoljskih in genotoksičnih napetosti [30, 31] sprožila. Čezmerno LAPTM4B-35 lahko vključite nekatere proto-onkogeni, kot so c-myc, c-jun in c-fos [35], in spodbuja proliferacijo, migracijo in invazijo v nekaterih človeških linijah raka, ki bi okrepila rast in metastaze HCC presadkov pri golih miših [36]. Povezane preiskava je pomenilo, da lahko LAPTM4B izboljša celično proliferacijo ali preživetja z vključevanjem v prenos signalov poti, kot fosfatidilinozitol 3 kinaza beljakovin poti v kinaze B. In LAPTM4B-35 lahko medsebojno deluje z nekaterimi beljakovinami, povezanih z rakom, kot 2A beljakovin fosfataze in protein kinaze C [10]. Li et al ugotovila, da LAPTM4B-35 motivira odpornost mnogovrstnimi rakavih celic s spodbujanjem izločanje drog in anti-apoptozo z aktiviranjem PI3K /AKT signalizacijo [24], kar pomeni, da lahko LAPTM4B-35 nov cilj zdravljenja. Funkcija in mehanizem LAPTM4B v GC potrebujejo nadaljnjo preiskavo.

Na koncu je trenutna študija kaže, da ima LPTM4B-35 čezmernim pomembno vlogo pri spodbujanju proliferacije celic, migracije in invazijo v želodcu raka. LAPTM4B-35 pozitiven izraz v želodčnih tkivih raka povezana s slabim izidom in dokazal, da je neodvisen napovedni dejavnik pri podskupini GC bolnika v TNM fazah I-III ali brez lymphovascular invazijo. Tako lahko LAPTM4B-35 predstavljajo uporaben biomarker da napovedati prognozo v nekaterih podskupini GC. Poleg tega, kot vloge LAPTM4B-35 v omejevanje-lizosomska posredovano celično smrt in spodbujanje avtofagija imajo pomembne učinke preživetja v rakave celice, in LAPTM4B-35 je preveč izražena v velikem deležu raka želodca, bi bilo koristno za ciljne za zdravljenje podtip skupino raka želodca.

Podpora Informacije
S1 nabor podatkov. Posamezni rezultati relativno mRNA za LAPTM4B-35 izražanja, celično proliferacijo, migracijo in invazije, preživetje pathients in clinicopathological features.
(Excel)
doi:10.1371/journal.pone.0121559.s001
(XLS)

Acknowledgments

We hvala Guoshuang Feng (od kitajskega centra za nadzor in preprečevanje bolezni), za njegovo prijazno pomoč pri statistiki podatkov.

• Plos ONE: Čezmerno izražanje receptorja za napredno Glycation končnih proizvodov (RAGE) je povezana s slabo prognozo želodčnega raka
• Plos ONE: Vpliv intratumorska ekspresivnih nivojev fluoropirimidinski-presnovnih encimov o zdravljenju izidov adjuvantne S-1 terapije želodčnega raka