PLoS ONE: Сайленсинг Claudin-11 связано с повышением инвазивности рака желудка Cells

Абстрактный

Фон
<р> Claudins являются мембранные белки, которые играют решающую роль в переходе (TJ) формирования жесткой и функция. Члены семейства генов клаудин было продемонстрировано, что аберрантно регулируется, и участвовать в патогенезе различных злокачественных опухолей человека. В настоящем исследовании мы сообщаем, что клаудин-11 ( CLDN11
) приглушается при раке желудка с помощью
гиперметилированием его промоторной области.

Методология /Основные выводы <бр>

Уровни CLDN11
метилирование и экспрессию мРНК определяли в первичных желудочных раковых тканей, доброкачественное слизистых оболочек желудка и клеточных линий желудочного происхождения с использованием количественной метилирования-специфической ПЦР (qMSP) и количественной обратной транскриптазы-PCR (QRT-ПЦР), соответственно. Анализы спаренных рака желудка и прилегающих к ним нормальных тканях желудка выявлено гиперметилирование CLDN11
промоторной области в рака желудка, и это гиперметилирование значимо коррелировали с подавлением CLDN11
выражение против
нормальные ткани. CLDN11
промоторной области также гиперметилированы во всех желудочных раковых клеточных линий тестировалось по отношению к увековечены нормальных эпителиальных клеток желудка. Кроме того, CLDN11
экспрессия мРНК обратно коррелирует с уровнем метилирования. Лечение CLDN11
-nonexpressing Клетки рака желудка с 5-аза-2'-деоксицитидина восстановленном CLDN11
выражение. Кроме того, миРНК-обусловленный нокдаун CLDN11
выражение в нормальных эпителиальных клеток желудка увеличили их подвижность и инвазивность.

Выводы /Значение
<р> Эти данные свидетельствуют о том, что гиперметилирование CLDN11
, что приводит к экспрессии подавляются, способствует канцерогенеза желудка за счет увеличения клеточного моторику и инвазивности. Дальнейшее понимание механизмов, лежащих в основе роли Claudin белков в желудочном канцерогенезе, вероятно, поможет в выявлении новых подходов к диагностике и терапии рака желудка
<р> Цитирование:. Агарвал R, Мори Y, Cheng Y, Джин Z, Olaru А.В., Гамильтон JP и др. (2009) Сайленсинг Claudin-11 связано с повышением инвазивности клеток рака желудка. PLoS ONE 4 (11): e8002. DOI: 10.1371 /journal.pone.0008002
<р> Редактор: ФАТХ Kashanchi, Университет Джорджа Вашингтона Школа Медицины, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 3 августа 2009 года; Принято 23 октября 2009 года; Опубликовано: 24 ноября, 2009
<р> Copyright: © 2009 Agarwal и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа было поддержано США национальных институтов здоровья предоставляет CA085069, CA138677 и CA146799 к SJ Мельцера. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> рак желудка (GC) остается вторым наиболее распространенной причиной смерти от рака во всем мире. Это один из самых смертельных злокачественных новообразований и ведущей причиной смерти от рака в развивающихся странах, с общим уровнем 5-летней выживаемости ниже 20% [1], [2].
<Р> Исследования ШС и их предраковый предшественника поражения выявили несколько генетических и эпигенетических изменений, в том числе микроспутника нестабильности, точечные мутации, и потеря гетерозиготности (LOH), влияющие на гены-супрессоры опухолей (TSGs) [3] - [6]. Тем не менее, молекулярный патогенез GC до сих пор не вполне понятны.
<Р> эпигенетические изменения чрезвычайно важны в развитии рака и прогрессии [7]. Транскрипционная инактивации генов-супрессоров опухолей через аномальным промотора гиперметилированием CpG островков, вызывая постоянное молчание генов, является одним из основных эпигенетическое механизм инактивации TSG.
<Р> Ранее исследования были опубликованы на гиперметилированием промотора в ШС и их предраковых предшественников [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A и p15INK4B были одними из первых генов, чтобы показать гиперметилирование ГКС [11]. Наша группа и другие впоследствии обнаружили гиперметилирование гена репарации ошибочно спаренных hMLH1 ДНК в ШС, проявляющего частые микросателлитный нестабильность (MSI-H) [12] - [14]. Мы также показали, что гиперметилирование E-кадгерина (CDH1) гена часто встречается в ГКС [15].
<Р> генома поиска пилот микрочипов на основе проведенного нашей группой, выполнена, чтобы обнаружить новые эпигенетически глушителями генов в желудочного канцерогенеза, которые были определены клаудин-11 ( CLDN11
), плотный узел (TJ) белка, в качестве потенциальной мишени эпигенетической инактивации в рака желудка (неопубликованные данные).
<р> Claudin-11 принадлежит к семейству белков Claudin, который содержит более 23 членов. Члены семьи клаудин выражаются в манере, сильно тканесецифического в различных нормальных и опухолевых тканей [16]. Claudins представляют собой трансмембранные белки, которые играют решающую роль в формировании и функции TJ. TJs являются межклеточные критическими в парацеллюлярной транспорта растворенных веществ, а также в поддержании клеточной полярности. Опухолевые клетки обычно демонстрируют структурные и функциональные недостатки в их TJs [17]
. <Р> В последние годы ряд исследований продемонстрировали аберрантную экспрессию Claudin белков в различных типах рака [18], [16]. Некоторые из этих исследований было установлено нарушение регуляции экспрессии белка клаудин с помощью
гиперметилированием промотора. Гиперметилирование-индуцированной глушителей экспрессии клаудин-7 ранее сообщалось в груди [19] и колоректального [20] карцином. Claudin-6 также эпигенетически притихли при раке молочной железы [21], в то время как claudins -3 и -4 являются эпигенетически регулируются в клетках рака яичников [22], [23].
<Р> В настоящее время исследование определяет и отчеты, в наши знания в первый раз, что CLDN11
промотором область гиперметилированы GC тканей и клеточных линий. К тому же, в то время как <ЕМ> CLDN11
мРНК экспрессируется во всех первичных нераковых тканей слизистой оболочки желудка, а также в иммортализованной нормальной желудочной эпителиальной клеточной линии, он был подавлен во всех тканях GC и клеточные линии исследовали. Интересно, что миРНК-опосредованной подавление CLDN11
в CLDN11
-expressing клетки желудка также связаны с раком, связанных с изменением фенотипа, в частности увеличения подвижности клеток и инвазии.

Материалы и методы

клеточные линии и клинической ткани Образцы
<р> Иммортализованные человека нормальные эпителиальные клетки желудка (HFE145) были получены от доктора Дуэйн Т. Смут (Howard University) и GC клеточные линии AGS, SIIA, MKN28, KATOIII и СНУ-1 были получены из АТСС. Все клеточные линии культивировали и поддерживали в среде RPMI 1640, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки и 1% -ного раствора антибиотика-противогрибкового (Invitrogen).
<Р> Спаренные первичные желудка нормальных и опухолевых тканей были собраны в больнице Джона Хопкинса ( JHH). Образцы были быстро замораживали сразу после резекции.

Этика Заявление
<р> Университет Джонса Хопкинса совет Review (JHU) Институциональная (IRB) утверждение было получено для всех случаев, включенных в исследование. Случаи были получены из JHU хирургической патологии при JHU IRB утвержденных освобождение 02-07-19-05e в соответствии с правилом 45 CFR 46,101 (б), который отказывается от требования для получения согласия пациента.

Очистка и подготовка геномной ДНК и Общую РНК
<р> геномную ДНК экстрагировали из быстро замораживали образцы тканей или клеточных линий с использованием DNeasy Blood &Amp; Tissue Kit (QIAGEN, Valencia, CA) в соответствии с протоколом производителя. Общую РНК экстрагировали реагентом TRIzol (Invitrogen). Извлеченный ДНК и РНК были количественно определены с помощью NanoDrop ND-1000 спектрофотометр (NanoDrop, Уилмингтон, DE).

Количественный Метилирование-специфической ПЦР (qMSP) для Claudin-11
<р> геномных ДНК получают из 36 образцы пациентов, содержащие 18 и 18 GC совпавшие нераковые желудка слизистых оболочек (NS) тканей, а также из различных клеточных линий желудка, были подвергнуты qMSP. qMSP проводили, как описано ранее, с незначительными изменениями [24]. Вкратце, бисульфит обработка геномных ДНК проводили с использованием EpiTect бисульфит Treatment Kit (Qiagen, Valencia, CA). MSP ампликона и TaqMan зонд для обнаружения полностью метилированной ДНК были разработаны, чтобы включать в себя несколько сайтов CpG в 5'-UTR области CLDN11
гена. CLDN11
-специфических праймеров и зондов последовательности были использованы: прямой праймер 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; обратный праймер 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan зонд 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Универсальный метилированной ДНК (Хемикон Интернэшнл, Temecula, CA), служили в качестве положительного контроля, и серийных разведений нем использовались для построения стандартной кривой. qMSP с TaqMan зондом были выполнены на термоциклеру iQ5 (BioRad, Hercules, CA) с использованием Iq Supermix (. там же
). Пятьдесят циклов ПЦР-амплификации, начиная с 50 нг бисульфита обработанной геномной ДНК проводили в трех экземплярах, в соответствии с протоколом производителя. Двухуровневые ПЦР с последовательностями β-актина (ACTB) праймеров и зондов, не содержащих CpGs были выполнены для нормализации. Последовательности праймеров и зондов были использованы в качестве опубликованы ранее [24]. Нормализованное значение метилирования (NMV) был определен следующим образом: NMV = ( CLDN11-S
/ CLDN11-FM
) /( ACTB-S
/ ACTB -FM
) * 100, где CLDN11-S
и CLDN11-FM
представляют CLDN11
уровни метилирования в образце и полностью метилированных ДНК соответственно, а ACTB-S
и ACTB-FM
соответствуют бета-актина
в образце и полностью метилированных ДНК, соответственно. Целого генома ДНК амплифицируют (РГА), использовали в качестве отрицательного контроля неметилированной.

Количественный с обратной транскрипцией-ПЦР анализ
<р> CLDN11
ОТ-ПЦР ампликонов был разработан, чтобы перекрывать границе интрон-экзон для того, чтобы исключить геномную ДНК ( г
ДНК) амплификации. Последовательности праймеров были опубликованы ранее в работе [18]. Одноступенчатый QRT-ПЦР проводили, как описано ранее [24], используя QuantiTect SYBRA RT-PCR (Qiagen, Valencia, CA), в соответствии с протоколом производителя. CLDN11
выражение нормализовалось к бета-актина
выражения. Суммарную РНК из HFE145 клеток использовали для стандартной кривой. ( CLDN11-S
/ CLDN11-C
) /( ACTB-S
/ ACTB-C
), где CLDN11- S
и CLDN11-C
представляют CLDN11
уровни экспрессии мРНК в исследуемом образце и контрольных мРНК, соответственно, в то время как ACTB-S
и ACTB -С
соответствуют бета-актина
уровни экспрессии в тестируемом образце и контрольных мРНК, соответственно.

5-аза-2'-дезоксицитидин (5-Аза-ПСТ) Лечение
<р> AGS является GC клеточная линия проявления гиперметилирование CLDN11
промотор в сочетании с отсутствующим CLDN11
экспрессии мРНК. 5-аза-2'-deoxycitidine (5-аза-ПСТ) обработка клеток проводили, как описано ранее [24]. Короче говоря, GC клеточная линия AGS (АТСС номер по каталогу CRL-1739) был высевали при плотности 2 × 10 ^{5 клеток /мл в Т-75 колбу. Через двадцать четыре часа спустя, клетки обрабатывали 1 мкМ 5-аза-ПСТ в течение 72 часов. Среды, содержащие 5-аза-ПСТ заменяли свежеприготовленной среды каждые 24 часа. Затем клетки собирают для экстракции суммарной РНК. Всего РНК из клеток AGS до и после обработки 5-аза-ПСТ были подвергнуты количественному анализа в реальном времени RT-PCR.}

Малый интерферирующих РНК Нокдаун Эксперименты

CLDN11
-специфические олигонуклеотиды миРНК были приобретены у Ambion, Inc. (Остин, Техас). Клеточная линия HFE145, что CLDN11
положительный, был выбран для изучения влияния клаудин-11 нокдауна по миграции и инвазионных свойств клетки желудка. Эксперименты проводили, как описано ранее (Агаруол <ЕМ> и др.
, 2005). Клетки, культивированные в 6-луночные планшеты трансфицировали с миРНК дуплексы с использованием Липофектамин 2000 (Invitrogen), следуя инструкциям производителя. Мок-трансфекцию и неспецифических миРНК дуплексы были использованы в качестве отрицательного контроля. Клетки обрабатывали в течение 48 до 72 часов, чтобы обеспечить максимальное нокдаун, после чего они были либо собраны для Вестерн-блот-анализа или использовать для миграции и инвазии анализов.

Вестерн-блот-анализ клаудин-11 в желудочном клеточных линиях
<р> культур Сливающиеся клеток промывали HBSS (Invitrogen) и целых клеточных лизатов были сделаны с использованием буфера для лизиса: 62,5 ммоль /л Трис-HCl (рН 6,8), 10% глицерина и 2% SDS. Концентрацию белка определяли с использованием бицинхониновой кислоты (ВСА) набора для анализа (Pierce, Rockford, IL). Двадцать микрограммов общего белка были разделены на 10% до 20% SDS-PAGE на Трис-глицин гелей (Invitrogen) и переносили на поливинилидендифторидную мембраны (Millipore Corp., Bedford, MA). Мембраны блокировали 5% обезжиренным сухим молоком, промывали в буфере TBST, и зондируют анти-клаудин-11 антителом (Zymed, San Francisco, CA). Затем блоты промывали и инкубировали в конъюгированного с пероксидазой хрена вторичного антитела (анти-кроличьего IgG: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Для обнаружения, хемилюминесценции проводили с использованием улучшенного набора для хемилюминесценции (Amersham Pharmacia Biotech).

Вторжение сотовый и анализа миграции
<р> инвазивность миРНК-трансфецированных клеток определяли с использованием матригелем инвазия камерные вкладыши (24-луночный формат с 8 мкм порами, BD Biosciences) с использованием модифицированного анализа камеры Бойдена [25]. Клетки культивировали до примерно 80% сплошности и недостатком сыворотки в течение ночи. В день анализа клетки обрабатывали трипсином и жизнеспособных клеток принято. Приблизительно 50000 клеток высевали на верхнюю часть каждого из каждого фильтра в среде без сыворотки. Равный объем той же самой среде, содержащей 20% FCS, помещали в нижнюю камеру (<ЕМ> i.e.
, Колодец под фильтром), чтобы действовать в качестве хемоаттрактанту. Планшеты инкубировали при 37 ° С в течение до 48 часов. Клетки, которые не мигрируют или вторгаться через поры вставок Transwell были удалены вручную с помощью ватного тампона. Клетки, присутствующие в нижней части мембраны, фиксировали в холодном метаноле в течение 10 мин, а затем окрашивали 0,01% кристаллическим фиолетовым в 20% этаноле. После 10-минутной инкубации, фильтры промывали тщательно водой и суспендировали в 200 мкл 5% уксусной кислоты и 5% -ным раствором метанола. Колориметрические показания были взяты при OD <суб> 595. Эксперименты повторяли по меньшей мере три раза, с трех повторах в каждом эксперименте. Для оценки миграции клеток, анализы проводились по существу, как описано выше, за исключением того, что клетки высевают на вершине без покрытия (Матригель-Free) вставками.

Статистический анализ
<р> Статистический анализ проводили с использованием т Стьюдента -test (SPSS, версия 16), с р
&л;. 0,05 считали статистически значимыми

Результаты и обсуждение

Сначала мы проверили нашу гипотезу о том, что CLDN11
промотор гиперметилированы и что эта гиперметилирование обратно коррелирует с CLDN11
экспрессии мРНК в первичных тканей GC. Спаренные первичные желудка нормальных и опухолевых тканей были собраны в Хопкинса Джонса (JHH). Образцы были получены сразу после резекции и быстро замораживают до использования. Только случаи, полученные с информированного согласия, утвержденный Институциональным наблюдательным советом (IRB) были включены в этот проект. Геномных ДНК были получены из 36 клинических образцов, включающий 18 GC и 18 совпавшие доброкачественное слизистой оболочки желудка (NS) ткани. CLDN11
уровни метилирования промотора в этих образцах анализировали с использованием количественного в режиме реального времени метилирования-специфической ПЦР (qMSP). На рисунке 1А показывает нормированное значение метилирования (NMV), i.e.
, Отношение метилированных значением CLDN11
промоторной области в каждом образце, чтобы полностью метилированных контрольной ДНК. CLDN11
NM Vs
были в образцах GC значительно выше, чем в их соответствующих тканей NS ( P
&л; 0,001). Для того, чтобы оценить, является ли CLDN11
промотор гиперметилирование в ШС был связан с молчанием CLDN11
выражения, CLDN11
уровни мРНК измеряли с помощью количественного в режиме реального времени (QRT-PCR) в РНК, экстрагированные из 36 образцов, используемых для анализа метилирования. Как показано на рисунке 1В, нормированные значения экспрессии (Nevs) из CLDN11
в образцах GC были значительно ниже, чем в парных образцах NS ( P
&л; 0,001). Эти данные устанавливает, что CLDN11
промотор гиперметилирование коррелирует с уменьшением или глушителем CLDN11
экспрессии мРНК в первичной ШС.

Далее, мы оценивали CLDN11
промотор метилирование и выражение в желудочном клеточных линиях. Были изучены Иммортализованные человека нормальных эпителиальных клеток желудка (HFE145) и GC клеточные линии AGS, SIIA, MKN28, KATOIII и СНУ-1. Все линии ГХ протестированной клеточной (AGS, SIIA, MKN28, KATOIII и СНУ-1) продемонстрировал гиперметилирование промоторов, в то время как не метилирование не наблюдалось в нормальных иммортализованных клетках HFE145 (фиг.2А). CLDN11
уровни мРНК оценивали с использованием QRT-ПЦР на РНК очищали от клеточных линий, в то время как экспрессия белка клаудин-11 анализировали с помощью вестерн-блоттинга. Как показано на рисунке 2B, все 5 линий рака не обнаруживали детектируемой экспрессии CLDN11
мРНК или белка, в то время как HFE145 клетки проявляется высокий CLDN11
уровни экспрессии. Этот вывод устанавливает, что CLDN11
является координационно гиперметилированы и подавляются в GC клеточных линий по отношению к нормальным эпителиальных клеток желудка (NGECs).
<Р> Для дальнейшей проверки молчание CLDN11
выражения с помощью гиперметилирование, мы рассматривали GC клеточную линию AGS с деметилирующим агентом 5-аза-2-дезоксицитидин (5-аза-О.К., 1 мкМ), в течение различных промежутков времени. Всего РНК, экстрагированные перед против.
После лечения были подвергнуты QRT-PCR для CLDN11
. Как видно на рисунке 3, в каждый момент времени, CLDN11
мРНК стали вновь выражена после обработки 5-аза-ПСТ, подтверждая, что CLDN11
молчит промоутер гиперметилированием в AGS . GC клетки
<р> Члены семейства клаудин белка участвуют в регуляции клеточной адгезии, инвазии и миграции опухолевых клеток [25] - [27]. Поэтому мы в следующий раз исследовали, может ли <ЕМ> CLDN11
влияет на подвижность клеток или инвазии. HFE145 клетки, которые выражают обильные CLDN11
, были выбраны для изучения эффектов CLDN11
нокдаун на инвазивными и мигрирующими свойства эпителиальных клеток желудка. Переходные миРНК трансфекцию проводили с использованием CLDN11-
конкретных миРНК дуплексы. Трансфекция с CLDN11
-специфический миРНК дуплексы эффективно подавленные клаудин-11 уровней белка > 90%, в то время как выражение осталось неизменным в mock- или контроля миРНК-обработанных клеток (рис 4а). Сотовый подвижности и инвазии анализы проводили на миРНК-трансфицированных клеток с использованием модифицированной системы анализа Бойден-камере [25]. Интересно отметить, что, как показано на рисунках 4В и 4С, ингибирование CLDN11
экспрессия в клетках HFE145 значительно увеличилось миграционные и инвазивные потенциалы этих клеток, соответственно.
<Р> В настоящем исследовании, таким образом, подтверждает гипотезу о том, что CLDN11
, плотный узел белок, замалчивается в GC с помощью гиперметилированием промотора, и эти данные подтверждают причастность CLDN11
в контроле вторжения GC и миграции клеток.
<р> гиперметилирования промоторов, как известно, связаны с транскрипционной молчанию определенных генов. Метилирование ДНК может препятствовать связыванию транскрипционных факторов, чьи сайты связывания содержат CpG динуклеотиды. С помощью программы TFSEARCH программного обеспечения, мы сканировали CLDN11
последовательность найдена, чтобы быть гиперметилированы в желудочном раковых тканях и клеточных линиях, т.е.
., Ампликон qMSP (-104 до +4 основы по отношению к с сайтом начала транскрипции для CLDN11
). Это сканирование определены предполагаемые сайты связывания Sp1 и GATA-1 и GATA-2. Предыдущие исследования показали, что гиперметилирование промоторной ДНК способствует молчанию CLDN3
и CLDN4
в яичниках клеточных линиях, в части через
метилирования-индуцированное нарушение связывания Sp1 к родственным сайта связывания (22, 23). Кроме того, члены семьи GATA было показано, что положительные регуляторы CLDN11
транскрипции [28]. Дальнейшие исследования в настоящее время оправдано, чтобы оценить, не влияет ли гиперметилирование этих сайтов с связывания факторов транскрипции, и как такие разрушение может влиять <ЕМ> CLDN11
транскрипции генов.
<Р> Опухолевые клетки обычно имеют структурные и функциональные недостатки в их TJs [17]. Эти недостатки связаны с потерей полярности и дифференцировки. Другим важным связующим звеном между TJs и рака является потеря целостности TJ, с последующей утечкой или транспортировки про-онкогенных веществ (таких, как факторы роста или питательные вещества) в развитие опухолевых клеток зачатков, способствуя росту опухоли [29]. Кроме того, потеря полярности, дифференциации и адгезионных свойств, связанных с нарушением функции TJ при раке может иметь решающее значение в приобретении метастатического фенотипа [30]. Исследования показали, что аномалии в TJ-ассоциированных белков могут представлять собой эпителиально-мезенхимальных перехода (EMT), тем самым изменяя инвазивность и подвижность раковых клеток.
<Р> Модуляции в выражении TJ-ассоциированных белков, в частности белков, клаудин имеют было показано, в ряде видов рака. Недавние исследования, проведенные нами и другими показали изменения в Claudin регуляции белка в различных эпителиального рака [18]. Члены Claudin семейства генов экспрессируются в сильно тканесецифического, а также на стадии конкретных очень развития, таким образом. Кроме того, в зависимости от типа рака, экспрессия клаудин белков может быть или повышающей регуляции или подавлена ​​в раковых клетках. Например, несколько Claudin белков усиливается в толстой кишке, яичников, поджелудочной железы и рака простаты, в то время как некоторые из них подавляются при раке молочной железы и рака головы и шеи [16], [18]
<р> Исследования, ранее сообщалось, изменения в экспрессии профили членов семьи Claudin быть связаны с GC. Последовательный анализ экспрессии генов (SAGE) определили CLDN18
ген, как подавляются в ШС, обладающих кишечную фенотип [31]. CLDN23
ген также подавляются в ШС кишечного типа [32]. И наоборот, Cunningham <ЕМ> и др.
Сообщили CLDN4
выражение должно быть увеличено в кишечной метаплазией и желудочной эпителиальной дисплазии, идентифицирующий этот ген в качестве маркера предраковых GC [33]. В настоящем исследовании мы обнаружили, CLDN11
выражение, которое будет подавлена ​​или заставили замолчать GC с помощью
гиперметилированием его промоторной области. Более того, мы обнаружили, что в отличие от CLDN18
и CLDN23
, CLDN11
экспрессия подавлена ​​в образцах GC пациентов, а также в клеточных линиях, независимо от диффузного против .
кишечную подтип.
<р> Claudin-11, также известный как олигодендроцитов-специфический белок, впервые был идентифицирован, чтобы быть специфически экспрессируется в плотных соединений нитей олигодендроцитов в головном мозге и в клетках Сертоли крыс и мышей [ ,,,0],34], [35]. Потеря экспрессии клаудин-11, что приводит к нарушению барьера TJ, связан с неврологическими и репродуктивного дефицита [36]. Недавнее исследование показало, избыточная экспрессия и mislocalization из CLDN11
из гематотестикулярного барьера в клетках Сертоли быть связано с тестикулярной интраэпителиальной неоплазии у мужчин [37]. Данные в настоящем исследовании установлено, что CLDN11
выражается в нормальных тканях желудка и увековечил NGECs. Тем не менее, его полные функции в нормальном желудке, а также в желудочном канцерогенезе остаются неясными.
<Р> В попытке изучить возможную причастность CLDN11
в GC, мы изучали фенотипические изменения, связанные с молчанием CLDN11
выражение CLDN11-
, экспрессирующих эпителиальных клеток желудка (HFE145). Очень интересно, что миРНК-опосредованной нокдаун CLDN11
приводит к увеличению подвижности клеток и вторжения.
<Р> Предыдущие исследования сообщали рака конкретных фенотипические изменения, которые будут связаны с модуляциями в Claudin экспрессии в различных типах рака , Сверхэкспрессия Claudin-3 и Claudin-4 белков в яичниковые линиях раковых клеток приводит к увеличению инвазии этих клеток [25]. При раке толстой кишки, повышенная экспрессия Claudin-1 было сообщено, а также изменения в клаудин-1 выражение оказывают значительное влияние на рост ксенотрансплантированной опухолей и метастазов в бестимусных голых мышей [27]. С другой стороны, клаудин-7 деактивация при раке молочной железы было связано с увеличением клеточного discohesion и способность клеток рака молочной железы распространения [19]. Кроме того, эксперименты в панкреатических клеточных линий показали, что экспрессия клаудин-4 приводит к снижению инвазивности, туморогенности и метастатического потенциала этих клеток [38]. Причины этих расхождений в действие в настоящее время неясна, но может быть связано с ткане-специфических различий в клаудин функции или даже вариации в реакции различных клеточных линий. Очевидно, что члены семьи Claudin, как известно, выражается в манере тканесецифического и может осуществлять расходящиеся эффекты.
<Р> Хотя в последние годы стало ясно, что TJs и TJ-ассоциированные белки имеют обширный и разнообразный функционал и физиологической активности в нормальных и раковых условиях, молекулярные механизмы, лежащие в основе этих мероприятий остаются неясными. TJs являются сложными межклеточные аппараты, способные рекрутинговых сигнальных белков, тем самым регулируя различные клеточные процессы, включая рост клеток, дифференцировку и онкогенеза [39], [40]. Клаудин белки непосредственно связывать с дискретными пути передачи сигналов посредством взаимодействия с сигнальными молекулами, такими, как атипичная протеинкиназы С и Rho белков, а также с другими PDZ домен-содержащих белков. При раке яичников, claudins модифицировать опухолевой инвазии путем регуляции ММР активности [25].

В целом, данные из текущего исследования определить CLDN11
в качестве мишени эпигенетической модификации, а также перспективным биомаркером рака желудка раннего выявления, диагностики и терапии. Эти данные также свидетельствуют о причастности CLDN11
деактивация в канцерогенезе с помощью
продвижении вторжения и подвижность клеток. Механизмы этого явления подлежат дальнейшему исследованию.

Выражение признательности
<р> Мы благодарим доктора Дуэйна T Смут за его щедрый дар HFE145 клеток.

• PLoS Genetics: MIR-218 Угнетает инвазию и метастазирование рака желудка путем пристреливать Robo1 Receptor
• PLoS Genetics: Онкогенные Комбинации Pathway Предсказать клинический прогноз в рака желудка