Plos ONE: utišanje Claudin-11 je povezana z večjim invazivnosti želodca raka celic

Povzetek

Ozadje

Claudins so membranski proteini, ki igrajo ključne vloge v tesen križišču (TJ) oblikovanja in funkcionalnosti. Člani claudin genske družine, so dokazali, da se odklonsko urejeno, da sodelujejo v patogenezi različnih človeških raka. V tej raziskavi smo poročajo, da claudin-11 ( CLDN11
) je utišan pri raku želodca preko
hypermethylation svojega promotorja regiji.

Metodologija /Glavne ugotovitve

Ravni CLDN11
metilacija in mRNA izraz so bile izmerjene v osnovnih želodčnih tkiva raka, noncancerous želodčne sluznice in celičnih linij želodčnega izvora s kvantitativno metilacijo specifičnih PCR (qMSP) in kvantitativno povratne transkriptaze-PCR (QRT-PCR) oz. Analize seznanjenih želodca raka in sosednjih normalnih želodčnega tkiva je pokazala hypermethylation v CLDN11
promotorja regiji želodca raka, in to hypermethylation je pomembno povezana z downregulation za CLDN11
izraz vs
normalno tkivo. CLDN11
promotor regija je hypermethylated tudi v vseh želodčnih celičnih linijah raka testirajo glede na imortaliziranih normalnih želodca epitelijskih celic. Poleg tega, CLDN11
mRNA izraz je obratno povezana s stopnjo metilacije. Zdravljenje CLDN11
-nonexpressing želodca rakave celice s 5-aza-2'-deoksicitidinska obnovljena CLDN11
izraz. Poleg tega, siRNA posredovano rasklapanje za CLDN11
izraz v normalnih želodčne epitelijskih celic povečali gibljivost in invazivnosti.

Sklepi /Pomen

Ti podatki kažejo, da hypermethylation za CLDN11
, ki vodijo do navzdol reguliranih izražanja, prispeva k želodca kancerogenosti s povečanjem celično gibljivost in invazivnosti. Nadaljnje razumevanje mehanizmov, povezanih z vlogo claudin beljakovin v želodcu rakotvornost bo verjetno pomagalo pri ugotavljanju romana pristopov za diagnostiko in terapijo raka želodca

Navedba. Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP et al. (2009) utišanje Claudin-11 je povezana z večjim invazivnosti želodca rakavih celic. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10,1371 /journal.pone.0008002

Urednik: Fatah Kashanchi, George Washington University School of Medicine, Združene države Amerike

Prejeto: 3. avgust 2009; Sprejeto: 23. oktober 2009; Objavljeno: 24. november 2009

Copyright: © 2009 Agarwal et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprl ameriški National Institutes of Health podeljuje CA085069, CA138677 in CA146799 za SJ Meltzer. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) ostaja druga najbolj pogost vzrok smrti zaradi raka v svetu. To je ena od najbolj smrtonosnih malignih bolezni in vodilni vzrok smrti zaradi raka v državah v razvoju, s splošnimi preživetja 5 let pod 20% [1], [2].

Raziskave GK in njihova preneoplastično prekurzor poškodbe so odkrili številne genetske in epigenetski spremembe, vključno z mikrosatelitnih nestabilnosti, točkovnih mutacij, in izgube heterozigotnosti (LOH), ki vplivajo na zaviralnih genov (ZTP) [3] - [6]. Kljub temu, molekulska patogeneza GC je še vedno nepopolno razumemo.

epigenetske spremembe so zelo pomembne za razvoj in napredovanje raka [7]. Transkripcije inaktivacijo zaviralnih genov preko odklonskega promotorja hypermethylation CpG otokov, ki povzroča stalno genov utišanja, je glavni epigenetsko mehanizem TSG inaktivacije.

Pred tem so bile objavljene študije o promotorja hypermethylation v GK in njihovih predrakavih predhodnimi sestavinami [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A in p15INK4B so bili med prvimi genov pokazati hypermethylation v GK [11]. Naša skupina in drugi kasneje odkrili hypermethylation od popravljanja neujemanja gena hMLH1 DNK v GK razstavlja pogosto mikrosatelitnega nestabilnost (MSI-H) [12] - [14]. Prav tako se je pokazalo, da se pojavi hypermethylation gena E-kadherina (CDH1) pogosto v GK [15].

, ki temelji mikromrež pilot genoma vsej iskanje naša skupina izvaja, izvaja za odkrivanje novih epigenetically utišani genov v želodca karcinogeneza, označene claudin-11 ( CLDN11
), tesen spoj (TJ) protein, kot potencialni cilj epigenetske inaktivacije v želodcu raka (neobjavljeni podatki).

claudin-11 spada družini claudin proteinov, ki vsebuje več kot 23 članov. Člani družine claudin so izražene tako visoko tkivno specifično različnih normalnih in neoplastičnih tkiv [16]. Claudins so transmembranski proteini, ki igrajo ključne vloge v TJ oblikovanja in funkcionalnosti. TJS so intercelularne križiščih kritični v paracelični prevozu topil, kot tudi pri ohranjanju celice polarnost. Tumorske celice pogosto kažejo strukturne in funkcionalne pomanjkljivosti v svojih TJS [17].

V zadnjih letih so številne študije so pokazale, zmotne izražanje claudin beljakovin v različnih vrstah raka [18], [16]. Nekatere od teh študij je pokazala, disregulacij claudin beljakovin izražanja preko
promotorja hypermethylation. -Hypermethylation povzroča utišanje claudin-7 izražanja so že poročali v prsi [19] in debelega [20] karcinomov. Claudin-6 je tudi epigenetically utišani pri raku dojke [21], medtem ko claudins -3 in -4 so epigenetically urejena v jajčnikih rakavih celic [22], [23].

Sedanja študija opredeljuje in poročila, v naše znanje prvič, da je CLDN11
promotor regija hypermethylated v GC tkiv in celičnih linij. Medtem ko CLDN11
mRNA je bila izražena v vseh osnovnih noncancerous želodca tkiva sluznice, kot tudi v imortalizirana normalnem želodca celične linije epitelnega, je utišan v vseh GC tkivih in pregledati celične linije. Zanimivo je, da siRNA posredovano downregulation za CLDN11
v CLDN11
-izražanje želodčnih celic je bilo povezanih tudi z dejavnostmi, povezanimi z rakom sprememb fenotipske, posebej povečano celično gibljivost in invazivnosti.

Materiali in metode

Mobilni Lines in Klinični vzorci tkiva

ovekovečena normalne želodca epitelnih celic človeških (HFE145) so bili pridobljeni od Dr. Duane T. Smoot (Howard University) in GC celične linije AGS, združenje SIIA, MKN28, KATOIII in snu-1 so bili pridobljeni iz ATCC. Vse celične linije smo kultivirali in vzdržujejo v mediju RPMI 1640 z dodatkom 10% fetalnega govejega seruma in 1% antibiotike-antimikotično raztopine (Invitrogen).

Seznanjene primarni želodca normalnih in tumorskih tkivih, so bili zbrani v bolnišnici Johns Hopkins ( JHH). Osebki so snap zamrznjene takoj po resekcijo.

Etika Izjava

Johns Hopkins University (JHU) Institutional Review Board (IRB) je bila odobritev pridobljena v vseh primerih, vključenih v raziskavo. Primeri so bili pridobljeni iz JHU kirurška patologija pod JHU IRB odobrila 02-07-19-05e izvzetja v skladu s pravilom 45 CFR 46,101 (b), ki odpove pogoje za pridobitev soglasja pacienta.

Čiščenje in priprava genomske DNK in Total RNA

genomske DNK je bila vzeta iz snap zamrznjene vzorce tkiva ali celične linije z uporabo DNeasy Blood & Tissue Kit (QIAGEN, Valencia, CA), v skladu s protokolom proizvajalca. Celotno RNA smo ekstrahirali z TRIzola reagentom (Invitrogen). Ekstrahirajo DNA in RNA so količinsko z uporabo NanoDrop ND-1000 spektrofotometer (NanoDrop, Wilmington, DE).

Kvantitativna metilacije specifičnega PCR (qMSP) za Claudin-11

Genomski DNA, pridobljen iz 36 vzorce bolnikov, ki obsegajo 18 ° C in 18, ki se ujemajo noncancerous želodčne sluznice (NS) tkiva, kot tudi iz različnih želodčnih celičnih linij, so bili izpostavljeni qMSP. qMSP je bila izvedena, kot je opisano prej, z manjšimi spremembami [24]. Na kratko, je bisulfit zdravljenje genomske DNK izvede na EpiTect bisulfit Treatment Kit (Qiagen, Valencia, CA). PPN pomnožkov in TaqMan sonda zazna popolnoma methylated DNA so bili zasnovani, da vključuje več mest CpG v regiji 5'-UTR z CLDN11
gena. CLDN11
-specifična primerji in zaporedja sonda uporabljajo so: naprej primer 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; reverse primer 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan sonda 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Univerzalni Metiliran DNA (Chemicon International, Temecula, CA) je služila kot pozitivno kontrolo in smo uporabili serijske razredčitve to, da parcelo standardno krivuljo. qMSP s sondo TaqMan so bile opravljene na toplotno ciklerja iQ5 (BioRad, Hercules, CA) s pomočjo iQ Supermix ( ibid.
). Petdeset ciklov PCR, ki se začne s 50 ng-bisulfita obravnavajo genomske DNA smo izvedli v treh izvodih, v skladu s protokolom proizvajalca. Duplex PCR z β-aktinskih (ACTB) primerja in sonde sekvenc, ki ne vsebujejo CpGs so bile izvedene za normalizacijo. zaporedja začetnih oligonukleotidov in sonde, ki se uporabljajo, so bili že prej [24] objavila. Normalizirana metilacija vrednosti (NMV) je bila opredeljena na naslednji način: NMV = ( CLDN11-S
/ CLDN11-FM
) /( ACTB-S
/ ACTB -FM
) * 100, pri čemer je CLDN11-s
in CLDN11-FM
predstavljajo CLDN11
raven metilacije v vzorcu in v celoti metilni DNA, medtem ko so ACTB-s
in ACTB-FM
ustrezajo P-aktina
v vzorcu in v celoti metilni DNA, v tem zaporedju. Celotnega genoma pomnožena DNA (WGA) je bil uporabljen kot nemetiliran negativno kontrolo.

Kvantitativna Povratne Transcription-PCR analizo

CLDN11
RT-PCR pomnožkov je bil zasnovan tako, da se prekrivajo intron-ekson meja, da se izključi genomske DNA ( g
DNA) ojačanje. Primer zaporedja so bile, kot je objavljeno prej [18]. Enostopenjski QRT-PCR smo izvedli kot je opisano predhodno [24], z uporabo Quantitect SYBRA RT-PCR kit (QIAGEN, Valencia, CA), v skladu s protokolom proizvajalca. CLDN11
izraz je normalizirana na P
P-aktinski izražanja. Skupno RNK iz HFE145 celic smo uporabili standardno krivuljo. ( CLDN11-S
/ CLDN11-C
) /( ACTB-S
/ ACTB-C
), kjer je CLDN11- s
in CLDN11-C
predstavljajo CLDN11
ravni mRNA izražanja v preskusni vzorec in nadzora mRNA so, medtem ko so ACTB-s
in ACTB -C
ustrezajo beta-aktin
ravni izražanja v preskusni vzorec in nadzora mRNA so, oz.

5-aza-2'-deoksicitidin (5-aza-DC) Zdravljenje

AGS je GC celična linija manifestira hypermethylation na CLDN11
promotor v povezavi z manjkajočim CLDN11
mRNA izražanja. 5-aza-2'-deoksicitidin (5-aza-DC) obdelavo celic smo izvedli kot je bilo prej [24] opisano. Na kratko, je GC celična linija AGS (ATCC kataloška številka CRL-1739) cepimo z gostoto 2 x 10 ^{5 celic /ml v T-75 bučke. Štiriindvajset ur kasneje smo celice obdelali z 1 um 5-aza-DC 72 ur. Mediji, ki vsebujejo 5-aza-DC je bil nadomeščen s sveže pripravljenimi mediji vsakih 24 ur. Celice nato zberemo na skupno ekstrakcijo RNA. Skupaj RNA iz AGS celic pred zdravljenjem in po njem 5-aza-dC bili podvrženi kvantitativno realnem času analize RT-PCR.}

Mali moteče RNA rasklapanje Poskusi

CLDN11
-specifična siRNA oligo so bili kupljeni od Ambion, Inc. (Austin, TX). Celično linijo HFE145, ki je CLDN11
pozitiven, je bil izbran za študij vpliva claudin-11 rasklapanje o migracijski in invazijo lastnosti želodčnih celic. Poskusi so bile izvedene kot je bilo predhodno opisano (Agarwal sod.
, 2005). Celice kultivirani v 6 vdolbinami smo transfektirali z siRNA dupleksov uporabo Lipofectamine 2000 (Invitrogen), po navodilih proizvajalca. Mock-Transfekcije in nespecifični siRNA dvoetažna so bili uporabljeni kot negativne kontrole. Celice so zdravili 48 do 72 ur, da se omogoči maksimalna rasklapanje, po katerem so bodisi pridobljen Western blot analizo ali uporabiti za migracijo in invazijo testov.

Western Blot Analiza Claudin-11 v želodčnem celičnih linijah

Strnjena celične kulture smo sprali s HBSS (Invitrogen) in celih lizatov celic so bile narejene s pomočjo liznega pufra: 62,5 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8), 10% glicerola, in 2% SDS. Koncentracija proteina smo določili s pomočjo bicinchoninic kislina (BCA) analiznega kompleta (Pierce, Rockford, IL). Dvajset mikrogramov celokupnih proteinov smo ločili s 10% na 20% SDS-PAGE na Tris-glicin gelov (Invitrogen) in prenesemo na poliviniliden ditluoridne membrane (Millipore Corp. Bedford, MA). Membrane smo blokirali s 5% nemastno mleko v prahu, izperemo v pufru TBST in skeniran z anti-claudin-11 protitelesa (Zymed, San Francisco, CA). Blots smo potem sprali in inkubirali na hrenovo peroksidazo konjugiranih sekundarni protiteles (anti-kunčjega IgG: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Za detekcijo, je kemiluminescenca izvedena z uporabo okrepljenega kemiluminescenco komplet (Amersham Pharmacia Biotech).

Cell Invasion in migracije Vsebnost

invazivnosti siRNA-transfekciji celic smo določili s pomočjo Študiie-prevlečeni invazijo komorni vložki (24-dobro-format z 8-mikrometrskimi pore, BD bioznanosti) z uporabo modificiranega Boyden komore testa [25]. Celice smo kultivirali do približno 80% konfluentne in-seruma izstradana preko noči. Na dan preizkusa smo celice tripsinizirali in izvedljivih število celic delo. Približno 50.000 celice zasadimo na vrhu vsakega posameznega filtra v mediju brez seruma. Enak volumen istem mediju, ki vsebuje 20% FCS damo v spodnji komori ( t.j..
Je tudi pod filtrom) deluje kot chemoattractant. Test Plošče smo inkubirali pri 37 ° C do 48 ur. Celice, ki niso prehajajo ali napadejo skozi pore vložkov Transwell smo ročno odstranimo z vato. Celice so prisotne na dnu membrane so bile določene v hladnim metanolom 10 minut in nato obarvamo z 0,01% kristal vijoličnim v 20% etanolu. Po 10 minutah inkubacije, so filtri v vodi temeljito oprati in suspendiramo v 200 xl 5% ocetne kisline in 5% metanola. Kolorimetrične odčitki so bili sprejeti na OD _{595. Poskusi so bili ponovi vsaj trikrat, v treh izvodih v vsakem poskusu. Oceniti migracija celic, smo teste izvedli v bistvu tako kot zgoraj, le da so bile celice nanese na vrhu neprevlečenih (Matrigel prosto) vložki.}

Statistična analiza

Statistične analize so bile izvedene z uporabo študentskega t -test (SPSS, verzija 16), z p
. < 0,05 velja za statistično značilno

Rezultati in diskusija

najprej smo testirali hipotezo, da je CLDN11
promotor hypermethylated in da to hypermethylation korelira obratno s CLDN11
mRNA izražanja v primarnih GC tkivih. Seznanjene primarni želodca normalnih in tumorskih tkivih, so bili zbrani na Hopkins bolnišnici Johns (JHH). Osebki so dobili takoj po resekciji in snap zmrznjene do uporabe. Samo primeri, pridobljene s privolitvijo, ki jih revizijski odbor institucionalne (IRB) odobreni so bili vključeni v ta projekt. Genomske DNA so bili pridobljeni iz 36 kliničnih vzorcev, ki obsega 18 ° C in 18, ki se ujemajo noncancerous želodca sluznice (NS) tkiva. CLDN11
ravni promotor metilacije v teh vzorcih smo analizirali s kvantitativno realnem času metilacijo specifični PCR (qMSP). Slika 1A prikazuje normalizirane metilacijski vrednosti (NMV), t.j..
, Razmerje metiliranega vrednosti CLDN11
promotorja regiji v vsak osebek v celoti metiliranega kontrolno DNK. CLDN11
NM Vs
bili v GC osebkov bistveno višja kot pri njihovih ujemajočih NS tkiv ( P
< 0,001). Za oceno, ali CLDN11
promotor hypermethylation v GK je bila povezana z utišanje CLDN11
izražanja, CLDN11
ravni mRNA bilo merjeno s kvantitativno v realnem času (QRT-PCR) v RNA, pridobljeni od 36 vzorcev, ki se uporabljajo za analizo metilacije. Kot je prikazano na sliki 1B, normirane izraz vrednosti (NEVs) za CLDN11
in GC vzorcih so bile bistveno nižje kot v parnih NS vzorcih ( P
< 0,001). Ti podatki ugotovi, da je CLDN11
promotor hypermethylation povezana z zmanjšano ali utišati CLDN11
mRNA izražanja v primarnem GK.

Naprej, smo ocenili CLDN11
promotor metilacija in izražanje v celičnih linijah želodca. Ovekovečena normalne želodca epitelijskih celic človeka (HFE145) in GC celične linije AGS, SIIA, MKN28, KATOIII in snu-1 so preučevali. Vse GC celic testirani linije (AGS, SIIA, MKN28, KATOIII in snu-1) je pokazala promotor hypermethylation, ker ni bilo metilacije opazili imortaliziranih normalnih HFE145 celic (Slika 2A). CLDN11
ravni mRNA smo ocenili s pomočjo QRT-PCR na RNA očistimo iz celične linije, medtem ko je bil claudin-11 protein izraz analizirali z metodo Western blot. Kot je prikazano na sliki 2B, vseh 5 raka linije razstavljal ni zaznavno izraz CLDN11
mRNA in proteina, medtem ko HFE145 celice kaže visoke CLDN11
raven izražanja. Ta ugotovitev določa, da CLDN11
je coordinately hypermethylated in navzdol reguliranih v GC celičnih linij, v primerjavi z običajnimi želodčnih epitelijskih celic (NGECs).

Za dodatno potrditev utišanje CLDN11
izražanja , ki ga hypermethylation smo obdelan GC celične linije AGS je z demetiliranjem agent, 5-aza-2-deoksicitidinsko (5-aza-DC, 1 pM), v različnih časovnih intervalih. Skupaj RNA pridobljeni pred vs.
Ko je bilo zdravljenje izpostavljeni QRT-PCR za CLDN11
. Kot lahko vidimo na sliki 3, za vsak čas, CLDN11
mRNA postal ponovno izrazil na zdravljenje s 5-aza-DC, ki potrjuje, da je CLDN11
se zatrejo promotorja hypermethylation v letnem pregledu rasti . GC celice

Člani družine claudin beljakovin so bili vpleteni v regulacijo celičnega adhezijo, invazijo in migracije rakastih celic [25] - [27]. Zato bomo naslednjič raziskovali, ali CLDN11
vpliva na celično gibljivost ali invazivnost. HFE145 celice, ki izražajo bogat CLDN11
, so se odločili, da preuči učinke CLDN11
rasklapanje na invazivne in selitvenih lastnosti epitelijskih celic želodca. Prehodni siRNA Transfekcije opravi z CLDN11-
posebne siRNA dupleksov. Transfekciji s CLDN11
-specifične siRNA dvoetažna učinkovito zatrta claudin-11 količina beljakovin, ki jih > 90%, medtem ko je izraz ostal v mock- ali nadzirale-siRNA zdravijo celice (slika 4A) nespremenjena. Cell gibljivosti in invazijo analize so bile izvedene na siRNA transfekcije celic z uporabo modificiranega Boyden-komorni sistem Preskusno [25]. Zanimivo je, kot je prikazano na sliki 4B in 4C, inhibicijo CLDN11
izraz v HFE145 celic močno povečal migracijskih in invazivne potenciale teh celic, oz.

Trenutno Študija tako potrjuje hipotezo, da CLDN11
, tesen spoj protein, ki je utišan v GC preko promotorja hypermethylation, in ti podatki podpirajo sodelovanje CLDN11
pri nadzoru GC celične invazije in migracij.

Promotor hypermethylation je znano, da je povezana z transkripcijske utišanje določenih genov. DNA metilacija lahko vplivajo na vezavo transkripcijskih faktorjev, katerih vezava strani vsebujejo CpG dinukleotide. Uporaba programa TFSEARCH programske opreme, smo pregledal CLDN11
zaporedje bilo ugotovljeno, da se hypermethylated v želodčnih tkiv raka in celičnih linij, tj
., The qMSP pomnožkov (-104 do 4 baze glede na transkripcijski start stran za CLDN11
). Ta slika opredeljena domnevna vezavna mesta za servisnim paketom SP1 in GATA-1 in GATA-2. Prejšnje študije so pokazale, da hypermethylation od promotorja DNK prispeva k utišanje CLDN3
in CLDN4
in jajčnikov celičnih linijah, delno preko
motenj-metilacije povzroča vezave s servisnim paketom SP1 s sorodnim vezavno mesto (22, 23). Poleg tega so bili člani družine GATA izkazali za pozitivne regulatorji CLDN11
prepis [28]. Nadaljnje raziskave so zdaj upravičeno, da oceni, ali hypermethylation teh straneh moti vezavo transkripcijskih faktorjev, in kako so te motnje lahko vplivajo na CLDN11
gensko transkripcijo.

Tumorske celice običajno kažejo strukturne in funkcionalne pomanjkljivosti v svojem TJS [17]. Te pomanjkljivosti so povezane z izgubo polaritete in diferenciacije. Druga pomembna vez med TJS in rakom je izguba TJ celovitosti, s posledično puščanja ali prevoz pro-tumorogenih snovi (kot so rastni faktorji ali hranil) v razvoj tumorskih celic primordia, spodbuja rast tumorja [29]. Poleg tega lahko izguba polarnosti, diferenciacije in lepljivost, povezanih z okvarjenim TJ funkcijo raka je ključnega pomena pri pridobitvi metastaz fenotip [30]. Študije so pokazale, da lahko nepravilnosti v TJ, povezanih proteinov predstavljajo epitelne-mezenhimskih prehod (EMT), s čimer se spreminja invazivnosti in gibljivost rakavih celic.

modulacije v izražanju TJ-povezanih proteinov, predvsem claudin proteinov, imajo dokazano v številnih raka. Nedavne študije z nami in drugimi so pokazale spremembe v claudin proteinske regulacije v različnih rakavih obolenj epitelijskih [18]. Člani claudin družini genov so izražene tako visoko tkivno specifičen, kot tudi zelo razvojno fazo specifične. Poleg tega, odvisno od vrste raka, izraz claudin proteinov lahko bodisi molekul ali navzdol reguliranih v rakave celice. Na primer, več claudin beljakovine povečana pri debelega črevesa, jajčnikov, trebušne slinavke in prostati, medtem ko so nekateri navzdol reguliranih pri raku dojke in raku glave in vratu [16], [18]

Raziskave so že poročali spremembe v izražanju profili članov claudin družine, ki se povezujejo z GC. Serijska analiza genske ekspresije (SAGE) ugotovila, da je CLDN18
gen navzdol reguliranih v GK, ki imajo za črevesno fenotip [31]. CLDN23
gen navzdol reguliranih tudi v GK intestinalnega tipa [32]. Nasprotno, Cunningham PODJETJA
poročali et al. CLDN4
izraz, ki se v črevesju metaplazijo in želodca epitela displazija povečal, razpoznavanje te gen kot označevalec GC predhodnikov poškodb [33]. V sedanji raziskavi smo ugotovili, CLDN11
izraz, ki se navzdol reguliranih ali utišani v GC preko
hypermethylation svojega promotorja regiji. Poleg tega smo ugotovili, da v nasprotju s CLDN18
in CLDN23
, CLDN11
izraz je navzdol reguliranih v vzorcih GC bolnikov kot tudi v celičnih linijah, ne glede na razpršenih vs .
črevesno podtip.

Claudin-11, znan tudi kot oligodentrocitnega specifičnih beljakovin, je najprej ugotovil, da je treba posebej izražena v Tesni stik sklopov oligodendrocitov v možganih in v Sertolijeva Celica podgan in miši [ ,,,0],34], [35]. Izguba claudin-11 izražanja, ki vodi do motenj v TJ pregrade, ki je povezano z nevrološkimi in reproduktivnih primanjkljaj [36]. Nedavna študija poročali prekomerno in mislocalization za CLDN11
iz krvi modom v Sertolijeva Celica, ki je povezana z testisov intraepitelijske neoplazije pri moških [37]. Podatki v sedanji raziskavi ugotovi, da CLDN11
je izražen v normalnih želodčnih tkivih in ovekovečena NGECs. Vendar njene popolne funkcije v normalnem želodcu kot tudi v želodcu rakotvornost ostajajo nejasne.

V poskusu, da razišče morebitno vpletenost CLDN11
in GC, smo proučevali fenotipske spremembe, povezane z utišanje CLDN11
izraz v CLDN11-
izražajo želodčnih epitelnih celic (HFE145). Zelo zanimivo, siRNA posredovano rasklapanje za CLDN11
povzročilo večjo gibljivost celic in invazije.

Prejšnje študije so poročali raka posamezne fenotipske spremembe, ki jih je treba povezane z modulacije v claudin izražanja v različnih vrstah raka . Čezmerno claudin-3 in claudin-4 beljakovin v jajčnikih rakave celične linije rezultatov v povečani vdoru teh celic [25]. Pri raku debelega črevesa, povečala so poročali izraz claudin-1, in spremembe v claudin-1 izražanja izvajajo pomembno vpliva na rast ksenotransplantirali tumorjev in metastaz gole miši [27]. Po drugi strani pa je bilo claudin-7 downregulation pri raku na dojki, povezano s povečano celično discohesion in sposobnost celic raka dojke za razširjanje [19]. Poleg tega so poskusi trebušne slinavke celičnih linij, je pokazala, da izraz claudin-4 vodi v zmanjšano invazivnosti, tumorjev in metastatskega potenciala teh celic [38]. Razlogi za te razlike v učinku so danes nejasno, lahko pa so povezane z razlikami tkivno specifičnih v claudin funkcijo ali celo do razlike v odzivu različnih celičnih linijah. Jasno je, da so znani člani claudin družine, da se izrazi na način tkivno specifični in lahko uveljavljajo različne učinke.

Čeprav je v zadnjih letih je postalo jasno, da imajo TJS in TJ-povezani proteini obsežno in raznoliko funkcionalno in fiziološke aktivnosti v normalnih in rakavih pogoji, molekularne mehanizme, ki podpirajo te dejavnosti, še vedno nejasna. TJS so prefinjene intercelularne aparati, ki lahko najemanju signalnih proteinov in tako uravnava različne celične procese, vključno s celično rast, diferenciacijo in tumorigeneze [39], [40]. Claudin proteini neposredno povežemo z diskretnimi prenos signalov poti z interakcijo s signalnimi molekulami, kot so netipično protein kinaze C in Rho proteinov, kot tudi z drugimi PDZ proteini vsebujejo domene. Pri raku jajčnikov, claudins spremeniti tumorja invazijo z zakonsko ureditvijo MMP dejavnost [25].

Če povzamemo, podatki iz trenutne študije identificirati CLDN11
kot cilj epigenetske spremembe, kot tudi obetaven biomarkerjev za želodčne raka zgodnje odkrivanje, diagnostiko in terapijo. Te ugotovitve kažejo tudi sodelovanje CLDN11
downregulation v rakotvornost preko
spodbujanje celične invazije in gibljivost. Mehanizmi za ta pojav so predmet nadaljnje preiskave.

Priznanja

Zahvaljujemo se dr Duane T Smoot za njegovo velikodušno darilo HFE145 celic.

• Plos Genetics: MIR-218 zavira invazijo in metastaze želodca raka z usmerjanjem Robo1 Receptor
• Plos Genetics: onkogeni Pathway Kombinacije Napovedati Klinični prognozo želodčnega raka