PLOS ONE: El silenciamiento de Claudín-11 se asocia con mayor invasividad de las células de cáncer gástrico

Extracto

Antecedentes

Claudins son proteínas de membrana que desempeñan papeles cruciales en la formación apretada unión (TJ) y la función. Los miembros de la familia de genes claudin se han demostrado para ser aberrante regulada, y de participar en la patogénesis de diversos cánceres humanos. En el presente estudio, mostramos que la claudina-11 ( CLDN11
) se silencia en el cáncer gástrico a través de
hipermetilación de su región promotora.

Metodología /Principales conclusiones

Los niveles de CLDN11
metilación y la expresión de mRNA se midieron en los tejidos primarios de cáncer gástrico, mucosa gástrica no cancerosos y líneas celulares de origen gástrico mediante PCR cuantitativa específica de metilación (qMSP) y cuantitativa la transcriptasa inversa-PCR (qRT-PCR), respectivamente. Los análisis de los cánceres gástricos emparejados y tejidos normales adyacentes gástricos hipermetilación revelada del CLDN11
región promotora en los cánceres gástricos, y esto hipermetilación se correlacionó significativamente con la regulación a la baja de CLDN11
expresión vs
tejidos normales. El CLDN11
región promotora fue también hypermethylated en todas las líneas celulares de cáncer gástrico ensayados respecto a las células epiteliales gástricas normales inmortalizadas. Por otra parte, CLDN11
expresión de ARNm se correlacionó inversamente con el nivel de metilación. El tratamiento de CLDN11
-nonexpressing células de cáncer gástrico con 5-aza-2'- desoxicitidina restaurado CLDN11
expresión. desmontables Por otra parte, mediada por siRNA de CLDN11
expresión en las células epiteliales gástricas normales aumentaron su movilidad y capacidad de invasión.

Conclusiones /Importancia

Estos datos sugieren que la hipermetilación de CLDN11
, lo que lleva a la expresión downregulated, contribuye a la carcinogénesis gástrica mediante el aumento de la motilidad celular y la invasión. Una comprensión adicional de los mecanismos que subyacen a la función de claudin proteínas en la carcinogénesis gástrica probablemente ayudará en la identificación de nuevos enfoques para el diagnóstico y la terapia del cáncer gástrico

Visto:. Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP, et al. (2009) El silenciamiento de Claudín-11 se asocia con mayor invasividad de las células de cáncer gástrico. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10.1371 /journal.pone.0008002

Editor: Fatah Kashanchi, George Facultad de Medicina de la Universidad de Washington, Estados Unidos de América

Recibido: 3 Agosto 2009; Aceptado: 23 de octubre de 2009; Publicado: 24 Noviembre 2009

Derechos de Autor © 2009 Agarwal et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este trabajo fue apoyada por los Institutos nacionales de Salud de Estados Unidos otorga CA085069, CA138677 y CA146799 Meltzer SJ. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

el cáncer gástrico (CG) sigue siendo la segunda causa más común de muerte por cáncer a nivel mundial. Es una de las enfermedades más letales y una causa principal de muerte por cáncer en los países en desarrollo, con tasas de supervivencia global a 5 años por debajo del 20% [1], [2].

Los estudios de los GC y su precursor preneoplásicas lesiones han identificado varias alteraciones genéticas y epigenéticas, incluyendo inestabilidad de microsatélites, mutaciones puntuales, y la pérdida de heterocigosidad (LOH) que afectan a genes supresores de tumores (TSG) [3] - [6]. Sin embargo, la patogénesis molecular de GC está todavía no se entienden completamente.

Alteraciones epigenéticas son extremadamente importantes en el desarrollo y progresión del cáncer [7]. inactivación transcripcional de los genes supresores de tumores a través de la hipermetilación aberrante promotor de las islas CpG, causando silenciamiento génico permanente, es un mecanismo epigenético importante de TSG inactivación
.

Anteriormente, los estudios han sido publicados sobre la hipermetilación del promotor en GC y sus precursores [premalignas ,,,0],8] - [10]. p16INK4A y p15INK4B fueron de los primeros genes para mostrar la hipermetilación en GC [11]. Nuestro grupo y otros descubrieron posteriormente hipermetilación del gen de reparación del ADN no coinciden hMLH1 en GC exhibir inestabilidad de microsatélites frecuentes (MSI-H) [12] - [14]. También puso de manifiesto que la hipermetilación del gen de la E-cadherina (CDH1) se produce con frecuencia en los GC [15].

Una búsqueda en todo el genoma de los microarrays de base experimental llevado a cabo por nuestro grupo, realiza para descubrir nuevos genes silenciados en epigenetically carcinogénesis gástrica, claudina-11 identificados ( CLDN11
), un cruce (TJ) de proteínas apretado, como un objetivo potencial de inactivación epigenética en el cáncer gástrico (datos no publicados).

Claudín-11 pertenece a la familia de proteínas Claudín, que contiene más de 23 miembros. Los miembros de la familia claudin se expresan de una manera altamente específica de tejido en una variedad de tejidos normales y neoplásicas [16]. Claudins son proteínas transmembrana que desempeñan papeles cruciales en la formación y función de TJ. TJs son uniones intercelulares clave en el transporte paracelular de solutos, así como en el mantenimiento de la polaridad celular. Las células tumorales comúnmente exhiben deficiencias estructurales y funcionales en su TJs [17].

En los últimos años, varios estudios han demostrado la expresión aberrante de claudin proteínas en diversos tipos de cáncer [18], [16]. Varios de estos estudios encontraron desregulación de la expresión de la proteína claudina a través de
la hipermetilación del promotor. silenciamiento hipermetilación inducida de claudina-7 de expresión se había informado anteriormente en cáncer de mama [19] y [20] colorrectal carcinomas. Claudina-6 también es silenciado epigenético en cáncer de mama [21], mientras que claudinas -3 y -4 están regulados epigenetically en las células de cáncer de ovario [22], [23].

El actual estudio identifica e informes, a nuestro conocimiento por primera vez, que el CLDN11
región promotora se hypermethylated en tejidos y líneas celulares de GC. Por otra parte, mientras que CLDN11
mRNA se expresó en todos los tejidos de la mucosa gástrica no cancerosos primarios, así como en una línea celular inmortalizada normal de gástrica epitelial, se silenció en todos los tejidos de GC y las líneas celulares examinadas. Curiosamente regulación a la baja, mediada por siRNA de CLDN11
en CLDN11
expresando células gástricas también se asoció con cambios fenotípicos relacionados con el cáncer, específicamente el aumento de la motilidad celular y la invasión.

Materiales Métodos y

Líneas celulares y de tejidos clínica Las muestras

células normales humanas inmortalizadas gástricos epiteliales (HFE145) se obtuvieron del Dr. Duane T. Smoot (Universidad de Howard) y GC líneas de células AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, y SNU-1 se obtuvieron de ATCC. Todas las líneas celulares se cultivaron y mantuvieron en medio RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino y solución de antibiótico-antimicótico al 1% (Invitrogen).

tejidos normales y tumorales gástricas primarias apareadas se recogieron en el Hospital Johns Hopkins ( JHH). Las muestras fueron congelaron inmediatamente después de la resección.

Declaración de Ética

Johns Hopkins University (JHU) Junta de Revisión Institucional (IRB) se obtuvo la aprobación para todos los casos incluidos en el estudio. Los casos se obtuvieron a partir de la patología quirúrgica JHU bajo 02-07-19-05e exención IRB aprobado por la Universidad Johns Hopkins en virtud de la regla 45 CFR 46.101 (b), que renuncia a los requisitos para obtener el consentimiento del paciente.

Tratamiento y preparación de ADN genómico y total RNA

ADN genómico fue extraído de muestras de tejidos o líneas celulares utilizando un DNeasy Blood &snap-congelado; Tissue Kit (QIAGEN, Valencia, CA) de acuerdo con el protocolo del fabricante. El ARN total se extrajo con el reactivo Trizol (Invitrogen). Extrajeron el ADN y el ARN se cuantificaron utilizando un NanoDrop ND-1000 Espectrofotómetro (NanoDrop, Wilmington, DE).

Quantitative metilación específica de PCR (qMSP) para claudin-11

ADN genómico obtenido de 36 muestras de pacientes que comprenden 18 GC y 18 tejidos emparejados de la mucosa del estómago no canceroso (NS), así como de diversas líneas de células gástricas, se sometieron a qMSP. qMSP se realizó como se ha descrito anteriormente, con modificaciones menores [24]. En breve, se realizó tratamiento con bisulfito de ADN genómico utilizando un bisulfito de Tratamiento Kit EpiTect (QIAGEN, Valencia, CA). Un amplicón MSP y la sonda TaqMan para la detección de ADN completamente metilado fueron diseñados para incluir múltiples sitios CpG en la región 5 'UTR del gen CLDN11
. CLDN11
cebadores específicos de secuencias de la sonda y utilizados fueron: cebador directo 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; cebador inverso 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan sonda 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. ADN metilado universal CpGenome (Chemicon International, Temecula, CA) sirvió como control positivo, y diluciones en serie de la misma se utiliza para trazar una curva estándar. qMSP con sonda TaqMan se realizaron en un termociclador iQ5 (BioRad, Hercules, CA) usando iQ Supermix ( ibid.
). Cincuenta ciclos de amplificación por PCR a partir de 50 ng de ADN genómico tratado con bisulfito se realizaron por triplicado, de acuerdo con el protocolo del fabricante. Duplex PCR con secuencias de β-actina (ACTB) de cebadores y sondas que no contienen CpG se realizaron para la normalización. Las secuencias de cebador y sonda usadas fueron según lo publicado anteriormente [24]. metilación valor normalizado (NMV) se define como sigue: NMV = ( CLDN11-S
/
CLDN11-FM) /( ACTB-S
/ ACTB -FM
) * 100, donde CLDN11-S
y CLDN11-FM
representan CLDN11
los niveles de metilación en la muestra de ADN metilado y completamente, respectivamente, mientras ACTB-S
y ACTB-FM
corresponden a β-actina
en la muestra y los ADN totalmente metilados, respectivamente. Todo el genoma de ADN amplificado (WGA) se utilizó como control negativo no metilado.

transcripción inversa-PCR Análisis cuantitativo

El CLDN11
amplificación por RT-PCR fue diseñado para solapar un límite intrón-exón con el fin de excluir de ADN genómico ( g
ADN) de amplificación. Primer secuencias fueron los publicados anteriormente [18]. Un solo paso QRT-PCR se realizó como se describe anteriormente [24], utilizando un kit Quantitect Sybra RT-PCR (QIAGEN, Valencia, CA), de acuerdo con el protocolo del fabricante. CLDN11
expresión se normalizó a β-actina
expresión. El ARN total de HFE145 células se utilizó para la curva estándar. ( CLDN11-S
/ CLDN11-C
) /( ACTB-S
/ ACTB-C
), donde CLDN11- S
y CLDN11-C
representar CLDN11
los niveles de expresión de ARNm de los ARNm de muestras y control de ensayo, respectivamente, mientras que ACTB-S
y ACTB -C
corresponden a ß-actina
los niveles de expresión de los ARNm de la muestra y de control de la prueba, España

5-Aza-2'- desoxicitidina tratamiento, respectivamente. (5-aza-dC)

AGS es una línea celular que se manifiesta GC hipermetilación del CLDN11
promotor conjuntamente con CLDN11
la expresión del ARNm ausente. Se realizó tratamiento con 5-aza-2 'deoxycitidine (5-aza-dC) de las células como se describe anteriormente [24]. En resumen, la línea de células AGS GC (ATCC número de catálogo CRL-1739) se sembró a una densidad de 2 × 10 ^{5 células /ml en un matraz T-75. Veinticuatro horas después, las células se trataron con 1 M 5-aza-dC durante 72 horas. Los medios que contienen 5-aza-DC fue reemplazado con medio recién preparado cada 24 horas. Las células se recogieron a continuación para la extracción de ARN total. ARN totales de células AGS antes y después del tratamiento con 5-aza-DC fueron sometidos a análisis en tiempo real RT-PCR cuantitativa.}

Los experimentos pequeños ARN de interferencia de derribo

CLDN11
oligos siRNA específicos de fueron adquiridos de Ambion, Inc. (Austin, TX). La línea celular HFE145, que es CLDN11
positivo, fue seleccionado para estudiar el efecto de la claudina-11 desmontables en las propiedades de migración y la invasión de las células gástricas. Los experimentos se llevaron a cabo como se describe previamente (Agarwal et al.
, 2005). Las células cultivadas en placas de 6 pocillos se transfectaron con ARNsi dúplex utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen), siguiendo las instrucciones del fabricante. Mock-transfecciones y dúplex de siRNA no específicos se utilizaron como controles negativos. Las células fueron tratadas durante 48 a 72 horas para permitir la máxima caída, después de lo cual se recogieron ya sea para el análisis de transferencia de Western o utilizados para los ensayos de migración e invasión.

Western Blot El análisis de Claudín-11 en líneas de células gástricas

cultivos de células confluentes se lavaron con HBSS (Invitrogen) y lisados ​​de células enteras se realizaron usando tampón de lisis: 62,5 mmol /L de Tris-HCl (pH 6,8), 10% de glicerol, y 2% de SDS. La concentración de proteína se determinó usando un kit de ensayo de ácido bicinconínico (BCA) (Pierce, Rockford, IL). Veinte microgramos de proteínas totales fueron separados por 10% a 20% de SDS-PAGE en geles de Tris-glicina (Invitrogen) y se transfirieron a membranas de difluoruro de polivinilideno (Millipore Corp., Bedford, MA). Las membranas se bloquearon con leche en polvo sin grasa 5%, se lavaron en tampón de TBST, y se sondaron con un anticuerpo anti-claudin-11 anticuerpo (Zymed, San Francisco, CA). Las transferencias se lavaron a continuación y se incubaron en anticuerpo secundario de rábano picante conjugada con peroxidasa (IgG anti-conejo: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Para la detección, la quimioluminiscencia se llevó a cabo usando un kit de quimioluminiscencia (Amersham Pharmacia Biotech).

Cell Invasion y Migración Ensayo

invasividad de las células transfectadas con siRNA se determinó usando insertos de cámara de invasión Matrigel recubiertos de (24-well-formato con 8-micras poros, BD Biosciences) usando un ensayo de cámara de Boyden modificada [25]. Las células fueron cultivadas a aproximadamente el 80% de confluencia y privaron de suero durante la noche. En el día del ensayo, se tripsinizaron las células y el recuento de células viables tomadas. Aproximadamente 50000 células se sembraron en la parte superior de cada uno de cada filtro en medio libre de suero. Un volumen igual del mismo medio que contiene FCS al 20% se colocó en la cámara baja ( es decir.
, El pozo debajo del filtro) para actuar como un quimioatrayente. Las placas de ensayo se incubaron a 37 ° C durante un máximo de 48 horas. Las células que no migraron o invaden a través de los poros de las inserciones Transwell fueron retirados manualmente con un hisopo de algodón. Las células presentes en la parte inferior de la membrana se fijaron en metanol frío durante 10 min y después se tiñeron con 0,01% de cristal violeta en 20% de etanol. Después de 10 min de incubación, los filtros se lavaron a fondo en agua y se suspendieron en 200 l de ácido acético al 5% y 5% de metanol. lecturas colorimétricas se tomaron a una DO _{595. Los experimentos se repitieron al menos tres veces, con triplicados en cada experimento. Para evaluar la migración celular, los ensayos se llevaron a cabo esencialmente como el anterior, excepto que las células se sembraron en la parte superior de los insertos sin recubrir (-Matrigel libre).}

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se realizaron con la t de Student -test (SPSS, versión 16), con p
. < 0,05 considerado estadísticamente significativo

resultados y Discusión

primero probamos nuestra hipótesis de que el CLDN11
promotor se hypermethylated y que esto se correlaciona inversamente con la hipermetilación CLDN11
la expresión de ARNm en tejidos GC primarios. tejidos normales y tumorales gástricas primarias pareadas se recogieron en el Hospital Johns Hopkins (JHH). Se obtuvieron muestras inmediatamente después de la resección y se congelaron hasta su uso. Sólo los casos obtenidas con el consentimiento informado aprobado por la Junta de Revisión Institucional (IRB) se incluyeron en este proyecto. Los ADN genómicos se obtuvieron de 36 muestras clínicas, que comprende 18 GC y 18 tejidos emparejados no cancerosas de la mucosa gástrica (NS). CLDN11
niveles de metilación del promotor en estas muestras fueron analizadas en tiempo real mediante la metilación específica de PCR cuantitativa (qMSP). La Figura 1A muestra el valor de metilación normalizado (VMN), es decir.
, La relación de valor metilado de la CLDN11
región promotora en cada espécimen a un ADN de control totalmente metilado. CLDN11
NM Vs
fueron significativamente mayores en las muestras de GC que en sus tejidos a juego NS ( P Hotel < 0,001). Para evaluar si CLDN11
hipermetilación promotor en los GC se asoció con el silenciamiento de CLDN11
expresión, CLDN11
niveles de mRNA se midieron utilizando cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR) en ARN extraídos de las 36 muestras utilizadas para el análisis de metilación. Como se demuestra en la Figura 1B, los valores de expresión normalizados (NEV) de CLDN11 Hoteles en muestras de GC fueron significativamente más bajos que en las muestras pareadas NS ( P Hotel < 0,001). Estos datos se establece que CLDN11
la hipermetilación del promotor se correlaciona con una disminución o silenciados CLDN11
la expresión de ARNm en los GC primaria.

A continuación, se evaluó CLDN11
la metilación del promotor y la expresión en líneas celulares gástricas. Se estudiaron las células inmortalizadas humanas normales gástricas epiteliales (HFE145) y líneas de células AGS GC, SIIA, MKN28, KATOIII, y SNU-1. Todas las líneas celulares ensayadas (GC AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, y SNU-1) demostraron hipermetilación del promotor, mientras que no se observó metilación en HFE145 células normales inmortalizadas (Figura 2A). CLDN11
los niveles de ARNm se evaluó mediante qRT-PCR en ARN purificado a partir de las líneas celulares, mientras que claudin-11 expresión de la proteína se analizó por transferencia Western. Como se muestra en la Figura 2B, los 5 líneas de cáncer mostraron ninguna expresión detectable de CLDN11
ARNm o proteína, mientras que las células manifiestan HFE145 altos CLDN11
niveles de expresión. Este hallazgo establece que CLDN11
está coordinada hypermethylated y downregulated en líneas celulares GC relación con las células epiteliales gástricas normales (NGECs).

A fin de validar el silenciamiento de CLDN11
expresión hipermetilación, que trató la línea celular GC AGS con el agente de desmetilación, 5-aza-2-desoxicitidina (5-aza-dC, 1 M), por intervalos de tiempo variables. Total de ARN extraído antes de vs.
Después del tratamiento fueron sometidos a QRT-PCR para CLDN11
. Como puede verse en la figura 3, en cada punto de tiempo, CLDN11
ARNm se convirtió re-expresada tras el tratamiento con 5-aza-DC, lo que confirma que CLDN11
es silenciado por la hipermetilación del promotor en AGS . células GC

los miembros de la familia de proteínas claudin han sido implicados en la regulación de la adhesión celular, la invasión y migración de las células del cáncer [25] - [27]. Por lo tanto, hemos investigado si la próxima CLDN11
motilidad celular influencias o capacidad de invasión. HFE145 células, que expresan abundantes CLDN11
, fueron elegidos para estudiar los efectos de CLDN11
caída de las propiedades invasivas y migratorias de las células epiteliales gástricas. transfecciones transitorias siRNA se llevaron a cabo utilizando CLDN11-
dúplex de siRNA específicos. La transfección con CLDN11
específico de ARNsi dúplex eficiente reprimidos claudina-11 los niveles de proteína de > 90%, mientras que la expresión se mantuvo sin cambios en la maqueta o controlar las células tratadas con siRNA (Figura 4A). ensayos de motilidad celular y la invasión se llevaron a cabo en células siRNA transfectadas utilizando un sistema de ensayo cámara de Boyden modificada [25]. Curiosamente, como se muestra en las figuras 4B y 4C, la inhibición de CLDN11
expresión en HFE145 células aumentó significativamente los potenciales migratorias e invasivas de estas células, respectivamente.

El estudio actual de este modo confirma la hipótesis de que CLDN11
, una proteína de unión estrecha, se silencia en el GC a través de la hipermetilación del promotor, y estos datos apoyan la participación de los CLDN11
en el control de la invasión de células de GC y la migración.

hipermetilación del promotor se sabe que está asociada con el silenciamiento transcripcional de ciertos genes. la metilación del ADN puede interferir con la unión de factores de transcripción cuya sitios de unión contener dinucleótidos CpG. Usando el programa de software TFSEARCH, escaneamos el CLDN11
secuencia encontrada para ser hypermethylated en tejidos de cáncer gástrico y líneas celulares, es decir
., El amplicón qMSP (-104 a 4 bases en relación con el sitio de inicio de la transcripción de CLDN11
). Esta exploración identificó supuestos sitios de unión para Sp1 y GATA-1 y GATA-2. Estudios anteriores han demostrado que la hipermetilación del promotor de ADN contribuye al silenciamiento de CLDN3
y CLDN4 Hoteles en líneas celulares de ovario, en parte, a través de
interrupción inducida por metilación de la unión de Sp1 a su sitio de unión reconocido (22, 23). Además, los miembros de la familia GATA se han demostrado para ser reguladores positivos de CLDN11
transcripción [28]. Otros estudios están garantizados para evaluar si la hipermetilación de estos sitios interfiere con la unión de factores de transcripción, y como tal interrupción puede influir CLDN11
la transcripción de genes.

Las células tumorales típicamente exhiben deficiencias estructurales y funcionales en su TJs [17]. Estas deficiencias se asocian con una pérdida de la polaridad y la diferenciación. Otro vínculo importante entre TJs y el cáncer es una pérdida de integridad TJ, con la consiguiente fuga o el transporte de sustancias pro-tumorigénicos (tales como factores de crecimiento o nutrientes) en el desarrollo de los primordios de las células tumorales, la promoción del crecimiento del tumor [29]. Además, la pérdida de la polaridad, la diferenciación, y las propiedades adhesivas asociadas con deterioro de la función TJ en el cáncer puede ser crítico en la adquisición de un fenotipo metastásico [30]. Los estudios han sugerido que las anomalías en proteínas asociadas a TJ pueden representar transición epitelio-mesenquimal (EMT), cambiando de este modo la capacidad de invasión y la motilidad de las células cancerosas.

Modulaciones en la expresión de proteínas asociadas-TJ, proteínas particularmente claudina, han ha demostrado en un número de cánceres. Estudios recientes realizados por nosotros y otros han demostrado alteraciones en la regulación de proteínas claudin en diversos cánceres epiteliales [18]. Los miembros de la familia de genes claudin se expresan de una manera altamente específica de tejido, así como una etapa específica del desarrollo muy,. Además, dependiendo del tipo de cáncer, la expresión de proteínas claudin puede ser upregulated o downregulated en las células cancerosas. Por ejemplo, varias proteínas claudin están regulados por incremento en cánceres de colon, ovario, páncreas y próstata, mientras que algunos se downregulated en el cáncer de mama y el cáncer de cabeza y cuello [16], [18]

Los estudios han informado anteriormente de cambios en la expresión los perfiles de los miembros de la familia claudin a estar asociados con GC. Serial análisis de la expresión génica (SAGE) identificó el CLDN18
genes regulados a la baja como en los GC que poseen un fenotipo intestinal [31]. El CLDN23
gen es también downregulated en GC de tipo intestinal [32]. Por el contrario, Cunningham et al.
Informó CLDN4
expresión que se incremente en la metaplasia intestinal y displasia epitelial gástrica, la identificación de este gen como un marcador de lesiones precursoras GC [33]. En el presente estudio, encontramos CLDN11
expresión downregulated o silenciado en GC a través de
hipermetilación de su región promotora. Por otra parte, se encontró que a diferencia de CLDN18
y CLDN23
, CLDN11
expresión se downregulated en las muestras de pacientes GC, así como en líneas celulares, independientemente del difusa vs .
subtipo intestinal.

claudin-11, también conocida como proteína-oligodendrocyte específico, fue identificado primero que se expresa específicamente en las hebras de unión estrecha de los oligodendrocitos en el cerebro y en las células de Sertoli de ratas y ratones [ ,,,0],34], [35]. La pérdida de expresión claudin-11, lo que conduce a la interrupción de la barrera TJ, se asocia con déficit neurológicos y reproductivos [36]. Un estudio reciente reportó la sobreexpresión y la deslocalización de CLDN11
de la barrera sangre-testículo en las células de Sertoli que se asocia con neoplasia intraepitelial testicular en los hombres [37]. Los datos en el estudio actual establece que CLDN11
se expresa en tejidos normales gástricas e inmortalizado NGECs. Sin embargo, sus funciones completas en el estómago normal, así como en la carcinogénesis gástrica siguen sin estar claros.

En un intento de explorar la posible implicación de CLDN11 Hoteles en GC, se estudiaron los cambios fenotípicos asociados con silenciamiento de CLDN11
expresión en CLDN11-
que expresan las células epiteliales gástricas (HFE145). caída muy interesante, mediada por siRNA de CLDN11
resultado en un aumento de la motilidad celular y la invasión.

Los estudios previos han reportado cambios fenotípicos específicos de cáncer que se asociarán a las modulaciones en la expresión de claudina en varios tipos de cáncer . La sobreexpresión de claudin-3 y claudin-4 proteínas en los resultados de las líneas celulares de cáncer de ovario en aumento de la invasión por estas células [25]. En el cáncer de colon, el aumento de expresión de claudin-1 se ha informado, y los cambios en claudin-1 expresión ejercen efectos significativos sobre el crecimiento de tumores y metástasis xenoinjertados en ratones desnudos atímicos [27]. Por otro lado, claudin-7 downregulation en cáncer de mama se ha asociado con un aumento de descohesión celular y la capacidad de las células de cáncer de mama para difundir [19]. Además, los experimentos en líneas celulares pancreáticas mostraron que la expresión de claudin-4 conduce a la invasividad reducida, la tumorigenicidad y el potencial metastásico de estas células [38]. Las razones de estas discrepancias en efecto son actualmente poco clara, pero puede estar relacionado con las diferencias específicas de tejido en función de la claudina o incluso a variaciones en la respuesta de las diferentes líneas celulares. Claramente, se sabe que los miembros de la familia claudin que se expresa de una manera específica de tejido y pueden ejercer efectos divergentes.

Aunque en los últimos años se ha hecho evidente que TJs y proteínas asociadas a TJ cuentan con una amplia y diversa funcional y las actividades fisiológicas en condiciones normales y cancerosas, los mecanismos moleculares que subyacen a estas actividades siguen sin estar claros. TJs son aparatos intercelulares sofisticados capaces de proteínas de señalización de reclutamiento, regulando de esta manera diversos procesos celulares incluyendo el crecimiento celular, la diferenciación, y la tumorigénesis [39], [40]. proteínas claudin asocian directamente con las vías de transducción de señales discretas mediante la interacción con moléculas de señalización, tales como atípico de la proteína quinasa C y las proteínas Rho, así como con otras proteínas que contienen el dominio PDZ. En el cáncer de ovario, claudinas modifican la invasión tumoral mediante la regulación de la actividad de MMP [25].

En resumen, los datos de este estudio identifican CLDN11
como un objetivo de la modificación epigenética, así como una prometedora biomarcador para el cáncer gástrico precoz detección, el diagnóstico y la terapia. Estos resultados también sugieren la implicación de CLDN11
regulación a la baja en la carcinogénesis a través de
promoción de la invasión celular y la motilidad. Los mecanismos de este fenómeno son objeto de una investigación.

Reconocimientos

Agradecemos al Dr. Duane T Smoot por su generoso regalo de HFE145 células.

• PLoS Genetics: miR-218 inhibe la invasión y metástasis de cáncer gástrico mediante la focalización Robo1 Receptor
• PLoS Genetics: oncogénicos Pathway Combinaciones predecir el pronóstico clínico en gástrico Cancer