PLoS ONE: Triukšmo slopinimo ir Claudin-11 yra susijęs su padidėjusia invazijos skrandžio vėžio Cells

Anotacija

Fonas

Claudins yra membraniniai baltymai, kurie vaidina svarbius vaidmenis stora sankryžos (TJ) formavimo ir funkcija. buvo įrodytas nariai claudin genų šeimos turi būti nenormaliai reguliuojama, ir dalyvauti įvairių žmogaus vėžio patogenezėje. Šiame tyrime mes pranešti, kad claudin-11 ( CLDN11
) yra nutildė skrandžio vėžio per pervežimas savo promotoriaus regione hypermethylation.

Metodika /vyriausiųjų išvadų

lygiai, CLDN11
metilinimas ir iRNR raiška buvo matuojamas pirminis navikas audinių, noncancerous skrandžio gleivinės ir ląstelių linijų skrandžio kilmės naudojant kiekybinį metilinimo konkrečių PGR (qMSP) ir kiekybinę atvirkštinės transkriptazės-PGR (KRL-PGR), atitinkamai. Analizuoja suporuotų skrandžio vėžio ir gretimuose normaliuose audiniuose skrandžio atskleidė hypermethylation iš CLDN11
promotoriaus regione skrandžio vėžio, ir tai hypermethylation reikšmingai koreliavo su downregulation iš CLDN11
išraiška vs
normaliuose audiniuose. CLDN11
rengėjas regionas taip pat buvo hypermethylated visų skrandžio vėžio ląstelių linijas išbandė palyginti su imortalizuotų normaliomis skrandžio epitelinių ląstelių. Be to, CLDN11
iRNR raiška buvo atvirkščiai koreliuoja su jo metilinimo lygio. Gydymas CLDN11
-nonexpressing skrandžio vėžio ląstelės su 5-aza-2'-deoksicitidino atkurtos CLDN11
išraiška. Be to, siRNR tarpininkaujant nokdaunas iš CLDN11
išraiška normaliomis skrandžio epitelinių ląstelių padidino savo judrumą ir invaziškumo.

Išvados /Reikšmė

Šie duomenys rodo, kad hypermethylation iš CLDN11
, todėl downregulated išraiškos, prisideda prie skrandžio kancerogenezėje didinant ląstelių judrumą ir invaziškumo. Dar suprasti mechanizmus, pagrindžiančių claudin baltymus skrandžio kancerogenezėje greičiausiai padės į romano identifikavimo vaidmenį metodų diagnozės ir gydymo skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Agarwal R Mori Y Cheng Y Jin Z, Olaru AV, Hamiltonas JP, ir kt., (2009) Triukšmo slopinimo ir Claudin-11 yra susijęs su padidėjusia invazijos skrandžio vėžio ląsteles. PLoS ONE 4 (11): e8002. Doi: 10,1371 /journal.pone.0008002

redaktorius: "Fatah Kashanchi, George Washington universiteto medicinos mokykla, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo rugpjūčio 3, 2009 m Priėmė: Balandis 23, 2009 m Paskelbta: Lapkričio 24, 2009

Visos teisės saugomos: © 2009 Agarwal et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė JAV nacionalinių sveikatos institutų suteikia CA085069, CA138677 ir CA146799 į SJ Meltzer. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) išlieka antra labiausiai paplitusi priežastis mirčių nuo vėžio visame pasaulyje. Jis yra vienas iš labiausiai mirtinų piktybinių navikų ir pirmaujanti mirties priežastis vėžio besivystančiose šalyse, su bendrais 5 metų išgyvenimo mažiau nei 20% [1], [2].

Tyrimai GCS ir jų priešvėžine pirmtako pažeidimai nustatė keletą genetinių ir epigenetinius pakeitimus, įskaitant mikrosatelitiniai nestabilumas, taškines mutacijas, ir praradimo heterozigotiškumo (LOH) įtakos naviko slopinančias genus (GTG) [3] - [6]. Nepaisant to, molekulinės patogenezę GC dar nepilnai suprastas.

Epigenetiniai pakitimai yra labai svarbus vėžio išsivystymo ir progresavimo [7]. Transkripcinis inaktyvacijai auglio slopintuvas genų per nukrypusiu nuo normos promotoriaus hypermethylation CpG salų, todėl nuolatinis genai yra nuslopinami, yra pagrindinis epigenetinius mechanizmas TSG nukenksminimą.

Anksčiau, tyrimai buvo skelbiami promotoriaus hypermethylation į GCS ir jų ikivėžinių prekursorių [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A ir p15INK4B buvo tarp pirmųjų genų parodyti hypermethylation į GCS [11]. Mūsų grupė ir kiti vėliau atrado hypermethylation iš hMLH1 DNR neatitikimas remonto geno GCS pasižymintys dažnai mikrosatelitinio nestabilumą (MSI-H) [12] - [14]. Mes taip pat parodė, kad hypermethylation iš E-cad (CDH1) geno dažnai pasitaiko GCS [15].

atliko mūsų grupės pilotas Mikrogardelė pagrindu genomo paieška, kuri atliekama siekiant atrasti naujų epigenetically nutildė genų skrandžio Kancerogeninis, nustatė claudin-11 ( CLDN11
), stora sankryžos (TJ) baltymai, kaip potencialų tikslą epigenetinio nukenksminti skrandžio vėžio (neskelbtų duomenų).

claudin-11 priklauso su claudin baltymų šeimos, kuri yra daugiau nei 23 nariai. Nariai claudin šeimos išreiškiami labai audinių specialiu būdu iš normalių ir vėžinių audinių [16] įvairovė. Claudins yra transmembranines baltymai, kurie vaidina svarbius vaidmenis TJ formavimas ir funkcijos. TJs yra Tarpląstelinių sankryžos kritinių į paracellular transporto tirpiniai, taip pat siekiant išlaikyti ląstelių poliškumą. Naviko ląstelės paprastai demonstruoja struktūrinius ir funkcinius trūkumus savo TJS [17].

pastaraisiais metais įrodė, netipiško išraišką claudin baltymus [18], [16] įvairių rūšių vėžio keletas tyrimų. Kai kurie iš šių tyrimų rezultatai parodė, disreguliacija claudin baltymų raiškos per pervežimas promotoriaus hypermethylation. Hypermethylation sukeltas slopinimo ir claudin-7 išraiška buvo pranešta anksčiau krūties [19] ir tiesiosios žarnos [20] karcinomos. Claudin-6 taip pat epigenetically nutildė krūties vėžio [21], o claudins -3 ir -4 yra epigenetically reguliuoja kiaušidžių vėžio ląstelių [22], [23].

Dabartinė studijų identifikuoja ir ataskaitos, į mūsų žinios, pirmą kartą, kad CLDN11
rengėjas regionas hypermethylated GC audinių ir ląstelių linijų. Be to, nors CLDN11
mRNR buvo išreikštas visose pradinėse noncancerous skrandžio gleivinės audinių, taip pat kaip ir imortalizuotų įprastą skrandžio epitelinių ląstelių linijos, ji nutilo visose GC audinių ir ištirti ląstelių linijos. Įdomu tai, kad siRNR tarpininkaujant downregulation iš CLDN11
CLDN11
-expressing skrandžio ląstelės taip pat buvo susijęs su vėžiu susiję fenotipo pokyčius, ypač padidėjo ląstelių judrumui ir invaziškumo.

Medžiagos ir metodai

Mobilaus ryšio linijos ir klinikinės Audinių pavyzdžiai

įamžinta normalūs žmogaus skrandžio epitelio ląstelės (HFE145) buvo gauti iš dr Duane T. Smoot (Howard University) ir GC ląstelių linijų AGS, SIIA, MKN28, KATOIII ir SNU-1 buvo gauti iš ATCC. Visi ląstelių linijos buvo auginamos ir prižiūrimos RPMI 1640 terpėje, papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo ir 1% antibiotikams priešgrybelinį preparatą tirpalu (Invitrogen).

Prijungti pirminis skrandžio normalus ir navikų audiniuose buvo renkami Johnso Hopkinso ligoninės ( JHH). Mėginiai buvo Snap-šaldyta karto po rezekcijos.

Etika pareiškimas

Johnso Hopkinso universiteto (JHU) Institucinis apžvalga valdyba (IRB) patvirtinimas buvo gautas visais atvejais įtraukiami į tyrimą. Atvejai buvo gauta iš JHU chirurginės patologijos pagal JHU IRB patvirtintas išimties 02-07-19-05e pagal 45 taisyklę BPS 46,101 (B), kuris atsisako vykdyti gavimo paciento sutikimą reikalavimus.

valymas ir paruošimas genomo DNR ir viso RNR

Genomo DNR buvo išskirta iš Snap-šaldyta audinio mėginiai ar ląstelių linijos, naudojant DNeasy Kraują & Audinių komplektas (QIAGEN, Valensija, Kalifornija) pagal gamintojo protokolą. Bendras RNR buvo išskirta su Trizol reagento (Invitrogen). Išgauti DNR ir RNR buvo kiekybiškai naudojant NanoDrop ND-1000 spektrofotometras (NanoDrop Wilmington, DE).

Kiekybiniai Metilinimas-Konkretus PGR (qMSP) už Claudin-11

Genomo DNR gaunama iš 36 pacientų mėginiai sudaro 18 GC ir 18 atitiko noncancerous skrandžio gleivinės (NS) audinius, taip pat nuo įvairių skrandžio ląstelių linijas, buvo atliktas qMSP. qMSP buvo atliktas taip, kaip aprašyta anksčiau, atlikus nedidelius pakeitimus [24]. Trumpai tariant, bisulfito gydymas genomo DNR buvo atliktas naudojant EpiTect bisulfite Gydymo rinkinį (QIAGEN, Valencia, CA). JEP amplikono ir TaqMan zondas aptikti visiškai metilo DNR buvo suprojektuotas, kad apimtų kelis CpG svetaines 5'-UTR regione CLDN11
geno. CLDN11
specifinę gruntai ir zondo sekas buvo: į priekį gruntas 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3 "; Grįžtamieji gruntas 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3 "; TaqMan zondas 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 ". CpGenome Universal metilinti DNR (Chemicon International, Temecula, CA) tarnavo kaip teigiama kontrolė, ir serijos praskiedimai jį buvo naudojami sklypas standartinę kreivę. qMSP su TaqMan zondo buvo atliekami ant iQ5 termocikleriu (BioRad, Hercules, Kalifornija), naudojant IQ SUPERMIX (, ten.
). Penkiasdešimt ciklai PGR amplifikacijos pradinę su 50 ng bisulfito gydytų genominės DNR buvo pakartotas tris kartus, pagal gamintojo protokolą. Dvipusis PGR su β-aktino (ACTB) pradmenų ir zondo sekų, kurių sudėtyje yra ne CpGs buvo atlikti normalizuoti. Gruntas ir zondo sekas, buvo paskelbtos anksčiau [24]. Normalizuotas metilinimas vertė (NMV) buvo apibrėžta taip: NMV = ( CLDN11-S
/ CLDN11-FM
) /( ACTB-S
/ ACTB -FM
) * 100, kur CLDN11-S parsisiųsti ir CLDN11-FM
atstovauti CLDN11
metilinimo lygis mėginyje ir pilnai metilintų DNR, atitinkamai, o ACTB-S parsisiųsti ir ACTB-FM
atitinka beta-aktino
mėginio ir visiškai denatūruotu DNR, atitinkamai. Nenugriebto genomo sustiprina DNR "(WGA) buvo naudojamas kaip nedenatūruotu neigiama kontrole.

Kiekybiniai atvirkštinės transkripcijos-PGR analizė

CLDN11
AT-PGR amplifikacijos buvo sukurta siekiant sutampa intronus Exon riba siekiant neįtraukti genomo DNR ( g
DNR) stiprinimas. Gruntas sekos buvo paskelbtos anksčiau [18]. Vienas žingsnis KRL-PGR buvo atliekama taip, kaip aprašyta anksčiau [24], naudojant Quantitect SYBRA RT-PGR rinkinys (QIAGEN, Valencia, CA), pagal gamintojo protokolą. CLDN11
išraiška buvo normalizuotas beta
-actin išraiška. Bendras RNR iš HFE145 ląstelių buvo naudojami standartinės kreivės. ( CLDN11-S
/ CLDN11 C
) /( ACTB-S
/ ACTB C
), kur CLDN11- S parsisiųsti ir CLDN11 C
atstovauti CLDN11
iRNR raiška lygiai mėginio ir kontrolės mRNR, atitinkamai, o ACTB-S parsisiųsti ir ACTB -C
atitinka beta-aktino
ekspresijos lygį mėginio ir kontrolės mRNR, atitinkamai.

5-aza-2'-dezoksicitidino (5-aza-DC) gydymas

AGS yra GC ląstelių linija pasireiškianti hypermethylation kad CLDN11
rengėjas kartu su nedalyvaujančio CLDN11
iRNR raiška. 5-aza-2'-deoxycitidine (5-aza-DC) gydymas ląstelių buvo vykdomi, kaip aprašyta anksčiau [24]. Trumpai tariant, GC ląstelių linija AGS (ATCC katalogo numeris CRL-1739) buvo pasėjamos esant tankio 2 × 10 ^{5 ląstelių /ml T-75 kolbą. vėliau dvidešimt keturias valandas, ląstelės buvo gydomi 1 pM 5-aza-DC 72 valandas. Žiniasklaida, kurių sudėtyje yra 5-aza-DC buvo pakeistas šviežiai paruoštų žiniasklaidos kas 24 valandas. Ląstelės tada buvo paruošta bendra RNR gavyba. Iš viso RNR iš AGS ląstelių Prieš ir po 5-aza-DC gydymo buvo atliekama kiekybinė realaus laiko AT-PGR analizei.}

sirnr triuškinantis eksperimentai

CLDN11
specifinę siRNA oligos buvo įsigytas iš Ambion, Inc. (Austin, TX). HFE145 ląstelių linija, kuri yra CLDN11
teigiamas, buvo pasirinkta ištirti claudin-11 triuškinantis poveikį migracijos ir invazija savybių skrandžio ląstelėse. Eksperimentai buvo atliekami taip, kaip aprašyta anksčiau (Agarwal , et al.,
, 2005). Ląstelės auginamos 6-duobučių lėkštelėse buvo pernešta su siRNA per du aukštus, naudojant LipofectAMINE 2000 (INVITROGEN), pagal gamintojo instrukcijas. Mock-transfekcija ir nespecifinių siRNA dupleksus buvo naudojami kaip neigiamos kontrolės. Ląstelės buvo gydomi 48 iki 72 valandų, kad būtų galima maksimaliai triuškinantis, po kurio jie buvo arba nuimami Vakarų blot analize arba naudojami migracijos ir invazija tyrimai.

Vakarų dėmė analizė Claudin-11 skrandžio ląstelių linijas

Susiliejančio ląstelių kultūros buvo plaunamas HBSS (Invitrogen) ir visos ląstelės lizato buvo pagamintas naudojant lizės buferiniame tirpale: 62,5 mmol /l Tris-HCl (pH = 6,8), 10% glicerolis, ir 2% SDS. Baltymų koncentracija buvo nustatoma naudojant bicinchoninic rūgštis (BCA) Analizės komplektas (Pierce, Rockford, IL). Dvidešimt mikrogramų bendrųjų baltymų buvo atskirtos nuo 10% iki 20% SDS-PAGE dėl tri-glicinas geliai (Invitrogen) ir perkelti į polivinilideno difluoridą membranų (Millipore "Corp., Bedford, MA). Membranos buvo užblokuotas su 5% Nonfat sauso pieno, išplautos TBST buferio, ir tyrinėjo su anti-claudin-11 antikūnų (Zymed, San Francisko, CA). tada dėmės buvo plaunami ir inkubuojami krienų peroksidazės konjuguoto vidurinė antikūnų (anti-triušio IgG: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech Piscataway, NJ). Norint nustatyti, chemiluminescencja buvo atliekami naudojant sustiprintą chemiliuminescencine rinkinį (Amersham Pharmacia Biotech).

Mobilusis invazija ir migracijos Analizės

invazijos iš siRNR-perkeltų ląstelių buvo nustatoma naudojant Matrigel dengtos invazija kameriniai įdėklai (24-gerai formatas su 8-mikrometrai poras, BD gyvosios gamtos mokslai), naudojant modifikuotą Boyden kameros tyrimą [25]. Ląstelės buvo auginamos maždaug 80% susiliejimo ir serumo alksta naktį. Dėl testo dieną, ląstelės buvo tripsinizuojamos ir gyvų ląstelių skaičius imtasi. Maždaug 50000 ląstelės buvo padengtą ant kiekvieno iš kiekvieno filtro terpėje serumo neturinčioje viršuje. Tokį patį tūrį tos pačios terpėje, turinčioje 20% FCS buvo dedamas į apatinę kamerą ( I.E.
, Gerai po filtru), kuris veikia kaip chemoattractant. Analizės plokštelės buvo inkubuojamos 37 ° C iki 48 val. Ląstelių, kurios nebuvo migruoja arba įsiveržti per iš Transwell intarpais poras buvo rankiniu būdu pašalinami su medvilniniu tamponu. Ląstelės, esančioms membranos apačioje buvo nustatyti šaltame metanolio 10 min ir vėliau yra nudažomi su 0,01% violetinei 20% etanolio. Po to, kai 10 min inkubavimo, filtrai buvo kruopščiai išplauti vandenyje ir suspenduotos 200 pL 5% acto rūgšties ir 5% metanolio. Kolorimetrin rodmenys buvo imtasi OD _{595. Eksperimentai buvo kartojamas bent tris kartus, su trimis egzemplioriais kiekvienam eksperimentui. Siekiant įvertinti ląstelių migraciją, tyrimai buvo atliekami iš esmės, kaip nurodyta pirmiau, išskyrus tai, kad ląstelės buvo padengtas ant Nedengtojo (Matrigel-Free) intarpais.}

Statistinė analizė

Statistinė duomenų analizė atlikta naudojant Stjudento t -test (SPSS, versija 16), su p
. < 0,05 statistiškai reikšmingas

rezultatai ir jų aptarimas

Mes pirmą kartą išbandė mūsų hipotezę, kad CLDN11
rengėjas yra hypermethylated ir kad tai hypermethylation koreliuoja atvirkščiai CLDN11
iRNR išraiškos pradinėse GC audiniuose. Poriniai pirminis skrandžio normalus ir navikų audiniuose buvo renkami Johns Hopkins ligoninėje (JHH). Mėginiai buvo gauti iš karto po rezekcijos ir przystawkę užšaldyti iki naudojimo. Tik atvejai gauti informuoto sutikimo, patvirtintą pagal institucinius ekspertizės valdyba (IRB) buvo įtraukti į šį projektą. Genomo DNR buvo gauti iš 36 klinikinių mėginių, apimanti 18 GC ir 18 atitiko noncancerous skrandžio gleivinės (NS) audinius. CLDN11
rengėjas metilinimo lygis šių mėginių buvo analizuojami naudojant kiekybinį realaus laiko metilinimo konkrečių PGR (qMSP). 1A pav rodo normalizuotą metilinimo vertę (NMV) I.E.
, Kad denatūruotą vertės CLDN11
promotoriaus regione kiekvieną egzempliorių santykis visiškai denatūruotą valdymo DNR. CLDN11
NM vs
buvo žymiai didesnis GC egzempliorių nei savo atitikimo NS audinių ( P
< 0,001). Siekiant įvertinti, ar CLDN11
rengėjas hypermethylation į GCS buvo susijęs su triukšmo slopinimo yra CLDN11
saviraiškos, CLDN11
iRNR kiekis buvo išmatuotas naudojant kiekybinį realaus laiko (KRL-PGR) ir RNR, išgauti iš 36 egzempliorių, naudojamų metilinimo analizė. Kaip parodė 1B pav, normalizuota išraiška vertės (NEVs) ir CLDN11
GC egzemplioriai buvo gerokai mažesnis nei suporuotas NS mėginių ( P
< 0,001). Šie duomenys įrodo, kad CLDN11
rengėjas hypermethylation koreliuoja su sumažėjusio ar engiamų CLDN11
iRNR išraiškos pirminės GCS.

Be to, mes vertinami CLDN11
rengėjas metilinimas ir išraiška skrandžio ląstelių linijų. Įamžinta normalūs žmogaus skrandžio epitelio ląstelių (HFE145) ir GC ląstelių linijos "AGS SIIA, MKN28, KATOIII ir SNU-1 buvo tirta. Visi GC ląstelių linijos bandymo metu (MAA SIIA, MKN28, KATOIII ir SNU-1) parodė promotoriaus hypermethylation, o ne metilinimas buvo pastebėtas imortalizuotų normaliomis HFE145 ląstelių (2a pav.) CLDN11
iRNR kiekis buvo įvertintas naudojantis KRL PGR RNR išvalytas nuo ląstelių linijų, o claudin-11 baltymo ekspresija buvo analizuojami imunoblotingo. Kaip parodyta 2B pav, visi 5 vėžio linijos eksponuojami neaptinkama išraišką CLDN11
iRNR ar proteino, o HFE145 ląstelės pasireiškia didelis CLDN11
raiškos lygį. Ši išvada nustatyta, kad CLDN11
yra suderintai hypermethylated ir downregulated GC ląstelių linijų, palyginti su normaliomis skrandžio epitelio ląstelių (NGECs).

Jei dar patvirtinti nutildymo iš CLDN11
išraiškos hypermethylation, mes apdorojimo GC ląstelių linijos AGS su demetilinimą agento, 5-aza-2-deoksicitidino (5-aza-DC, 1 mkm), numatomos skirtingos laiko intervalus. Iš viso RNR išgauti iki vs.
Po gydymo buvo atliktas KRL-PGR už CLDN11
. Kaip galima matyti 3 paveiksle, kiekvienu laiko momentu CLDN11
iRNR tapo vėl išreiškė ant gydymo 5-aza-DC, patvirtinantis, kad CLDN11
yra nutildyti promotoriaus hypermethylation į AGS . GC ląstelės

nariai claudin baltymų šeimos buvo susijęs su ląstelių sukibimą, invazijos ir migracijos vėžio ląstelių [25] reglamento - [27]. Todėl kitą kartą tyrė, ar CLDN11
įtakoja ląstelių judrumas arba invazyvumas. HFE145 ląstelių, kurios išreikšti gausu CLDN11
, buvo pasirinkta studijuoti poveikį, CLDN11
nokdaunas nuo invazinių ir migracijos savybių skrandžio epitelinių ląstelių. Transient siRNA transfekcija buvo atliekami naudojant CLDN11-
konkrečius siRNA dupleksus. Transfekcijq su CLDN11
specifinę siRNA dupleksus efektyviai represuotų claudin-11 baltymo koncentracija pagal > 90%, tuo tarpu raiška išliko nepakitęs mock- arba kontroliuoti siRNA gydytų ląsteles (4a pav.) Mobilusis motorikos ir invazija tyrimai buvo atliekami siRNA-perkeltų ląstelių naudojant modifikuotą Boyden-kamerinę tyrimo sistema [25]. Įdomu tai, kad, kaip parodyta Fig 4B ir 4C, slopindamas CLDN11
išraiška HFE145 ląstelių gerokai padidėjo migracijos ir invazinių potencialą šių ląstelių, atitinkamai.

Dabartinis tyrimas taip patvirtina hipotezę, kad CLDN11
, stora sankryžos baltymai, yra nutildyti GC per promotoriaus hypermethylation, ir šie duomenys patvirtina CLDN11 pervežimas į GC ląstelių invazija ir migracijos kontrolę.

Rėmėjas hypermethylation yra žinoma, kad būti susijęs su transkripcijos nuslopinami tam tikrų genų. DNR metilinimas gali trukdyti privalomas transkripcijos faktorių, kurių privalomas svetainės yra CpG dinucleotides. Naudojant TFSEARCH programinę įrangą, mes nuskaityti CLDN11
seka nustatyta, kad hypermethylated skrandžio vėžio audinių ir ląstelių linijų, ty
., Tuo qMSP amplikono (-104 iki 4 bazės, palyginti su transkripcijos pradžios svetainė, CLDN11
). Tai skenavimas nustatyti tariamą privalomus svetaines SP1 ir GATA-1 ir GATA-2. Ankstesni tyrimai parodė, kad promotoriaus DNR hypermethylation prisideda prie triukšmo slopinimo ir CLDN3 parsisiųsti ir CLDN4
kiaušidžių ląstelių linijų, iš dalies per pervežimas metilinimo sukeltos sutrikimų privalomas SP1 prisijungti prie savo specifinio rišimosi vietos, (22, 23). Be to, nariai gata šeimos buvo įrodyta, kad būti teigiami reguliatoriai CLDN11
transkripcija [28]. Tolesni tyrimai dabar garantuoja, kad įvertinti, ar hypermethylation iš šių svetainių konfliktuoja su privalomas transkripcijos veiksnių, ir kaip tokie sutrikimas gali paveikti CLDN11
genų transkripciją.

vėžinių ląstelių paprastai demonstruoja struktūrinius ir funkcinius trūkumus jų TJS [17]. Šie trūkumai yra susiję su poliškumo ir diferenciacijos praradimo. Kitas svarbus ryšys tarp TJS ir vėžio yra TJ vientisumo praradimas, vadinasi nuotėkio ar transporto PRO-kancerogeniniam medžiagų (pavyzdžiui, augimo faktorių ir maistinių medžiagų) į besivystančių naviko ląstelių primordia, skatinti navikų augimą [29]. Be to, poliškumas, diferenciacijos ir lipnios savybių, susijusių su sutrikusia TJ funkcija vėžio slinkimas gali būti pavojinga įgyti metastazavusiu fenotipą [30]. Tyrimai parodė, kad anomalijos TJ susijusių baltymų gali atstovauti epitelio-mezenchiminių perėjimą (EMT), tokiu būdu keičiant invazinis ir judrumas vėžinių ląstelių.

moduliacijos išraiška Tj susijusių baltymų, ypač claudin baltymų, turinčių buvo parodyta nuo vėžinių susirgimų. Naujausi tyrimai JAV ir kitų parodė pakitimus claudin baltymų reguliavimo įvairiose epitelio vėžio [18]. Nariai claudin genų šeimos, yra išreikšti labai audinių-specifinis, taip pat labai vystymosi stadijos-specifinis, būdu. Be to, priklausomai nuo vėžio tipo, claudin baltymų išraiška gali būti arba aktyvinama arba downregulated į vėžio ląsteles. Pavyzdžiui, keletas claudin baltymai aktyvinama į gaubtinės žarnos, kiaušidžių, kasos ir prostatos vėžio, o kai kurie downregulated krūties vėžio ir galvos ir kaklo vėžiu [16], [18]

Studijos anksčiau pranešė pokyčius išraiškos profiliai iš narių claudin šeimos, sietinus su GC. Serijos analizė genų ekspresiją (SAGE) nustatė, kad CLDN18
geną kaip downregulated į GCS turinčių žarnyno fenotipą [31]. CLDN23
genas taip pat downregulated žarnyne tipo GKS [32]. Priešingai, Cunninghamas, ir kt.
Pranešė, CLDN4
išraiška būti padidintas žarnyno metaplazijos ir skrandžio epitelio displazija, nustatant šį geną kaip GC pirmtakų pažeidimų [33] persekiotoją. Atsižvelgiant į dabartinę studijų, mes nustatėme, CLDN11
išraiška turi būti downregulated arba nutildyti GC per pervežimas savo promotoriaus regione hypermethylation. Be to, mes nustatėme, kad, skirtingai nei CLDN18 parsisiųsti ir CLDN23
CLDN11
išraiška buvo downregulated GC pacientų egzempliorių, taip pat ląstelių linijas, nepriklausomai nuo to, difuzinės, vs .
žarnyno potipių.

Claudin-11, taip pat žinomas kaip oligodendrocito-specifinio baltymo, pirmą kartą buvo nustatyta, kad konkrečiai išreikštas stora sankryžos kryptis oligodendrocytes smegenyse ir Sertoli ląstelių žiurkėmis ir pelėmis [ ,,,0],34], [35]. Praradimas claudin-11 išraiška, todėl sutrinka TJ barjerą, yra susijusios su neurologiniais ir reprodukcinės deficitą [36]. Neseniai atliktas tyrimas pranešė raiška ir mislocalization iš CLDN11
iš kraujo ir sėklidžių kliūties Sertoli ląstelių būti susijęs su sėklidžių intraepitelinei navikų vyrų [37]. Duomenys dabartinio tyrimo nustatyta, kad CLDN11
yra išreikštas įprastais skrandžio audinių ir įamžino NGECs. Tačiau jos visiškai funkcijos normalus skrandžio, taip pat skrandžio kancerogenezėje lieka neaiški.

bandant ištirti galimą dalyvavimą CLDN11
GC, mes studijavo fenotipo pokyčius, susijusius su triukšmo slopinimo ir CLDN11
išraiška CLDN11-
išreiškė skrandžio epitelio ląstelių (HFE145). Labai įdomiai, siRNR tarpininkaujant nokdaunas iš CLDN11
lėmė padidėjusios ląstelių judrumui ir invazijos.

Ankstesni tyrimai pranešė vėžio konkrečių fenotipo pokyčius būti susijęs su moduliacijos į claudin išraiškos įvairių vėžio rūšių , Padidėjusi claudin-3 ir claudin-4 baltymų kiaušidžių vėžio ląstelių linijų rezultatų padidėjo invazija šių ląstelių [25]. Be gaubtinės žarnos vėžio, padidėjo išraiška claudin-1 buvo pranešta, ir pokyčiai claudin-1 išraiškos daryti reikšmingą poveikį xenografted auglių ir metastazių augimo athymic nuogas pelių [27]. Kita vertus, claudin-7 downregulation į krūties vėžio buvo susijęs su padidėjusia korinio discohesion ir krūties vėžio ląstelių gebėjimą skleisti [19]. Be to, eksperimentai kasos ląstelių linijas parodė, kad išraiška claudin-4 veda prie riboto invazijos, tumorogeniš- ir metastazavusiu potencialo šių ląstelių [38]. Šių neatitikimų poveikio priežastys yra neaišku, bet gali būti susijęs su audinių specifinių skirtumų claudin funkciją ar net skirtumų atsakant skirtingų ląstelių linijų. Aišku, nariai claudin šeimos yra žinoma, kad būti išreikštas audinių specifinių būdu ir gali vykdyti skirtingus efektus.

Nors pastaraisiais metais tapo aišku, kad TJs ir TJ-susijusios baltymai turi daug ir įvairios funkcinės ir fiziologiniai veikla normaliomis ir vėžinių sąlygomis, molekulinius mechanizmus pagrindinės šių veiklos lieka neaiški. TJs yra sudėtingas Tarpląstelinių aparatai, galintys įdarbinti signalizacijos baltymų, taip reguliuojant įvairius ląstelių procesus, įskaitant ląstelių augimo, diferenciacijos ir Tumorigenesis [39], [40]. Claudin baltymai tiesiogiai susieti su atskirų signalo perdavimo kelius sąveikaujant su signalizavimo molekulių, tokių kaip neįprasti baltymų kinazės C ir Rho baltymų, o taip pat su kitais PDZ domenų, kurių sudėtyje yra baltymų. Kiaušidžių vėžio, claudins keisti naviko invazija reguliuojant MMP veiklą [25].

Apibendrinant, duomenys iš dabartinio tyrimo nustatyti, CLDN11
kaip epigenetinio pakeitimo tikslą, taip pat perspektyvus biologinis skrandžio vėžio ankstyvo ligos aptikimo, diagnostikos ir terapijos. Šie duomenys taip pat rodo, dalyvavimą CLDN11
downregulation į kancerogenezėje per pervežimas ląstelių invaziją ir judrumo skatinimo. Šio reiškinio mechanizmai yra taikomi tolesniam tyrimui.

Padėka

Mes dėkojame dr Duane T Smoot savo turtinga dovana HFE145 ląsteles.

• PLoS Genetics: mir-218 Slopina invazija ir metastazių skrandžio vėžio nukreipiant Robo1 receptorius
• PLoS Genetics: onkogeniniam kelią Deriniai Spėkite Clinical prognozė skrandžio vėžio