PLoS ONE: vaiennettu Claudin-11 liittyy lisääntynyt invasiivisuus mahasyövän Cells

tiivistelmä

Background

Claudins ovat kalvoproteiineja että kriittisiä rooleja tiiviin liitoksen (TJ) muodostuminen ja toiminto. Jäsenet klaudiini geeniperheen on osoitettu olevan poikkeavasti säänneltävä, ja osallistua synnyssä erilaisten ihmisen syöpien. Tässä tutkimuksessa raportoimme että klaudiini-11 ( CLDN11
) vaimentuu mahasyövän kautta
hypermetylaatiota sen promoottorialueen.

Menetelmät /Principal Havainnot

tasot CLDN11
metylaation ja mRNA: n ilmentymisen mitattiin ensisijainen mahasyövän kudoksiin, noncancerous mahan limakalvoja, ja solulinjoja mahalaukun peräisin kvantitatiivisin metylaatiospesifinen PCR (qMSP) ja kvantitatiivinen käänteistranskriptaasi-PCR (qRT-PCR), vastaavasti. Analyysit pariksi syöpien ja viereisten normaali mahan kudoksissa paljasti hypermetylaatiota CLDN11
promoottorialueen syöpien, ja tämä hypermetylaation korreloi merkitsevästi downregulation CLDN11
ilmaisun vs.
normaalit kudokset. CLDN11
promoottorialue myös hypermetyloitunut kaikissa mahasyövässä testatuissa solulinjoissa suhteessa kuolemattomaksi normaaliin mahalaukun epiteelisolujen. Lisäksi CLDN11
-mRNA korreloi käänteisesti sen metylointi tasolla. Hoito CLDN11
-nonexpressing mahasyövän soluja 5-atsa-2'-deoksisytidiini palautettu CLDN11
ilme. Lisäksi siRNA-välitteisen knockdovvn CLDN11
ilmentymistä normaaleissa mahalaukun epiteelisolujen lisäsivät liikkuvuutta ja invasiivisuus.

Johtopäätökset /merkitys

Nämä tiedot viittaavat siihen, että hypermetylaatiota CLDN11
, mikä vaimentua ilme, edistää mahasyövän lisäämällä solujen liikkuvuutta ja invasiivisuus. Lisäksi ymmärrys mekanismeista roolia klaudiini proteiinien mahasyövän todennäköisesti auttaa tunnistamaan uusia lähestymistapoja diagnosointiin ja hoitoon mahasyöpä.

Citation: Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP, et ai. (2009) vaiennettu Claudin-11 liittyy lisääntynyt invasiivisuus mahasyövän Cells. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10,1371 /journal.pone.0008002

Editor: Fatah Kashanchi, George Washington University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 03 elokuu 2009; Hyväksytty: 23 lokakuu 2009; Julkaistu 24. marraskuuta 2009

Copyright: © 2009 Agarwal et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Yhdysvaltain National Institutes of Health myöntää CA085069, CA138677 ja CA146799 SJ Meltzer. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) jää toiseksi yleisimmäksi syy syöpäkuolemista maailmanlaajuisesti. Se on yksi kaikkein vaarallisin syöpäsairauksia sekä johtava syy syöpäkuolemista kehitysmaissa, joissa yleinen 5-vuoden eloonjäämisluvut alle 20% [1], [2].

Opiskelu GC ja niiden preneoplastista esiaste vaurioita ovat tunnistaneet useita geneettisiä ja epigeneettiset muutokset, kuten mikrosatelliittien epävakaus, pistemutaatiot, ja heterotsygotian menetys (LOH) vaikuttavat tuumorisuppressorigeeneille (APT) [3] - [6]. Kuitenkin, molekyyli patogeneesi GC on vielä epätäydellisesti ymmärretty.

Epigeneettiset muutokset ovat erittäin tärkeitä syövän kehittymisessä ja etenemisessä [7]. Transkription inaktivointi tuumorisuppressorigeeneille kautta poikkeava promoottori hypermetylaation CpG-saarekkeiden, aiheuttaa pysyviä geenien, on merkittävä epigeneettiset mekanismi TSG inaktivaation.

Aiemmin tutkimuksia on julkaistu promoottori hypermetylaation in GC ja niiden syöpää edeltävät esiasteita [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A ja p15INK4B olivat ensimmäisiä geenit näyttää hypermetylaation in GC [11]. Ryhmämme ja muut myöhemmin löysi hypermetylaatiota hMLH1 DNA mismatch korjaus geenin GC näytteille usein mikrosatelliittien epävakaus (MSI-H) [12] - [14]. Osoitimme myös, että hypermetylaatiota E-kadheriinin (CDH1) geeni esiintyy usein GC [15].

pilotti microarray-pohjainen genominlaajuisten haku suoritti ryhmämme, suoritetaan löytää uusia epigeneettiseltä vaiennettu geenien mahasyövän, jonka tunnuksena klaudiini-11 ( CLDN11
), tiukka risteykseen (TJ) proteiini, mahdollisena kohteena epigeneettiset inaktivaatiomenetelmät syöpien (julkaisemattomia tuloksia).

Claudin-11 kuuluu perheeseen klaudiini proteiineja, joka sisältää yli 23 jäsentä. Jäsenten klaudiini perheen ilmaistaan ​​erittäin kudosspesifisellä tavalla eri normaalien ja neoplastisten kudosten [16]. Claudins ovat transmembraaniproteiineja että keskeisessä asemassa ovat TJ muodostumista ja toimintaa. TJs ovat välisissä liitoksissa kriittisiä parasellulaarisen kuljetukseen liuenneita aineita, sekä ylläpitää solussa napaisuus. Kasvainsolut, esiintyy yleisesti rakenteellisia ja toiminnallisia häiriöitä niiden TJs [17].

Viime vuosina useat tutkimukset ovat osoittaneet, poikkeava ilmentyminen klaudiini proteiinien eri syöpätyypeissä [18], [16]. Useat näistä tutkimuksista löytyy häiriöstä klaudiini proteiinin ilmentymisen kautta
promoottori hypermetylaation. Hypermetylaation aiheuttama vaiennettu klaudiini-7 ilmentyminen on aiemmin raportoitu rintojen [19] ja peräsuolen [20] karsinoomat. Claudin-6 on myös epigeneettiseltä vaiennetaan rintasyövässä [21], kun taas claudins -3 ja -4 ovat epigeneettiseltä säännellään munasarjasyöpäsoluja [22], [23].

Nykyinen tutkimus tunnistaa ja raportit, jotta tietomme ensimmäistä kertaa, että CLDN11
promoottorialue hypermetyloitunut GC kudoksissa ja solulinjoissa. Lisäksi, kun taas CLDN11
mRNA ilmentyy kaikissa ensisijainen noncancerous mahalaukun limakalvon kudoksissa, sekä kuolemattomaksi normaali mahan epiteelisolulinja, se oli vaiennettu kaikissa GC kudoksissa ja solulinjoissa tutkittiin. Mielenkiintoista, siRNA-välitteinen downregulation CLDN11
in CLDN11
ilmentävää mahalaukun soluissa liittyi myös syöpään liittyvien fenotyyppisten muutosten, erityisesti lisääntynyt solun liikkuvuus ja invasiivisuus.

Materiaalit ja menetelmät

solulinjat ja Clinical kudosnäytteiden

Immortalized ihmisen normaali mahan epiteelisolujen (HFE145) saatiin tri Duane T. Smoot (Howard University) ja GC solulinjat AGS, SIIA MKN28, KATOIII, ja SNU-1 saatiin ATCC: ltä. Kaikkia solulinjoja viljeltiin ja ylläpidettiin RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia ja 1% antibiootti-antimykoottiliuoksella (Invitrogen).

Parilliset ensisijainen mahalaukun normaalien ja tuumorikudosten kerättiin Johns Hopkins Hospital ( JHH). Näytteet olivat snap-jäädytetty heti resektion.

Ethics lausunto

Johns Hopkins University (JHU) Institutional Review Board (IRB) hyväksyntä saatiin kaikissa tapauksissa mukana tutkimuksessa. Tapaukset saatiin JHU kirurginen patologia alle JHU IRB-hyväksytty vapautus 02-07-19-05e säännön nojalla 45 CFR 46,101 (b), joka poikkeaa saamisen edellytykset potilaan suostumus.

puhdistus ja Genomisen DNA ja Total RNA

Perimän DNA uutettiin snap-jäädytetty kudosnäytteistä tai solulinjoja käyttämällä DNeasy Veri & Tissue Kit (QIAGEN, Valencia, CA) valmistajan protokollaa. Kokonais-RNA uutettiin Trizol-reagenssia (Invitrogen). Uutettua DNA: ta ja RNA kvantitoitiin käyttäen NanoDrop ND-1000 Spektrofotometri (NanoDrop, Wilmington, DE).

Quantitative metylaatiospesifinen PCR (qMSP) ja Claudin-11

genomisia DNA: ita on saatu 36 potilaan näytettä, joka sisältää 18 GC ja 18 täsmäsi noncancerous mahan limakalvojen (NS) kudoksissa, samoin kuin eri mahalaukun solulinjoja, alistettiin qMSP. qMSP suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu, vähäisin muutoksin [24]. Lyhyesti, bisulfiittikäsittelyn genomi-DNA: iden suoritettiin käyttäen EpiTect bisulfiittikäsittelyä Kit (QIAGEN, Valencia, CA). MSP-amplikoni ja TaqMan-koettimella on havaita täysin metyloidut DNA oli suunniteltu sisältää useita CpG-sivustoja 5'-UTR-alue CLDN11
geenin. CLDN11
erityisiä alukkeita ja koetinsekvenssit käytettiin: forward-aluke 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; reverse-aluke 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan-koetin 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Universal Metyloitu DNA (Chemicon International, Temecula, CA) toimi positiivisena kontrollina, ja sarjalaimennoksia sitä käytettiin piirtää standardikäyrän. qMSP kanssa TaqMan koetin tehtävä sellaisen iQ5 lämpösyklilaite (BioRad, Hercules, CA) käyttäen iQ Supermixiä ( em.
). Viisikymmentä sykliä PCR-monistuksen lähtien 50 ng ui bisulfiittikäsiteltyä genomisen DNA tehtiin kolmena kappaleena, mukaan valmistajan protokollaa. Duplex PCR β-aktiini (ACTB) aluketta ja koetin sekvenssit, joissa ei ole CpG: t tehtiin normalisoinnin. Aluke ja koetinsekvenssit käytettiin olivat aiemmin julkaistuista [24]. Normalisoitu metylaatio arvo (NMV) on määritelty seuraavasti: NMV = ( CLDN11-S
/ CLDN11-FM
) /( ACTB-S
/ ACTB Fm
) * 100, jossa CLDN11-S
ja CLDN11-FM
edustavat CLDN11
metylaatiotasoilla näytteessä ja täysin metyloidut DNA: t, vastaavasti, kun taas ACTB-S
ja ACTB-FM
vastaavat β-aktiini
näytteessä ja täysin metyloidut DNA: t, vastaavasti. Koko genomin monistettu DNA (WGA) käytettiin metyloimattoman negatiivisena kontrollina.

Quantitative Käänteinen transkriptio-PCR-analyysi

CLDN11
RT-PCR-amplikoni on suunniteltu päällekkäisiä introni-eksoni rajan, jotta suljetaan genomista DNA ( g
DNA) vahvistusta. Primer sekvenssit kuten aiemmin julkaistuista [18]. Yksi askel qRT-PCR suoritettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [24], käyttämällä Quantitect SYBRA RT-PCR-kittiä (QIAGEN, Valencia, CA), mukaisesti valmistajan protokollaa. CLDN11
ilmaus normalisoitiin β
aktiinin ilme. Kokonais-RNA HFE145 soluja käytettiin standardikäyrää. ( CLDN11-S Twitter / CLDN11-C
) /( ACTB-S Twitter / ACTB-C
), jossa CLDN11- S
ja CLDN11-C
edustavat CLDN11
mRNA ekspressiotasot testinäytteen ja ohjaus mRNA: t, vastaavasti, kun taas ACTB-S
ja ACTB -C
vastaavat β-aktiinin
ekspressiotasot testinäytteessä ja valvonta-mRNA: iden, vastaavasti.

5-atsa-2'-Deoksisytidiini (5-atsa-dC) hoito

AGS on GC solulinja ilmentää hypermetylaatiota CLDN11
promoottori yhdessä poissa CLDN11
mRNA ilmaisun. 5-atsa-2'-deoksisytidiini (5-atsa-dC) solujen käsittely suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [24]. Lyhyesti, GC solulinja AGS (ATCC luettelonumero CRL-1739) siirrostettiin tiheydellä 2 x 10 ^{5 solua /ml T-75 pulloon. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin solut käsiteltiin 1 uM 5-atsa-dC: ssa 72 tuntia. Media, joka sisältää 5-atsa-dC korvattiin juuri valmistettu media 24 tunnin välein. Sitten solut otettiin talteen ja kokonais-RNA uuttamalla. Yhteensä RNA: iden AGS soluista ennen ja jälkeen 5-atsa-dC hoito tehtiin kvantitatiivisen tosiaikaisen RT-PCR-analyysillä.}

Sirna Knockdown Kokeet

CLDN11
erityisiä siRNA oligot ostettiin Ambion, Inc. (Austin, TX). HFE145 solulinja, joka on CLDN11
positiivinen, valittiin vaikutuksen tutkimiseen klaudiini-11 Knockdown maahanmuutosta ja hyökkäys ominaisuuksia mahan soluja. Kokeet suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu (Agarwal et ai.
, 2005). Soluja viljeltiin 6-kuoppalevyillä transfektoitiin siRNA-dupleksit käyttämällä LipofectAMINE 2000 (Invitrogen) seuraten valmistajan ohjeita. Mock-transfektioissa ja epäspesifinen siRNA-dupleksit käytettiin negatiivisina kontrolleina. Soluja käsiteltiin 48 72 tuntia jotta mahdollisimman Knockdown, jonka jälkeen ne joko korjattu Western blot analyysiä tai migraatioon ja invaasion määrityksissä.

Western Blot analyysi Claudin-11 Mahalaukun Cell Lines

Konfluentteja soluviljelmiä pestiin HBSS (Invitrogen) ja kokosolulysaateista tehtiin käyttäen lyysipuskuria: 62,5 mmol /L Tris-HCI (pH 6,8), 10% glyserolia, ja 2% SDS: ää. Proteiinipitoisuus määritettiin käyttäen bikinkoniini- happoa (BCA) -määrityksellä (Pierce, Rockford, IL). Kaksikymmentä mikrogrammaa kokonais-proteiinit erotettiin 10%: sta 20% SDS-PAGE: Tris-glysiini-geeleissä (Invitrogen) ja siirrettiin polyvinylideenidifluoridi kalvoja (Millipore Corp., Bedford, MA). Membraanit blokattiin 5% rasvatonta kuivamaitoa, pestiin TBST-puskurissa, ja tutkittiin anti-klaudiini-11-vasta-ainetta (Zymed, San Francisco, CA). Sitten blotit pestiin ja inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (anti-kani-IgG: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Havaitsemiseen, kemiluminesenssin suoritettiin käyttäen tehostettua kemiluminesenssia (Amersham Pharmacia Biotech).

Cell Invasion ja Migration Pitoisuus

invasiivisuus siRNA-transfektoiduissa soluissa määritettiin käyttämällä Matrigel-päällystettyjä invaasio kammion insertit (24-well-muodossa 8-um huokosia, BD Biosciences) käyttäen muunneltua Boyden kammion määritys [25]. Soluja viljeltiin noin 80%: n konfluenssiin ja seerumia yön yli. Päivänä määritystä solut käsiteltiin trypsiinillä ja elinkelpoisten solujen määrä ottaa. Noin 50000 solut maljattiin päällekkäin jokaisen suodattimen seerumia. Yhtä suuri määrä samaa alustaa, joka sisälsi 20% FCS: ää, pantiin alempaan kammioon ( ts.
, Hyvin alla suodatin) toimimaan kemoattraktantti. Koelevyjä inkuboitiin 37 ° C: ssa korkeintaan 48 tuntia. Solut, jotka eivät muuttaneet tai hyökätä huokosten läpi Transwell insertit poistetaan käsin pumpulipuikolla. Solujen läsnä alareunassa kalvon kiinnitettiin kylmällä metanolilla 10 minuutin ajan, ja sitten värjättiin 0,01% kristalliviolettia 20% etanolia. 10 minuutin inkubaatioajan jälkeen, suodattimet pestiin huolellisesti vedellä ja suspendoitiin 200 ul: aan 5% etikkahappoa ja 5% metanolia. Kolorimetrinen lukemat otettiin OD _{595. Kokeet toistettiin vähintään kolme kertaa, ja kolmena rinnakkaisena kussakin kokeessa. Arvioida solujen vaeltamiseen, määritykset suoritettiin olennaisesti kuten edellä, paitsi että solut maljattiin päälle päällystämättömän (matrigeelin-vapaa) inserttejä.}

Tilastollinen analyysi

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen Studentin t -testi (SPSS, versio 16), jossa p
< 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

tulokset ja keskustelu

testattiin ensin hypoteesia, että CLDN11
promoottori hypermetyloitunut ja että tämä hypermetylaation korreloi käänteisesti CLDN11
mRNA: n ekspression ensisijainen GC kudoksissa. Pariksi ensisijainen mahalaukun normaalin ja kasvaimen kudokset kerättiin Johns Hopkins Hospital (JHH). Näytteet saatiin heti resektion ja pikajäädytettiin käyttöön asti. Ainoastaan ​​tapauksissa saatu tietoisen suostumuksen hyväksymä Institutional Review Board (IRB) sisällytettiin tässä projektissa. Genomisia DNA: ita saatiin 36 kliinisistä näytteistä, jotka käsittävät 18 GC ja 18 Hyväksytty noncancerous mahalaukun limakalvon (NS) kudoksiin. CLDN11
promoottorin metylaation tasot näissä analysoitiin käyttäen kvantitatiivisen tosiaikaisen metylaatiospesifinen PCR (qMSP). Kuvio 1A näyttää normalisoitu metylaatio arvo (NMV), ts.
Suhde metyloitua arvosta CLDN11
promoottorialue kunkin näytteen täysin metyloitu kontrolli-DNA. CLDN11
NM Vs
olivat merkittävästi korkeammat GC yksilöitä kuin niiden vastaavat NS kudoksiin ( P
< 0,001). Sen arvioimiseksi, CLDN11
promoottori hypermetylaation in GC liittyi vaiennettu CLDN11
ilme, CLDN11
mRNA mitattiin käyttämällä kvantitatiivista reaaliaikaista (qRT-PCR) in RNA: t uutetaan 36 yksilöihin, joita käytetään metylointianalyysi. Kuten osoitettu kuviossa 1B, normalisoitu ilmaisu arvot (Nevs) on CLDN11
GC näytteet olivat huomattavasti pienemmät kuin pariksi NS näytteissä ( P
< 0,001). Nämä tiedot vahvistetaan, että CLDN11
promoottori hypermetylaation korreloi heikentynyt tai vaimennettu CLDN11
mRNA ilmaisun ensisijainen GC.

Seuraavaksi arvioimme CLDN11
promoottori metylaatio ja ilmaisun mahalaukun solulinjoissa. Ikuisti ihmisen normaalia mahalaukun epiteelisolujen (HFE145) ja GC solulinjat AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, ja SNU-1 tutkittiin. Kaikki GC testatuissa solulinjoissa (AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, ja SNU-1) osoitti promoottorin hypermetylaatio, kun taas mitään metylaatio havaittu kuolemattomaksi normaaleissa HFE145 solut (kuvio 2A). CLDN11
mRNA-tasot arvioitiin käyttäen qRT-PCR: ää RNA: t puhdistettiin solulinjoista, kun taas klaudiini-11-proteiinin ilmentyminen analysoitiin Western-blottauksella. Kuten kuvassa 2B on esitetty, kaikki 5 syövän riviä ei esiintynyt havaittavaa ekspressiota CLDN11
mRNA: n tai proteiinin, kun taas HFE145 solut ilmenee korkea CLDN11
ekspressiotasoja. Tämä havainto vahvistetaan, että CLDN11
on koordinoidusti hypermetyloitunut ja vaimentua GC solulinjoissa suhteessa normaaliin mahalaukun epiteelisolujen (NGECs).

edelleen vahvistaa vaiennettu CLDN11
ilmentyminen hypermetylaation, käsittelimme GC solulinja AGS kanssa demetyloiva agentti, 5-atsa-2-deoksisytidiini (5-atsa-dC, 1 uM), ja vaihtelevin aikavälein. Yhteensä RNA: t uutetaan ennen vs.
Käsittelyn jälkeen tehtiin qRT-PCR CLDN11
. Kuten voidaan nähdä kuviosta 3, kullakin ajanhetkellä, CLDN11
mRNA tuli uudelleen ilmaisi käsiteltäessä 5-atsa-dC, jossa vahvistetaan, että CLDN11
on vaiennetaan promoottori hypermetylaation vuonna AGS GC soluja.

jäsenet klaudiini proteiinin perhe ovat sekaantuneet säätelyyn soluadheesiota, invaasiota ja migraatio syöpäsolujen [25] - [27]. Siksi tutkimme seuraavaksi CLDN11
vaikutteita solun liikkuvuus tai invasiivisuus. HFE145 soluja, jotka ilmentävät runsas CLDN11
, valittiin vaikutuksia tutkittiin CLDN11
Knockdown on invasiivisia ja muuttavien ominaisuuksien mahalaukun epiteelisolujen. Ohimenevä siRNA transfektiot tehtiin käyttämällä CLDN11-
erityisiä siRNA dupleksit. Transfektio CLDN11
erityisiä siRNA-dupleksit tehokkaasti tukahdutettu klaudiini-11-proteiinin tasot > 90%, kun taas ilmaisu pysyivät ennallaan jäljitellyistä tai ohjata siRNA käsiteltyjä soluja (kuvio 4A). Solun liikkuvuus ja invaasio määritykset suoritettiin siRNA-transfektoiduissa soluissa käyttäen muunneltua Boyden-kammion koejärjestelmässä [25]. Mielenkiintoista on, kuten on esitetty kuvioissa 4B ja 4C, inhibitio CLDN11
ilmentymisen HFE145 soluissa lisäsi merkittävästi muuttavien ja invasiivisia mahdollisuuksia näiden solujen, vastaavasti.

Nykyinen tutkimus vahvistaa siten hypoteesia, että CLDN11
, tiukka risteykseen proteiinia, on vaiennettu GC kautta promoottori hypermetylaation, ja nämä tiedot tukevat osallistumista CLDN11
valvonnassa GC soluinvaasiota ja muuttoliike.

Promoottori hypermetylaation tiedetään liittyvän transkription hiljentäminen tiettyjen geenien. DNA: n metylaatio voi häiritä sitoutumista transkriptiotekijöiden joiden sitoutumiskohtien sisältävät CpG dinukleotideissä. Käyttämällä TFSEARCH ohjelma, me skannattu CLDN11
sekvenssin havaittiin olevan hypermetyloitunut mahasyövän kudoksissa ja solulinjoissa, eli
., The qMSP amplikonin (-104-4 emästä suhteessa kun transkription aloituspaikan CLDN11
). Tämä skannaus tunnistaa otaksuttu sitoutumiskohtia SP1 ja GATA-1 ja GATA-2. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että hypermetylaatiota promoottori DNA myötävaikuttaa vaiennettu CLDN3
ja CLDN4
munasarjojen solulinjoissa, osittain kautta
metylaatio aiheuttama häiriö sitoutumisen SP1 sen samaa alkuperää sitoutumiskohdan (22, 23). Lisäksi jäsenet GATA perheen on osoitettu olevan positiivinen säätelijöitä CLDN11
transkriptio [28]. Lisätutkimukset ovat nyt perusteltua arvioida hypermetylaatiota näitä sivustoja häiritsee sitoutumista transkriptiotekijöiden, ja kuinka tällaiset häiriöt voivat vaikuttaa CLDN11
geenin transkription.

tuumorisoluja tyypillisesti rakenteellisia ja toiminnallisia puutteita niiden TJs [17]. Nämä puutteet liittyvät menetys napaisuuden ja erilaistumista. Toinen tärkeä yhteys TJs ja syöpä on menetys TJ eheyden, minkä seurauksena vuoto tai kuljetusta pro-tuumorigeenisen aineita (kuten kasvutekijöitä tai ravintoaineiden) kehittääkseen tuumorisolun primordia, edistää kasvaimen kasvua [29]. Lisäksi menetys polariteetin, erilaistumista ja liima ominaisuuksia, jotka liittyvät heikentynyt TJ toiminto syöpä voi olla kriittinen hankkimisesta metastaattisessa fenotyyppi [30]. Tutkimukset ovat viitanneet siihen, että poikkeamat TJ liittyvien proteiinien voi edustaa epiteelin-mesenkymaalitransitioon (EMT), mikä muuttaa invasiivisuus ja motiliteettia syöpäsoluja.

Modulaatiot ilmentymisen TJ liittyvien proteiinien, erityisesti klaudiini proteiineja, on on osoitettu useissa syövissä. Viimeaikaiset tutkimukset meidän ja muut ovat osoittaneet muutoksia klaudiini proteiinia sääntelyn eri epiteelisyövissä [18]. Jäsenet klaudiini geeniperheen ilmaistaan ​​erittäin kudosspesifisiä sekä erittäin kehitysvaiheessa-erityisiä, tavalla. Lisäksi, riippuen syövän tyypistä, ekspression klaudiini proteiinit voivat olla joko ilmen- tymisen lisääntymisen tai vaimentua syöpäsoluissa. Esimerkiksi useat klaudiini proteiinit yläreguloituja paksusuoli, munasarja-, haima- ja eturauhasen syöpiä, kun taas jotkut ovat vaimentua rintasyövän ja pään ja kaulan alueen syövät [16], [18]

Tutkimukset ovat aiemmin raportoitu muutoksia ilmaisun profiilit jäsenten klaudiini perheen liittyvän GC. Serial analyysi geenien ilmentymistä (SAGE) tunnisti CLDN18
geenin vaimentua in GC joilla suoliston fenotyyppi [31]. CLDN23
geeni myös vaimentua suolen-tyyppinen GC [32]. Kääntäen, Cunningham et al.
Raportoitu CLDN4
lauseke kasvanut suolen metaplasiaa ja mahalaukun epiteelin dysplasiaa, tämän geenin tunnistamiseksi merkkinä GC esiasteleesioita [33]. Nykyisessä tutkimuksessa löydettiin CLDN11
lauseke vaimentua tai vaiennettu GC kautta
hypermetylaatiota sen promoottorialueen. Lisäksi olemme havainneet, että toisin kuin CLDN18
ja CLDN23
, CLDN11
ilmentymistä vaimentua GC potilasnäytteiden sekä solulinjoissa, riippumatta hajanainen vs .
suoliston alatyyppi.

Claudin-11, joka tunnetaan myös nimellä oligodendrocyte-spesifistä proteiinia, oli ensimmäinen identifioitu nimenomaisesti ilmaistaan ​​tiiviin liitoksen osa oligodendrosyyttien aivoissa ja Sertoli-solujen ja rotilla ja hiirillä [ ,,,0],34], [35]. Menetys klaudiini-11 ilmentyminen, joka johtaa häiriöitä TJ este, liittyy neurologisia ja lisääntymis- alijäämät [36]. Tuoreessa tutkimuksessa raportoitu yli-ilmentymisen ja mislocalization on CLDN11
verestä-kiveksen esteen Sertolin soluissa liittyvän kivesten intraepiteliaalisten neoplasiaa miehillä [37]. Tiedot nykyisen tutkimuksessa todetaan, että CLDN11
ilmentyy normaaleissa mahan kudoksissa ja kuolemattomaksi NGECs. Kuitenkin sen täydellinen tehtävät normaalissa vatsassa sekä mahasyövän jäävät epäselviksi.

Yrittäessään tutkia mahdollista osallistumista CLDN11
GC, tutkimme fenotyyppisiä muutoksia, jotka liittyvät hiljentäminen CLDN11
ilmaisun CLDN11-
ilmentävät mahan epiteelisolujen (HFE145). Erittäin kiinnostavaa, siRNA-välitteisen knockdovvn CLDN11
lisännyt solun liikkuvuus ja invaasiota.

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet syöpää erityisiä fenotyyppisiä muutoksia liittyä modulaatiot vuonna klaudiini ilmaisun eri syöpätyypeissä . Yli-ilmentymisen klaudiini-3 ja klaudiini-4 proteiinien munasarjasyövän solulinjoissa johtaa lisääntyneeseen invaasiota näiden solujen [25]. Paksusuolen syöpä, lisääntynyt ilmentyminen klaudiini-1 on raportoitu, ja muutokset klaudiini-1 ilmentymisen aiheuttavat merkittäviä vaikutuksia kasvuun Ksenosiirretyn kasvaimia ja etäpesäkkeitä kateenkorvattomissa nude-hiirissä [27]. Toisaalta, klaudiini-7 downregulation rintasyövän on liittynyt lisääntynyt solujen discohesion ja kyky rintasyövän solujen levittää [19]. Lisäksi kokeissa haiman solulinjat osoittivat, että ilmentyminen klaudiini-4 johtaa vähentyneeseen invasiivisuus, tuumorigeenisyyteen, ja metastaattisen potentiaalin näiden solujen [38]. Syyt näihin eroihin voimassa tällä hetkellä epäselvä, mutta voi liittyä kudosspesifisiä eroja klaudiini toimintahäiriön tai jopa vaihteluille vasteen eri solulinjoissa. On selvää, jäsenet klaudiini perheen tiedetään ilmaistava kudosspesifisellä tavalla ja voivat käyttää erilaiset vaikutukset.

Vaikka viime vuosina on käynyt selväksi, että TJs ja TJ liittyvien proteiinien on laaja ja monipuolinen toiminnallinen ja fysiologisia toimintoja normaalissa ja syöpä- olosuhteissa molekyylitason mekanismit näitä toimintoja jää epäselväksi. TJs ovat kehittyneempiä solujen välisen laitteita pystyy rekrytoinnin signalointi proteiineja, säädeltyä solujen eri prosessien kuten solun kasvussa, erilaistumiseen, ja kasvaimen kehittymisen [39], [40]. Klaudiini proteiineja suoraan yhdistää diskreetti signaalintransduktioreitteihin vuorovaikutuksessa molekyylejä, kuten epätyypillinen proteiinikinaasi C ja Rho proteiineja, samoin kuin muiden PDZ domain sisältäviä proteiineja. Munasarjasyövän, claudins muokata kasvaimen invaasio säätelemällä MMP toimintaa [25].

Yhteenvetona tiedot nykyisestä tutkimuksen tunnistaa CLDN11
tavoitteeksi epigeneettiset muutos sekä lupaava biomarkkereiden mahasyövän varhaisen toteamisen, diagnosoinnin ja hoidon. Nämä havainnot viittaavat myös siihen osallistuminen CLDN11
downregulation karsinogeneesis- kautta
edistäminen soluinvaasiota ja liikkuvuuteen. Mekanismit tätä ilmiötä sovelletaan lisätutkimuksia.

Kiitokset

Kiitämme tohtori Duane T Smoot hänen antelias lahja HFE145 soluja.

• PLoS Genetics: MiR-218 Estää ja metastaasit mahasyövän kohdistamalla ROBO1 Reseptori
• PLoS Genetics: onkogeeninen Pathway Yhdistelmät Veikkaa Clinical ennuste mahasyövän